| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 50mg | ||
| 100mg |
| 靶点 |
Non-peptide neuropeptide Y (NPY) Y2 receptor (IC50 = 15 nM)
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| 体外研究 (In Vitro) |
在用大鼠Y2受体cDNA转染的HEK 293细胞中，受体结合测试表明BIIE-0246以高亲和力竞争特定的[125I]PYY3-36结合位点(IC50=15±3nM)。另一方面，在转染的 HEK 293 细胞中，即使浓度高达至 10 μM。它们是大鼠 Y1、Y4 或 Y5 受体的 cDNA [1]。
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| 体内研究 (In Vivo) |
当喂食饲料时，遗传性肥胖的 NPY 小鼠具有较高的体重和肥胖水平。在两种基因型中，BIIE-0246 治疗在 4.5 周和 2 周后均导致体重增加。对于脂肪量的增加，BIIE-0246 没有明显的效果。 BIIE-0246 对 DIO 中的体重和成分的影响因基因型而异（治疗 × 基因型相互作用，体重 P < 0.05，脂肪量 P < 0.001，瘦肉量 P < 0.05）。事后分析显示，DIO-WT 组的去脂体重增加较少，体重和脂肪量增加较多的趋势。 BIIE-0246 阻止 DIO-NPY 脂肪量增加 (P=0.05)。有趣的是，在 4.5 周的队列中没有观察到较高的胆固醇水平，但在给予 BIIE-0246 两周的 WT 小鼠中却出现了较高的胆固醇水平。在两个 DIO-NPY 治疗组中（DIO-NPY 媒介物 P<0.01；DIO-NPY BIIE-0246 P<0.001），胆固醇水平与体脂量呈正相关；在任何其他组中都没有观察到这种关系。此外，用 BIIE-0246 治疗的 DIO-NPY 组的脂肪量和胆固醇的回归曲线显着低于用媒介物治疗的组 [2]。
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| 酶活实验 |
结合分析[1]
所有结合试验都是通过在最终体积为500μl的KRP中加入100μl的膜或细胞制剂来启动的，KRP含有0.1%（w v−1）BSA、0.05%（w v-1）杆菌肽放射性标记探针和未标记的肽或竞争对手。在放射性标记探针浓度增加的情况下进行等温饱和，而在存在和不存在各种竞争对手的情况下，使用30-35pM的放射性标记探针进行竞争结合实验，浓度范围为10-12-10-6M。在大鼠脑匀浆中，分别使用[125I[Leu31，Pro34]PYY和[125I]PYY3-36研究Y1样和Y2样受体，如前所述（Dumont等人，1995）。[125I]GR231118和[125I][Leu31，Pro34]PYY分别用于转染大鼠Y1和Y5受体cDNA的HEK 293细胞。分别使用[125I]PYY3-36和[125I]hPP在转染有大鼠Y2和Y4受体cDNA的HEK 293细胞中进行结合。在1μM pNPY存在下测定非特异性结合。孵育2小时后，使用细胞收获器过滤装置通过Schleicher和Schuell#32玻璃过滤器（之前浸泡在1.0%聚乙烯亚胺中）快速过滤终止结合反应。用3ml冷KRP冲洗过滤器三次，使用效率为85%的伽马计数器对过滤器上残留的放射性进行定量。[1] 所有结合实验重复三到六次，每次重复三次，结果以特异性结合（竞争）或fmol（饱和）的百分比表示。Kd值（即占据总受体群体50%所需的放射性配体浓度）是使用GraphPad Prism软件从饱和等温线结合实验中获得的数据计算出来的，并拟合为单位点双曲线。使用GraphPad Prism软件根据竞争结合测定数据计算各种肽和拮抗剂的IC50值（即竞争50%的放射性配体特异性结合所需的未标记肽的浓度），并拟合到S形剂量反应曲线。 定量受体放射自显影术[1] 受体放射自显影如其他地方详细描述的那样进行（Dumont等人，1996；1998a，1998b；Jacques等人，1997）。所有切片（20μm）均使用-17°C的冷冻切片机获得，安装在明胶-铬-明矾涂层载玻片上，在4°C的干燥器中干燥过夜，然后保持在-80°C直至使用。 [1] 在实验当天，相邻的冠状切片在室温下在pH 7.4的KRP缓冲液中预孵育60分钟，然后在含有0.1%BSA、0.05%杆菌肽、30 pM[125I]PYY3-36和不同浓度的BIIE0246（10-10-10-5M）的新鲜KRP缓冲溶液中孵育120分钟。孵育2小时后，将切片在冰冷的KRP缓冲液中洗涤四次，每次2分钟，然后浸入去离子水中去除盐分并快速干燥。使用1μM NPY测定非特异性结合。将孵育切片与3H Hyperfilms一起与放射性标准物放置6天。胶片的显影和定量如其他地方详细描述的那样（Dumont等人，1996；1998a）。 |
| 细胞实验 |
体外生物测定[1]
兔（Cadieux等人，1993）和狗（Pheng等人，1997）的隐静脉、大鼠输精管（Martel等人，1990；Dumont等人，1994）、大鼠结肠（Pheng等，1999）和人脑动脉（Abounader等人，1995）的制备如其他地方详细描述的。通过累积添加兔隐静脉和人脑动脉（NPY诱导的收缩）以及大鼠输精管（NPY抑制电刺激抽搐反应）的肽，生成了对NPY的浓度反应曲线，而对大鼠结肠（NPY诱发的收缩）则采用非累积方式。在这些组织中，通过在NPY前10分钟施加不同浓度或单一最大浓度（1μM）的BIIE0246，研究了BIIE0246的拮抗特性。在犬隐静脉中，通过在NPY预收缩组织上累积添加BIIE0246，研究了BIIE0246阻断NPY收缩作用的能力。[1] 通过绘制NPY的摩尔浓度与以最大响应百分比表示的响应的关系图，构建了浓度响应曲线。从这些图中，通过非线性回归分析（S形剂量反应曲线）计算EC50值。根据每条曲线计算EC50值，并根据这些数据计算大鼠输精管、兔隐静脉和人脑动脉的平均值±s.e.mean。对于每种使用的拮抗剂浓度，浓度比是通过将拮抗剂存在下NPY的EC50值除以阻断剂不存在时获得的EC50来计算的。构建Schild图，并使用线性回归确定x截距（pA2值）。对于犬隐静脉，pA2值被确定为将NPY的收缩作用降低50%所需的BIIE0246浓度。 转染细胞[1] HEK 293细胞在添加了10%胎牛血清和抗生素（青霉素G钠、硫酸链霉素和两性霉素B）的Dulbecco改良Eagle培养基（D-MEM）中维持。使用磷酸钙法用大鼠Y1、Y2、Y4或Y5受体cDNA中的任一种转染培养的细胞（Tong等人，1995）。简要地，将125μl 2.5 M磷酸钙加入到1.125 ml水中，水中含有50μg大鼠Y1、Y2、Y4或Y5受体cDNA，该cDNA先前插入表达pcDNA3载体中，并与1.25 ml pH 7.05的2×HEPES缓冲液缓慢混合，在室温下放置20分钟。将混合物加入到含有30%融合的HEK 293细胞的150 mm培养皿中，然后返回培养箱。第二天早上换了媒介。48小时后，用pH 7.4的KRP缓冲液洗涤细胞并刮除。然后将分离的细胞在400×g下离心10分钟，用KRP缓冲液（pH 7.4), 再次离心两次并重新悬浮在8ml pH 7.4的KRP缓冲液中并用于受体结合测定。 |
| 动物实验 |
药物治疗研究在小鼠20周龄时进行。治疗前，小鼠通过每日腹腔注射生理盐水（ip）进行为期2周的适应性训练，以消除操作应激。一半饲喂标准饲料的小鼠（每组n = 10–13）接受4.5周的治疗，另一半小鼠在治疗2周后即被处死并收集组织（每组n = 7–14）。DIO小鼠（每组n = 7–12）接受2周的治疗。（研究方案见补充图1）。小鼠每日腹腔注射1.3 mg/kg的Y2受体拮抗剂（BIIE0246，Tocris Bioscience，英国布里斯托尔）或载体（DMSO、Tween® 80）（Fisher Scientific，美国新泽西州费尔劳恩）和0.9%氯化钠，二者比例为1:1:18。先前一项急性给药研究（Forbes等，2012）中使用了2 mg/kg剂量的BIIE0246，这支持了本研究中重复给药剂量（1.3 mg/kg）的合理性。BIIE0246在小鼠体内的半衰期小于3小时，但明显长于其他Y2受体拮抗剂的半衰期，因此是最适合慢性给药的Y2受体拮抗剂（Brothers等，2010）。[2]
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
1. 新合成的非肽类神经肽Y (NPY) Y(2)受体拮抗剂BIIE0246能够以高亲和力（8至15 nM）竞争性结合转染大鼠Y(2)受体cDNA的HEK293细胞以及大鼠脑和人额叶皮层膜匀浆中的特异性[(125)I]PYY(3-36)结合位点。2. 有趣的是，在大鼠脑匀浆中，尽管NPY、C2-NPY和PYY(3-36)抑制了所有特异性[(125)I]PYY(3-36)标记，但BIIE0246未能竞争性结合所有特异性结合位点，这表明[(125)I]PYY(3-36)除了识别Y(2)亚型外，还识别另一类特异性NPY结合位点，最可能是Y(5)受体。 3. 定量受体放射自显影数据证实，大鼠脑、狨猴和人海马结构中存在对[(125)I]PYY(3-36)/BIIE0246敏感的(Y(2))和不敏感的(Y(5))结合位点。4. 在大鼠输精管和犬隐静脉（两种典型的Y(2)生物测定）中，BIIE0246分别使NPY浓度-反应曲线平行右移，pA(2)值分别为8.1和8.6。在大鼠结肠（Y(2)/Y(4) 生物测定）中，BIIE0246 (1 μM) 完全阻断了 PYY(3-36) 诱导的收缩，但对 [Leu(31), Pro(34)]NPY（Y(1)、Y(4) 和 Y(5) 受体激动剂）和 hPP（Y(4) 和 Y(5) 受体激动剂）诱导的收缩没有影响。此外，BIIE0246 也未能改变 NPY 在典型的 Y(1) 体外生物测定中的收缩效应。综上所述，这些结果表明 BIIE0246 是一种高效、高亲和力的 Y(2) 受体亚型选择性拮抗剂。进一步阐明Y(2)受体在生物体中的功能作用将大有裨益。[1]
总之，我们利用多种受体结合试验和体外生物测定证明，BIIE0246是一种高效且选择性的Y2受体拮抗剂，对Y1、Y4和Y5亚型受体没有高亲和力。据我们所知，BIIE0246是首个高效且选择性的工具，可用于精确确定Y2受体在不同组织中的潜在作用，并从分子层面解析该受体上激动剂和拮抗剂识别位点的特征。除了Y2基因敲除小鼠（Naveilhan等人，1999）之外，BIIE0246的可用性对于证明该亚型参与NPY及相关肽类诱导的特定效应也至关重要。[1]神经肽Y（NPY）在中枢和交感神经系统（SNS）水平的能量稳态调节中发挥着重要作用。外周Y2受体的基因沉默具有抗肥胖作用，但尚不清楚外周Y2受体的药理学阻断是否同样有益于能量稳态。本研究在健康状态和高能量状态下（无论是否存在过量NPY），探讨了外周给药的Y2受体拮抗剂的作用。脑内去甲肾上腺素能神经和交感神经系统中NPY过表达的遗传性肥胖小鼠（OE-NPYDβH）代表NPY水平升高的情况，而野生型（WT）小鼠则代表NPY水平正常的情况。对喂食标准饲料或高脂饮食的OE-NPYDβH小鼠和WT小鼠，分别给予特异性Y2受体拮抗剂BIIE0246（1.3 mg/kg/天，腹腔注射），持续2周或4.5周。Y2受体拮抗剂治疗增加了两种基因型小鼠在标准饲料喂养下的体重增加，并导致代谢紊乱（例如高胰岛素血症和高胆固醇血症），尤其是在WT小鼠中。在能量过剩的情况下（即喂食高脂饮食），阻断Y2受体诱导WT小鼠肥胖，而OE-NPYDβH小鼠的脂肪量增加、肝糖原和血清胆固醇水平相对于体脂含量均有所降低。因此，可以得出结论，在 NPY 水平正常的情况下，外周 Y2 受体拮抗剂没有治疗肥胖的潜力，相反，甚至可能诱发代谢紊乱。然而，当高能量饮食与 NPY 水平升高相结合时，例如压力与不健康饮食相结合，Y2 受体拮抗剂对代谢状态有益。[2] |
| 分子式 |
C49H57N11O6
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|---|---|
| 分子量 |
896.046980000001
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| 精确质量 |
895.449
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| CAS号 |
246146-55-4
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| 相关CAS号 |
BIIE-0246 hydrochloride
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| PubChem CID |
9811493
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 折射率 |
1.7
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| LogP |
5.48
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| tPSA |
221.68
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
5
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| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
16
|
| 重原子数目 |
66
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| 分子复杂度/Complexity |
1710
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C1CCC(C1)(CC(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NCCN2C(=O)N(N(C2=O)C3=CC=CC=C3)C4=CC=CC=C4)CC(=O)N5CCN(CC5)C6C7=CC=CC=C7C(=O)NC8=CC=CC=C68
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| InChi Key |
RSJAXPUYVJKAAA-JPGJPTAESA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C49H57N11O6/c50-46(51)53-25-13-22-40(45(64)52-26-27-58-47(65)59(34-14-3-1-4-15-34)60(48(58)66)35-16-5-2-6-17-35)54-41(61)32-49(23-11-12-24-49)33-42(62)56-28-30-57(31-29-56)43-36-18-7-8-19-37(36)44(63)55-39-21-10-9-20-38(39)43/h1-10,14-21,40,43H,11-13,22-33H2,(H,52,64)(H,54,61)(H,55,63)(H4,50,51,53)/t40-,43?/m0/s1
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| 化学名 |
(2S)-5-(diaminomethylideneamino)-N-[2-(3,5-dioxo-1,2-diphenyl-1,2,4-triazolidin-4-yl)ethyl]-2-[[2-[1-[2-oxo-2-[4-(6-oxo-5,11-dihydrobenzo[c][1]benzazepin-11-yl)piperazin-1-yl]ethyl]cyclopentyl]acetyl]amino]pentanamide
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| 别名 |
AR-H 053591; BIIE-0246; CHEMBL540989; BIIE-0246; BIIE 0246; 246146-55-4; BIIE0246; Ar-H-053591; (2S)-5-(diaminomethylideneamino)-N-[2-(3,5-dioxo-1,2-diphenyl-1,2,4-triazolidin-4-yl)ethyl]-2-[[2-[1-[2-oxo-2-[4-(6-oxo-5,11-dihydrobenzo[c][1]benzazepin-11-yl)piperazin-1-yl]ethyl]cyclopentyl]acetyl]amino]pentanamide; N3Z657H81X; Cyclopentaneacetamide, N-((1S)-4-((aminoiminomethyl)amino)-1-(((2-(3,5-dioxo-1,2-diphenyl-1,2,4-triazolidin-4-yl)ethyl)amino)carbonyl)butyl)-1-(2-(4-(6,11-dihydro-6-oxo-5H-dibenz(b,E)azepin-11-yl)-1-piperazinyl)-2-oxoethyl)-; GTPL1547; AR H 053591; BIIE-0246; AR-H-053591; AR H053591; ARH053591; BIIE 0246; CTK8E9439; BIIE0246;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~111.60 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (2.79 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.1160 mL | 5.5800 mL | 11.1601 mL | |
| 5 mM | 0.2232 mL | 1.1160 mL | 2.2320 mL | |
| 10 mM | 0.1116 mL | 0.5580 mL | 1.1160 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
 (A,D)Body weight,(B,E)fat mass and(C,F)lean mass gain in OE-NPYDβHand WT mice on chow (n= 11–12/group)(A–C)or Western diet (n= 7–11/group)(D–F)treated with Y2-receptor antagonist (BIIE0246) or vehicle for 4.5 or 2 weeks, respectively.Front Pharmacol.2018 Apr 5;9:319. |
|---|
(A)Representative H&E stainings of liver slides with × 20 magnification (scale bar 100 μm), and(B)triglycerides and(C)cholesterol in the livers of mice on chow diet treated with Y2-receptor antagonist (BIIE0246) or vehicle for 4.5 weeks (n= 8–12/group).Front Pharmacol.2018 Apr 5;9:319. |
(A–D)mRNA expression ofNpy,(E–H)Th(I,J)Pomcand(K,L)Y2rin the hypothalamus and the brainstem of chow-(A,B,E,F,I,K)or Western-diet-fed(C,D,G,H,J,L)OE-NPYDβHand WT mice (n= 6–12/group) after 2-week Y2-receptor antagonist (BIIE0246) or vehicle |
Thiotaurine
ALG1001 TFA
SJF-8240 (Foretinib-Based PROTAC 7)
BMS-066
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