Broflanilide   中文名称: 溴虫氟苯双酰胺

Insect GABA-gated chloride channel (RDL GABA receptor) non-competitive antagonist. [1]
Desmethyl-broflanilide (active metabolite): IC50 = 1.3 nM against wild-type Spodoptera litura RDL GABA receptor homomer expressed in cells (membrane potential assay). [1]
The primary target of broflanilide is the insect γ-aminobutyric acid (GABA)-gated chloride channel, specifically the resistant-to-dieldrin (RDL) GABA receptor. Broflanilide itself acts as a prodrug and is metabolized in insects to the active metabolite desmethyl-broflanilide (DMBF). DMBF acts as a potent and selective non-competitive antagonist of the insect RDL GABA receptor, binding to a novel site (M1-M3 intersubunit cavity) and irreversibly blocking the chloride channel. This inhibits chloride influx, leading to hyperexcitation, convulsions, paralysis, and death in insects. Unlike conventional GABA antagonists like fipronil and dieldrin, broflanilide binds to a distinct site, showing no cross-resistance with these insecticides.

Desmethyl-broflanilide 是昆虫抗狄氏剂 (RDL) GABA 受体的强效特异性拮抗剂，在农药 broflanilide 代谢时产生。其抑制斜纹夜蛾 RDL GABAR 的 IC50 值为 1.3 nM。 Desmethyl-broflanilide 对 GlyR α1-A288Gβ 和 GlyR α1-A288G 具有相对轻微的抑制作用。温和（IC50，0.706，0.149 μM）[1]。对人 GABAA α1β2η2 受体、哺乳动物 GABAA α1β3η2 受体和人甘氨酸受体 (GlyR) α1β 的作用也较差。

---

膜电位测定显示，活性代谢物脱甲基-broflanilide对野生型斜纹夜蛾 RDL GABA 受体亚基同源多聚体具有高抑制效力，IC50 值为 1.3 nM。此效力显著高于传统的非竞争性拮抗剂，如氟虫腈 (IC50 = 105 nM)、EBOB、印防己毒素、林丹、狄氏剂和 α-硫丹。 [1]
使用表达野生型斜纹夜蛾 RDL GABA 受体的非洲爪蟾卵母细胞进行的双电极电压钳记录表明，脱甲基-broflanilide的拮抗活性比其母体化合物broflanilide高 1000 倍。 [1]
在使用果蝇 S2 细胞的膜电位测定中，观察到多种间二酰胺类化合物对斜纹夜蛾的杀幼虫活性 (LD50) 与其对斜纹夜蛾 RDL GABA 受体同源多聚体的抑制效力之间存在线性相关性 (R² = 0.94)，支持 RDL GABA 受体是其作用靶点。 [1]
对果蝇 RDL GABA 受体的突变研究表明，G336M 突变 (相当于斜纹夜蛾中的 G319M) 消除了脱甲基-broflanilide的抑制活性，但对氟虫腈等传统非竞争性拮抗剂影响很小。相反，位于 A2' 位置的突变 (如 A2'S, A2'N, A2'G，这些突变导致对环二烯类和氟虫腈的抗性) 对脱甲基-broflanilide的活性没有影响。 [1]
脱甲基-broflanilide对昆虫 RDL GABA 受体具有高选择性。其对人类 GABA_A 受体 (α1β2γ2 和 α1β3γ2) 和人类甘氨酸受体 (α1 和 α1β) 的 IC50 > 3 µM，而对昆虫受体的 IC50 为 1.3 nM。人类甘氨酸受体 α1 亚基中的 A288G 突变 (相当于果蝇中的 G336) 显著增加了对脱甲基-broflanilide的敏感性 (IC50 从 >3 µM 降至 α1 的 149 nM 和 α1β 的 706 nM)。 [1]
脱甲基-broflanilide的结合位点与大环内酯类 (如伊维菌素、米尔贝肟) 的结合位点重叠，证据是这些化合物能完全抑制 [³H]BPB 1 (一种脱甲基-broflanilide 类似物) 的结合。然而，突变 (如 I277F, L281C, V340Q/N, A2'S/N) 对大环内酯类活性的影响 (将其从激动剂变为拮抗剂) 与对脱甲基-broflanilide活性的影响 (轻微降低或无变化) 不同。 [1]
同源建模和分子对接研究表明，脱甲基-broflanilide结合于果蝇 RDL GABA 受体关闭构象中 G336 附近的一个亚基间空腔 (M1-M3 口袋)，这与氟虫腈的孔道结合位点不同。 [1]
Broflanilide (以及 BPB 3，一种 N-甲基类似物) 不抑制 [³H]BPB 1 与家蝇 RDL GABA 受体膜的结合，而脱甲基-broflanilide (以及 BPB 1) 则完全抑制该结合，表明 N-甲基间二酰胺需要去甲基化才能产生活性。 [1]

---

体外研究表明，溴虫氟苯双酰胺在昆虫体内代谢为活性产物Desmethyl-broflanilide。在表达斜纹夜蛾野生型RDL GABA受体的细胞膜电位测定中，Desmethyl-broflanilide显示出极强的抑制活性，IC₅₀值为1.3 nM，其效力显著高于传统非竞争性拮抗剂氟虫腈（IC₅₀=105 nM）。在非洲爪蟾卵母细胞表达体系中，双电极电压钳记录显示，Desmethyl-broflanilide的拮抗活性比母体化合物溴虫氟苯双酰胺高约1000倍。该活性代谢物对哺乳动物GABA_A受体（α1β2γ2和α1β3γ2）及人甘氨酸受体α1β的抑制作用极弱（IC₅₀ >3 μM），但对引入A288G突变的甘氨酸受体α1亚基抑制作用增强（IC₅₀=149 nM）。此外，溴虫氟苯双酰胺对人SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞的细胞毒性主要由其活性成分引起，可导致线粒体损伤（膜电位崩溃、通透性转换孔开放）、DNA损伤（单链断裂、双链断裂、氧化性损伤）并诱导线粒体介导的凋亡。

Broflanilide和脱甲基-broflanilide在斜纹夜蛾幼虫中引起相同的兴奋性症状 (惊厥和麻痹)。 [1]
Broflanilide和脱甲基-broflanilide的杀幼虫效力没有差异。 [1]
BPB 3 (一种 N-甲基间二酰胺类似物) 对狄氏剂敏感型和狄氏剂抗性型 (携带 A2'S 突变) 家蝇表现出相同水平的杀虫活性。 [1]

---

溴虫氟苯双酰胺在多种农业害虫和卫生害虫中显示出高效的杀虫活性。对斜纹夜蛾RDL GABA受体的抑制效价（IC₅₀=1.3 nM）与其杀幼虫活性之间存在良好的线性相关性（R²=0.94），证实RDL GABA受体是其杀虫作用的功能靶点。在室内滞留喷洒应用中，含溴虫氟苯双酰胺的制剂VECTRON™ T500（100 mg ai/m²）对冈比亚按蚊实验室敏感品系和野生种群均表现出持久的致死效果，在水泥和泥墙表面喷洒6个月后，对野生种群的死亡率仍维持在80%以上，诱导死亡率达83.2-95.0%。该化合物具有低击倒效应，但能使蚊虫充分暴露于致死剂量。在农业害虫防治中，溴虫氟苯双酰胺对鳞翅目（小菜蛾、草地贪夜蛾）、鞘翅目（黄曲条跳甲）和蓟马类等咀嚼式口器害虫高效，对氟虫腈产生抗性的害虫依然有效。连续10代暴露于溴虫氟苯双酰胺的草地贪夜蛾种群仅产生2.71倍的抗性，代谢抗性风险较低，但存在较高的适合度代价（相对适合度仅为0.35）。

体外酶/受体结合实验主要通过放射性配体结合技术和功能测定进行。1. 放射性配体结合实验：制备表达RDL GABA受体的细胞膜或家蝇头部膜，与³H标记的配体（如[³H]BPB 1，一种Desmethyl-broflanilide类似物）及不同浓度的待测化合物共同孵育，通过过滤分离结合与未结合的放射性，闪烁计数检测结合活性。2. 膜电位测定：在表达RDL GABA受体的果蝇S2细胞或哺乳动物细胞中，加入EC₅₀浓度的GABA刺激，使用荧光染料检测膜电位变化，通过不同浓度化合物处理计算IC₅₀值。3. 双电极电压钳记录：在注射了RDL GABA受体cRNA的非洲爪蟾卵母细胞中进行，钳制电位下记录GABA诱导的氯电流，评估化合物的拮抗作用。

膜电位测定法： 使用膜电位测定法评估化合物对 RDL GABA 受体的抑制活性。实验使用表达野生型或突变型 RDL GABA 受体亚基同源多聚体的果蝇 S2 细胞或其他合适的细胞系。测量在测试化合物存在或不存在的情况下，施加 GABA (EC50 浓度) 引起的膜电位变化，通常使用荧光或电位敏感染料。通过生成浓度-反应曲线来计算 IC50 值。该测定用于比较脱甲基-broflanilide与传统非竞争性拮抗剂的效力，并评估各种突变的影响。 [1]
双电极电压钳记录法： 向非洲爪蟾卵母细胞注射编码野生型或突变型 RDL GABA 受体亚基的 cRNA。表达后，对卵母细胞进行电压钳制，记录 GABA 应用引发的氯离子电流。测量测试化合物 (如broflanilide和脱甲基-broflanilide) 对这些 GABA 诱导电流的抑制作用，以确定拮抗效力。 [1]
放射性配体结合实验： 使用从家蝇头部或表达 RDL GABA 受体的细胞制备的膜。测量氚标记的配体 (如 [³H]EBOB、[³H]BPB 1、[³H]阿维菌素) 在竞争性化合物 (如broflanilide、脱甲基-broflanilide、氟虫腈、狄氏剂) 存在或不存在的情况下与受体的结合。该实验有助于表征结合位点以及不同类别杀虫剂之间的相互作用。 [1]

---

体外细胞实验主要使用昆虫细胞系和哺乳动物细胞系进行。1. 昆虫细胞实验：使用表达野生型或突变型RDL GABA受体的果蝇S2细胞，通过膜电位测定法检测化合物对受体的抑制作用。用EC₅₀浓度的GABA刺激细胞，在不同浓度待测化合物存在下，使用荧光染料检测膜电位变化，绘制浓度-效应曲线计算IC₅₀值。2. 哺乳动物细胞毒性实验：使用人SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞，通过MTT法检测细胞活力，Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测凋亡率，荧光染色法观察线粒体膜电位（JC-1染色）和活性氧水平（DCFH-DA染色），单细胞凝胶电泳（彗星实验）检测DNA损伤，Western blot检测凋亡相关蛋白表达变化。

溴虫氟苯双酰胺在昆虫体内被代谢为活性产物Desmethyl-broflanilide，后者是实际的活性形式。N-甲基间二酰胺类化合物（包括溴虫氟苯双酰胺本身）不抑制³H标记的BPB 1与RDL GABA受体的结合，而代谢产物DMBF则完全抑制，表明母体化合物需要去甲基化才能产生活性。该化合物具有高亲脂性，在农业害虫防治中通过叶面喷雾、土壤处理和种子处理等多种方式施用，可被植物吸收并传导至植株各部位。在室内滞留喷洒应用中，VECTRON™ T500制剂在水泥和泥墙表面可持续6个月保持80%以上的杀虫活性，表现出优异的残留效果。

研究表明，溴氟苯胺在体内代谢为活性形式去甲基溴氟苯胺（N-去甲基化）。这一推测得到了以下事实的支持：1）两种化合物具有相同的杀幼虫效果和效力；2）去甲基溴氟苯胺的体外拮抗活性比溴氟苯胺高1000倍；3）N-甲基类似物（如BPB 3）具有杀虫活性，但与去甲基类似物不同，它们在体外不与RDL GABA受体结合。[1]

---

溴虫氟苯双酰胺在昆虫体内被代谢为活性产物Desmethyl-broflanilide，后者是实际的活性形式。N-甲基间二酰胺类化合物（包括溴虫氟苯双酰胺本身）不抑制³H标记的BPB 1与RDL GABA受体的结合，而代谢产物DMBF则完全抑制，表明母体化合物需要去甲基化才能产生活性。该化合物具有高亲脂性，在农业害虫防治中通过叶面喷雾、土壤处理和种子处理等多种方式施用，可被植物吸收并传导至植株各部位。在室内滞留喷洒应用中，VECTRON™ T500制剂在水泥和泥墙表面可持续6个月保持80%以上的杀虫活性，表现出优异的残留效果。

溴虫氟苯双酰胺对哺乳动物具有较高的选择性安全性，但对水生生物具有一定的毒性风险。在受体选择性方面，活性代谢物Desmethyl-broflanilide对昆虫RDL GABA受体的抑制效力（IC₅₀=1.3 nM）比对哺乳动物GABA_A受体（IC₅₀ >3 μM）高约2300倍，表现出优异的选择性。对人SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞的毒性研究表明，该化合物可导致线粒体损伤（膜电位崩溃、通透性转换孔开放）、DNA损伤（单链断裂、双链断裂、氧化性损伤）并诱导线粒体介导的细胞凋亡。环境毒理学方面，长时间暴露于低浓度溴虫氟苯双酰胺对斑马鱼具有慢性毒性，对水生生态系统构成潜在风险。在农业应用中，溴虫氟苯双酰胺对意大利蜜蜂和玉米螟赤眼蜂等非靶标节肢动物具有较高的毒性风险。

[1]. Broflanilide: A meta-diamide insecticide with a novel mode of action. Bioorg Med Chem. 2016 Feb 1;24(3):372-7.

溴氟苯胺是一种苯甲酰胺，由3-[苯甲酰(甲基)氨基]-2-氟苯甲酸的羧基与2-溴-4-(1,1,1,2,3,3,3-七氟丙-2-基)-6-(三氟甲基)苯胺的氨基缩合而成。它是一种杀虫剂，对斜纹夜蛾幼虫具有很高的杀灭活性，并且对环二烯类和氟虫腈抗性的害虫也有效。它可用作农用化学品、GABA拮抗剂和杀虫剂。它属于苯甲酰胺类、单氟苯类、有机氟杀虫剂、溴苯类和（三氟甲基）苯类。

---

溴氟酰胺是一种间二酰胺类杀虫剂，由三井化学农业株式会社发现。[1]
其主要作用机制是作为昆虫GABA门控氯离子通道（RDL GABA受体）的非竞争性拮抗剂（NCA），但其作用位点与环二烯类、林丹和氟虫腈等经典NCA不同。[1]
其活性代谢物去甲基溴氟酰胺的结合位点位于果蝇RDL GABA受体（亚基间腔）M3跨膜区G336残基处或附近。 [1]
这种新的作用位点被认为是其有效对抗因RDL GABA受体M2区A2'位点突变而对环二烯类和氟虫腈产生抗性的害虫的关键所在。[1]
去甲基溴氟苯胺对昆虫GABA和甘氨酸受体的选择性远高于哺乳动物，这使其具有良好的毒理学特性。与哺乳动物受体G336位点对应的甘氨酸残基是决定这种选择性的关键因素。[1]
虽然其结合位点与大环内酯类（例如伊维菌素）的结合位点重叠，但它们的作用机制不同（拮抗剂与变构激动剂），受体突变对其活性的影响也不同。[1]

C25H14BRF11N2O2

663.277304172516

662.006

C, 45.27; H, 2.13; Br, 12.05; F, 31.51; N, 4.22; O, 4.82

1207727-04-5

53341374

White to off-white solid powder

1.6±0.1 g/cm3

467.9±45.0 °C at 760 mmHg

236.8±28.7 °C

0.0±1.2 mmHg at 25°C

1.538

5.3

49.4

1

13

5

41

922

0

BrC1=CC(=CC(C(F)(F)F)=C1NC(C1C=CC=C(C=1F)N(C)C(C1C=CC=CC=1)=O)=O)C(C(F)(F)F)(C(F)(F)F)F

QSLZKWPYTWEWHC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H14BrF11N2O2/c1-39(21(41)12-6-3-2-4-7-12)17-9-5-8-14(18(17)27)20(40)38-19-15(23(29,30)31)10-13(11-16(19)26)22(28,24(32,33)34)25(35,36)37/h2-11H,1H3,(H,38,40)

3-[benzoyl(methyl)amino]-N-[2-bromo-4-(1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropan-2-yl)-6-(trifluoromethyl)phenyl]-2-fluorobenzamide

broflanilide; 1207727-04-5; 5M24RC688M; CHEBI:131598; DTXSID50894815;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~250 mg/mL (~376.91 mM)

配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.14 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。