| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Haspin (Haploid Germ Cell-Specific Nuclear Protein Kinase) - Inhibitor. Haspin is a protein kinase that specifically phosphorylates histone H3 at threonine 3 (H3T3ph), which is necessary for mitosis progression [1]
. - IC50 value for Haspin enzyme inhibition: 2 nM (determined by FRET assay in a panel of 27 protein kinases) [1] . - IC50 values for cell proliferation inhibition: - HCT-116 (colon cancer): 500 nM [1] . - HeLa (cervical cancer): 473 nM [1] . - MDA-MB-231 (breast cancer): 752 nM [1] . - Wi-38 (normal human diploid fibroblasts): 1059 nM [1] . |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
CHR-6494（0-10-5 nM；72 小时）呈剂量依赖性地抑制 HCT-116、HeLa、MDA-MB-231 和 Wi-38 等细胞的生长；CHR-6494（500 nM）对这些细胞的 IC50 值分别为 500 nM 和 473 nM。此外，CHR-6494（500 nM）可上调纺锤体组装检查点蛋白 BUB1 和有丝分裂标志物细胞周期蛋白 B1 的表达，IC50 值分别为 752 nM 和 1059 nM。CHR-6494 对黑色素瘤细胞系（包括 BRAFV600E 突变体、NRAS 突变体和野生型细胞）具有抑制作用，其 IC50 值范围为 396 nM 至 1229 nM [2]。浓度为 300 nM 和 600 nM 的 CHR-6494（作用 72 小时）可使 COLO-792 细胞中 caspase 3/7 的活性分别增加 3 倍和 6 倍，RPMI-7951 细胞中 caspase 3/7 的活性分别增加 85 倍和 16 倍 [2]。CHR-6494 与 MEK 染料联用时，可有效抑制黑色素瘤细胞的活力，加速黑色素瘤细胞的凋亡，通过在细胞周期的不同阶段阻滞黑色素瘤细胞来单独调控细胞周期进程，并抑制黑色素瘤细胞的迁移 [2]。CHR-6494（50 nM、200 nM；作用 1 周）可增强 MLN8237 对 MDA-MB-231 和 SKBR3 乳腺癌细胞的抗增殖活性 [3]。 MLN8237 与 CHR-6494 (200 nM；72 小时) 联用可提高 SKBR3 和 MDA-MB-231 细胞的无菌性 [3]。
抑制组蛋白 H3T3 磷酸化：如蛋白质印迹和免疫荧光所示，CHR-6494 以剂量依赖的方式抑制 HeLa、HCT-116 和 MDA-MB-231 癌细胞系中的 H3T3 磷酸化。在 500 nM 浓度下，H3T3ph 信号极低。该化合物不影响总 Haspin 蛋白水平，也不影响其他组蛋白 H3 残基（H3S10ph 和 H3S28ph）的磷酸化 [1] 。 - 抗增殖作用：如 XTT 法所示，CHR-6494 以剂量依赖的方式抑制癌细胞生长。在癌细胞中，IC50 值范围为 473-752 nM，而正常 Wi-38 细胞的 IC50 值约为癌细胞的 2 倍（1059 nM），表明该化合物对癌细胞具有选择性。Haspin 的过表达可部分挽救细胞免受该化合物的影响[1]。 - 细胞周期阻滞：CHR-6494 处理可引起剂量依赖性的 G2/M 期阻滞。药物处理后，G2/M 期细胞的比例从基础水平的 8-15% 增加到 30-50%。在 HCT-116 细胞中，停药后 G2/M 期阻滞可持续 24-48 小时[1]。 - 细胞凋亡诱导：Annexin V-FITC/PI 染色显示，CHR-6494 可剂量依赖性地诱导细胞凋亡。细胞凋亡率在HeLa细胞中为89.88%，在HCT-116细胞中为63.27%，在MDA-MB-231细胞中为30.41%[1]。 - 有丝分裂灾难：CHR-6494处理导致有丝分裂缺陷，包括中期排列紊乱、纺锤体形态异常（多极）和中心体扩增。后期细胞的比例呈剂量依赖性下降。具有 >2 个中心体的细胞数量随药物浓度的增加而增加 [1] 。 - 纺锤体检查点激活：CHR-6494 处理上调了所有三种癌细胞系中的纺锤体组装检查点蛋白 BUB1 和有丝分裂阻滞标志物细胞周期蛋白 B1，表明有丝分裂检查点被激活 [1] 。 - 激酶选择性：在使用基于 FRET 的 Z'-LYTE 激酶检测方法测试的 27 种蛋白激酶中，CHR-6494 对 Haspin 的 IC50 为 2 nM，而对所有其他激酶的 IC50 值均在微摩尔范围内，表明其具有高选择性 [1] 。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在裸鼠人结直肠结肠模型中，HCT-116 已被证实能抑制 CHR-6494（50 mg/kg；腹腔注射；连续 5 天，共 2 个疗程，15 天）引起的肿瘤生长，且不显著改变体重[1]。在携带 MDA-MB-231 异种移植瘤的裸鼠模型中，与化妆品相比，CHR-6494（20 mg/kg；连续 15 天腹腔注射）对肿瘤体积和重量均有抑制作用[3]。连续15天腹腔注射（20 mg/kg）可增强MLN8237（20 mg/kg；口服）在体内对肿瘤重量和体积的抑制作用[3]。
异种移植模型中的抗肿瘤活性：使用HCT-116人结直肠癌细胞异种移植到裸鼠体内，评估了CHR-6494的抗肿瘤活性。将已建立肿瘤（平均体积200 mm³）的小鼠每天腹腔注射50 mg/kg CHR-6494，连续5天，共进行两个疗程，持续15天。结果表明，肿瘤生长抑制呈剂量依赖性。停止治疗后，肿瘤开始复发，证实了该化合物的抗增殖作用[1]。 - 安全性概况：对接受治疗的小鼠的结肠、肝脏和肾脏切片进行组织病理学分析，未发现异常。在治疗期间，CHR-6494治疗的小鼠体重没有变化，表明在所述条件下无毒性[1]。 |
| 酶活实验 |
Haspin抑制剂的高通量筛选：我们开发了一种基于放射性标记的Haspin激酶活性测定方法，该方法利用[γ-³³P]-ATP将放射性物质掺入组蛋白H3中，并在均相FlashPlate 384孔板中进行。该测定方法每孔使用10 ng Haspin酶和1.5 μg组蛋白H3底物。反应通过加入[γ-³³P]-ATP启动，室温孵育75分钟，用EDTA终止反应，洗涤后使用TopCount计数器进行计数[1]。
- 激酶选择性分析：我们使用基于FRET的Z'-LYTE激酶测定法，测试了CHR-6494对27种蛋白激酶的酶抑制能力。该测定方法基于磷酸化肽和非磷酸化肽对蛋白水解酶切割的敏感性差异。在初级反应中，激酶将磷酸基团从ATP转移到合成的FRET肽上。在次级反应中，位点特异性蛋白酶切割未磷酸化的FRET肽，从而破坏供体和受体荧光团之间的FRET。磷酸化的肽则维持FRET。在400 nm激发后，供体与受体发射的比值可以量化反应进程[1]。 |
| 细胞实验 |
细胞活力检测 (XTT)：将细胞以每孔 4×10⁴ 个细胞的密度接种于 94 孔板中，培养 24 小时使其贴壁。然后更换培养基，加入不同浓度的 CHR-6494 (0.001-10 μM)。72 小时后，加入 XTT 试剂并测定光密度值。使用 GraphPad Prism 软件 [1] 计算 IC50 值。
- 细胞凋亡检测 (Annexin V-FITC/PI)：将细胞用 CHR-6494 (0.5、1、1.5 μM) 或 DMSO 对照处理 48 小时。收集悬浮细胞和贴壁细胞，用 PBS 洗涤，并根据制造商的说明用 Annexin V-FITC 和碘化丙啶染色。染色后的细胞通过流式细胞术进行分析[1] 。 - 细胞周期分析：将细胞在冰冷的70%乙醇中于-20°C固定过夜，洗涤后重悬于磷酸盐-柠檬酸缓冲液中，并用含50 μg/mL RNase A的25 μg/mL碘化丙啶于37°C染色30分钟。DNA含量通过流式细胞术进行分析[1] 。 - Western Blot分析：用500 nM CHR-6494或DMSO对照处理48小时后收集细胞，裂解，并通过SDS-PAGE分离蛋白质。转移至硝酸纤维素膜后，使用针对H3T3ph、总H3、Haspin、H3S28ph、H3S10ph、微管蛋白、细胞周期蛋白B1、BUB1和肌动蛋白的抗体进行蛋白质检测。使用 Odyssey IR 扫描仪对膜进行扫描和定量分析 [1] 。 - 免疫荧光染色：将生长在盖玻片上的细胞进行处理，用 4% 多聚甲醛或冷甲醇固定，透化，然后与针对 H3T3ph、α-微管蛋白、γ-微管蛋白或 H3S10ph 的一抗孵育。洗涤后，将细胞与 Alexa 488 和 Alexa 568 标记的二抗孵育，用 DAPI 封片，并使用共聚焦显微镜成像 [1] 。 |
| 动物实验 |
异种移植研究设计：** 将3.5×10⁶个HCT-116细胞溶于250 μL无菌PBS中，皮下注射至4-5周龄的无胸腺裸鼠（nu/nu）雄性小鼠体内。当肿瘤平均体积达到200 mm³（注射后15天）时，将24只肿瘤大小均一的小鼠随机分为两组：对照组（n=8）注射溶剂（10% DMSO/20% 2-羟丙基-β-环糊精），治疗组（n=16）注射溶于相同溶剂的50 mg/kg CHR-6494。治疗组每日腹腔注射给药，连续5天，共进行两个疗程，持续15天。每周测量两次肿瘤大小和小鼠体重。肿瘤体积计算公式为 V = D × d²/2，其中 D 为长轴，d 为短轴 [1]
。 - **毒性评估：**处死动物后，收集结肠、肺、肝脏和肾脏组织，固定并用苏木精和伊红染色，进行组织学分析以评估内源性毒性 [1] 。 异种移植研究设计：将 3.5×10⁶ 个 HCT-116 细胞溶于 250 μL 无菌 PBS 中，皮下注射到 4-5 周龄的无胸腺 nu/nu 雄性小鼠体内。当肿瘤平均体积达到 200 mm³（注射后 15 天）时，将 24 只肿瘤大小均一的小鼠随机分为两组：对照组（n=8）注射溶剂（10% DMSO/20% 2-羟丙基-β-环糊精），治疗组（n=16）注射 50 mg/kg 溶于相同溶剂的 CHR-6494。治疗采用腹腔注射，连续 5 天，共 15 天，分为两个疗程。每周测量两次肿瘤大小和体重。肿瘤体积计算公式为 V = D × d²/2，其中 D 为长轴，d 为短轴 [1]。 - 毒性评估：处死小鼠后，收集结肠、肺、肝脏和肾脏组织，固定后进行苏木精-伊红染色，用于组织学分析以评估内源性毒性 [1]。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
体内毒性：在异种移植裸鼠中，腹腔注射 50 mg/kg CHR-6494 15 天后，组织病理学分析显示结肠、肝脏和肾脏组织均未见异常。治疗期间，受试小鼠的体重没有变化，表明在所述条件下未观察到明显的毒性[1]
。 - 对癌细胞的选择性：CHR-6494 在正常人 Wi-38 二倍体成纤维细胞中的 IC50 值（1059 nM）约为癌细胞系（473-752 nM）的 2 倍，表明其对癌细胞具有优先活性[1] 。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
化学名称：CHR-6494是3-(1H-吲唑-5-基)-N-丙基咪唑并[1,2-b]哒嗪-6-胺。它是通过高通量筛选从包含117,995个化合物的Haspin抑制剂库中鉴定出来的[1]
。 - 首个Haspin抑制剂：CHR-6494是首个组蛋白激酶Haspin抑制剂，在体外、离体和体内均表现出广泛的抗癌活性[1] 。 - 作用机制：CHR-6494通过抑制Haspin，阻断组蛋白H3在苏氨酸3位点的磷酸化（H3T3ph），而H3T3ph对于染色单体的正常黏连、中期排列以及有丝分裂的正常进行至关重要。这会导致有丝分裂灾难，其特征是纺锤体异常、中心体扩增、G2/M期阻滞以及随后的细胞凋亡[1]。 - 抗血管生成活性：在离体鸡胚主动脉弓环试验中，浓度为1 μM的CHR-6494可使bFGF诱导的血管萌芽面积减少70%，表明其具有抗血管生成特性[1]。 - 与其他有丝分裂激酶抑制剂的比较：CHR-6494属于新一代抗有丝分裂化合物，其靶向有丝分裂机制中除微管以外的其他成分，因此可能避免与紫杉烷类药物相关的副作用。与 Aurora B 激酶抑制剂不同，CHR-6494 不会增加多倍体水平 [1] 。 - 临床潜力：Haspin 在淋巴瘤中过度表达，提示 CHR-6494 可能对血液系统恶性肿瘤具有特殊应用价值。该化合物值得进一步开展临床前研究，包括生物利用度、药代动力学以及其他癌症模型的研究 [1] 。 - 来源：CHR-6494 由 Chroma Therapeutics（英国牛津郡）提供 [1] 。 |
| 分子式 |
C16H16N6
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|---|---|
| 分子量 |
292.346
|
| 精确质量 |
292.143
|
| CAS号 |
1333377-65-3
|
| 相关CAS号 |
CHR-6494 TFA;1458630-17-5
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| PubChem CID |
70679308
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| 外观&性状 |
Light yellow to khaki solid powder
|
| 密度 |
1.4±0.1 g/cm3
|
| 折射率 |
1.747
|
| LogP |
2.48
|
| tPSA |
74.13
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
22
|
| 分子复杂度/Complexity |
378
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
CZZCAOGIEGXMBZ-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C16H16N6/c1-2-7-17-15-5-6-16-18-10-14(22(16)21-15)11-3-4-13-12(8-11)9-19-20-13/h3-6,8-10H,2,7H2,1H3,(H,17,21)(H,19,20)
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| 化学名 |
3-(1H-indazol-5-yl)-N-propylimidazo[1,2-b]pyridazin-6-amine
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| 别名 |
CHR-6494 CHR6494 CHR 6494
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~171.03 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.55 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 1 mg/mL (3.42 mM) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 10.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.4206 mL | 17.1028 mL | 34.2056 mL | |
| 5 mM | 0.6841 mL | 3.4206 mL | 6.8411 mL | |
| 10 mM | 0.3421 mL | 1.7103 mL | 3.4206 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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