FGFR2 (IC50 = 1.8 nM); RET (IC50 = 3 nM); DDR2 (IC50 = 3.6 nM); PDGFRβ (IC50 = 4.1 nM); PDGFRβ (IC50 = 4.1 nM)
Fibroblast Growth Factor Receptor 1 (FGFR1) (IC₅₀=4.5 nM, Kᵢ=2.7±0.2 nM) [1]
Fibroblast Growth Factor Receptor 2 (FGFR2) (IC₅₀=1.8 nM, Kᵢ=0.68±0.07 nM) [1]
Fibroblast Growth Factor Receptor 3 (FGFR3) (IC₅₀=4.5 nM) [1]
Fibroblast Growth Factor Receptor 4 (FGFR4) (IC₅₀=34 nM) [1]
RET (IC₅₀=3 nM) [1]
DDR2 (IC₅₀=3.6 nM) [1]
FMS (CSF1-R) (IC₅₀=3.8 nM) [1]
PDGFRβ (IC₅₀=4.1 nM) [1]
LCK (IC₅₀=6.2 nM) [1]
YES (IC₅₀=7.6 nM) [1]
ARG (IC₅₀=7.9 nM) [1]
KIT (IC₅₀=8.2 nM) [1]
PDGFRα (IC₅₀=9.5 nM) [1]
QIK (IC₅₀=9.7 nM) [1]
VEGFR1 (FLT1) (IC₅₀=11 nM) [1]
SRC (IC₅₀=11 nM) [1]
ABL (IC₅₀=14 nM) [1]
EPHA1 (IC₅₀=15 nM) [1]
CSK (IC₅₀=17 nM) [1]
FGR (IC₅₀=17 nM) [1]
LYN (IC₅₀=17 nM) [1]
VEGFR2 (KDR) (IC₅₀=21 nM) [1]
VEGFR3 (FLT4) (IC₅₀=31 nM) [1]
IGFR (IC₅₀>100 nM) [1]

体外活性：Derazantinib（以前称为 ARQ 087）是一种新型、口服生物利用度、ATP 竞争性、小分子、多激酶抑制剂，对 FGFR（成纤维细胞生长因子受体）成瘾细胞系和肿瘤具有有效的体外和体内活性在生化检测中，FGFR1-3 的 IC50 值分别为 4.5、1.8 和 4.5 nM，FGFR2 的 IC50 值为 1.8 nM，FGFR1 和 3 的 IC50 值为 4.5 nM。在细胞中，ARQ 087 表现出对 FGFR2 自磷酸化和其他蛋白质的抑制作用ARQ 087 治疗的反应证明了 FGFR 通路（FRS2α、AKT、ERK）下游。细胞增殖研究表明，ARQ 087 在 FGFR 失调（包括扩增、融合和突变）驱动的细胞系中具有抗增殖活性。在具有高水平 FGFR2 蛋白的细胞系中进行的细胞周期研究表明，ARQ 087 诱导的 G1 细胞周期停滞与随后诱导的细胞凋亡之间存在正相关关系。此外，ARQ 087 可有效抑制 FGFR2 改变、SNU-16 和 NCI-H716、具有基因扩增和融合的异种移植肿瘤模型中的体内肿瘤生长。 ARQ 087 目前正在一项 1/2 期临床试验中进行研究，其中包括一个针对已确认 FGFR2 基因融合的肝内胆管癌患者的子队列 (NCT01752920)。激酶测定：使用 3 倍稀释方案在 DMSO 中滴定 Derazantinib，然后在去离子水中进一步稀释 10 倍，最终 DMSO 浓度为 10%。将一定体积 (2.5 μL) 的这些稀释液或载体添加到反应板的每个孔中。将 FGFR1 或 FGFR2 添加到每个孔的测定缓冲液中，体积为 17.5 μL，最终浓度分别为 0.50 或 0.25 nM。 30 分钟预孵育期后，将 ATP 和底物添加到测定缓冲液 (5 μL) 中，最终浓度为 0-1,000 μM ATP 和 80 nM 生物素化-PYK2，最终反应体积为 25 μL。将板在室温下孵育 60 分钟，然后通过添加在含有 EDTA 的测定缓冲液中制备的 10 μL 终止/检测混合物在黑暗中停止细胞测定：使用 130 μL 培养基以每孔 3000-5000 个细胞接种细胞在 96 孔组织培养处理的板中。将细胞孵育过夜，然后用 3 倍连续稀释的 Derazantinib（从 100 μM 开始）处理。将细胞放回 37°C 湿润培养箱中培养 72 小时。使用MTS测定法测量细胞增殖。

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Derazantinib（ARQ-087） 是一种ATP竞争性抑制剂，可结合FGFR的非活性态和活性态，以剂量依赖性方式抑制其自磷酸化和激酶活性[1]
- 在异位表达FGFR的COS-1细胞中，它可抑制FGFR1（EC₅₀<0.123 μM）、FGFR2（EC₅₀=0.185 μM）、FGFR3（EC₅₀=0.463 μM）的磷酸化，对FGFR4的活性较弱（EC₅₀>10 μM）[1]
- 在FGFR失调的细胞系中表现出强效抗增殖活性：NCI-H716（FGFR2扩增/融合，GI₅₀=0.10 μM）、SNU-16（FGFR2扩增/融合，GI₅₀=0.10 μM）、KG-1（FGFR1融合，GI₅₀=0.13 μM）、KATO-III（FGFR2扩增，GI₅₀=0.20 μM）、J82（FGFR3突变，GI₅₀=0.30 μM）等[1]
- 在依赖FGFR融合或亚型的Ba/F3转染细胞系中，具有抗增殖作用：FGFR3-BAIAP2L1（GI₅₀=34.9 nM）、FGFR2-CIT（GI₅₀=39.5 nM）、TEL-FGFR2（GI₅₀=59.8 nM）、FGFR2（GI₅₀=232 nM）、FGFR1（GI₅₀=355 nM）等[1]
- 在FGFR依赖性癌细胞中抑制FGFR信号通路，降低下游蛋白（FRS2α、AKT、MEK、ERK）的磷酸化水平[1]
- 以0.1–1 μM Derazantinib（ARQ-087） 处理NCI-H716和SNU-16细胞，可呈剂量和时间依赖性诱导G1期细胞周期停滞；1 μM处理72小时后，NCI-H716细胞的亚G1群（凋亡细胞）比例增至17.5%[1]
- 在SNU-16细胞中，下调XIAP表达，上调切割型PARP、活化型caspase 3和磷酸化p53的水平，提示诱导凋亡[1]

Derazantinib 可有效抑制 FGFR2 改变、SNU-16 和 NCI-H716、具有基因扩增和融合的异种移植肿瘤模型中的肿瘤生长。在注射Derazantinib的翅膀中，大多数胚胎表现出异常的外部表型（81.3%），这可能是由于抑制了肢芽间充质的增殖。翅膀更短更薄，具有 FGFR 抑制的典型骨骼表型，其中尺骨和桡骨尺寸更短或更小，或者偶尔完全缺失

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在SNU-16移植瘤模型（FGFR2扩增/融合）中，口服给予 Derazantinib（ARQ-087） 75 mg/kg和50 mg/kg（每日一次，连续14天），肿瘤生长抑制率（TGI）分别为83%（p=0.002）和69%（p=0.013），观察到部分和完全肿瘤缓解[1]
- 在NCI-H716移植瘤模型（FGFR2扩增/融合）中，75 mg/kg和50 mg/kg剂量（每日一次，连续14天）的TGI分别为96%（p=0.0001）和68%（p=0.0001）[1]
- 在Ba/F3-FGFR2移植瘤模型中，强效抑制肿瘤生长，但在Ba/F3-INSR模型（非FGFR依赖）中无疗效[1]
- 单次口服25–75 mg/kg剂量可降低SNU-16移植瘤中FGFR、FRS2α和ERK的磷酸化水平，且不影响总FGFR2蛋白表达[1]

通过 ARQ 087 使用 ATP 和生物素化的 PYK2 肽底物评估重组 FGFR1 或 FGFR2 蛋白的激酶抑制活性。使用三倍稀释方案在 DMSO 中滴定后，ARQ 087 在去离子水中稀释十倍，最终 DMSO 浓度为 10%。在反应板的每个孔中，添加一定体积（2.5 μL）的这些稀释液或媒介物。在每个孔中，使用 17.5 μL 的体积将 FGFR1 或 FGFR2 添加到测定缓冲液中（50 mM Tris，pH 8.0，0.02 mg/mL BSA，10 mM MgCl2，1 mM EGTA，10% 甘油，0.1 mM Na3PO4， 1 mM DTT)，终浓度分别为 0.50 或 0.25 nM。在 30 分钟的预孵育期后，将 ATP 和底物添加到测定缓冲液 (5 μL) 中，最终反应体积为 25 μL，ATP 和 80 nM 生物素化-PYK2 的最终浓度为 0–1,000 μM。室温孵育 60 分钟后，将 10 μL 在含有 EDTA、AlphaScreen^TM 链霉亲和素供体和 P-TYR-100 受体珠的测定缓冲液中制备的终止/检测混合物添加到板中以终止他们在黑暗中。 EDTA 的最终浓度为 10 mM，AlphaScreen^TM 供体和受体珠的量均为 500 ng/孔。在黑暗中室温下孵育 60 分钟后，在 Perkin Elmer Envision Multilabel 读板仪上读取测定板的读数。 （发射波长：570 nm，激发波长：640 nm）。对于紧密结合抑制剂，利用了酶浓度的影响。如果酶浓度高于所用测定条件下的IC50值，则根据需要将IC50值转换成Ki值。

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激酶抑制活性实验：制备 Derazantinib（ARQ-087） 的DMSO系列3倍稀释液，再用去离子水进一步稀释至最终DMSO浓度为10%。将稀释液或溶媒（2.5 μL）加入反应板，向各孔中加入含重组FGFR1或FGFR2的实验缓冲液（50 mM Tris pH 8.0、0.02 mg/mL BSA、10 mM MgCl₂、1 mM EGTA、10%甘油、0.1 mM Na₃PO₄、1 mM DTT），终浓度分别为0.50 nM（FGFR1）或0.25 nM（FGFR2），预孵育30分钟。加入含ATP（0–1000 μM）和生物素化PYK2肽底物（80 nM）的实验缓冲液（5 μL）启动反应，室温孵育60分钟。加入含EDTA、AlphaScreen™链霉亲和素供体珠和P-TYR-100受体珠的终止/检测混合物（10 μL），室温避光孵育60分钟后，在激发波长640 nm、发射波长570 nm下检测信号，使用DynaFit软件计算Kᵢ值[1]
- FGFR自磷酸化实验：实验混合物包含100 mM Tris pH 8.0、10 mM MgCl₂、1 mM磷酸烯醇丙酮酸、0.28 mM NADH、丙酮酸激酶（89 U/mL）、乳酸脱氢酶（124 U/mL）和2% DMSO。将非磷酸化的FGFR1或FGFR2激酶结构域与不同浓度的 Derazantinib（ARQ-087） 孵育，加入1 mM ATP启动反应，在30°C下通过酶标仪检测NADH吸收值的降低，评估自磷酸化抑制情况[1]

将细胞在 37°C 下铺板并孵育一整夜后，用 0.1 μM 或 1 μM ARQ 087 对其进行 24 或 72 小时处理。使用 FACS Calibur 流式细胞仪分析细胞周期概况细胞固定、染色并用 Cycletest Plus 试剂盒处理后。

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细胞增殖实验：将细胞以3000–5000个/孔接种到96孔板，过夜孵育。加入 Derazantinib（ARQ-087） 的系列3倍稀释液（起始浓度100 μM），培养72小时。加入MTS/PMS试剂，37°C孵育4小时后，在490 nM波长下检测吸光度，计算GI₅₀值[1]
- FGFR磷酸化实验：将转染FGFR1-4的COS-1细胞用 Derazantinib（ARQ-087） 预处理2小时，再用100 pM FGF1/FGF2/FGF7刺激15分钟。细胞裂解后，通过Western blot检测磷酸化FGFR和总FGFR[1]
- FGFR通路抑制实验：将FGFR依赖性癌细胞（NCI-H716、SNU-16、KATO-III）用 Derazantinib（ARQ-087） 处理2小时，或预处理2小时后进行FGF刺激。细胞裂解物通过Western blot分析FGFR、FRS2α、AKT、MEK和ERK的磷酸化水平[1]
- 细胞周期分析：用0.1 μM或1 μM Derazantinib（ARQ-087） 处理细胞24或72小时，固定后用Cycletest Plus试剂染色，通过流式细胞术分析细胞周期分布（亚G1期、G1期、S期、G2/M期）[1]
- 凋亡相关蛋白实验：用1 μM Derazantinib（ARQ-087） 处理SNU-16细胞0、24、48或72小时，通过Western blot检测XIAP、切割型PARP、活化型caspase 3和磷酸化p53，以β-肌动蛋白作为内参[1]

小鼠：将已建立皮下肿瘤（400 mg）的雌性 CB17 SCID 小鼠（NCI-H716）或 NCr nu/nu 小鼠（SNU-16）分别给予载体对照或单次口服德拉扎替尼。单次给药 4 小时后，采集血浆和肿瘤样本。德拉扎替尼采用口服给药。每组的给药剂量为 10 mL/kg，或 0.1 mL/10 g 体重。

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异种移植瘤模型建立：将 6 周龄的雌性 NCr nu/nu 小鼠（用于 SNU-16 模型）或 CB-17 SCID 雌性小鼠（用于 NCI-H716 和 BaF3 模型）适应环境 2 周以上。将肿瘤细胞（5×10⁶ SNU-16、8×10⁶ NCI-H716 或 2×10⁶ BaF3）皮下植入右上腹部；SNU-16 细胞悬浮于 HBSS 中，而 NCI-H716 细胞悬浮于 50% Matrigel/HBSS 中 [1]
- 药物制剂和给药：Derazantinib (ARQ-087) 配制于 DMA:cremophor EL:丙二醇:0.2 M pH 5 醋酸盐缓冲液 (10:10:30:50) 中，并以 10 mL/kg (0.1 mL/10 g 体重) 的体积口服给药。当肿瘤负荷达到 100–200 mg 时开始治疗，给药方案为每 10 天或每 14 天给药一次 [1]
- 体内药效学试验：荷瘤小鼠（荷瘤量约为 400 mg SNU-16 或 NCI-H716）单次口服 Derazantinib (ARQ-087) 或赋形剂。给药后 4 小时采集血浆和肿瘤样本，并进行免疫组织化学 (IHC) 检测，以检测磷酸化 FGFR、磷酸化 FRS2α、磷酸化 ERK 和总 FGFR2 [1]
- 肿瘤和体重监测：每周使用电子游标卡尺测量肿瘤大小 2–3 次，肿瘤重量计算公式为长度×(宽度)²/2。定期监测体重；体重减轻超过20%、濒死或肿瘤体积超过2000毫克的实验小鼠，采用二氧化碳吸入法实施安乐死[1]

150 mg/kg 剂量的德拉扎替尼 (ARQ-087) 耐受性差，会导致无法接受的体重下降和全身嗜睡 [1]
- 每日一次 100 mg/kg 剂量下，观察到约 10% 的体重下降 [1]
- 剂量高达 75 mg/kg 时耐受性良好，无明显毒性 [1]

[1].Published online 2016 Sep 14.

德拉扎替尼正在临床试验NCT03230318（德拉扎替尼治疗FGFR2基因融合阳性、不可切除或晚期肝内胆管癌患者）中进行研究。
德拉扎替尼是一种口服生物利用度高的成纤维细胞生长因子受体（FGFR）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。德拉扎替尼可与FGFR亚型1、2和3结合并有效抑制其活性。这可能导致FGFR介导的信号转导通路、肿瘤细胞增殖、肿瘤血管生成以及FGFR过表达肿瘤细胞的死亡受到抑制。 FGFR 是一种受体酪氨酸激酶，在多种肿瘤细胞类型中表达上调，并在肿瘤细胞增殖、分化、血管生成和存活中发挥关键作用。

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Derazantinib (ARQ-087) 是一种新型 ATP 竞争性多激酶抑制剂，靶向 FGFR 家族成员和其他激酶（RET、PDGFR、VEGFR 等），通过阻断自身磷酸化和激酶活性来抑制 FGFR 的非活性和活性形式[1]。
- 目前正在一项 I/II 期临床试验 (NCT01752920) 中进行评估，其中包括一个针对经证实存在 FGFR2 基因融合的肝内胆管癌患者的亚组[1]。
- 临床前研究表明，Derazantinib 对由 FGFR 失调（扩增、突变、基因融合）驱动的癌症（包括胆管癌、胃癌等）有效。膀胱癌、子宫内膜癌和白血病[1]
- FGFR基因融合的存在与对Derazantinib (ARQ-087)的高敏感性相关，这归因于其对携带融合基因的细胞中ERK1/2活化的强效抑制[1]

C29H29FN4O

468.58

468.232

C, 74.34; H, 6.24; F, 4.05; N, 11.96; O, 3.41

1234356-69-4

Derazantinib Racemate;2309668-44-6;Derazantinib dihydrochloride;1821329-75-2

46834118

White to yellow solid powder

1.2±0.1 g/cm3

615.1±65.0 °C at 760 mmHg

325.8±34.3 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.632

5.66

59.1

2

6

9

35

638

1

COCCNCCC1=CC(NC2=NC=C3C[C@@H](C4=CC=CC=C4F)C5=CC=CC=C5C3=N2)=CC=C1

KPJDVVCDVBFRMU-AREMUKBSSA-N

InChI=1S/C29H29FN4O/c1-35-16-15-31-14-13-20-7-6-8-22(17-20)33-29-32-19-21-18-26(24-10-4-5-12-27(24)30)23-9-2-3-11-25(23)28(21)34-29/h2-12,17,19,26,31H,13-16,18H2,1H3,(H,32,33,34)/t26-/m1/s1

(6R)-6-(2-fluorophenyl)-N-[3-[2-(2-methoxyethylamino)ethyl]phenyl]-5,6-dihydrobenzo[h]quinazolin-2-amine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.34 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。