Broflanilide   中文名称: 溴虫氟苯双酰胺

Insect GABA-gated chloride channel (RDL GABA receptor) non-competitive antagonist. [1]
Desmethyl-broflanilide (active metabolite): IC50 = 1.3 nM against wild-type Spodoptera litura RDL GABA receptor homomer expressed in cells (membrane potential assay). [1]

Desmethyl-broflanilide 是昆虫抗狄氏剂 (RDL) GABA 受体的强效特异性拮抗剂，在农药 broflanilide 代谢时产生。其抑制斜纹夜蛾 RDL GABAR 的 IC50 值为 1.3 nM。 Desmethyl-broflanilide 对 GlyR α1-A288Gβ 和 GlyR α1-A288G 具有相对轻微的抑制作用。温和（IC50，0.706，0.149 μM）[1]。对人 GABAA α1β2η2 受体、哺乳动物 GABAA α1β3η2 受体和人甘氨酸受体 (GlyR) α1β 的作用也较差。

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膜电位测定显示，活性代谢物脱甲基-broflanilide对野生型斜纹夜蛾 RDL GABA 受体亚基同源多聚体具有高抑制效力，IC50 值为 1.3 nM。此效力显著高于传统的非竞争性拮抗剂，如氟虫腈 (IC50 = 105 nM)、EBOB、印防己毒素、林丹、狄氏剂和 α-硫丹。 [1]
使用表达野生型斜纹夜蛾 RDL GABA 受体的非洲爪蟾卵母细胞进行的双电极电压钳记录表明，脱甲基-broflanilide的拮抗活性比其母体化合物broflanilide高 1000 倍。 [1]
在使用果蝇 S2 细胞的膜电位测定中，观察到多种间二酰胺类化合物对斜纹夜蛾的杀幼虫活性 (LD50) 与其对斜纹夜蛾 RDL GABA 受体同源多聚体的抑制效力之间存在线性相关性 (R² = 0.94)，支持 RDL GABA 受体是其作用靶点。 [1]
对果蝇 RDL GABA 受体的突变研究表明，G336M 突变 (相当于斜纹夜蛾中的 G319M) 消除了脱甲基-broflanilide的抑制活性，但对氟虫腈等传统非竞争性拮抗剂影响很小。相反，位于 A2' 位置的突变 (如 A2'S, A2'N, A2'G，这些突变导致对环二烯类和氟虫腈的抗性) 对脱甲基-broflanilide的活性没有影响。 [1]
脱甲基-broflanilide对昆虫 RDL GABA 受体具有高选择性。其对人类 GABA_A 受体 (α1β2γ2 和 α1β3γ2) 和人类甘氨酸受体 (α1 和 α1β) 的 IC50 > 3 µM，而对昆虫受体的 IC50 为 1.3 nM。人类甘氨酸受体 α1 亚基中的 A288G 突变 (相当于果蝇中的 G336) 显著增加了对脱甲基-broflanilide的敏感性 (IC50 从 >3 µM 降至 α1 的 149 nM 和 α1β 的 706 nM)。 [1]
脱甲基-broflanilide的结合位点与大环内酯类 (如伊维菌素、米尔贝肟) 的结合位点重叠，证据是这些化合物能完全抑制 [³H]BPB 1 (一种脱甲基-broflanilide 类似物) 的结合。然而，突变 (如 I277F, L281C, V340Q/N, A2'S/N) 对大环内酯类活性的影响 (将其从激动剂变为拮抗剂) 与对脱甲基-broflanilide活性的影响 (轻微降低或无变化) 不同。 [1]
同源建模和分子对接研究表明，脱甲基-broflanilide结合于果蝇 RDL GABA 受体关闭构象中 G336 附近的一个亚基间空腔 (M1-M3 口袋)，这与氟虫腈的孔道结合位点不同。 [1]
Broflanilide (以及 BPB 3，一种 N-甲基类似物) 不抑制 [³H]BPB 1 与家蝇 RDL GABA 受体膜的结合，而脱甲基-broflanilide (以及 BPB 1) 则完全抑制该结合，表明 N-甲基间二酰胺需要去甲基化才能产生活性。 [1]

Broflanilide和脱甲基-broflanilide在斜纹夜蛾幼虫中引起相同的兴奋性症状 (惊厥和麻痹)。 [1]
Broflanilide和脱甲基-broflanilide的杀幼虫效力没有差异。 [1]
BPB 3 (一种 N-甲基间二酰胺类似物) 对狄氏剂敏感型和狄氏剂抗性型 (携带 A2'S 突变) 家蝇表现出相同水平的杀虫活性。 [1]

膜电位测定法： 使用膜电位测定法评估化合物对 RDL GABA 受体的抑制活性。实验使用表达野生型或突变型 RDL GABA 受体亚基同源多聚体的果蝇 S2 细胞或其他合适的细胞系。测量在测试化合物存在或不存在的情况下，施加 GABA (EC50 浓度) 引起的膜电位变化，通常使用荧光或电位敏感染料。通过生成浓度-反应曲线来计算 IC50 值。该测定用于比较脱甲基-broflanilide与传统非竞争性拮抗剂的效力，并评估各种突变的影响。 [1]
双电极电压钳记录法： 向非洲爪蟾卵母细胞注射编码野生型或突变型 RDL GABA 受体亚基的 cRNA。表达后，对卵母细胞进行电压钳制，记录 GABA 应用引发的氯离子电流。测量测试化合物 (如broflanilide和脱甲基-broflanilide) 对这些 GABA 诱导电流的抑制作用，以确定拮抗效力。 [1]
放射性配体结合实验： 使用从家蝇头部或表达 RDL GABA 受体的细胞制备的膜。测量氚标记的配体 (如 [³H]EBOB、[³H]BPB 1、[³H]阿维菌素) 在竞争性化合物 (如broflanilide、脱甲基-broflanilide、氟虫腈、狄氏剂) 存在或不存在的情况下与受体的结合。该实验有助于表征结合位点以及不同类别杀虫剂之间的相互作用。 [1]

Studies have shown that Broflanilide is metabolized in vivo to the active form desmethylBroflanilide (N-demethylation). This hypothesis is supported by the following facts: 1) the two compounds have the same larvicidal effect and potency; 2) the in vitro antagonistic activity of desmethylBroflanilide is 1000 times higher than that of Broflanilide; 3) N-methyl analogs (such as BPB 3) have insecticidal activity, but unlike desmethyl analogs, they do not bind to the RDL GABA receptor in vitro. [1]

[1]. Broflanilide: A meta-diamide insecticide with a novel mode of action. Bioorg Med Chem. 2016 Feb 1;24(3):372-7.

Broflanilide is a benzamide formed by the condensation of the carboxyl group of 3-[benzoyl(methyl)amino]-2-fluorobenzoic acid with the amino group of 2-bromo-4-(1,1,1,2,3,3,3-heptafluoroprop-2-yl)-6-(trifluoromethyl)aniline. It is an insecticide with high killing activity against the larvae of the beet armyworm and is also effective against pests resistant to cyclodienes and fipronil. It can be used as an agrochemical, GABA antagonist, and insecticide. It belongs to the benzamide class, monofluorobenzene class, organofluorine insecticides, bromobenzene class, and (trifluoromethyl)benzene class. Bromofluoroamide is a m-diamide insecticide discovered by Mitsui Chemicals & Agriculture Co., Ltd. [1]
Its main mechanism of action is as a non-competitive antagonist (NCA) of insect GABA-gated chloride channels (RDL GABA receptors), but its site of action is different from that of classic NCAs such as cyclodienes, lindane, and fipronil. [1]
The binding site of its active metabolite, desmethylbromofluoroamide, is located at or near the G336 residue of the M3 transmembrane region of the Drosophila RDL GABA receptor (intersubunit cavity). [1]
This novel site of action is considered to be the key to its effective resistance against pests resistant to cyclodienes and fipronil due to mutations at the A2' site in the M2 region of the RDL GABA receptor. [1]
DesmethylBroflanilide has a much higher selectivity for insect GABA and glycine receptors than that for mammals, which gives it good toxicological properties. The glycine residue corresponding to the G336 site of the mammalian receptor is the key factor determining this selectivity. [1]
Although their binding sites overlap with those of macrolides (e.g., ivermectin), their mechanisms of action differ (antagonist vs. allosteric agonist), and receptor mutations have different effects on their activity. [1]

C25H14BRF11N2O2

663.277304172516

662.006

1207727-04-5

53341374

White to off-white solid powder

1.6±0.1 g/cm3

467.9±45.0 °C at 760 mmHg

236.8±28.7 °C

0.0±1.2 mmHg at 25°C

1.538

5.3

49.4

1

13

5

41

922

0

QSLZKWPYTWEWHC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H14BrF11N2O2/c1-39(21(41)12-6-3-2-4-7-12)17-9-5-8-14(18(17)27)20(40)38-19-15(23(29,30)31)10-13(11-16(19)26)22(28,24(32,33)34)25(35,36)37/h2-11H,1H3,(H,38,40)

3-[benzoyl(methyl)amino]-N-[2-bromo-4-(1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropan-2-yl)-6-(trifluoromethyl)phenyl]-2-fluorobenzamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~250 mg/mL (~376.91 mM)

配方 1 中的溶解度: 2.08 mg/mL (3.14 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。