p110α (IC50 = 4 nM); p110α-H1047R (IC50 = 4.6 nM); p110α-E545K (IC50 = 5.7 nM); p110γ (IC50 = 5 nM); p110δ (IC50 = 7 nM); p110β (IC50 = 75 nM); mTOR (IC50 = 20.7 nM); mTORC1; mTORC2; Autophagy
Kinase Assay: PI3Kα, β, and δ proteins are composed of the iSH2 domain of p85 NH2-terminally fused to the full-length protein p110 protein, with the exception of α that also does not contain the last 20 amino acids. PI3Kγ is produced as full-length protein deleted for its first 144 amino acids. All constructs are fused to a COOH-terminal His tag for convenient purification and then cloned into the pBlue-Bac4.5 (for α, β, and δ isoforms) or pVL1393 (for γ isoform) plasmids. The different vectors are then cotransfected with BaculoGold WT genomic DNA using methods recommended by the vendor for production of the respective recombinant baculoviruses and proteins. BEZ235 are tested for their activity against PI3K using a Kinase-Glo assay. The kinase reaction is done in 384-well black plate. Each well is loaded with 50 μL of test items (in 90% DMSO) and 5 μL reaction buffer containing 10 μg/mL PI substrate (l-α-phosphatidylinositol; Avanti Polar Lipids; prepared in 3% octyl-glucoside) and the PI3K proteins (10, 25, 10, and 150 nM of p110α, p110β, p110δ, and p110γ, respectively) are then added to it. The reaction is started by the addition of 5 μL of 1 μM ATP prepared in the reaction buffer and is incubated for either 60 (for p110α, p110β, and p110δ) or 120 min (for p110γ). It is terminated by the addition of 10 μL Kinase-Glo buffer. The plates are then read in a Synergy 2 reader for luminescence detection.

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Cell Assay: MOLT-4 and CEM-R cells; The solubility of this compound in DMSO is<10 mM. General tips for obtaining a higher concentration: Please warm the tube at 37 °C for 10 minutes and/or shake it in the ultrasonic bath for a while.Stock solution can be stored below -20°C for several months; 500 nM, for cell cycle inhibition 200 nM, 16 hours for pRb decrease.

BEZ235 significantly reduces the phosphorylation levels of the mTOR activated kinase p70S6K. BEZ235 results in a reduction of S235/S236P-RPS6 levels with IC50 of 6.5 nM. The activity of BEZ235 against mTOR is determined using a biochemical mTOR K-LISA assay with IC50 of 20.7 nM. BEZ235 shows slightly lower activity against its β paralogue with IC50 of 75 nM. The PI3K/Akt/mTOR pathway is often constitutively activated in human tumor cells. BEZ235 blocks PI3K and mTOR kinase activity by binding to the ATP-binding cleft of these enzymes. Both PTEN-null cell lines PC3M and U87MG show a dose-dependent reduction in cell proliferation when treated with increasing concentrations of BEZ235 with an average GI50 of 10-12 nM. BEZ235 is an mTORC1/2 catalytic inhibitor.

激酶测定：PI3Kα、β 和 δ 蛋白由 p85 NH2 末端与全长蛋白 p110 蛋白融合的 iSH2 结构域组成，但 α 蛋白除外，它也不包含最后 20 个氨基酸。 PI3Kγ 是作为删除前 144 个氨基酸的全长蛋白质产生的。所有构建体均与 COOH 末端 His 标签融合，以便于纯化，然后克隆到 pBlue-Bac4.5（对于 α、β 和 δ 同工型）或 pVL1393（对于 γ 同工型）质粒中。然后使用供应商推荐的方法将不同的载体与 BaculoGold WT 基因组 DNA 共转染，以生产各自的重组杆状病毒和蛋白质。使用 Kinase-Glo 测定测试 BEZ235 的抗 PI3K 活性。激酶反应在 384 孔黑色板中进行。每孔加载 50 μL 测试项目（90% DMSO 中）和 5 μL 反应缓冲液，其中含有 10 μg/mL PI 底物（L-α-磷脂酰肌醇；Avanti 极性脂质；用 3% 辛基葡萄糖苷制备）和 PI3K然后向其中添加蛋白质（分别为 10、25、10 和 150 nM 的 p110α、p110β、p110δ 和 p110γ）。通过添加在反应缓冲液中制备的 5 μL 1 μM ATP 开始反应，并孵育 60 分钟（对于 p110α、p110β 和 p110δ）或 120 分钟（对于 p110γ）。通过添加 10 μL Kinase-Glo 缓冲液来终止。然后在 Synergy 2 读数器中读取板以进行发光检测。细胞测定：MOLT-4和CEM-R细胞；该化合物在 DMSO 中的溶解度<10 mM。获得较高浓度的一般提示：请将管在 37 °C 下加热 10 分钟和/或在超声波浴中摇动一段时间。储备液可在 -20°C 以下保存几个月； 500 nM，细胞周期抑制 200 nM，pRb 减少 16 小时。 BEZ235 显着降低 mTOR 激活激酶 p70S6K 的磷酸化水平。 BEZ235 导致 S235/S236P-RPS6 水平降低，IC50 为 6.5 nM。使用生化 mTOR K-LISA 测定法测定 BEZ235 针对 mTOR 的活性，IC50 为 20.7 nM。 BEZ235 对其 β 旁系同源物表现出略低的活性，IC50 为 75 nM。 PI3K/Akt/mTOR 通路在人类肿瘤细胞中通常被组成型激活。 BEZ235 通过与 PI3K 和 mTOR 激酶的 ATP 结合间隙结合来阻断这些酶的活性。当用浓度不断增加的 BEZ235 处理时，PTEN 缺失细胞系 PC3M 和 U87MG 均显示出剂量依赖性的细胞增殖减少，平均 GI50 为 10-12 nM。 BEZ235 是一种 mTORC1/2 催化抑制剂。

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NVP-BEZ235 以ATP竞争性方式抑制PI3Kα，IC₅₀随ATP浓度增加呈线性变化。
在U87MG胶质母细胞瘤细胞（PTEN阴性）中，NVP-BEZ235以剂量依赖性方式降低Akt在Ser473（S473P-Akt）和Thr308（T308P-Akt）的磷酸化，通过ELISA测得的IC₅₀值分别为8.0 ± 3.2 nM和30 ± 15 nM。该抑制作用在去除化合物后可逆。
在250 nM浓度下，NVP-BEZ235阻断IGF-I诱导的S473P-Akt，但不影响IGF-IR磷酸化，也不抑制表皮生长因子或血小板衍生生长因子诱导的丝裂原活化蛋白激酶通路激活。
在250 nM浓度下，它不抑制茴香霉素诱导的c-Jun氨基末端激酶或p38磷酸化。
它阻断白细胞介素-4诱导的S473P-Akt，但不影响Stat6磷酸化。
在浓度高达250 nM时，它不抑制DNA损伤诱导的ATM或DNA-PK激活，但在1,250 nM时会降低DNA-PK自身磷酸化。
它诱导FKHRL1（FOXO3a）核转位并激活叉头盒介导的转录。
它抑制p70S6K磷酸化，并在TSC1缺失的MEF细胞中以IC₅₀为6.5 nM降低磷酸化S6水平。
在免疫沉淀激酶测定中，它抑制mTORC1和mTORC2激酶活性。
在PTEN缺失的细胞系（PC3M和U87MG）中，它诱导G₁期细胞周期停滞并增加p27Kip1水平，但不诱导凋亡或将细胞数量降至接种密度以下。 [1]

BEZ235 诱导肿瘤消退（69%），但对体重增加没有显着影响。总而言之，这些初步的体内功效结果表明，BEZ235 作为单一药物口服给药时会导致疾病停滞，并且在联合研究中使用时可以增强其他抗癌药物的功效。

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达考替尼（BEZ235，NVP-BEZ 235）是一种口服PI3K抑制剂，具有良好的耐受性抗肿瘤活性[1]
Dactolisib (BEZ235, NVP-BEZ 235）的药代动力学特性最初是在携带PC3M肿瘤的裸鼠体内进行评估的。在50 mg/kg的剂量下，Dactolisib (BEZ235, NVP-BEZ 235）在血浆中迅速出现，0.5小时的Cmax为1.68μmol/L，C24h为0.03μmol/L。在肿瘤组织中，1小时时达到的Cmax（Tmax）为2.05 nmol/g，24小时后降至0.23 nmol/g（图5A）Dactolisib（BEZ235，NVP-BEZ 235）从肝脏中相对较快地消除。对肿瘤组织中S473P-Akt水平的体内分析显示，给药后1小时达到最大抑制作用（对应于肿瘤Cmax），治疗后16小时仍观察到持续抑制作用，给药24小时后，四个肿瘤中的两个几乎完全恢复到基础水平（图5B）。基于这项研究的药代动力学模拟表明，当以50mg/kg的剂量每天给药或以25mg/kg的剂量每天两次给药时，3至5天内将达到稳态水平。剂量方案之间的差异在于预测的肿瘤峰值水平（分别为2.6和1.6 nmol/g），而贯穿水平几乎保持相当（分别为0.53和0.60μmol/L）。考虑到这种药代动力学模拟，以25mg/kg口服NVP-BEZ235的剂量对携带PC3M肿瘤的动物进行慢性治疗，每天两次。使用该时间表，观察到肿瘤生长受到统计学上的显著抑制，治疗10天后的最终T/C值为22%（图5C）。NVP-BEZ235对体重增加的非统计学显著影响（图5C）以及研究过程中没有动物死亡的事实表明，该治疗具有良好的耐受性。通过肿瘤提取物的蛋白质印迹或肿瘤切片的免疫染色检测到，抗肿瘤作用与最后一剂后1或18小时肿瘤组织中S473P-Akt的抑制密切相关（图5D）。这些时间点的化合物浓度在1小时时为1.32nmol/g，在18小时时为0.51nmol/g，接近稳态峰值水平的预测值（见上文）。

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口服给予NVP-BEZ235（25 mg/kg，每日两次）可显著抑制PC3M前列腺癌异种移植瘤的生长（治疗10天后T/C = 22%）。肿瘤生长抑制与肿瘤组织中S473P-Akt水平降低相关。
在U87MG胶质母细胞瘤异种移植模型中，每日一次口服给药显示剂量依赖性肿瘤生长抑制（T/C值：25 mg/kg时为22%，35 mg/kg时为18%，45 mg/kg时为5.5%）。
在U87MG模型中与替莫唑胺联用，NVP-BEZ235增强抗肿瘤活性，与单用替莫唑胺（T/C = 5.2%）相比，导致肿瘤消退（消退69%）。
治疗耐受性良好，无明显体重减轻或死亡。 [1]

PI3Kα、β 和 δ 蛋白由 p85 NH2 末端与全长蛋白 p110 蛋白融合的 iSH2 结构域组成，但 α 除外，它也不包含最后 20 个氨基酸。 PI3Kγ 是作为删除前 144 个氨基酸的全长蛋白质产生的。所有构建体均与 COOH 末端 His 标签融合，以便于纯化，然后克隆到 pBlue-Bac4.5（对于 α、β 和 δ 同工型）或 pVL1393（对于 γ 同工型）质粒中。然后使用供应商推荐的方法将不同的载体与 BaculoGold WT 基因组 DNA 共转染，以生产各自的重组杆状病毒和蛋白质。使用 Kinase-Glo 测定测试 BEZ235 的抗 PI3K 活性。激酶反应在 384 孔黑色板中进行。每孔加载 50 μL 测试项目（90% DMSO 中）和 5 μL 反应缓冲液，其中含有 10 μg/mL PI 底物（L-α-磷脂酰肌醇；Avanti 极性脂质；用 3% 辛基葡萄糖苷制备）和 PI3K然后向其中添加蛋白质（分别为 10、25、10 和 150 nM 的 p110α、p110β、p110δ 和 p110γ）。通过添加在反应缓冲液中制备的 5 μL 1 μM ATP 开始反应，并孵育 60 分钟（对于 p110α、p110β 和 p110δ）或 120 分钟（对于 p110γ）。通过添加 10 μL Kinase-Glo 缓冲液来终止。然后在 Synergy 2 读数器中读取板以进行发光检测。

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使用Kinase-Glo发光法评估PI3K酶活性。将重组I类PI3K亚型（p110α、β、δ、γ）与测试化合物在含有Tris-HCl、NaCl、MgCl₂、DTT、CHAPS、PI底物和ATP的反应缓冲液中于384孔板中孵育。反应进行60-120分钟，用Kinase-Glo缓冲液终止，然后测量发光。
使用K-LISA法测定mTOR激酶活性，但正文中未详细描述具体流程。
IC₅₀值从剂量反应曲线确定。 [1]

MOLT-4 和 CEM-R 细胞；该化合物在 DMSO 中的溶解度<10 mM。获得较高浓度的一般提示：请将管在 37 °C 下加热 10 分钟和/或在超声波浴中摇动一段时间。储备液可在 -20°C 以下保存几个月； 500 nM，细胞周期抑制 200 nM，pRb 减少 16 小时。 BEZ235 显着降低 mTOR 激活激酶 p70S6K 的磷酸化水平。 BEZ235 导致 S235/S236P-RPS6 水平降低，IC50 为 6.5 nM。使用生化 mTOR K-LISA 测定法测定 BEZ235 针对 mTOR 的活性，IC50 为 20.7 nM。 BEZ235 对其 β 旁系同源物表现出略低的活性，IC50 为 75 nM。 PI3K/Akt/mTOR 通路在人类肿瘤细胞中通常被组成型激活。 BEZ235 通过与 PI3K 和 mTOR 激酶的 ATP 结合间隙结合来阻断这些酶的活性。当用浓度不断增加的 BEZ235 处理时，PTEN 缺失细胞系 PC3M 和 U87MG 均显示出剂量依赖性的细胞增殖减少，平均 GI50 为 10-12 nM。 BEZ235 是一种 mTORC1/2 催化抑制剂。

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对于磷酸化Akt ELISA，将U87MG细胞接种于96孔板，用化合物处理30分钟，裂解，将细胞提取物转移至包被有抗Akt抗体的ELISA板中。孵育后，加入磷酸化特异性抗体（抗S473P-Akt或抗T308P-Akt），随后加入HRP偶联的二抗和发光底物。
对于磷酸化S6细胞实验，将TSC1缺失的MEF细胞接种于96孔黑色板，用化合物处理1小时，用甲醛固定，封闭，与抗磷酸化S6抗体孵育，然后与IRDye 800标记的二抗孵育。使用红外成像仪测量荧光。
对于叉头盒转位实验，将稳定表达GFP-FKHRL1的U2OS细胞接种于96孔板，饥饿处理，用化合物处理，固定，并用Hoechst染色细胞核。通过荧光显微镜观察转位情况。
对于细胞增殖实验，将细胞与化合物孵育72小时，用亚甲基蓝染色，测量吸光度以估计细胞数量。
对于细胞周期分析，用化合物处理PC3M细胞24小时，收集细胞，并通过流式细胞术进行分析。 [1]

小鼠：将NVP-Dactolisib (BEZ235)粉末超声溶解于NMP中，并加入剩余体积的聚乙二醇300，使溶液浓度达到5 mg/mL。给药剂量为10 mL/kg。分析时，将冷冻组织切碎，然后在等体积的冰冷PBS中匀浆。离心后，取上清液进行分析。随后，以1 mL/min的流速，用含0.05% (v/v)三氟乙酸的水溶液中10%至90% (v/v)乙腈的线性梯度，在20分钟内洗脱样品。通过340 nm紫外吸收值鉴定化合物，并使用外标法计算峰高来测定浓度[1]。

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异种移植瘤的建立、疗效研究、化合物制备和分析[1]
肿瘤的建立、分组随机化以及疗效研究期间的肿瘤和体重记录已在其他文献中描述。抗肿瘤活性以%T/C（治疗组动物肿瘤体积平均增加值除以对照组动物肿瘤体积平均增加值再乘以100）和/或肿瘤消退率（%Reg）表示，肿瘤消退率的计算公式为[（治疗开始时的平均肿瘤体积 - 治疗后的平均肿瘤体积）/（治疗开始时的平均肿瘤体积）] × 100。数据以平均值±1个标准误（SE）表示。组间与载体对照组的比较采用单因素方差分析（ANOVA）或秩方差分析，并在数据呈正态分布或不呈正态分布时分别进行Dunnett检验。所有检验的显著性水平均设定为P < 0.05。所有计算均使用SigmaStat 2.03版软件完成。 Dactolisib（BEZ235，NVP-BEZ 235）（游离碱）配制于NMP/聚乙二醇300（10/90，v/v）混合溶剂中。每日给药时，按以下方法新鲜配制溶液（5 mg/mL）：将粉末超声溶解于NMP中，然后加入剩余体积的聚乙二醇300。给药体积为10 mL/kg。分析时，将冷冻组织切碎，然后使用Polytron均质器（IKA）在等体积的冰冷PBS中均质。乙腈沉淀和离心后，使用配备Nucleosil 100-5 C18色谱柱的Merck-Hitachi/LaChrom反相高效液相色谱/紫外检测器分析上清液。然后，用含0.05% (v/v) 三氟乙酸的水溶液，以1 mL/min的流速，在20分钟内，用10%至90% (v/v)乙腈的线性梯度洗脱样品。化合物通过340 nm处的紫外吸收进行检测，浓度采用外标法，根据峰高确定。

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对于异种移植研究，将肿瘤碎片皮下植入裸鼠体内。当肿瘤体积达到约100–200 mm³时，将小鼠随机分组。
NVP-BEZ235（游离碱）配制成5 mg/mL的NMP/聚乙二醇300 (10:90, v/v)溶液。将粉末超声溶解于NMP中，然后加入PEG 300。该化合物以10 mL/kg体重的剂量口服给药。
在PC3M模型中，小鼠每日两次口服25 mg/kg，持续10天。
在U87MG模型中，小鼠每日一次口服25、35或45 mg/kg，或与替莫唑胺联合用药。
定期测量肿瘤体积和体重。在指定时间点处死动物，收集肿瘤组织进行分析。[1]

在荷PC3M肿瘤的裸鼠中，单次口服50 mg/kg的NVP-BEZ235后，血浆Cmax在0.5 h达到1.68 µM，24 h Cmax为0.03 µM。
在肿瘤组织中，Cmax在1 h时为2.05 nmol/g（Tmax），并在24 h时下降至0.23 nmol/g。
该化合物从肝脏中清除相对较快。
药代动力学模拟预测，每日一次50 mg/kg或每日两次25 mg/kg给药3-5天后可达到稳态血药浓度。
在长期治疗（每日两次25 mg/kg）中，给药后1 h肿瘤组织浓度为1.32 nmol/g，给药后18 h肿瘤组织浓度为0.51 nmol/g。[1]

体内研究表明，在有效剂量（25–45 mg/kg/天）下，NVP-BEZ235耐受性良好，在PC3M和U87MG异种移植模型中未观察到明显的体重减轻或死亡。

[1]. Identification and characterization of NVP-BEZ235, a new orally available dual phosphatidylinositol 3-kinase/mammalian target of rapamycin inhibitor with potent in vivo antitumor activity. Mol Cancer Ther, 2008, 7(7), 1851-1863.

达克利西布甲苯磺酸盐是达克利西布的甲苯磺酸盐形式，达克利西布是一种口服生物利用度高的咪唑喹啉类药物，靶向磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR），具有潜在的抗肿瘤活性。达克利西布给药后，可抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路中的PI3K激酶和mTOR激酶，从而导致PI3K/mTOR过表达肿瘤细胞的凋亡和生长抑制。PI3K/mTOR通路的激活可促进细胞生长、存活以及对化疗和放疗的耐药性。 mTOR是PI3K下游的丝氨酸/苏氨酸激酶，其激活也可能独立于PI3K。磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白抑制剂（mTOR）通路在人类肿瘤细胞中通常处于组成型激活状态，这为抗癌治疗干预提供了独特的机会。NVP-BEZ235是一种咪唑并[4,5-c]喹啉衍生物，它通过与PI3K和mTOR的ATP结合位点结合来抑制PI3K和mTOR的激酶活性。在利用人肿瘤细胞系的细胞模型中，该分子能够有效且特异性地阻断PI3K通路的异常激活，诱导G1期阻滞。NVP-BEZ235的细胞活性在人类癌症的体内模型中也得到了验证。因此，该化合物耐受性良好，口服给药后可抑制疾病进展，并且在体内联合用药研究中可增强其他抗癌药物的疗效。离体肿瘤组织药代动力学/药效学分析显示，化合物浓度与PI3K/Akt通路抑制之间存在时间依赖性相关性。综上所述，临床前数据表明，NVP-BEZ235是一种具有良好药理特性的强效双重PI3K/mTOR调节剂。 NVP-BEZ235 目前正处于 I 期临床试验阶段。[1]

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NVP-BEZ235 是一种通过基于结构的药物设计发现的咪唑并[4,5-c]喹啉衍生物。
它与 PI3K 和 mTOR 的 ATP 结合位点竞争性结合，并与保守残基形成氢键。
它能阻断 PTEN 缺失或 PI3K 突变的癌细胞中功能异常的 PI3K 通路激活。
在测试的细胞系中，它能诱导 G₁ 期阻滞和 p27Kip1 上调，但不诱导细胞凋亡。
在胶质母细胞瘤模型中，它与替莫唑胺显示出协同抗肿瘤活性。
在本文发表时，它已进入 I 期临床试验阶段。[1]

C37H31N5O4S

641.75

641.21

C, 69.25; H, 4.87; N, 10.91; O, 9.97; S, 5.00

1028385-32-1

Dactolisib;915019-65-7; 1028385-32-1; 2319647-83-9 (HCl)

49803145

Off-white to light yellow solid powder

8.216

139.25

1

7

4

47

1080

0

CN(C1=C2C3=CC(C4=CC5=CC=CC=C5N=C4)=CC=C3N=C1)C(N2C6=CC=C(C=C6)C(C)(C#N)C)=O.CC7=CC=C(S(=O)(O)=O)C=C7

FWURTHAUPVXZHW-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C30H23N5O.C7H8O3S/c1-30(2,18-31)22-9-11-23(12-10-22)35-28-24-15-19(21-14-20-6-4-5-7-25(20)32-16-21)8-13-26(24)33-17-27(28)34(3)29(35)36;1-6-2-4-7(5-3-6)11(8,9)10/h4-17H,1-3H3;2-5H,1H3,(H,8,9,10)

4-methylbenzenesulfonic acid;2-methyl-2-[4-(3-methyl-2-oxo-8-quinolin-3-ylimidazo[4,5-c]quinolin-1-yl)phenyl]propanenitrile

Dactolisib tosylate; NVP-BEZ 235 Tosylate; NVP-BEZ235-ANA; BEZ235 Tosylate; BEZ235 Tosylate; BEZ235 (Tosylate); Dactolisib (Tosylate); NVP-BEZ235-ANA; Dactolisib tosilate; Dactolisib tosylate [USAN]; UNII-U54GT9151S

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 1 mg/mL (1.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 10.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 2 中的溶解度: NMP+polyethylene glycol 300 (10/90, v/v): 30mg/mL

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配方 3 中的溶解度: 16.67 mg/mL (25.98 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。