| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
K⁺-Cl⁻ cotransporter 2 (KCC2); CLP-290 is a carbamate prodrug of the KCC2 activator CLP-257. [2]
The primary target of CLP290 is the neuron-specific K⁺-Cl⁻ cotransporter type 2 (KCC2). KCC2 is the principal chloride extruder in the central nervous system, maintaining low intracellular chloride levels in mature neurons by transporting chloride ions out of the cell, which is essential for GABA receptor-mediated hyperpolarizing inhibition. CLP290 exhibits high selectivity for KCC2 over related chloride transporters. It enhances KCC2 membrane stability and transport function by preventing dephosphorylation at the Ser940 site of the KCC2 protein, thereby restoring normal chloride homeostasis and GABAergic inhibition under pathological conditions. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
CLP-290本身是前药，在体外无直接药理活性。其活性代谢物CLP-257在体外研究中显示，能以浓度依赖性方式降低NG108细胞内的氯离子浓度（EC₅₀ = 616 nM），最大降幅约40%（从57 mM降至34 mM）。CLP-257对其他阳离子-氯离子协同转运蛋白（如NKCC1、KCC1、KCC3、KCC4）无显著影响，表现出对KCC2的高度选择性。此外，在BDNF处理或神经损伤的大鼠脊髓切片中，CLP-257能够恢复受损的Cl⁻转运能力，并逆转因KCC2功能下降导致的GABA能去极化移位。
在体外实验中，CLP290通过增强KCC2功能发挥神经保护作用。在原代培养的海马神经元中，惊厥剂刺激可诱导KCC2蛋白Ser940位点去磷酸化并下调其膜表达，导致神经元出现癫痫样爆发放电活动。而CLP290处理可剂量依赖性地预防KCC2的上述变化，从而恢复GABA介导的突触后抑制。CLP290处理显著降低了惊厥诱导后神经元的异常放电频率和幅度。此外，研究还表明CLP290可有效降低胞内氯离子浓度，恢复受损神经元中的氯离子转运效率。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在用吗啡治疗的大鼠中，CLP290（口服强饲法；100 mg/kg；每天两次；7 天）可抑制吗啡诱导的大鼠痛觉过敏 (MIH)，增加 KCC2 活性并恢复浅表背角 (SDH) 神经元中的 Cl- 转运。 [1]。
- 在大鼠外周神经损伤（神经病理性疼痛模型）中，口服CLP-290（100 mg/kg）产生的镇痛效果与普瑞巴林（30 mg/kg）相当（通过von Frey丝测量缩爪阈值）。给药后2小时观察到最大效应。 [2] - 在同一PNI模型中，CLP-290（100 mg/kg，口服）不影响加速转棒上的运动表现，而普瑞巴林（30 mg/kg）显著缩短了在棒上的时间。 [2] - 在大鼠吗啡诱导的痛觉过敏模型中，在吗啡治疗（10 mg/kg，皮下，每日两次）的同时口服CLP-290（100 mg/kg，每日两次，持续7天），可防止脊髓背角浅层中KCC2膜表达的下调。 [1] - 在同一MIH模型中，与CLP-290联合治疗显著防止了吗啡诱导的机械性超敏反应（缩爪阈值）的发展，并减少了皮下注射诱导的发声行为。 [1] - 在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型中，腹腔注射CLP-290（100 mg/kg，采血前4小时）显著降低了血浆精氨酸加压素水平约50%，并降低了血糖水平约15%。在对照（非糖尿病）大鼠中，CLP-290显著升高了血浆AVP水平，但不影响血糖。 [3] - 在STZ大鼠中，CLP-290治疗（100 mg/kg，腹腔注射）还降低了脑脊液葡萄糖和Na⁺浓度。 [3] CLP290在多种神经系统疾病动物模型中显示出显著的治疗效果。在癫痫研究中，CLP290治疗可剂量依赖性地抑制戊四氮（PTZ）诱导的小鼠惊厥发作，并在癫痫发生早期给药时减少自发性反复癫痫发作，提示其具有抗癫痫发生作用。在脊髓损伤大鼠模型中，CLP290可改善运动功能、减少肌肉共收缩、降低多突触反射通路的过度兴奋性，且不削弱运动输出。在神经病理性疼痛模型中，CLP290（100 mg/kg，口服，每日2次，持续7天）可预防和逆转吗啡诱导的痛觉过敏，恢复浅表背角神经元的KCC2活性和氯离子转运。在新生大鼠中，CLP290与咪达唑仑联用可协同增强镇静作用。此外，CLP290处理后肢去负荷大鼠中可降低腰椎脊髓运动神经元的自发肌电活动。 |
| 酶活实验 |
蛋白样品制备：从目标脑区或培养神经元中提取膜蛋白组分，使用含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液裂解细胞，通过超速离心富集膜蛋白。
Western blot检测：将等量蛋白进行SDS-PAGE电泳并转移至PVDF膜，用特异性一抗检测KCC2总蛋白、KCC2-Ser940位点磷酸化水平及膜表达水平。
[Cl⁻]i检测：使用氯离子敏感性荧光探针（如MQAE）检测胞内氯离子浓度。将细胞与CLP290共孵育后，加载MQAE探针，在荧光显微镜或酶标仪上检测荧光强度变化。
数据分析：通过灰度扫描计算KCC2蛋白相对表达量，根据荧光强度推算胞内氯离子浓度，比较处理组与对照组的差异。
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| 细胞实验 |
细胞培养：原代培养新生大鼠或小鼠的海马神经元、皮质神经元或脊髓背角神经元，培养至成熟（通常14-21天）。
药物处理：将不同浓度的CLP290（如0.1-10 μM）加入培养基中，预处理一定时间后进行后续实验。有时需先给予惊厥刺激（如PTZ、4-AP）诱导神经元异常放电。
电生理记录：使用全细胞膜片钳技术记录GABA诱发电流，评估GABA受体功能及Cl⁻梯度变化。或在多电极阵列系统上记录神经元网络的自发或诱发放电活动。
免疫细胞化学：固定细胞后，使用KCC2抗体和磷酸化特异性抗体进行染色，通过共聚焦显微镜观察KCC2的亚细胞定位和膜表达变化。
数据分析：比较不同处理组间GABA电流逆转电位、放电频率和幅度、以及KCC2表达和定位。
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| 动物实验 |
动物/疾病模型：成年雄性大鼠（300 g，出生后 >60 天）[1]
剂量：100 mg/kg 给药途径：口服（po）；100 mg/kg；每日两次；持续 7 天 实验结果：通过恢复 Cl- 转运或预防 SDH 缺陷，挽救已建立的 MIH 并阻止其发展。 - 神经病理性疼痛模型 (PNI)：在雄性 Sprague-Dawley 大鼠的左侧坐骨神经周围植入聚乙烯袖套。使用 von Frey 纤维评估机械性痛觉过敏。CLP-290溶解于 20% 2-羟丙基-β-环糊精 (HPCD) 溶液中，并以 100 mg/kg 的剂量口服给药。使用加速旋转杆评估运动功能。 [2] - 吗啡诱导痛觉过敏 (MIH) 模型：雄性大鼠皮下注射吗啡（10 mg/kg，每日两次），持续 7 天。同时，每日两次口服给予 CLP-290（100 mg/kg，溶于 20% HPCD）或溶剂，持续 7 天。使用 von Frey 纤维丝测量爪缩回阈值，并在皮下注射期间监测发声行为。[1] - 糖尿病 (DM) 模型：雄性 Sprague-Dawley 大鼠单次腹腔注射链脲佐菌素 (STZ，65 mg/kg) 以诱导糖尿病。三周后，腹腔注射 CLP-290（100 mg/kg，溶于 20% HPCD）或溶剂。 4小时后采集血样，用于测定AVP（ELISA）和葡萄糖水平。[3] - 药代动力学研究：雄性Sprague-Dawley大鼠口服CLP-290（100 mg/kg）。在不同时间点采集血样，并用LC/MS测定血浆中CLP-257（CLP-290的活性代谢物）的浓度。[2] - 毒理学研究：Sprague-Dawley大鼠（每剂量组5只雄性和5只雌性）连续7天灌胃给予CLP-290，剂量分别为200、600和2000 mg/kg/天（分两次给药）。评估内容包括死亡率、临床症状、食物消耗量、体重、尿液分析、血液学检查、凝血功能检查、临床化学检查、器官重量和组织病理学检查。[2] 动物与模型：使用成年雄性小鼠（如C57BL/6）或大鼠（Sprague-Dawley），构建癫痫模型（PTZ或匹罗卡品诱导）、神经病理性疼痛模型（吗啡诱导痛觉过敏或坐骨神经损伤）、脊髓损伤模型或后肢去负荷模型。 给药方案：CLP290通常通过口服灌胃给药，常见剂量为100 mg/kg，每日1-2次，连续3-14天。溶剂可使用10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween-80 + 45%生理盐水，或20%羟丙基-β-环糊精溶液。 药效评估： 癫痫模型：观察惊厥发作潜伏期、发作等级、发作持续时间。 疼痛模型：用von Frey丝评估机械痛阈。 脊髓损伤模型：使用BBB评分评估运动功能，肌电图记录反射活动。 组织学分析：给药结束后处死动物，取出目标脑区或脊髓腰膨大，用免疫组化或Western blot检测KCC2表达和磷酸化水平。 数据分析：比较治疗组与对照组的各项行为学和分子指标差异。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
CLP-290 是一种氨基甲酸酯前药，旨在保护 CLP-257 的羟基免受葡萄糖醛酸化。在大鼠口服给药（100 mg/kg）后，CLP-290 代谢为有活性的 KCC2 激活剂 CLP-257。转化生成的 CLP-257 表观终末半衰期（t₁/₂）约为 5 小时，与直接给予 CLP-257 相比，其最大血浆浓度（Cmax）和曲线下面积（AUC）均有所提高。[2]
静脉注射 CLP-257（20 mg/kg）后，其终末半衰期小于 15 分钟。腹腔注射 CLP-257（100 mg/kg）后，血浆浓度迅速下降。[2]
CLP290 是 CLP257 的一种氨基甲酸酯前药，旨在克服 CLP257 体内药代动力学特性不佳的问题。数据表明，CLP290 的口服生物利用度显著高于其活性形式 CLP257，这主要归因于前药策略保护了羟基免受葡萄糖醛酸化。在 SD 大鼠中，CLP290 口服后可转化为活性代谢物 CLP257。与 CLP257 相比，CLP290 具有更长的体内半衰期（t₁/₂），从而能够在更长的给药间隔内维持有效药物浓度。在溶解度方面，CLP290 可溶于 DMSO（约 33 mg/mL），并可配制于多种体内给药剂型中。储存条件：粉末在 -20°C 下可稳定保存 3 年，在 4°C 下可稳定保存 2 年；溶液在 -80°C 下可稳定保存 2 年。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在大鼠7天重复给药毒性研究中，CLP-290 以高达2000 mg/kg/天（分两次每日给药）的剂量给药时，对临床状况、体重、食物消耗、血液学、凝血功能、临床化学、尿液分析、器官重量或组织病理学均未产生影响。[2]
CLP-290 对hERG尾电流的抑制（心脏毒性风险）较弱，IC₅₀为224 μM（相比之下，CLP-257为449 μM），表明风险较低。[2]
在PNI模型中，CLP-290（100 mg/kg，口服）不会损害运动表现，而普瑞巴林则会导致明显的运动障碍。[2]
现有的毒理学数据表明，CLP290在实验剂量范围内总体耐受性良好。在脊髓损伤大鼠模型中，CLP290（100 mg/kg，口服）在等镇痛剂量下对运动功能无显著不良影响，相比普瑞巴林表现出更好的运动安全性。在大鼠后肢去负荷模型中，连续给药14天的CLP290对慢肌纤维横截面积无显著影响。根据材料安全数据表（MSDS），CLP290未被分类为有害物质，IARC和NTP均未将其列为致癌物。然而，全面的毒理学数据（如急性毒性、皮肤刺激性、致突变性）尚不完整。本产品仅用于研究用途，不适用于人类治疗应用。操作时应遵守标准实验室安全规范，并佩戴适当的个人防护装备。 |
| 参考文献 |
|
| 分子式 |
C19H21FN4O3S
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|---|---|
| 分子量 |
404.4604
|
| 精确质量 |
404.131
|
| 元素分析 |
C, 56.42; H, 5.23; F, 4.70; N, 13.85; O, 11.87; S, 7.93
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| CAS号 |
1181083-81-7
|
| 相关CAS号 |
1181083-81-7
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| PubChem CID |
44188755
|
| 外观&性状 |
Off-white to yellow solid powder
|
| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
553.7±60.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
288.6±32.9 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.5 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.691
|
| LogP |
2.89
|
| tPSA |
99.5
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
28
|
| 分子复杂度/Complexity |
680
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
C1CCN(NC1)C2=NC(=O)/C(=C/C3=C(C=C(C=C3)F)OC(=O)N4CCCC4)/S2
|
| InChi Key |
DIXMMXNNKLCLOM-WJDWOHSUSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C19H21FN4O3S/c20-14-6-5-13(15(12-14)27-19(26)23-8-3-4-9-23)11-16-17(25)22-18(28-16)24-10-2-1-7-21-24/h5-6,11-12,21H,1-4,7-10H2/b16-11-
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| 化学名 |
[5-Fluoro-2-[(Z)-(2-hexahydropyridazin-1-yl-4-oxo-thiazol-5-ylidene)methyl]phenyl] pyrrolidine-1-carboxylate
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| 别名 |
CLP290; (Z)-5-Fluoro-2-((4-oxo-2-(tetrahydropyridazin-1(2H)-yl)thiazol-5(4H)-ylidene)methyl)phenyl pyrrolidine-1-carboxylate; [5-Fluoro-2-[(Z)-(2-hexahydropyridazin-1-yl-4-oxo-thiazol-5-ylidene)methyl]phenyl] pyrrolidine-1-carboxylate; CLP 290; CLP-290
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~33.33 mg/mL (~82.41 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.14 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.4724 mL | 12.3622 mL | 24.7243 mL | |
| 5 mM | 0.4945 mL | 2.4724 mL | 4.9449 mL | |
| 10 mM | 0.2472 mL | 1.2362 mL | 2.4724 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
IDOR-1104-0086
Maxi-K modulator 1
VU6032735
VU6080824
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