| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
p32-sphingosine-activated protein kinase (EC50 = 8 ± 3 μM)
p18-sphingosine-activated protein kinase (Activates at 20-100 μM) [1] Protein kinase C (PKC) [2] Protein phosphatase 2A (PP2A) [4] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
p32-鞘氨醇激活蛋白对低剂量的 D-赤型-鞘氨醇有反应，在 2.5 μM 时观察到首次激活，在 10 -20 μM 时观察到最大活性。鞘氨醇相对于其他鞘氨醇立体异构体的潜力，以及鞘氨醇相对于氢化异鞘氨醇的偏好[1]。 D-erythro-Sphingosine 在体外抑制蛋白质调节 C[2]。 D-赤型-鞘氨醇已被证明可以抑制影响细胞调节和众多信号转导的连接多肽 C，并在一系列细胞中显示出抗肿瘤作用 [3]。
D-erythro-鞘氨醇 在 Jurkat T 细胞胞质溶胶中激活一种 p32-鞘氨醇激活的蛋白激酶，导致 p32 蛋白磷酸化水平增加约4倍，初始激活浓度为 2.5 μM，峰值活性在 10-20 μM。 [1] 它激活一种 p18-鞘氨醇激活的蛋白激酶，在较高浓度（20-100 μM）下诱导 p18 底物磷酸化，在 100 μM 时磷酸化水平增加5倍。 [1] p32 激酶的激活对 D-erythro-鞘氨醇 相对于其其他立体异构体（L-erythro, D-threo, L-threo）显示出适度的特异性。 [1] p18 激酶的激活对鞘氨醇的赤式异构体具有特异性；苏式异构体基本无活性。 [1] 在激活 p32 和 p18 激酶方面，D-erythro-鞘氨醇 优于其二氢类似物（二氢鞘氨醇）。 [1] 油酸可抑制鞘氨醇诱导的 p32 和 p18 磷酸化，IC50 约为 20 μM。 [1] 合成的 D-erythro-鞘氨醇 和商业来源的鞘氨醇制剂在基于囊泡的测定中都能有效抑制纯化的人血小板蛋白激酶C (PKC) 活性，在 50 μM 浓度下观察到完全抑制。 [2] 在使用 Triton X-100/磷脂酰丝氨酸/二酰基甘油的混合胶束测定中，合成和商业的 D-erythro-鞘氨醇 均能抑制纯化的 PKC，50%抑制率对应的浓度约为 ~6 mol%。 [2] D-erythro-鞘氨醇 抑制了 γ-凝血酶诱导的完整人血小板中 40 kDa 蛋白（一种 PKC 底物）的磷酸化。 [2] D-erythro-鞘氨醇 以剂量依赖的方式抑制 8 nM γ-凝血酶诱导的人血小板聚集，50%抑制率对应的浓度约为 10 μM。 [2] D-erythro-鞘氨醇 抑制了 8 nM γ-凝血酶诱导的人血小板 ATP 分泌。 [2] 合成的和商业的 D-erythro-鞘氨醇 对 PKC 活性、血小板 40 kDa 蛋白磷酸化、聚集和分泌的抑制效力是相等的。 [2] N,N-二甲基鞘氨醇 (DMS) 也能抑制纯化的 PKC，但未发现其污染本研究中使用的商业鞘氨醇制剂。 [2] 在小脑颗粒神经元 (CGNs) 培养模型中，用 D-erythro-鞘氨醇 (DES, 10 nM) 处理 5-20 分钟，可下调酪氨酸-307 磷酸化的 PP2A (pY307) 的水平。 [4] 用 DES (10 nM) 处理 20 分钟，还可降低去甲基化的 Leu-309 PP2A (DML309) 的水平。 [4] PP2A 活性测定表明，DES 处理在 5-20 分钟的暴露期间增加了 PP2A 的活性。 [4] DES 处理显著降低了塌陷反应介导蛋白-2 (pCRMP2) 在 5-20 分钟时的磷酸化水平。 [4] 在神经突生长实验中，用抑制性底物 (CSPGs 或 MAG) 预包被培养板会显著减少神经突的生长。用 DES (10 nM) 处理 48 小时可显著逆转这种神经突生长障碍。 [4] |
| 体内研究 (In Vivo) |
在大鼠脊髓损伤 (SCI) 模型中，通过皮下渗透泵慢性给予 D-erythro-鞘氨醇 (DES, 1 μM 溶液) 7 天，增强了损伤部位周围的 PP2A 活性。 [4]
与载体治疗的大鼠相比，DES 治疗显著降低了损伤脊髓组织中的 pY307 和 pCRMP2 水平。 [4] 脊髓白质的免疫荧光分析显示，DES 治疗后 pY307 和 pCRMP2 信号减少。 [4] 在 SCI 后第 32 天进行生物素化葡聚糖胺 (BDA) 顺行示踪显示，DES 治疗促进了轴突发芽，与载体治疗的对照组不同，可见细小的萌芽延伸至附近的灰质和损伤尾侧。 [4] 根据 BBB (Basso, Beattie, Bresnahan) 和 CBS (联合行为评分) 量表评估，DES 治疗的大鼠在 SCI 后第 7 天至第 28 天表现出显著的运动功能恢复改善。 [4] |
| 酶活实验 |
蛋白质激酶实验在总体积 50 μl 的体系中进行，包含 5 μl 鞘氨醇悬浮液（或作为对照的乙醇溶液）、5 μl 其他效应物、20 μl Mg²⁺/ATP 溶液（含有 100 mM Tris/HCl pH 7.4, 25 mM MgCl₂, 62.5 μM ATP 和 62.5 μCi/ml [γ-³²P]ATP）以及 20 μl 稀释的 Jurkat T 细胞胞质溶胶（每样品 8–12 μg 蛋白质）。 [1]
将反应混合物孵育，并评估蛋白质磷酸化情况。 [1] 使用两种方法测定蛋白激酶C (PKC) 活性。在囊泡测定法中，在磷脂酰丝氨酸 (PS) 和二油酰甘油 (DAG) 存在下测量酶活性。 [2] 在混合胶束测定法中，使用含有 PS 和 DAG 的 Triton X-100 混合胶束测定 PKC 活性。 [2] 对于抑制研究，在反应混合物中加入不同浓度的 D-erythro-鞘氨醇、商业鞘氨醇或 N,N-二甲基鞘氨醇。酶活性以未添加抑制剂时测得活性的百分比表示。 [2] 使用商业化的蛋白磷酸酶活性测定试剂盒测量 PP2A 活性。从细胞上清液或组织提取物中去除内源性游离磷酸盐。 [4] 将蛋白样品与化学合成的、对 PP2A 最优的磷酸肽底物一起孵育，孵育在优化了 PP2A 活性并抑制了阳离子依赖性磷酸酶 PP2B 和 PP2C 的缓冲液中进行。反应在 33°C 下进行 30 分钟。 [4] 通过测量 630 nm 处钼酸盐-孔雀石绿-磷酸盐复合物的吸光度来确定从底物释放的磷酸盐量。 [4] |
| 细胞实验 |
从健康志愿者的血液中制备洗涤过的人血小板。 [2]
对于聚集和分泌实验，将血小板与指定浓度的 D-erythro-鞘氨醇（溶于乙醇）预孵育，然后用 8 nM γ-凝血酶刺激。监测聚集和 ATP 分泌情况。 [2] 对于 40 kDa 底物磷酸化实验，在存在或不存在不同鞘氨醇制剂的情况下，用 8 nM γ-凝血酶刺激血小板沉淀。通过 SDS-PAGE 分离磷酸化蛋白，切下 40 kDa 条带，并计数掺入的 ³²P。 [2] 从 1 至 3 日龄的大鼠幼崽中培养原代小脑颗粒神经元 (CGNs)。将解离的组织消化并接种在聚-D-赖氨酸预包被的培养板上。 [4] 在一些实验中，培养板用抑制性底物 (CSPGs 或 MAG) 在 37°C 下预包被 4 小时。 [4] 神经元在接种后 2-4 小时用 D-erythro-鞘氨醇 (DES, 10 nM) 或其他试剂处理。 [4] 对于蛋白质分析，神经元在培养 24 小时后或在处理后指定时间点裂解，用于 Western blotting。 [4] 对于神经突生长分析，神经元处理 48 小时，然后固定并用 βIII-微管蛋白抗体染色。使用图像分析软件测量神经突长度。 [4] 对于 PP2A 活性测量，在处理后指定时间点收集细胞上清液。 [4] |
| 动物实验 |
采用重物冲击器在成年Sprague-Dawley大鼠T11节段诱导中度脊髓损伤（SCI）。[4]
SCI后立即在损伤部位附近植入皮下渗透泵。[4] 泵内填充生理盐水（载体）或D-赤式鞘氨醇（DES，1 μM）溶液。[4] 通过导管将渗透泵连接至损伤中心脊髓背侧的硬膜下腔。渗透泵持续输送溶液。[4] 为评估功能恢复情况，术后7天移除渗透泵。在损伤后28天内定期进行行为学测试（BBB、CBS）。 [4] 为了进行组织分析，在特定时间点处死大鼠（例如，损伤后7天进行蛋白质印迹和免疫荧光分析）。[4] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
鞘氨醇是一种双键为反式构型的鞘-4-烯。它既是人类代谢产物，也是小鼠代谢产物。它是鞘氨醇(1+)的共轭碱，也是L-赤式鞘氨醇的对映异构体。
鞘氨醇是一种具有长不饱和烃链的氨基醇。鞘氨醇及其衍生物鞘氨醇是哺乳动物鞘脂的主要碱基。（Dorland，第28版） 据报道，地黄、大豆和其他一些有相关数据的生物体中都含有鞘氨醇。 鞘氨醇是一种具有长不饱和烃链的氨基醇。鞘氨醇及其衍生物鞘氨醇是哺乳动物鞘脂的主要碱基。 （Dorland，第28版） 另见：L-赤式鞘氨醇（注释已移至）。 D-赤式鞘氨醇是一种生物活性鞘脂，可在无细胞体系中激活特定的蛋白激酶。[1] 其作用具有立体特异性，赤式构型对活性至关重要，尤其是对p18激酶。[1] 本研究基于底物特异性、激活效力和立体化学偏好，区分了两种不同的鞘氨醇激活的蛋白激酶（p32-SAPK和p18-SAPK）。[1] 脂肪酸（如油酸）可抑制鞘氨醇诱导的磷酸化，揭示了不同脂质信使在调节蛋白激酶活性方面可能存在拮抗作用。 [1] D-赤式鞘氨醇是一种强效且特异性的蛋白激酶C抑制剂。[2] 本研究中使用的市售鞘氨醇制剂主要含有D-赤式立体异构体，且未检测到N,N-二甲基鞘氨醇污染。[2] 本研究验证了特性明确的市售鞘氨醇作为PKC药理抑制剂在体外和细胞研究中的实用性。[2] 在本研究中，D-赤式鞘氨醇（DES）被用作蛋白磷酸酶2A（PP2A）的经典激动剂。[4] 该研究发现了一条信号通路，其中抑制性底物（CSPG、MAG）激活EGFR，EGFR进而磷酸化并使PP2A的Y307位点失活。失活的PP2A无法使CRMP2去磷酸化，导致轴突生长受损。[4] DES通过激活PP2A发挥作用，促进CRMP2去磷酸化，从而促进脊髓损伤后的轴突再生和功能恢复。[4] 这表明，PP2A的药理学激活，例如使用D-赤式鞘氨醇，可能是治疗中枢神经系统轴突损伤的潜在策略。[4] |
| 分子式 |
C₁₈H₃₇NO₂
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|---|---|
| 分子量 |
299.49
|
| 精确质量 |
299.282
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| 元素分析 |
C, 72.19; H, 12.45; N, 4.68; O, 10.68
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| CAS号 |
123-78-4
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| 相关CAS号 |
D-erythro-Sphingosine hydrochloride;2673-72-5;D-erythro-Sphingosine-d7;1246304-34-6
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| PubChem CID |
5280335
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
0.9±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
445.9±45.0 °C at 760 mmHg
|
| 熔点 |
81-82ºC
|
| 闪点 |
223.5±28.7 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±2.4 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.489
|
| LogP |
6.4
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| tPSA |
66.48
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
15
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| 重原子数目 |
21
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| 分子复杂度/Complexity |
231
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
CCCCCCCCCCCCC/C=C/[C@@H](O)[C@@H](N)CO
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| InChi Key |
WWUZIQQURGPMPG-KRWOKUGFSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H37NO2/c1-2-3-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-14-15-18(21)17(19)16-20/h14-15,17-18,20-21H,2-13,16,19H2,1H3/b15-14+/t17-,18+/m0/s1
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| 化学名 |
2S-amino-4E-octadecene-1,3R-diol
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| 别名 |
Erythrosphingosine erythro-C18-Sphingosine trans-4-Sphingenine(−)-Sphingosine D-erythro-Sphingosine C-18 Sphingosine (d18
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~166.95 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.35 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.3390 mL | 16.6950 mL | 33.3901 mL | |
| 5 mM | 0.6678 mL | 3.3390 mL | 6.6780 mL | |
| 10 mM | 0.3339 mL | 1.6695 mL | 3.3390 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
ζ-Stat (NSC37044)
PKCη pseudosubstrate inhibitor,myristoylated
PKCβII Peptide Inhibitor I
PKCε (85-92)
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