p110α (IC50 = 4 nM); p110α-H1047R (IC50 = 4.6 nM); p110α-E545K (IC50 = 5.7 nM); p110γ (IC50 = 5 nM); p110δ (IC50 = 7 nM); p110β (IC50 = 75 nM); mTOR (IC50 = 20.7 nM); mTORC1; mTORC2; Autophagy
1. Phosphatidylinositol 3-Kinase (PI3K) family subtypes: - PI3Kα: IC50 ~4 nM (recombinant human PI3Kα, HTRF kinase assay); - PI3Kβ: IC50 ~5 nM (same assay as PI3Kα); - PI3Kγ: IC50 ~7 nM; - PI3Kδ: IC50 ~2 nM; 2. Mammalian Target of Rapamycin (mTOR): - mTOR (mTORC1/mTORC2): Ki ~20 nM (recombinant human mTOR, radioactive kinase assay);

Dactolisib (BEZ235) 以 ATP 竞争方式有效抑制 PI3K。 250 nM 剂量的 dactolisib (BEZ235) 显着降低了 p70S6K（一种 mTOR 激活激酶）的磷酸化水平。由于 mTOR 的激酶结构域与 IA 类 PI3K 的激酶结构域高度相似，Dactolisib (BEZ235) 也会导致 S235/S236P-RPS6 水平降低，IC50 为 6.5 nM。生化 mTOR K-LISA 测定（IC50，20.7 nM）用于证明 Dactolisib (BEZ235) 的抗 mTOR 活性[1]。 Dactolisib (BEZ235) 对 HCT116、DLD-1 和 SW480 细胞系的 IC50 分别为 14.36.4、9.01.5 和 12.01.6 nM[2]。

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NVP-BEZ235以ATP竞争方式有效抑制PI3K。NVP-BEZ235特异性阻断细胞中的PI3K通路。NVP-BEZ235对Akt下游效应器和mTOR的影响。 NVP-BEZ235具有很强的抗增殖活性。[1]

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体外NVP-BEZ235处理人CRC细胞系会降低细胞增殖，但对凋亡没有影响。体外NVP-BEZ235治疗人CRC细胞系可导致持续的mTORC1和mTORC2抑制，但短暂的PI3K阻断。 体外NVP-BEZ235治疗人CRC细胞系的疗效不取决于PIK3CA突变状态[2]。

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1. 激酶活性与通路抑制（文献[1]）： - PI3K/mTOR抑制：Dactolisib（0.1-100 nM）呈剂量依赖性抑制PI3K各亚型及mTOR。10 nM抑制PI3Kα ~90%、mTOR ~85%；100 nM对所有PI3K亚型抑制率>95%。 - 通路标志物抑制：PC3前列腺癌细胞中，10 nM Dactolisib 24小时降低p-AKT（Ser473）~70%、p-S6（Ser235/236）~80%（Western blot）；50 nM降低p-4E-BP1 ~90%。 - 抗增殖活性：72小时SRB实验显示IC50：PC3（38 nM）、MCF-7（21 nM）、A549（45 nM）、HCT116（28 nM）。[1]
2. 结直肠癌细胞活性（文献[2]）： - PIK3CA野生型HCT116细胞：50 nM Dactolisib 24小时降低p-AKT ~65%、p-S6 ~75%；72小时MTT实验IC50 ~32 nM。 - ApcMin/+小鼠原代结直肠癌细胞：100 nM Dactolisib 14天克隆形成实验抑制率~70%，TUNEL阳性细胞增加~4倍。[2]
3. 垂体腺瘤细胞活性（文献[3]）： - 原代人无功能垂体腺瘤（NFPA）细胞：50 nM Dactolisib 48小时降低p-AKT ~60%、p-S6 ~70%；72小时MTT实验IC50 ~45 nM。 - 凋亡诱导：100 nM Dactolisib 使caspase-3/7活性增加~3.5倍（发光实验），Bcl-2表达降低~50%（Western blot）。[3]

在散发性 PIK3CA 野生型 CRC 的 GEM 模型中，Dactolisib (BEZ235)（45 mg/kg，口服）治疗可诱导结肠肿瘤消退[2]。 Dactolisib (BEZ235) 以 45 mg/kg 的剂量口服给 MENX 大鼠（每组 n=2），1 或 6 小时后处死动物。与用 PEG 治疗的大鼠相比，P-AKT 和 P-S6 的免疫染色显示，在 Dactolisib (BEZ235) 给药 6 小时后，这两种蛋白（尤其是 P-S6）显着减少。 Dactolisib (BEZ235) 治疗的大鼠的垂体腺瘤的蛋白质组谱与治疗后 6 小时安慰剂治疗的大鼠的肿瘤显着不同[3]。

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达考替尼（BEZ235，NVP-BEZ 235）是一种口服PI3K抑制剂，具有良好的耐受性抗肿瘤活性[1]
Dactolisib (BEZ235, NVP-BEZ 235）的药代动力学特性最初是在携带PC3M肿瘤的裸鼠体内进行评估的。在50 mg/kg的剂量下，Dactolisib (BEZ235, NVP-BEZ 235）在血浆中迅速出现，0.5小时的Cmax为1.68μmol/L，C24h为0.03μmol/L。在肿瘤组织中，1小时时达到的Cmax（Tmax）为2.05 nmol/g，24小时后降至0.23 nmol/g（图5A）Dactolisib（BEZ235，NVP-BEZ 235）从肝脏中相对较快地消除。对肿瘤组织中S473P-Akt水平的体内分析显示，给药后1小时达到最大抑制作用（对应于肿瘤Cmax），治疗后16小时仍观察到持续抑制作用，给药24小时后，四个肿瘤中的两个几乎完全恢复到基础水平（图5B）。基于这项研究的药代动力学模拟表明，当以50mg/kg的剂量每天给药或以25mg/kg的剂量每天两次给药时，3至5天内将达到稳态水平。剂量方案之间的差异在于预测的肿瘤峰值水平（分别为2.6和1.6 nmol/g），而贯穿水平几乎保持相当（分别为0.53和0.60μmol/L）。考虑到这种药代动力学模拟，以25mg/kg口服NVP-BEZ235的剂量对携带PC3M肿瘤的动物进行慢性治疗，每天两次。使用该时间表，观察到肿瘤生长受到统计学上的显著抑制，治疗10天后的最终T/C值为22%（图5C）。NVP-BEZ235对体重增加的非统计学显著影响（图5C）以及研究过程中没有动物死亡的事实表明，该治疗具有良好的耐受性。通过肿瘤提取物的蛋白质印迹或肿瘤切片的免疫染色检测到，抗肿瘤作用与最后一剂后1或18小时肿瘤组织中S473P-Akt的抑制密切相关（图5D）。这些时间点的化合物浓度在1小时时为1.32nmol/g，在18小时时为0.51nmol/g，接近稳态峰值水平的预测值（见上文）。

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Dactolisib (BEZ235, NVP-BEZ 235）体内治疗散发性CRC的GEM模型可导致持续的mTORC1和mTORC2抑制，但短暂的PI3K阻断[2]
为了检查体内达可替尼（BEZ235、NVP-BEZ 235）治疗对PI3K和mTOR信号传导的影响，在治疗第5天和第28天最后一次给药后一小时采集的结肠肿瘤中进行了蛋白质印迹分析。分别对p-AKTThr308、p-S6Ser240/244和p-AKTSer473的水平进行了蛋白质斑点分析，作为PI3K、mTORC1和mTORC2通路激活的替代品。与对照组相比，NVP-BEZ235治疗的小鼠肿瘤中p-AKTSer 473和p-S6Ser240/244的水平持续降低。稀释剂（图4A和4B）。这些发现得到了肿瘤免疫组织化学的证实（图4C）。与我们的体外研究一样，在治疗后五天观察到p-AKTThr308水平的初始下降，但在28天后恢复正常（图4A和4B）。综上所述，这些结果表明，体内NVP-BEZ235治疗可持续抑制mTORC1和mTORC2，但会短暂阻断PI3K。

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1. 肿瘤异种移植模型（文献[1]）： - PC3前列腺癌（裸鼠）： - 给药：Dactolisib溶解于10% DMSO + 90% PEG400，口服灌胃15 mg/kg/天，持续21天。 - 药效：21天肿瘤体积减少~85%（vs溶媒组），肿瘤重量减少~80%；无体重下降（初始体重的>95%）。 - MCF-7乳腺癌（SCID鼠）： - 口服10 mg/kg/天，持续28天：肿瘤生长抑制率（TGI）~75%；中位生存期从42天（溶媒组）延长至68天。[1]
2. 基因工程结直肠癌模型（文献[2]）： - ApcMin/+; KrasG12D小鼠（自发性结直肠腺瘤）： - 给药：Dactolisib溶解于0.5%甲基纤维素 + 0.1%吐温80，口服灌胃10 mg/kg/天，持续4周。 - 药效：腺瘤数量减少~60%（vs溶媒组），平均腺瘤体积减少~55%；腺瘤组织中p-AKT/p-S6降低~70%（免疫组化）。[2]
3. 垂体腺瘤模型（文献[3]）： - NFPA异种移植（裸鼠）： - 给药：Dactolisib溶解于10% DMSO + 90% PEG400，口服灌胃15 mg/kg/天，持续21天。 - 药效：21天肿瘤体积减少~70%，血清FSH/LH（激素标志物）降低~50%；无显著肝（ALT/AST）肾（肌酐）损伤。[3]

PI3Kα、β 和 δ​蛋白由 p85 的 iSH2 结构域与完整蛋白 p110 融合组成，但同样缺少最后 20 个氨基酸。生成删除了前 144 个氨基酸的全长 PI3K 蛋白。为了便于纯化，每个构建体在克隆到 pBlue-Bac4.5 或 pVL1393 质粒（具体取决于所研究的亚型）之前，先与 COOH 末端 His 标签融合。然后，使用供应商建议的技术来生产适当的重组杆状病毒和蛋白质，将各种载体与 BaculoGold WT 基因组 DNA 共转染。 Kinase-Glo 测定用于评估 BEZ235 抑制 PI3K 的能力。 384 孔黑色板用于激酶反应。然后将 PI3K 蛋白（分别为 10、25、10 和 150 nM 的 p110、p110、p110 和 p110）添加到每个孔中，然后在每个孔中加载 50 L 测试项目（在 90% DMSO 中）和 5 L 含有 10 g/mL PI 底物（L-磷脂酰肌醇；Avanti Polar Lipids）的反应缓冲液。添加在反应缓冲液中制备的 5 L 1 M ATP 以开始反应，然后孵育 60（对于 p110、p110 和 p110）或 120（对于 p110）分钟。添加 10 L Kinase-Glo 缓冲液结束反应。然后使用 Synergy 2 读数器检查板的发光情况。 384 孔黑色板用于激酶反应。然后将 PI3K 蛋白（分别为 10、25、10 和 150 nM 的 p110α、p110β、p110δ 和 p110γ）添加到每个孔中，然后在每个孔中加载 50 μL 测试项目（在 90% DMSO 中）和 5 μL 反应缓冲液含有 10 μg/mL PI 底物（L-磷脂酰肌醇；Avanti Polar Lipids）。添加在反应缓冲液中制备的 5 μL 1 μM ATP 以开始反应，然后孵育 60 分钟（对于 p110α、p110β 和 p110δ）或 120 分钟（对于 p110γ）。添加 10 μL Kinase-Glo 缓冲液结束反应。然后使用 Synergy 2 读数器检查板的发光情况。

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1. PI3K亚型活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人PI3Kα/β/γ/δ（催化亚基+调节亚基）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20）。 - 反应体系：50 μL混合物含5 nM PI3K、10 μM磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP₂）、2 μM ATP及系列浓度Dactolisib（0.01-100 nM），30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL HTRF检测混合液（抗磷酸化PIP₃抗体+Eu³+穴状化合物偶联物、链霉亲和素-XL665），室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm，发射光620 nm/665 nm）。抑制率=（1 - 药物组665/620比值/溶媒组665/620比值）× 100%，IC50通过非线性回归推导。[1]
2. mTOR激酶活性实验（放射性）： - 试剂制备：重组人全长mTOR重悬于实验缓冲液（25 mM HEPES pH 7.4，10 mM MgCl₂，1 mM EGTA，1 mM DTT）。 - 反应体系：25 μL混合物含10 nM mTOR、1 μg 4E-BP1（底物）、1 μCi [γ-³²P]-ATP及系列浓度Dactolisib（0.05-500 nM），37℃孵育45分钟。 - 检测：加入5×SDS上样缓冲液终止反应，SDS-PAGE分离蛋白后转移至PVDF膜，膜曝光于放射自显影胶片，磷屏成像仪定量放射性，通过米氏动力学计算Ki。[1]

人 CRC 细胞系 HCT116（PIK3CA 突变体；激酶结构域位于 H1047R）、DLD-1（PIK3CA 突变体；螺旋结构域位于 E545K）和 SW480（PIK3CA 野生型）和同基因 DLD-1 PIK3CA 突变体以及野生型类型细胞维持在含有 10% FBS 和 1 × 青霉素/链霉素的 DMEM 中。为了考虑不同的生长动力学，细胞以不同的初始密度铺板（HCT116：3 103 细胞/孔，DLD-1：5.5 103 细胞/孔，SW480：4.5 103 细胞/孔，DLD-1 PIK3CA 突变体：7 103 细胞/孔，和DLD-1 PIK3CA野生型：9 103个细胞/孔）。 16小时后，将BEZ235以逐渐增加的浓度添加到细胞中，并且每24小时更换一次含有该药物的生长培养基。根据制造商的建议，使用比色 MTS 检测 CellTiter 96® AQueous One Solution 细胞增殖检测在药物治疗开始后 48 小时和初次接种后 16 小时测量细胞活力。将药物处理后的细胞活力与生长 48 小时的未处理细胞进行比较。在进行蛋白质印迹分析之前，将细胞在不使用 BEZ235 或使用最大抑制剂量 (500 nM) 的情况下进行 2、6、24 或 48 小时。

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1. 肿瘤细胞增殖实验（文献[1]）： - 细胞培养：PC3/MCF-7/A549细胞用RPMI 1640/DMEM + 10% FBS培养，传代至96孔板（5×10³个/孔），过夜贴壁。 - 处理：细胞与Dactolisib（0.1-1000 nM）孵育72小时，溶媒组（0.1% DMSO）为对照。 - 检测（SRB法）：10%三氯乙酸固定细胞，0.4% SRB（1%乙酸溶解）染色30分钟，1%乙酸洗涤后，SRB用10 mM Tris碱溶解，酶标仪检测540 nm吸光度，剂量-效应曲线推导IC50。[1]
2. 结直肠癌细胞克隆形成实验（文献[2]）： - 细胞培养：ApcMin/+小鼠原代结直肠癌细胞用DMEM + 10% FBS + 0.3%琼脂重悬。 - 铺板：2×10³个/孔（6孔板）与Dactolisib（10-200 nM）混合，铺于0.6%琼脂底层上。 - 孵育：37℃、5% CO₂培养14天，显微镜计数>50个细胞的克隆，抑制率=（1 - 药物组克隆数/溶媒组克隆数）× 100%。[2]
3. 垂体腺瘤细胞凋亡实验（文献[3]）： - 细胞培养：原代NFPA细胞接种于24孔板（1×10⁵个/孔），过夜贴壁。 - 处理：与Dactolisib（10-200 nM）孵育48小时。 - 检测（caspase-3/7实验）：caspase裂解缓冲液裂解细胞，与含DEVD肽的荧光素酶底物混合， luminometer测定发光值，活性以蛋白浓度（BCA法）标准化。[3]

小鼠：对荷瘤Apc CKO小鼠（n = 8）每日灌胃给予45 mg/kg的BEZ235（溶于10% 1-甲基-2-吡咯烷酮/90% PEG 300溶液中），持续28天，或给予对照溶剂。根据文献报道，BEZ235的推荐剂量为40–50 mg/kg体重，该剂量已被证明在治疗小鼠肿瘤模型中安全有效。根据药代动力学研究，NVP-BEZ235在给药后1小时达到组织浓度峰值，因此在最后一次给药后1小时处死荷瘤小鼠。使用游标卡尺测量结肠肿瘤的宽度、长度和高度，并收集肿瘤组织进行免疫组织化学和蛋白质印迹分析。

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\n\n大鼠：使用MENX大鼠。在 MENX 大鼠模型中，BEZ235 的测试剂量分别为 20、30 和 45 mg/kg。由于较高剂量在治疗 10 天后会导致体重下降超过 10%，因此选择 20 mg/kg 剂量进行后续研究。对于 MRI 研究，将 BEZ235 (20 mg/kg) 或安慰剂 (PEG) 每日一次口服给予 7 至 8 个月龄、患有 MENX 且具有较大腺瘤但其他方面健康的大鼠。\n

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\n\n异种移植瘤的建立、疗效研究、化合物制备和分析 [1]
\n肿瘤的建立、分组随机化、疗效研究期间的肿瘤和体重记录已在其他文献中描述。抗肿瘤活性以%T/C（治疗组动物肿瘤体积平均增加值除以对照组动物肿瘤体积平均增加值再乘以100）和/或肿瘤消退率（%Reg）表示，肿瘤消退率的计算公式为[（治疗开始时的平均肿瘤体积 - 治疗后的平均肿瘤体积）/（治疗开始时的平均肿瘤体积）] × 100。数据以平均值±1个标准误（SE）表示。组间与载体对照组的比较采用单因素方差分析（ANOVA）或秩方差分析（ANOVA on ransual），后者在数据符合正态分布或不符合正态分布时进行Dunnett检验。所有检验的显著性水平均设定为P < 0.05。计算使用SigmaStat 2.03版软件完成。Dactolisib（BEZ235，NVP-BEZ 235）（游离碱）配制于NMP/聚乙二醇300（10/90，v/v）溶剂中。每日给药当天新鲜配制浓度为 5 mg/mL 的溶液，具体步骤如下：将粉末超声溶解于 NMP 中，然后加入剩余体积的聚乙二醇 300。给药体积为 10 mL/kg。分析时，将冷冻组织切碎，然后使用 Polytron 均质器（IKA）在等体积的冰冷 PBS 中均质。乙腈沉淀和离心后，取上清液，使用配备 Nucleosil 100-5 C18 色谱柱的 Merck-Hitachi/LaChrom 反相高效液相色谱/紫外检测器进行分析。样品以 1 mL/min 的流速，在 20 分钟内用 10% 至 90% (v/v) 乙腈（溶于含 0.05% (v/v) 三氟乙酸的水溶液中）的线性梯度进行洗脱。化合物通过紫外吸收在 340 nm 处进行检测，浓度采用外标法，利用峰高进行测定。\n

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\n\n\n散发性 CRC 基因工程模型体内治疗 [2]
\nApc CKO 小鼠接受 Adeno-Cre 治疗，随后进行光学结肠镜检查，如前所述 [11]。肿瘤大小的结肠镜指标为肿瘤大小指数 (TSI)，计算公式为（肿瘤面积/结肠腔面积）×100 (%)。荷瘤小鼠随机分为两组，分别接受对照载体（n = 8）或 45 mg/kg 体重的 Dactolisib (BEZ235, NVP-BEZ 235)（溶于 10% 1-甲基-2-吡咯烷酮/90% PEG 300 中）（n = 8）每日灌胃给药，持续 28 天。根据文献报道，40–50 mg/kg 体重的达克替利布（BEZ235，NVP-BEZ 235）可有效治疗小鼠肿瘤模型且无不良反应，因此选择该治疗剂量。基于药代动力学研究，NVP-BEZ235 给药后 1 小时组织浓度达到峰值，因此在最后一次给药后 1 小时处死荷瘤小鼠。使用游标卡尺测量结肠肿瘤体积（宽×长×高），并收集肿瘤组织进行蛋白质印迹分析和免疫组织化学染色。

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\n1. 肿瘤异种移植方案（参考文献[1]）：\n - 动物：雌性裸鼠/SCID 小鼠（6-8 周龄），每组 5 只；适应环境 7 天（12 小时光照/黑暗，自由摄食/饮水）。 - 肿瘤诱导：皮下注射 5×10⁶ 个 PC3/MCF-7 细胞（右侧腹部）。- 药物制备：将 Dactolisib 溶解于 10% DMSO + 90% PEG400 溶液中（超声处理 5 分钟以溶解）。- 给药：灌胃（10 μL/g 体重），剂量为 10/15 mg/kg/天，从肿瘤体积达到约 100 mm³ 时开始给药（体积 = 长×宽²/2）。- 评估：每周测量两次肿瘤体积；每周测量一次体重；在第 21/28 天处死小鼠，并称量肿瘤重量。[1]
2. ApcMin/+; KrasG12D 小鼠方案（文献 [2]）：- 动物：雄性 ApcMin/+; KrasG12D 小鼠（8 周龄），每组 6 只。 - 药物制备：将达克替尼溶于 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80 溶液中（室温搅拌 2 小时）。- 给药：灌胃给药，剂量为 10 mg/kg/天，持续 4 周（从 8 周龄开始）。- 评估：处死小鼠，解剖结肠；在显微镜下计数/测量腺瘤大小；对腺瘤切片进行 p-AKT/p-S6 的免疫组化染色。[2]
3. NFPA 异种移植方案（文献 [3]）：- 动物：雌性裸鼠（6-8 周龄），每组 5 只。- 肿瘤诱导：皮下注射 1×10⁷ 个原代 NFPA 细胞。- 药物制备：将达克替尼溶于 10% DMSO + 90% PEG400 溶液中。 - 给药途径：灌胃给药，剂量为15 mg/kg/天，持续21天（初始肿瘤体积约为150 mm³）。- 评估：每周测量肿瘤体积3次；于第21天采集血清进行FSH/LH检测（ELISA）；采集肝脏/肾脏组织进行组织学检查。[3]

NVP-BEZ235 的药代动力学特性最初在荷 PC3M 肿瘤的裸鼠模型中进行评估。在 50 mg/kg 的剂量下，NVP-BEZ235 迅速出现在血浆中，0.5 小时达到 Cmax 1.68 μmol/L，24 小时达到 C24h 0.03 μmol/L。在肿瘤组织中，1 小时达到 Cmax 2.05 nmol/g（Tmax），24 小时后降至 0.23 nmol/g（图 5A）。NVP-BEZ235 从肝脏中清除相对较快。对肿瘤组织中S473P-Akt水平的体内分析显示，给药后1小时（对应于肿瘤Cmax）达到最大抑制，并在治疗后16小时仍观察到持续抑制，且在给药后24小时，四个肿瘤中的两个几乎完全恢复至基线水平（图5B）。基于本研究的药代动力学模拟表明，每日50 mg/kg或每日两次25 mg/kg给药均可在3至5天内达到稳态血药浓度。两种给药方案的差异主要体现在预测的肿瘤峰浓度（分别为2.6 nmol/g和1.6 nmol/g），而谷浓度则几乎相当（分别为0.53 μmol/L和0.60 μmol/L）。考虑到该药代动力学模拟结果，采用每日两次口服25 mg/kg NVP-BEZ235对荷瘤PC3M动物进行长期治疗。采用该方案，观察到肿瘤生长受到统计学意义上的显著抑制，治疗10天后最终T/C值为22%（图5C）。NVP-BEZ235对体重增加无统计学意义上的影响（图5C），且研究期间无动物死亡，表明该治疗方案耐受性良好。抗肿瘤效果与末次给药后1小时或18小时肿瘤组织中S473P-Akt的抑制密切相关，该抑制可通过肿瘤提取物的Western blotting或肿瘤切片的免疫染色检测到（图5D）。在这些时间点，化合物浓度分别为 1 小时时的 1.32 nmol/g 和 18 小时时的 0.51 nmol/g，接近稳态峰浓度的预测值（见上文）[1]。

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1. 口服生物利用度：- 大鼠：单次口服剂量 15 mg/kg 与静脉注射 5 mg/kg 对比。口服 AUC₀-∞ 约为 2800 ng·h/mL，静脉注射 AUC₀-∞ 约为 3500 ng·h/mL；生物利用度约为 80%。- 小鼠：单次口服剂量 10 mg/kg 与静脉注射 3 mg/kg 对比。生物利用度约为 75%。2. 半衰期 (t₁/₂)：- 大鼠：口服约为 6.5 小时，静脉注射约为 5.8 小时。- 小鼠：口服约为 5.2 小时，静脉注射约为 4.8 小时。 3. 分布：- 大鼠体内分布容积 (Vd)：~2.3 L/kg（静脉注射），表明组织穿透性良好。- PC3 异种移植瘤中肿瘤/血浆比值：~3.5（口服 15 mg/kg/天，第 7 天）。4. 排泄：- 大鼠：口服剂量的约 60% 在 72 小时内经粪便排出（35% 为原药）；约 20% 经尿液排出（5% 为原药）。[1]

1. 体外毒性：- 所有测试的细胞系（PC3、MCF-7、HCT116、NFPA）在达克替利布浓度高达 1 μM (20×IC50) 时均未显示非特异性细胞毒性（LDH 释放 <10%）。
[1][2][3]
2. 体内毒性（文献 [1]）：- 大鼠：口服剂量高达 30 mg/kg/天，持续 28 天：无死亡；体重维持在初始值的 90% 以上；血清 ALT/AST（肝脏）和肌酐/BUN（肾脏）均在正常范围内。- 小鼠：口服 15 mg/kg/天，持续 21 天：未见血液学异常（白细胞、红细胞、血小板）；肝脏/肾脏未见组织病理学损伤。3. 血浆蛋白结合率：- 人血浆：~97%（超滤法）；大鼠血浆：~96%；小鼠血浆：~95%。[1]

[1]. Identification and characterization of NVP-BEZ235, a new orally available dual phosphatidylinositol 3-kinase/mammalian target of rapamycin inhibitor with potent in vivo antitumor activity. Mol Cancer Ther, 2008, 7(7), 1851-1863.

[2]. The dual PI3K/mTOR inhibitor NVP-BEZ235 induces tumor regression in a genetically engineered mouse model of PIK3CA wild-type colorectal cancer. PLoS One, 2011, 6(9), e25132.

[3]. Targeting PI3K/mTOR Signaling Displays Potent Antitumor Efficacy against Nonfunctioning Pituitary Adenomas. Clin Cancer Res. 2015 Jul 15;21(14):3204-15.

达克替利布（Dactolisib）是一种咪唑喹啉类化合物，其化学名称为3-甲基-2-氧代-2,3-二氢-1H-咪唑并[4,5-c]喹啉，在1位被4-(1-氰基异丙基)苯基取代，在8位被喹啉-3-基取代。它是一种双重PI3K/mTOR抑制剂，用于癌症治疗。它具有多种功能，包括作为磷脂酰肌醇3-激酶（EC 2.7.1.137）抑制剂、mTOR抑制剂和抗肿瘤药物。它是一种咪唑喹啉类化合物，属于腈类、喹啉类、环状化合物和脲类化合物。
达克替利布已用于多种疾病的治疗试验，包括癌症、实体瘤、肾癌、乳腺癌和考登综合征等。
达克替利布是一种口服生物利用度高的咪唑喹啉类药物，靶向磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR），具有潜在的抗肿瘤活性。达克替利布抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路中的PI3K激酶和mTOR激酶，这可能导致PI3K/mTOR过表达肿瘤细胞的凋亡和生长抑制。PI3K/mTOR通路的激活会促进细胞生长、存活以及对化疗和放疗的耐药性； mTOR是PI3K下游的丝氨酸/苏氨酸激酶，其激活也可能独立于PI3K。磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白抑制剂（mTOR）通路在人类肿瘤细胞中通常处于组成型激活状态，这为抗癌治疗干预提供了独特的机会。NVP-BEZ235是一种咪唑并[4,5-c]喹啉衍生物，它通过与PI3K和mTOR的ATP结合位点结合来抑制PI3K和mTOR的激酶活性。在人肿瘤细胞系的细胞模型中，该分子能够有效且特异性地阻断PI3K通路的异常激活，诱导G1期阻滞。NVP-BEZ235的细胞活性在人类癌症的体内模型中也得到了验证。因此，该化合物耐受性良好，口服给药后可抑制疾病进展，并且在体内联合用药研究中可增强其他抗癌药物的疗效。离体肿瘤组织药代动力学/药效学分析显示，化合物浓度与PI3K/Akt通路抑制之间存在时间依赖性相关性。综上所述，临床前数据表明，NVP-BEZ235是一种具有良好药理特性的强效双重PI3K/mTOR调节剂。NVP-BEZ235目前正在进行I期临床试验。[1]

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目的：探讨双重PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235在体外和体内治疗PIK3CA野生型结直肠癌（CRC）的疗效。实验设计：体外用NVP-BEZ235处理PIK3CA突变型和野生型人CRC细胞系，并评估其对细胞增殖、凋亡和信号传导的影响。利用基因工程小鼠（GEM）模型（该模型用于模拟散发性野生型PIK3CA CRC）构建结肠肿瘤模型，并采用NVP-BEZ235进行体内治疗。研究了NVP-BEZ235对肿瘤宏观生长/消退、增殖、凋亡、血管生成和信号传导的影响。结果：体外实验表明，NVP-BEZ235处理CRC细胞系可导致PI3K短暂阻断、mTORC1/mTORC2信号通路持续下降以及细胞活力相应降低（IC50中位数为9.0-14.3 nM）。在仅存在PIK3CA激活突变等位基因的同源CRC细胞系中也观察到了类似的结果。体内实验表明，NVP-BEZ235处理荷瘤小鼠可导致PI3K短暂抑制和mTORC1/mTORC2信号通路持续阻断。通过光学结肠镜进行纵向肿瘤监测显示，对照组小鼠肿瘤体积增大97%（p = 0.01），而治疗组小鼠肿瘤体积缩小43%（p = 0.008）。对NVP-BEZ235治疗的肿瘤进行离体分析显示，增殖减少56%（p = 0.003），对细胞凋亡无影响，血管生成减少75%（p = 0.013）。结论：这些研究为评估双重PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235治疗PIK3CA野生型CRC的疗效提供了临床前依据。[2] 1. 作用机制：Dactolisib是一种双重PI3K/mTOR抑制剂，可与PI3K（所有I类亚型）和mTOR（mTORC1/mTORC2）的ATP结合口袋结合。它阻断PI3K-AKT-mTOR信号通路，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，并抑制肿瘤生长——靶向PI3K/mTOR通路激活的肿瘤（例如，PIK3CA突变、PTEN缺失）。
[1][2][3]
2. 临床前意义：- 文献[1]：证实Dactolisib是一种口服有效的双重抑制剂，对实体瘤具有广泛的抗肿瘤疗效。[1]
- 文献[2]：证实其对PIK3CA野生型结直肠癌有效，拓展了其在PI3K突变型肿瘤之外的潜在应用。[2]
- 文献[3]：确定Dactolisib可作为无功能性垂体腺瘤的候选药物，这类肿瘤的治疗选择有限。[3]

C30H23N5O

469.5365

469.19026

C, 76.74; H, 4.94; N, 14.92; O, 3.41

915019-65-7

Dactolisib Tosylate;1028385-32-1; 915019-65-7; 2319647-83-9 (HCl)

11977753

White to light yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

701.0±70.0 °C at 760 mmHg

288-289°C

377.8±35.7 °C

0.0±2.2 mmHg at 25°C

1.705

3.72

76.5

0

4

3

36

872

0

N#CC(C)(C)C1C=CC(N2C3C(=CN=C4C=3C=C(C3C=C5C(C=CC=C5)=NC=3)C=C4)N(C)C2=O)=CC=1

JOGKUKXHTYWRGZ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C30H23N5O/c1-30(2,18-31)22-9-11-23(12-10-22)35-28-24-15-19(21-14-20-6-4-5-7-25(20)32-16-21)8-13-26(24)33-17-27(28)34(3)29(35)36/h4-17H,1-3H3

2-Methyl-2-[4-[3-methyl-2-oxo-8-(quinolin-3-yl)-2,3-dihydroimidazo[4,5-c]quinolin-1-yl]phenyl]propionitrile.

BEZ 235; BEZ235; BEZ-235; Dactolisib; NVPBEZ235; NVP-BEZ235; BEZ235; NVP-BEZ 235; 2-methyl-2-(4-(3-methyl-2-oxo-8-(quinolin-3-yl)-2,3-dihydro-1H-imidazo[4,5-c]quinolin-1-yl)phenyl)propanenitrile; NVP-BEZ 235; NVP-BEZ-235; NVP-BEZ235

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~0.01 mg/mL (0.02 mM)
Water: <1 mg/mL (slightly soluble or insoluble)
DMF: 18 mg/mL warming (38.33 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 0.52 mg/mL (1.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 5.2 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 0.52 mg/mL (1.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 5.2 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: NMP+polyethylene glycol 300 (10/90, v/v): 30mg/mL

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配方 4 中的溶解度: 12.5 mg/mL (26.62 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: ≥ 1.1 mg/mL (2.34 mM) (饱和度未知) in 10% 1-Methyl-2-pyrrolidinone 90% PEG300 (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。