Natural flavonoid in green tea; COX-1/cyclooxygenase-1

在浓度为 70 μg/mL 且 IC50 为 1.4 μM 时，(+)-儿茶素对环氧合酶-1 (COX-1) 的抑制率超过 95% [1]。用 (+)-儿茶素处理 24 小时后，观察到颜色呈剂量依赖性降低。在测试的最高浓度 (+)-儿茶素 (160 μg/mL) 下，54.76% 的细胞死亡，此时 (+)-儿茶素的 IC50 为 127.62 μg/mL。用 (+)-儿茶素处理 MCF-7 细胞导致细胞凋亡的诱导增加，且这种增加呈剂量和时间依赖性。与对照组相比，用 150 μg/mL 和 300 μg/mL (+)-儿茶素处理 24 小时后，分别有 40.7% 和 41.16% 的细胞发生凋亡。用 150 μg/mL (+)-儿茶素处理 24 小时后，MCF-7 细胞中 Caspase-3、-8 和 -9 的表达水平分别增加了 5.81 倍、1.42 倍、3.29 倍和 2.68 倍。与未处理的对照细胞水平相比 [2]。(+)-儿茶素水合物 (31.23–250 μg/mL) 对未分化的 IMR-32 神经母细胞瘤细胞是安全的，IC50 为 821.1 μg/mL。与儿茶素 (31.23–250 μg/mL) 联合处理可剂量依赖性地保护细胞免受阿霉素 (1 或 2 μg/mL) 诱导的细胞死亡；在阿霉素（1 μg/mL）存在下，儿茶素的IC50值为37.61 μg/mL；在阿霉素（2 μg/mL）存在下，IC50值为42.87 μg/mL。在分化的IMR-32细胞中，阿霉素（1.5 μg/mL）显著缩短了神经突长度，而儿茶素（40 μg/mL）预处理则显著增加了神经突长度（与单独使用阿霉素相比）。细胞周期分析显示，阿霉素（1.5 μg/mL）导致细胞周期阻滞于S期和G2/M期；儿茶素（40 μg/mL）预处理部分阻止了这种细胞周期阻滞。[1]

尽管差异不具有统计学意义，但在选择试验中，接受最低测试剂量（即 50 mg/kg，口服）(+)-儿茶素治疗的动物探索陌生目标的频率显著更高。(+)-儿茶素能够以剂量依赖的方式预防时间诱导的情景记忆丧失；口服 200 mg/kg 是最有效的剂量。与单独使用 DOX 治疗组相比，(+)-儿茶素治疗可防止 MPO 水平升高（海马中 21.98±9.44%，额叶皮层中 36.76±4.39%）[3]。

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在 Wistar 大鼠的时间诱导情景记忆缺陷模型（试验间隔 24 小时）中，在试验前和试验期间连续 7 天口服 50、100 和 200 mg/kg 的 (+)-儿茶素水合物，可剂量依赖性地逆转记忆缺陷，表现为新物体探索时间、识别指数和辨别指数的增加；最有效的剂量为 200 mg/kg。在阿霉素诱导的记忆缺陷模型（2.5 mg/kg 腹腔注射，50 天内 10 个周期）中，每日口服儿茶素 100 mg/kg，持续 57 天（包括 7 天预处理），可预防情景记忆缺陷，与单独使用阿霉素相比，识别和辨别指数显著提高。儿茶素治疗还显著降低了阿霉素诱导的海马和额叶皮层氧化应激标志物（脂质过氧化减少，过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽水平升高），降低了亚硝酸盐水平和髓过氧化物酶（MPO）活性（MPO增加百分比：海马从62.09%降至21.98%，额叶皮层从55.48%降至36.76%），并降低了海马中的乙酰胆碱酯酶活性（从0.020 ± 0.002降至0.016 ± 0.001 μmol/min/mg蛋白）。体重：与对照组相比，阿霉素显著降低了体重（第50天时分别为205.5 ± 8.35 g和247.83 ± 5.23 g）。儿茶素联合治疗并未显示出显著的额外体重减轻（194.38 ± 7.55 克）。[1]

离体乙酰胆碱酯酶 (AChE) 抑制试验：将大鼠脑匀浆与不同浓度（500 至 1.25 μg/mL）的 (+)-儿茶素水合物孵育 45 分钟，采用 Ellman 法（使用乙酰硫代胆碱碘化物和 DTNB）测定 AChE 活性。儿茶素的 IC50 为 21.15 μg/mL（相比之下，多奈哌齐的 IC50 = 79.11 μg/mL）。[1]

绿茶中的天然黄酮类化合物体外研究[2]
IMR-32 细胞系是源自男性白种人的神经母细胞瘤细胞系。该细胞系购自 NCCS，并在含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养基中进行传代培养。这些细胞用于细胞活力和细胞保护研究。在神经保护研究中，儿茶素和阿霉素 (DOX) 的处理是同时进行的（不更换培养基），其中儿茶素在加入阿霉素前 1 小时加入。

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未分化 IMR-32 细胞的 MTT 检测[2]
将 5000 个细胞接种于含有 50 µl 培养基的微孔板中，并孵育 24 小时。24 小时后，向孔中加入 50 µl 浓度范围为 31.23 至 250 µg/ml 的儿茶素溶液，孵育 1 小时。之后加入50 µl DOX（1或2 µg/ml），孵育24小时。随后加入50 µl MTT（2 mg/ml），于37 °C孵育3小时。之后移除培养基，加入100 µl DMSO，在轨道摇床上振荡约5分钟。生成的甲臜晶体溶解于DMSO中。在540 nm处测定DMSO溶解的甲臜的吸光度（Shi et al. 2015）。使用GraphPad Prism软件，通过非线性回归拟合数据计算儿茶素的IC50值。

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细胞周期分析[2]
采用流式细胞术评估儿茶素对DOX诱导的细胞周期改变的影响。将一百万个分化细胞接种于培养瓶中过夜，然后在37℃下用儿茶素（40 µg/ml）孵育2小时，随后用阿霉素（1.5 µg/ml）继续孵育24小时。用胰蛋白酶消化细胞，离心后用PBS洗涤。收集细胞沉淀，用70%冰甲醇固定，并在-20℃下保存24小时。然后用PBS洗涤细胞沉淀，并加入等渗PI溶液（25 µM碘化丙啶、0.03% NP-40和40 µg/ml RNase A）进行染色。使用 Accuri C6 流式细胞仪分析染色后的细胞，以进行细胞周期研究，激发波长为 488 nm，发射波长为 575/40 nm（Reddy 等，2015；Simon 等，2016）。

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MTT 法检测未分化的 IMR-32 细胞：将 5000 个细胞/孔接种于 96 孔板中。24 小时后，加入儿茶素（31.23–250 μg/mL）孵育 1 小时，然后加入阿霉素（1 或 2 μg/mL）继续孵育 24 小时。加入 MTT（2 mg/mL），于 37°C 孵育 3 小时，然后移除培养基，加入 DMSO，并在 540 nm 处读取吸光度。 [1]
分化型IMR-32细胞神经突长度测定：将细胞置于含5% FBS和10 μM全反式维甲酸的培养基中分化10天。第13天，用儿茶素（40 μg/mL）处理细胞1小时，再用阿霉素（1.5 μg/mL）处理48小时。使用ImageJ软件在倒置显微镜（40×物镜）下测量神经突长度，定义为神经突尖端到细胞体连接处的直线距离。每个处理孔分析约100张图像。[1]
细胞周期分析：将分化型IMR-32细胞（100万个）用儿茶素（40 μg/mL）处理2小时，再用阿霉素（1.5 μg/mL）处理24小时。细胞经胰蛋白酶消化后，用70%冰甲醇在-20℃固定24小时，洗涤后用碘化丙啶溶液（25 μM PI，0.03% NP-40，40 μg/mL RNase A）染色，并在激发波长488 nm、发射波长575/40 nm下进行流式细胞术分析。[1]

体内研究[2]
剂量选择 在评估儿茶素促认知作用的初步实验中，选择50、100和200 mg/kg剂量进行剂量-反应分析。在后续的化疗脑损伤（即阿霉素诱导的记忆缺陷模型）研究中，选择100 mg/kg剂量的儿茶素，因为该剂量在初步研究中显示出良好的效果，而且治疗是长期进行的。根据之前的研究和标准化的实验室程序（Steiniger 等，2004；Swamy 等，2011；Grandhi 等，2016）[2]，选择的 DOX 剂量为 2.5 mg/kg。
药物的制备和给药 在评估儿茶素促智作用的初步研究中，使用时间诱导记忆缺陷模型，将儿茶素配制成 50、100 和 200 mg/kg 的剂量，溶于 0.25% w/v 羧甲基纤维素钠 (CMC) 中，并在实验前和实验期间口服给药 7 天。本研究共设置四个实验组（每组 n = 9），分别使用一个溶剂对照组（CMC）和三个儿茶素组（三个剂量）。[2]
为诱导神经毒性和全身毒性，腹腔注射阿霉素（DOX，剂量为 2.5 mg/kg），每 5 天为一个周期，共 10 个周期。另设三个实验组（每组 n = 12），分别为：溶剂对照组（0.25% w/v CMC）、单独使用阿霉素组和儿茶素组（100 mg/kg，溶于 0.25% CMC，口服）。儿茶素口服给药 57 天，包括第一个阿霉素周期前一周的预处理。在第 57 天（即最后一个阿霉素周期结束后的第 58 天）进行行为学研究。所有处理以及行为分析均在上午 9 点至下午 4 点之间进行。研究期间，每 3 天测量一次动物的体重。在实验过程中，口服给药在熟悉化试验前 1 小时进行。

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时间诱导的自然记忆缺陷模型[2]
通过增加熟悉化试验和选择试验之间的时间间隔，可以自然地诱导大鼠的情景记忆缺陷。因此，最初的实验旨在评估儿茶素对时间诱导的记忆缺陷的影响，实验间隔为 24 小时。在该实验中，大鼠在第 1 天适应实验场地，并在第 2 天进行熟悉化试验。然后在 24 小时的间隔后，即第 3 天，动物进行识别试验，其中用一个新物体替换了熟悉的物体。实验共设置了四个组。在实验开始前7天，大鼠分别接受儿茶素（50、100和200 mg/kg，口服）或羧甲基纤维素钠（CMC，10 ml/kg，口服）治疗。在实验过程中，熟悉化测试和选择测试均在正式测试前1小时给药。时间诱导记忆缺陷模型：雄性Wistar大鼠（200-230 g）在实验开始前7天及实验期间，分别口服50、100或200 mg/kg的(+)-儿茶素水合物（溶于0.25% w/v羧甲基纤维素钠（CMC）溶液中）。新物体识别测试（NORT）的测试间隔为24小时。熟悉化测试和选择测试均在正式测试前1小时给药。 [1]
阿霉素诱导记忆缺陷模型：大鼠每5天腹腔注射阿霉素2.5 mg/kg，共10个周期（总计50天）。儿茶素（100 mg/kg，溶于0.25%羧甲基纤维素钠溶液）每日口服，持续57天（从第一个阿霉素周期前7天开始）。第58天进行NORT测试，两次测试间隔4小时。行为学测试结束后，在氯胺酮麻醉下处死大鼠；通过眼眶后静脉丛取血，分离脑组织（海马和额叶皮层）进行生化分析。[1]

在阿霉素诱导的毒性模型中，口服100 mg/kg的(+)-儿茶素水合物，持续57天，与单独使用阿霉素相比，并未引起显著的额外体重减轻（阿霉素+儿茶素：194.38 ± 7.55 g vs 单独使用阿霉素：205.5 ± 8.35 g）。[1]

[1]. Potential cancer-chemopreventive activities of wine stilbenoids and flavans extracted from grape (Vitis vinifera) cell cultures. Nutr Cancer. 2001;40(2):173-9.

[2]. Catechin ameliorates doxorubicin-induced neuronal cytotoxicity in in vitro and episodic memory deficit in in vivo in Wistar rats. Cytotechnology. 2018 Feb;70(1):245-259.

[3]. Alshatwi AA. Catechin hydrate suppresses MCF-7 proliferation through TP53/Caspase-mediated apoptosis. J Exp Clin Cancer Res. 2010 Dec 17;29:167.

(+)-儿茶素一水合物是(+)-儿茶素的一水合物，具有抗衰老作用。它含有(+)-儿茶素。(+)-儿茶素是儿茶素的(+)-对映异构体，是一种多酚类抗氧化植物代谢物，具有抗氧化和植物代谢作用。它是(-)-儿茶素的对映异构体。它是一种抗氧化黄酮类化合物，主要存在于木本植物中，以(+)-儿茶素和(-)-表儿茶素（顺式）两种形式存在。据报道，花青素醇存在于茶（Camellia sinensis）、芍药（Paeonia obovata）和其他具有相关数据的生物体中。儿茶素是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中发现或产生的代谢物。
一种主要存在于木本植物中的抗氧化黄酮类化合物，以两种形式存在：(+)-儿茶素和(-)-表儿茶素（顺式）。
另见：没食子儿茶素（及其亚类）；克罗弗勒默（单体）；蓝莓（部分）……

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适量饮用葡萄酒与降低癌症风险相关。利用葡萄藤细胞培养纯化了12种酚类化合物：芪类化合物反式-阿斯特拉林、反式-云杉素(2)、反式-白藜芦醇、反式-云杉醇、顺式-白藜芦醇、顺式-云杉素和顺式-白藜芦醇；黄烷类化合物(+)-儿茶素、(-)-表儿茶素和表儿茶素3-O-没食子酸酯；以及黄烷二聚体原花青素B2 3'-O-没食子酸酯。在器官培养中，使用致癌物处理的小鼠乳腺评估了这些化合物抑制环氧合酶和癌前病变形成的能力。在浓度为 10 μg/ml 时，反式-阿斯特里金和反式-皮西醇抑制了 7,12-二甲基苯并[a]蒽诱导的小鼠乳腺病变的发展，抑制率分别为 68.8% 和 76.9%（与未处理的乳腺相比）。在本研究测试的 12 种化合物中，反式-白藜芦醇的活性最强，反式-白藜芦醇的抑制率为 87.5%。在环氧合酶 (COX)-1 活性测定中，芪类化合物的反式异构体活性高于顺式异构体：反式-白藜芦醇的半数抑制浓度 (IC50) 为 14.9 μM（抑制率为 96%），而顺式-白藜芦醇的 IC50 为 55.4 μM。在COX-2活性测定中，仅反式和顺式白藜芦醇在所测试的化合物中显示出显著的抑制活性（IC50值分别为32.2和50.2 μM）。这是首次报道反式阿斯特林（一种近期在葡萄酒中发现的植物芪类化合物）具有潜在的癌症化学预防活性。反式阿斯特林及其苷元反式哌啶在小鼠乳腺器官培养试验中具有活性，但在COX-1和COX-2活性测定中未显示活性。反式白藜芦醇在本研究使用的所有三种生物测定中均具有活性。这些发现表明，反式阿斯特林和反式哌啶可能通过与反式白藜芦醇不同的机制发挥潜在的癌症化学预防作用。[1]

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化疗引起的认知障碍会降低癌症患者的生活质量。茶多酚是已知的化学预防剂。本研究旨在评估茶多酚(+)儿茶素水合物（儿茶素）对体外培养的IMR-32神经母细胞瘤细胞的神经保护作用，以及其对体内Wistar大鼠情景记忆障碍（由常用化疗药物阿霉素(DOX)诱导）的缓解作用。在体外实验中，我们通过细胞活力评估了儿茶素对未分化IMR-32细胞的神经保护作用，并通过神经突长度评估了其对分化细胞的神经保护作用。结果表明，儿茶素提高了未分化IMR-32细胞的活力。儿茶素预处理还增加了分化细胞的神经突长度。在体内实验中，我们使用时间诱导的记忆障碍模型（剂量分别为50、100和200 mg/kg）和DOX诱导的记忆障碍模型（剂量为100 mg/kg），通过新物体识别任务评估了儿茶素的神经保护作用。后一种模型是通过对Wistar大鼠腹腔注射阿霉素（DOX，2.5 mg/kg），连续50天，共10个周期建立的。儿茶素以剂量依赖的方式显著逆转了时间诱导的记忆缺陷，并在100 mg/kg剂量下预防了DOX诱导的记忆缺陷。此外，在DOX诱导的毒性模型中，儿茶素治疗显著降低了海马和大脑皮层的氧化应激、乙酰胆碱酯酶活性和神经炎症。因此，儿茶素可能是一种潜在的辅助疗法，用于改善DOX诱导的认知障碍，从而提高癌症幸存者的生活质量。这种改善可能归因于增强抗氧化防御、预防神经炎症和抑制乙酰胆碱酯酶。[2] 儿茶素水合物（CH）是一种强效抗氧化剂，能够清除自由基。酚类化合物CH是从植物中提取的，存在于绿茶、红酒等天然食品和饮料中。CH具有抗癌潜力。许多抗癌药物的作用机制是基于其诱导细胞凋亡的能力。本研究旨在鉴定CH在MCF-7人乳腺癌细胞中靶向的下游凋亡基因。CH通过诱导细胞凋亡有效杀伤MCF-7细胞。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）和实时PCR证实了细胞凋亡的发生。在150 μg/ml和300 μg/ml CH处理24小时后，细胞凋亡率分别为40.7%和41.16%。此外，在暴露于 150 μg/ml 和 300 μg/ml CH 48 小时后，凋亡细胞的比例分别为 43.73% 和 52.95%。有趣的是，在暴露于两种浓度的 CH 72 小时后，几乎 100% 的细胞失去了完整性。实时定量 PCR 进一步证实了这些结果，即 caspase-3、-8 和 -9 以及 TP53 的表达呈时间和剂量依赖性增加。总之，CH 诱导细胞凋亡的能力与其增加 caspase-3、-8 和 -9 以及 TP53 等促凋亡基因表达的能力有关。[3](+)-儿茶素水合物是一种茶多酚（黄烷-3-醇），具有抗氧化、抗炎和神经保护作用。本研究表明，儿茶素可改善体外阿霉素诱导的神经元细胞毒性和体内情景记忆缺陷，其机制可能包括增强抗氧化防御、预防神经炎症和抑制乙酰胆碱酯酶。该研究提示儿茶素可能是一种潜在的化疗相关认知障碍（“化疗脑”）辅助治疗方法。[1]

C15H14O6

290.2681

308.089

C, 58.44; H, 5.23; O, 36.33

225937-10-0

(±)-Catechin;7295-85-4;Catechin;154-23-4

107957

Off-white to yellow solid powder

630.4ºC at760mmHg

175-177ºC

335ºC

9.29E-17mmHg at 25°C

1.481

119.61

6

7

1

22

364

2

C1[C@@H]([C@H](OC2=CC(=CC(=C21)O)O)C3=CC(=C(C=C3)O)O)O.O

OFUMQWOJBVNKLR-NQQJLSKUSA-N

InChI=1S/C15H14O6.H2O/c16-8-4-11(18)9-6-13(20)15(21-14(9)5-8)7-1-2-10(17)12(19)3-7;/h1-5,13,15-20H,6H2;1H2/t13-,15+;/m0./s1

(2R,3S)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)-3,4-dihydro-2H-chromene-3,5,7-triol;hydrate

(+)-Catechin Hydrate; 225937-10-0; Catechin hydrate; 88191-48-4; (+)-catechin monohydrate; (2R,3S)-2-(3,4-Dihydroxyphenyl)chroman-3,5,7-triol hydrate; MFCD00149354; (+)-Cyanidol-3;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~50 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (Infinity mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (Infinity mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (Infinity mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。