Birinapant (TL32711)   中文名称: 比瑞那帕

XIAP (Kd = 45 nM); cIAP1 (Kd <1 nM)
Birinapant primarily targets IAP family proteins, including cIAP1, cIAP2, XIAP, and ML-IAP. In cell-free systems, it exhibits ultra-high affinity for the BIR3 domain of cIAP1 (Kd < 1 nM) and binds XIAP with a Kd of 45 nM. Birinapant preferentially targets TRAF2-associated cIAP1 and cIAP2, inducing their autoubiquitylation and proteasomal degradation, thereby relieving IAP-mediated inhibition of apoptotic pathways.

Birinapant 与 cIAP1 和 XIAP 结合，Kd 值分别为 45 和 1 nM。 Birinapant 显着增加 SUM149（三阴性、EGFR 激活）细胞中 TNF-α 诱导的细胞凋亡的效力，这些细胞是 TRAIL 敏感但 TRAIL 不敏感的 SUM190（ErbB2 过表达）细胞。 cIAP1 的快速降解、半胱天冬酶的激活、PARP 的裂解和 NF-B 的激活都是由 birinapant 引起的。 [1]在体外，birinapant 和 TNF-α 表现出有效的抗黑色素瘤作用。虽然这两种物质单独使用均无效，但 birinapant 与 TNF-(1 ng/mL) 联用可抑制人黑色素瘤细胞系 WTH202、WM793B、WM1366 和 WM164 的生长，IC50 分别为 1.8、2.5、7.9 和 9 nM。 birinapant 单独抑制 WM9 细胞的增殖，IC50 为 2.4 nM。在这些细胞系中，birinapant 显着抑制靶蛋白 cIAP1 和 cIAP2。 [2]

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Birinapant在体外能有效诱导多种肿瘤细胞死亡。其机制是：降解cIAP1/2后，促进RIPK1与caspase-8形成复合物，激活caspase-8并启动外源性凋亡通路。在联合TNF-α时，Birinapant对黑色素瘤细胞株WTH202、WM793B、WM1366和WM164的IC50分别为1.8、2.5、7.9和9 nM。在ALL细胞系中，与TNF-α联用后的中位IC50低至3.6 nM，表现出显著的细胞毒作用。

Birinapant (30 mg/kg) 治疗可显着诱导黑色素瘤异种移植模型 451Lu 中肿瘤生长的消除。 [2]

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在黑色素瘤异种移植模型中，Birinapant作为单一药物[2]
抑制肿瘤生长 为了研究birinapant是否能在体内作为单一药物抑制黑色素瘤肿瘤生长，我们选择了两种细胞系进行异种移植实验：两种细胞系在体外都对birinapant单一药物耐药，但451Lu在体外对birinapant与TNF-α联合治疗有反应，而1205Lu在体外对联合治疗无反应。将这两种细胞系接种于裸鼠体内，形成可触及的肿瘤，然后随机分为对照和双抗治疗组。在给药的三周内，birinapant在两种模型中都显示出抗肿瘤作用，尽管在体外联合敏感细胞系中，随着birinapant治疗动物的肿瘤生长消失，这种作用更加持久。相比之下，1205Lu肿瘤显示肿瘤生长明显减缓，但没有肿瘤消失（图5A）。
在随后的体内实验中，我们通过肿瘤裂解物的免疫印迹进一步证实了两种模型中双抗靶向抑制作用。动物再次接种异种移植模型和肿瘤。然后动物在48小时的间隔内进行两次预处理，并在第二次给药后3、6、12和24小时切除肿瘤。与对照相比，cIAP1蛋白在3h后降低到低水平，这种效果在两种模型中都持续了24小时（图5B）。在同一肿瘤的活组织检查中，活化的caspase-3染色显示，在治疗24小时后，与对照相比，biinapant处理的动物中凋亡细胞适度增加（图5C）。

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药物治疗增加了ICMT-11的平均[(18)F]肿瘤摄取，CPA在24小时达到峰值(40 mg/kg；AUC40-60：基线和24小时分别为8.04±1.33和16.05±3.35 %ID/mL × min)和6小时birinapant (15 mg/kg；AUC40-60: 20.29±0.82和31.07±5.66% ID/mL × min，基线和6小时分别)。基于体素的肿瘤内在异质性时空分析表明，通过ICMT-11可以检测到离散的caspase-3激活口袋[(18)F]。肿瘤[(18)F]ICMT-11摄取增加与体外测量的caspase-3激活有关，早期放射性示踪剂摄取预测细胞凋亡，与[(18)F]氟脱氧葡萄糖- pet的糖代谢不同，后者描述细胞活力的持续丧失。
结论：CPA和birinapant的促凋亡作用导致PET检测的ICMT-11摄取呈时间依赖性增加[(18)F]。[18] [F]ICMT-11-PET有望作为caspase-3相关肿瘤细胞凋亡的无创药效学标志物。][3]

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在多种患者来源的异种移植模型（PDX）中，Birinapant在耐受良好的剂量下能有效抑制肿瘤生长。在儿童ALL异种移植模型中，Birinapant（30 mg/kg，腹腔注射，每3天一次×5次）在3个B-precursor ALL模型中的3个均诱导了显著的事件无生存期差异，其中ALL-17达到完全缓解，ALL-2达到维持性完全缓解（至第42天仍处于缓解状态）。在骨髓瘤异种移植模型中，Birinapant与硼替佐米联合应用显著延长了生存期。

使用荧光底物来确定物质与 XIAP 和 cIAP1 的结合亲和力，然后报告 Kd 值。首先通过用固定浓度滴定不同的蛋白质浓度（半对数稀释中的 0.075–5 μM）来计算荧光标记的修饰 Smac 肽（AbuRPF-K(5-Fam)-NH2；FP 肽）解离常数 (Kd)肽（5 nM）。测定中使用 5 nM FP 肽和 50 nM XIAP，使用 GraphPad Prism 将非线性最小二乘法拟合到单位点结合模型，生成剂量反应曲线。将 FP 肽：蛋白质二元复合物与不同浓度的 Smac 模拟物（半对数稀释液中的 100-0.001 μM）在 100 mL 0.1 M 磷酸钾缓冲液（pH 7.5，含有 100 mg/mL 牛）中混合 15 分钟。 c-球蛋白。孵育后，使用多标签读板机上的 520 nm 发射滤光片和 485 nm 激发滤光片确定偏振值。

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蛋白准备: 表达并纯化IAP家族蛋白的BIR结构域（如cIAP1-BIR3、XIAP-BIR3）。 亲和力测定: 采用荧光偏振（FP）或表面等离子体共振（SPR）技术，测定Birinapant与各BIR结构域的结合亲和力（Kd值）。 竞争结合: 使用荧光标记的SMAC衍生肽作为示踪剂，通过竞争结合实验验证结合特异性。 数据分析: 计算Birinapant对各靶点的Kd值，结果为cIAP1 < 1 nM，XIAP为45 nM。

细胞贴壁24小时后，将细胞与birinapant和/或TNF-α一起孵育另外24或72小时。然后进行 MTS 测定。

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细胞活力[1]
台盼蓝排除试验如前所述[2]。细胞接种于6孔板，每孔7.5 × 104 （SUM149）或1.5 × 105 （SUM190）细胞，粘附过夜。细胞分别用TRAIL （0-100 ng mL−1）、Birinapant (0-10,000 nM)、GT13402 （0-10,000 nM）、TNF-α (50 ng mL−1)、TNF-α中和抗体（10 μg mL−1）、pan-caspase抑制剂Q-VD-OPh （20 μM）或根据指示组合处理。所有处理均作用24 h，然后胰蛋白酶化细胞并在PBS中重悬。将10 μL细胞悬液加入10 μL 0.4%台锥蓝中，将10 μL细胞悬液载于血细胞计上；计数细胞数，记录活细胞数和死细胞数。

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克隆生长试验[1]
细胞以每孔250-500个细胞（SUM149）或每孔500 - 1000个细胞（SUM190）的方式在6孔板中一式三次镀，并粘附过夜。细胞分别用TRAIL （0-100 ng mL−1）、Birinapant (0-10,000 nM)、GT13402 （0-10,000 nM）、TNF-α (50 ng mL−1)、TNF-α中和抗体（10 μg mL−1）、pan-caspase抑制剂Q-VD-OPh （20 μM）或根据指示组合处理。处理24 h后，用PBS洗涤细胞2次，加入常规培养基。然后让细胞生长5-14天，每4-5天更换一次培养基。一旦观察到至少50个细胞的菌落，用PBS洗涤，固定，用0.4%结晶紫染色，然后用冷水冲洗并放置干燥过夜。使用ColCount对菌落进行计数和成像，并计算每个镀细胞形成的菌落。数值归一化为未治疗。

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Annexin-V染色[1]
细胞接种于6孔板，每孔7.5 × 104 （SUM149）或1.5 × 105 （SUM190）细胞，粘附过夜。将细胞用TRAIL （0-100 ng mL−1）、Birinapant (0 - 1000 nM)、GT13402 （0 - 1000 nM）或组合处理12小时。用0.25%胰蛋白酶（-EDTA）收获细胞，用PBS洗涤，在生物素偶联的Annexin-V中重悬5分钟。再用PBS洗涤细胞，用链霉亲和素偶联的FITC和7-AAD染料在冰上重悬15分钟。细胞在PBS中洗涤并重悬，然后在BD FACSCalibur流式细胞仪上收集至少25,000个事件。采用FlowJo软件对结果进行分析。

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TNFR1敲低[1]
细胞接种于6孔板中，每孔1.5 × 105个细胞，粘附过夜。24 h后，在dharmect转染试剂的存在下，使用100 nM的scramble control siRNA或靶向TNFR1 siRNA。转染后第1天加入Birinapant(0-1,000 nM)， 24 h后收获细胞进行台盼蓝活力染色和western免疫印迹，确认敲除。

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体外药敏试验[2]
对于单层细胞培养实验，细胞被允许附着24小时，随后与Birinapant和/或TNF-α孵育24或72小时。CellTiter 96®水相非放射性细胞增殖试验（MTS）根据制造商的说明进行。为了进行细胞周期分析，将黑色素瘤细胞固定在70%乙醇中，并用碘化丙啶染色。随后用EPICS XL仪器分析样品。根据制造商的描述，用膜联蛋白V异藻蓝蛋白偶联物进行膜联蛋白V染色。简单地说，用DMSO对照、Birinapant和/或TNF-α处理细胞24小时。将重悬的细胞洗净，用偶联物孵育15min，加入膜联蛋白结合缓冲液。随后用EPICS XL仪器分析样品。
451Lu和WM1366黑色素瘤细胞用Birinapant1uM联合TNF-α 1ng/ml治疗。然后将细胞在存在或不存在Z-VAD-FMK（泛caspase抑制剂）的情况下孵育72小时。使用MTS法评估增殖。
451Lu和WM1366黑色素瘤细胞用Birinapant 1uM联合TNF-α 1ng/ml治疗。然后将细胞在存在或不存在Necrostatin-1 （RIP1激酶抑制剂）的情况下孵育72小时。使用MTS法评估增殖。[2]

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细胞培养: 将肿瘤细胞接种于96孔板，培养至适宜汇合度（如ALL、黑色素瘤、骨髓瘤细胞系）。 药物处理: 加入不同浓度的Birinapant（单药或联合TNF-α/TRAIL/化疗药物），孵育48-96小时。 细胞活力检测: 采用MTT、CCK-8或CellTiter-Glo法测定细胞活力，计算IC50值。 凋亡检测: 通过Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率，或通过Western blot检测cIAP1/2降解、caspase-8活化、PARP剪切等标志物。

人黑色素瘤异种移植模型 451Lu
30 mg/kg
每周 3 次腹腔注射

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所有动物实验均按照 Wistar IACUC 111954 号方案在裸鼠中进行。每组 10 只裸鼠皮下接种 1×10⁶ 个 451Lu 或 1205Lu 人黑色素瘤细胞，细胞悬浮于 Matrigel/完全培养基（1:1 比例）中。待肿瘤形成后，将两种肿瘤模型的小鼠随机分为两组。两组均每周腹腔注射三次，分别给予载体对照或 Birinapant 30mg/kg，持续 21 天。Birinapant 溶于 12.5% Captisol 蒸馏水中。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤大小。随后，分别以相同方式将451Lu和1205Lu的肿瘤细胞接种到10只和15只小鼠的卫星组中。当肿瘤平均体积达到200mm³时，按照上述方法给予动物Birinapant或载体对照。48小时后，给予两次给药，处死动物，并在最后一次给药后的四个时间点收集肿瘤。肿瘤样本用液氮速冻，用于后续的蛋白质分析，并制成FFPE组织块用于免疫组织化学分析。[2]

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小动物实验模型[3]
体内实验性异种移植模型的建立方法为：将5 × 10³个38C13细胞皮下注射到C3H小鼠体内，或将5 × 10⁶个HCT116细胞或2 × 10⁶个MDA-MB-231细胞皮下注射到BALB/c裸鼠体内。所有小鼠均为6至8周龄的雌性小鼠，购自Charles River公司。当异种移植瘤达到约 80 mm3 时[使用游标卡尺测量肿瘤尺寸，并使用最适合估计肿瘤质量的椭球体公式计算肿瘤体积；体积 mm3 = (π/6) × a × b × c，其中 a、b 和 c 代表肿瘤的 3 个正交轴]，小鼠被注射单剂量 CPA（40 mg/kg 腹腔注射）或 Birinapant（15 m/kg 腹腔注射），并在纵向设置中进行正电子发射断层扫描-计算机断层扫描 (PET-CT) 成像，其中同一动物作为其自身的对照。

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动物与模型: 使用免疫缺陷小鼠（如NSG或SCID小鼠），皮下或静脉接种肿瘤细胞构建异种移植模型（ALL、骨髓瘤、实体瘤等）。 分组与给药: 待肿瘤体积达到约100-200 mm³后，将动物随机分为对照组和治疗组。Birinapant通常以30 mg/kg的剂量腹腔注射给药，每3天一次，共5次（Q3D×5）；或与化疗药物联合应用。 监测指标: 每周测量2-3次肿瘤体积和小鼠体重；记录事件无生存期（EFS）和总生存期（OS）。 终点分析: 实验结束时处死动物，收集肿瘤组织进行Western blot（检测cIAP1/2、PARP等）、免疫组化和TUNEL染色，评估体内靶点抑制和凋亡诱导情况。

Birinapant采用30分钟静脉输注方式给药，每周一次。临床药代动力学研究（114例晚期恶性肿瘤患者）显示，其药代动力学呈三室模型特征：终末半衰期约40小时，清除率为21 L/h，稳态分布容积为10.2 L。Birinapant在0.18-35 mg/m²剂量范围内呈线性药代动力学特征，每周给药后无明显蓄积。与伊立替康、多西他赛、吉西他滨、脂质体多柔比星联用时，Birinapant的药代动力学特征保持不变；但与紫杉醇/卡铂联用时，其AUC增加约2倍，可能与OATP1B3介导的组织摄取减少有关。

临床前和临床研究中，Birinapant总体耐受性良好。在儿童ALL异种移植模型中，30 mg/kg（Q3D×5）的给药方案耐受性良好，未报告显著毒性。骨髓瘤异种移植模型中，Birinapant与硼替佐米联合应用同样耐受性良好。临床研究中，Birinapant与多种化疗方案联合时，其耐受性未发生改变；即使与紫杉醇/卡铂联用时暴露量增加2倍，也未观察到耐受性变化。需要注意的是，Birinapant仅供研究使用，需由经过培训的人员操作，避免皮肤和眼睛接触。

[1]. Smac mimetic Birinapant induces apoptosis and enhances TRAIL potency in inflammatory breast cancer cells in an IAP-dependent and TNF-α-independent mechanism. Breast Cancer Res Treat. 2013 Jan;137(2):359-71.

[2]. The novel SMAC mimetic birinapant exhibits potent activity against human melanoma cells. Clin Cancer Res. 2013 Apr 1;19(7):1784-94.

[3]. Temporal and spatial evolution of therapy-induced tumor apoptosis detected by caspase-3-selective molecular imaging. Clin Cancer Res. 2013 Jul 15;19(14):3914-24.

[4]. Birinapant (TL32711), a bivalent SMAC mimetic, targets TRAF2-associated cIAPs, abrogates TNF-induced NF-κB activation, and is active in patient-derived xenograft models. Mol Cancer Ther. 2014 Apr;13(4):867-79.

Birinapant 是一种二肽。
Birinapant 已被研究用于治疗骨髓增生异常综合征 (MDS) 和慢性粒单核细胞白血病 (CMML)。
Birinapant 是一种合成小分子，既是线粒体来源的半胱天冬酶第二激活因子 (SMAC) 的肽模拟物，又是凋亡抑制蛋白 (IAP) 家族蛋白的抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。作为 SMAC 模拟物和 IAP 拮抗剂，Birinapant 可选择性地结合并抑制 IAP 的活性，例如 X 染色体连锁 IAP (XIAP) 和细胞 IAP 1 (cIAP1) 和 2 (cIAP2)，其中对 cIAP1 的抑制作用强于 cIAP2。由于IAPs能够保护癌细胞免受凋亡过程的影响，因此该药物可能通过激活癌细胞的凋亡信号通路来恢复和促进凋亡的诱导，并抑制核因子-κB (NF-κB)介导的存活通路。许多癌细胞类型均过表达IAPs。IAPs能够通过其杆状病毒lAP重复序列(BIR)结构域与活性caspase-3、-7和-9结合，从而抑制凋亡。IAPs的过表达既能促进癌细胞存活，又能增强化疗耐药性。

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X染色体连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)是哺乳动物中最有效的caspase抑制剂，它与炎性乳腺癌(IBC)的获得性治疗耐药性相关。炎性乳腺癌是乳腺癌的一个侵袭性亚型，生存率极低。第二线粒体来源的半胱天冬酶激活因子（Smac）蛋白是IAP蛋白的强效拮抗剂，也是开发Smac模拟药物的基础。本文首次报道，二价Smac模拟物Birinapant可作为单一药物诱导TRAIL不敏感的SUM190（ErbB2过表达）细胞死亡，并显著增强TRAIL敏感的SUM149（三阴性、EGFR激活）细胞（两种患者来源的IBC肿瘤模型）中TRAIL诱导的细胞凋亡效力。Birinapant对cIAP1/2和XIAP具有高亲和力（纳摩尔级）。我们利用具有不同XIAP表达水平的同源SUM149和SUM190细胞（SUM149 wtXIAP，SUM190 shXIAP）以及另一种具有高cIAP1/2结合亲和力但XIAP结合亲和力低（K_d > 1 μM）的二价Smac模拟物（GT13402），证明XIAP抑制是提高TRAIL效力的必要条件。相反，Birinapant单药疗效归因于其对泛IAP的拮抗作用。Birinapant可导致cIAP1快速降解、caspase激活、PARP裂解和NF-κB激活。Birinapant处理后，SUM190细胞中TNF-α的产生略有增加，而SUM149细胞中未观察到TNF-α的增加。外源性TNF-α的添加并未提高Birinapant的疗效。TNF-α中和抗体或TNFR1敲低均未能逆转细胞死亡。然而，泛半胱天冬酶抑制剂Q-VD-OPh逆转了Birinapant介导的细胞死亡。此外，Birinapant单独或联合用药均可降低IBC细胞的集落形成能力和非锚定依赖性生长潜能。这些发现表明，Birinapant以IAP依赖的方式启动癌细胞的死亡，从而支持开发用于IBC治疗的Smac模拟物。[1]

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目的：凋亡抑制蛋白（IAP）促进癌细胞存活并赋予其治疗耐药性。我们报道了第二种线粒体来源的半胱天冬酶模拟物——比瑞那泮（birinapant）——能够恢复黑色素瘤细胞对凋亡刺激（如TNF-α）的敏感性。比瑞那泮可作为cIAP1和cIAP2的拮抗剂。实验设计：我们选取了17株黑色素瘤细胞系，这些细胞系代表了皮肤黑色素瘤的五大遗传亚型。我们分别用比瑞那泮单药治疗或与TNF-α联合治疗这些细胞系。我们评估了药物对细胞活力、靶点抑制和凋亡启动的影响，并在二维（2D）、三维（3D）球体和体内异种移植模型中验证了这些结果。结果：当比瑞那泮与TNF-α联合使用时，在18株细胞系中的12株中观察到了显著的联合活性，即两种药物单独使用均无效，但联合使用却非常有效。在球状体模型中也观察到了这种反应，而体内实验表明，在体外耐药细胞系中，即使不添加TNF-α，birinapant也能抑制肿瘤生长。Birinapant与TNF-α联合使用，对获得性BRAF抑制剂耐药的黑色素瘤细胞系的生长抑制程度与对亲代细胞系的抑制程度相同。结论：Birinapant与TNF-α联合使用在体外表现出强大的抗黑色素瘤作用。即使细胞在体外对单药治疗耐药，Birinapant作为单药在体内也显示出抗肿瘤活性。Birinapant与TNF-α联合使用对获得性BRAF抑制剂耐药的黑色素瘤细胞系有效。[2]

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目的：诱导肿瘤细胞凋亡被认为是抗癌治疗的理想目标。我们研究了能否利用 caspase-3 放射性示踪剂 [(18)F]ICMT-11 和正电子发射断层扫描 (PET) 无创地检测细胞毒性药物和机制靶向药物诱导的细胞凋亡的动态时空演变。实验设计：我们体外评估了单剂量烷化剂环磷酰胺（CPA 或 4-氢过氧环磷酰胺）或机制靶向小分子 SMAC 模拟物 birinapant 对 caspase-3 活化的影响，并利用 [(18)F]ICMT-11-PET 在荷瘤小鼠（38C13 B 细胞淋巴瘤、HCT116 结肠癌或 MDA-MB-231 乳腺腺癌）体内进行了检测。我们将 caspase-3 的离体分析结果与体内 PET 成像数据进行了比较。[3]

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获得凋亡抵抗是癌症发展过程中的一个基本事件。癌细胞逃避凋亡的机制之一是凋亡抑制蛋白（IAP）的失调。IAP的活性受内源性IAP拮抗剂（例如SMAC，也称为DIABLO）的调控。SMAC通过其N端四肽（AVPI）与IAP的特定BIR结构域结合来拮抗IAP蛋白。模拟SMAC AVPI基序的小分子化合物已被设计用于克服癌细胞的IAP介导的凋亡抵抗。本文报道了birinapant（TL32711）的临床前特征，birinapant是一种二价SMAC模拟化合物，目前正在进行癌症治疗的临床试验。体外实验表明，Birinapant 可与 cIAP1、cIAP2 和 XIAP 的 BIR3 结构域以及 ML-IAP 的 BIR 结构域结合，并在完整细胞中诱导 cIAP1 和 cIAP2 的自泛素化和蛋白酶体降解，从而导致 RIPK1:caspase-8 复合物的形成、caspase-8 的激活以及肿瘤细胞死亡。Birinapant 优先靶向 TRAF2 相关的 cIAP1 和 cIAP2，进而抑制 TNF 诱导的 NF-κB 激活。Birinapant 可通过 TNF 依赖性或 TNF 非依赖性方式增强多种化疗抗癌药物的活性。在多种原发性患者来源的异种移植模型中，耐受剂量的 birinapant 可抑制肿瘤生长。这些结果支持将 birinapant 与多种化疗药物联合治疗，特别是那些可以诱导 TNF 分泌的化疗药物。[4]

C42H56F2N8O6

806.94

806.42909

C, 62.51; H, 6.99; F, 4.71; N, 13.89; O, 11.90

1260251-31-7

49836020

White solid powder

1.3±0.1 g/cm3

1090.5±65.0 °C at 760 mmHg

613.3±34.3 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.628

2.98

174.1

8

10

15

58

1350

8

FC1C([H])=C([H])C2=C(C=1[H])N([H])C(C1=C(C3C([H])=C([H])C(=C([H])C=3N1[H])F)C([H])([H])[C@]1([H])C([H])([H])[C@@]([H])(C([H])([H])N1C([C@]([H])(C([H])([H])C([H])([H])[H])N([H])C([C@]([H])(C([H])([H])[H])N([H])C([H])([H])[H])=O)=O)O[H])=C2C([H])([H])[C@]1([H])C([H])([H])[C@@]([H])(C([H])([H])N1C([C@]([H])(C([H])([H])C([H])([H])[H])N([H])C([C@]([H])(C([H])([H])[H])N([H])C([H])([H])[H])=O)=O)O[H]

PKWRMUKBEYJEIX-DXXQBUJASA-N

InChI=1S/C42H56F2N8O6/c1-7-33(49-39(55)21(3)45-5)41(57)51-19-27(53)15-25(51)17-31-29-11-9-23(43)13-35(29)47-37(31)38-32(30-12-10-24(44)14-36(30)48-38)18-26-16-28(54)20-52(26)42(58)34(8-2)50-40(56)22(4)46-6/h9-14,21-22,25-28,33-34,45-48,53-54H,7-8,15-20H2,1-6H3,(H,49,55)(H,50,56)/t21-,22-,25-,26-,27-,28-,33-,34-/m0/s1

(2S)-N-[(2S)-1-[(2R,4S)-2-[[6-fluoro-2-[6-fluoro-3-[[(2R,4S)-4-hydroxy-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-(methylamino)propanoyl]amino]butanoyl]pyrrolidin-2-yl]methyl]-1H-indol-2-yl]-1H-indol-3-yl]methyl]-4-hydroxypyrrolidin-1-yl]-1-oxobutan-2-yl]-2-(methylamino)propanamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.08 mg/mL (2.58 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.58 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 15% Captisol: 15mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。