p53 (IC50 = 0.37 μM); NF-κB (IC50 = 0.47 μM); FACT
FACT (facilitates chromatin transcription) complex [1]
FACT (facilitates chromatin transcription) complex [2]

CBL0137 是胰腺癌细胞系细胞凋亡的有效诱导剂，对胰腺癌干细胞和活跃增殖的肿瘤细胞有毒。使用 CBL0137 和相关分子可以抑制 NF-B 和 HSF-1 控制的细胞应激途径，同时激活 p53 [2]。 CBL0137 结合 DNA 时不会引入任何类型的化学改变，使其无基因毒性。促进染色质转录 (FACT) 复合物是一种参与转录、复制和 DNA 修复的染色质重塑复合物，由于 CBL0137 与 DNA 结合而功能失活。在 CBL0137 处理的细胞中，FACT 从核质中丢失并被捕获在染色质中，从而抑制 FACT 依赖性转录，包括 NF-kB 介导的转录。此外，FACT 的染色质捕获导致 p53 以酪蛋白激酶 2 (CK2) 依赖性方式磷酸化和激活 [3]。

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CBL0137盐酸盐（CBLC137）对人纤维肉瘤HT1080细胞具有细胞毒性（具有特定IC₅₀值），对正常二倍体成纤维细胞（Wi38、MEF）的毒性较低（P < 0.001）。用2 μM CBLC137处理24小时可诱导肿瘤细胞（HT1080、RCC45、MiaPaca）细胞周期停滞，但对正常细胞（Wi38、NKE-hTERT）影响较小。它通过酪蛋白激酶2（CK2）促进p53 Ser³⁹²磷酸化来激活p53，并通过将FACT捕获在染色质中抑制NF-κB依赖性转录，且不会诱导可检测到的DNA损伤（彗星实验和H2AX磷酸化实验证实无DNA断裂）。此外，它还会降低FACT亚基（SSRP1、SPT16）的可溶性部分，阻断NF-κB的核质穿梭和DNA结合 [1]
CBL0137盐酸盐（CBLC137）是胰腺癌细胞系（MiaPaCa-2、PANC-1、BxPC-3）的强效凋亡诱导剂，用2 μM处理4-24小时后，可检测到半胱天冬酶3、7、8、9和PARP1的切割。它能抑制胰腺癌细胞和耐药癌干细胞（CSCs）的活力，降低CSC表面标志物（CD24ᵂⁱ CD44ᵂⁱ）的比例，阻止吉西他滨诱导的“侧群”富集。在集落形成实验（MiaPaCa-2、PANC-1）中与吉西他滨表现出协同作用，并能抑制吉西他滨诱导的转录反应，包括NF-κB靶基因表达和核糖核苷酸还原酶（RNR）的RRM1/RRM2亚基 [2]

在小鼠中，CBL0137 可有效对抗多种胰腺导管腺癌 (PDA) 模型，包括原位吉西他滨耐药 PANC-1 模型和患者来源的异种移植物，其中 CBL0137 的抗肿瘤作用与 FACT 的过度表达相关[1]。根据其提出的作用机制，CBL0137靶向胶质母细胞瘤（GBM），穿透血脑屏障，并且在TMZ反应性和耐药性原位模型中均有效。这种药物能够穿过血脑屏障，尤其是静脉注射时，其治疗中枢神经系统肿瘤的潜力令人鼓舞。在原位模型中，静脉注射药物比口服药物具有更高的生物利用度，因为它们在肿瘤组织中积累更多。 CBL0137 在脑组织中的正常积累不会导致可检测到的神经毒性[3]。

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CBL0137盐酸盐（CBLC137）在多种人类肿瘤异种移植小鼠模型中表现出抗肿瘤活性。对于肾细胞癌Caki-1、结直肠癌DLD-1、黑色素瘤Mel-7和胰腺导管腺癌（PDA），CBLC137处理与溶媒组相比显著降低肿瘤体积（P < 0.005，方差分析），每组5-10只小鼠。在患有自发性乳腺肿瘤的MMTV-neu转基因小鼠中，口服灌胃100 mg/kg CBLC137后24小时，肿瘤中SSRP1和SPT16的可溶性部分减少（P < 0.05） [1]
CBL0137盐酸盐（CBLC137）在胰腺癌的原位和患者来源异种移植（PDX）模型中显示出疗效。在原位吉西他滨耐药PANC-1模型（每组6-7只）中，每周静脉注射90 mg/kg CBLC137，持续4周，可减少肿瘤体积，与吉西他滨（40 mg/kg腹腔注射，每4天一次）联合使用可增强抗肿瘤效果。在PDX模型（PDX#13756、#13590；每组5-10只）中，50-90 mg/kg CBLC137静脉注射每周一次（单独或与20 mg/kg吉西他滨腹腔注射每4天一次联合使用），持续4周，可抑制肿瘤生长，其抗肿瘤效果与FACT过表达相关 [2]

将 CBL0137 盐酸盐应用于 MiaPaca2 和 BxPC-3 细胞 4 或 24 小时。蛋白酶和磷酸酶抑制剂存在于 1× 细胞培养裂解试剂中，用于收获细胞。在 SDS-PAGE 凝胶上分离后，将 5 至 20 μg 裂解物转移到 PVDF 膜上。靶向 SSRP1、SPT16、RRM1 和 RRM2 蛋白的抗体用于探测印迹。上样对照是 GAPDH。 ECL 试剂盒用于可视化蛋白质[1]。

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从经CBL0137盐酸盐（CBLC137）、奎纳克林或紫外线处理的HT1080细胞裂解物中免疫沉淀CK2β，进行CK2激酶活性测定。使用对应于p53 C末端（311-393位氨基酸）的肽底物，检测药物诱导的CK2介导的磷酸化 [1]

将细胞重悬于无血清 Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) 中，并暴露于不同浓度的 CBL0137 盐酸盐中 1 小时。然后，将来自每种处理条件的 105 个细胞接种到 6 孔板的 3 个孔中，加入 2 mL 无血清 DMEM/F12 培养基，补充有 0.4% BSA、0.2×B27、10 ng/mL 重组 EGF，并含有 0.25 ％琼脂糖。在具有常规含 FBS 培养基的 6 孔板的三个孔中，将来自每种处理条件的 103 个细胞铺板。平板接种后七至十五天，在倒置显微镜下对菌落进行计数。

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细胞毒性实验：将肿瘤细胞（HT1080、RCC45、MiaPaca）和正常细胞（Wi38、NKE-hTERT）用不同浓度的CBL0137盐酸盐（CBLC137）处理24-72小时，通过Cell Titer Blue实验或亚甲基蓝染色检测细胞活力。细胞周期分析：用2 μM CBLC137处理细胞24小时后，用碘化丙啶染色，通过流式细胞术（FACS）分析。蛋白质印迹法：用CBLC137（0.8-2 μM）处理HT1080细胞8-16小时，检测p53 Ser³⁹²磷酸化、FACT亚基表达以及半胱天冬酶/PARP1切割。RT-PCR/qPCR：用1-2 μM CBLC137处理HT1080或MiaPaCa-2细胞2-24小时，定量NF-κB靶基因（IL-8、TNF、IκBα）和RNR亚基（RRM1、RRM2）的mRNA表达。染色质免疫沉淀（ChIP）：用1-2 μM CBLC137处理HT1080细胞2小时（有/无TNF刺激），分析SSRP1、p65和RNA聚合酶II与NF-κB依赖性基因启动子（IL-8、TNF）的结合情况。CSC相关实验：用3 μM CBLC137处理PANC-1细胞1小时，用Hoechst 33342或CSC表面标志物（CD24、CD44）染色，流式细胞术分析；药物处理后计数2D/3D培养基中的集落形成情况 [1][2]

使用氯胺酮/赛拉嗪对10周龄雌性无胸腺裸鼠（每组8只）进行深度麻醉。每只小鼠经剖腹手术在其胰尾接种2×10⁶个PANC-1细胞。接种两周后，通过超声检测到肿瘤，开始治疗。治疗方案如下：1）对照组，灌胃无菌水和100 mg/kg卡匹索；2）将100 mg/mL卡匹索与50～90 mg/kg CBL0137盐酸盐稀释，每周一次经尾静脉注射；3）口服10～20 mg/kg CBL0137盐酸盐，连续用药五天，停药两天。使用数字游标卡尺测量肿瘤大小。公式 LW²/2 用于确定肿瘤体积，其中 L 为最长边，W 为垂直于 W 的边。小鼠在治疗开始后至少监测 90 天，或直至每只小鼠至少有一个肿瘤体积达到 1000 mm³，以先发生者为准。

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异种移植瘤模型：将人肿瘤细胞（Caki-1、DLD-1、Mel-7、PDA、PANC-1）或 PDX 组织接种到裸鼠或 SCID 小鼠体内。当肿瘤达到指定体积时，每周一次静脉注射 50-90 mg/kg 的 CBL0137 HCl (CBLC137)，单独使用或与吉西他滨（20-40 mg/kg，腹腔注射，每 4 天一次）联合使用，持续 4 周。定期测量肿瘤体积，并在治疗后 1 周处死小鼠，收集肿瘤组织进行分析。自发性肿瘤模型：将MMTV-neu转基因小鼠（可触及乳腺肿瘤）经口灌胃给予100 mg/kg CBLC137，24小时后收集肿瘤裂解液，通过Western blot检测可溶性FACT亚基[1][2]

CBL0137 HCl (CBLC137) 对肿瘤细胞表现出选择性毒性，其对肿瘤细胞（HT1080、C8）的 IC₅₀ 值低于对正常二倍体成纤维细胞（Wi38、MEF）的 IC₅₀ 值。彗星试验（无尾矩增加）和组蛋白 H2AX 磷酸化缺失证实，CBLC137 不会在 HeLa 或 HT1080 细胞中诱导可检测的 DNA 损伤 [1]

[1]. Sci Transl Med . 2011 Aug 10;3(95):95ra74.

[2]. Oncotarget . 2014 Nov 30;5(22):11038-53.

[3]. Neuro Oncol . 2017 Feb 1;19(2):186-196.

有效根除癌症需要针对多个靶点进行治疗。p53 和核因子 κB (NF-κB) 通路在几乎所有肿瘤中均存在异常调控，因此它们分别成为治疗激活和抑制的理想靶点。我们分离并优化了小分子化合物 curaxins 的结构，该化合物能够同时激活 p53 并抑制 NF-κB，且不引起可检测的基因毒性。Curaxins 对所有测试的小鼠体内人源肿瘤异种移植模型均表现出抗癌活性。本文报道，curaxins 对 p53 和 NF-κB 的影响及其对癌细胞的毒性均源于 FACT（促进染色质转录）复合物的“染色质捕获”。这种 FACT 复合物的不可及性导致酪蛋白激酶 2 对 p53 Ser(392) 的磷酸化，并抑制 NF-κB 依赖性转录，而 NF-κB 依赖性转录在延伸阶段需要 FACT 复合物的活性。这些结果表明，FACT 是一种潜在的抗癌靶点，能够在不诱导 DNA 损伤的情况下，同时调节多种在癌症中经常失调的信号通路。Curaxin 类化合物具有开发成有效且安全的抗癌药物的潜力。[1]

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由于缺乏有效的治疗方法，胰腺导管腺癌 (PDA) 仍然是最致命的癌症之一。Curaxin 是一类具有抗癌活性的小分子化合物，已在不同的小鼠癌症模型中得到证实。先导化合物 CBL0137 近期已进入 I 期临床试验。Curaxin 通过抑制染色质重塑复合物 FACT，调节参与 PDA 发病机制的多个重要信号通路。FACT 在多种肿瘤中过表达，其中在 PDA 中的过表达率最高 (59%)。本研究在体外和体内小鼠模型中，测试了 CBL0137 单独使用或与目前标准疗法吉西他滨联合使用对不同 PDA 模型的疗效。研究发现，CBL0137 单独使用即可有效诱导胰腺癌细胞系凋亡，并且不仅对增殖的肿瘤细胞具有毒性，对胰腺癌干细胞也具有毒性。在小鼠模型中，CBL0137 对多种胰腺导管腺癌 (PDA) 模型有效，包括原位吉西他滨耐药的 PANC-1 模型和患者来源的异种移植瘤模型，其中 CBL0137 的抗肿瘤作用与 FACT 的过表达相关。此外，我们观察到 CBL0137 与吉西他滨存在协同作用，这可能是由于 CBL0137 能够抑制吉西他滨诱导的多种转录程序，包括 NF-κB 反应和核糖核苷酸还原酶的表达，而核糖核苷酸还原酶是吉西他滨在细胞中的靶点之一。这些数据表明，应在胰腺导管腺癌 (PDA) 患者的 II 期临床试验中测试 CBL0137 单药治疗以及与吉西他滨联合治疗的疗效。[2]

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由于缺乏有效的治疗方法，胰腺导管腺癌 (PDA) 仍然是最致命的癌症之一。Curaxin 是一类具有抗癌活性的小分子化合物，已在不同的小鼠癌症模型中得到证实。Curaxin 的先导化合物 CBL0137 近期已进入 I 期临床试验。Curaxin 通过抑制染色质重塑复合物 FACT 来调节参与 PDA 发病机制的多个重要信号通路。FACT 在多种肿瘤中过表达，其中在 PDA 中的过表达率最高 (59%)。本研究在体外和小鼠模型中测试了 CBL0137 单药治疗以及与当前标准疗法吉西他滨联合治疗对不同 PDA 模型的疗效。研究发现，CBL0137 单独使用即可有效诱导胰腺癌细胞系凋亡，并且不仅对增殖的肿瘤细胞具有毒性，对胰腺癌干细胞也具有毒性。在小鼠模型中，CBL0137 对多种胰腺导管腺癌 (PDA) 模型有效，包括原位吉西他滨耐药的 PANC-1 模型和患者来源的异种移植瘤模型，其中 CBL0137 的抗肿瘤作用与 FACT 的过表达相关。此外，我们观察到 CBL0137 与吉西他滨存在协同作用，这可能是由于 CBL0137 能够抑制吉西他滨诱导的多种转录程序，包括 NF-κB 反应和核糖核苷酸还原酶的表达，而核糖核苷酸还原酶是吉西他滨在细胞中的靶点之一。这些数据表明，应在胰腺导管腺癌（PDA）患者的 II 期临床试验中测试 CBL0137 单药治疗以及与吉西他滨联合治疗的疗效。[3]

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CBL0137 HCl (CBLC137) 是一种先导化合物 curaxin，这是一类靶向 FACT 复合物的小分子抗癌药物。[1][2]
其作用机制涉及 FACT 的“染色质捕获”，从而激活 p53（通过 CK2 介导的 Ser³⁹² 磷酸化）并抑制 NF-κB（阻断转录延伸），且不引起基因毒性。[1]
FACT 在多种肿瘤中过表达（胰腺导管腺癌中过表达率为 59%），CBL0137 的抗肿瘤作用与 FACT 的表达水平相关。[2]
它能清除耐药性癌干细胞，并通过抑制吉西他滨诱导的 FACT 表达增强吉西他滨的疗效。 NF-κB 反应和 RNR 表达 [2]
CBL0137 已进入 I 期临床试验，并拟在胰腺癌患者中开展 II 期临床试验（单药或联合吉西他滨）[2]

C21H24N2O2-HCL

372.89

372.16

C, 67.64; H, 6.76; Cl, 9.51; N, 7.51; O, 8.58

1197397-89-9

CBL0137;1197996-80-7

44519123

Off-white to yellow solid powder

5.39

51.1

2

3

6

26

466

0

CC(C1C=C2C(N(CCNC(C)C)C3=CC=C(C=C32)C(C)=O)=CC=1)=O.Cl

IXRKBBVMDMKAEB-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H24N2O2.ClH/c1-13(2)22-9-10-23-20-7-5-16(14(3)24)11-18(20)19-12-17(15(4)25)6-8-21(19)23;/h5-8,11-13,22H,9-10H2,1-4H3;1H

1-[6-acetyl-9-[2-(propan-2-ylamino)ethyl]carbazol-3-yl]ethanone;hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.70 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.70 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 5%DMSO+40%PEG300+5%Tween80+50%ddH2O: 0.75mg/ml

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。