Camptothecins; TOP I; topoisomerase I

抗体-药物偶联物可选择性、高效地将抗癌药物递送至肿瘤组织，具有显着的抗肿瘤功效和广泛的治疗窗[2]。使用具有不同生物学特性的五种 CRC 细胞系研究了 [fam-] trastuzumab deruxtecan 对 CRC 的抗肿瘤活性。首先检查了这些不同细胞系中 HER2 在 mRNA 和蛋白质水平上的表达。免疫印迹分析以及 RT 和实时聚合酶链反应 (PCR) 分析显示，所有 CRC 细胞系中 HER2 蛋白和 HER2 mRNA 的量均远小于 NCI-N87 细胞。 [fam-] trastuzumab deruxtecan 减弱了 NCI-N87 细胞的活力，与之前的结果一致，而所有五种 CRC 细胞系均表现出对该药物的耐药性。这些发现表明 HER2 蛋白的表达水平可能决定对 [fam-] 曲妥珠单抗 deruxtecan 的敏感性。

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Dxd（ADC的Exatecan衍生物）是一种强效的DNA拓扑异构酶I抑制剂，用作与HER2靶向ADC的偶联药物（DS-8201a），IC50为0.31μM。IC50范围为1.43 nM至4.07 nM，Dxd对KPL-4、NCI-N87、SK-BR-3和MDA-MB-468的人癌症细胞系具有细胞毒性；然而，以Dxd为有效载荷的对照IgG-ADC对四种细胞系（表达HER2）没有抑制作用。IC50值分别为26.8、25.4和6.7 ng/mL，DS-8201a（有效载荷为Dxd）对HER2阳性KPL-4、NCI-N87和SK-BR-3细胞系表现出显著的抑制作用，但对MDA-MB-468没有这种抑制作用（IC50，>10000 ng/mL）[3]。

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DS-8201a的结构如图1A所示DS-8201a是一种靶向HER2的ADC，由抗HER2抗体和拓扑异构酶I抑制剂DX-8951（Dxd）的衍生物组成，它们通过马来酰亚胺-甘油-苯丙氨酸-甘油（GGFG）肽接头结合在一起。在用还原剂三（2-羧乙基）膦盐酸盐（TCEP HCl）还原链间二硫键后，接头有效载荷通过半胱氨酸残基与抗体偶联。由于四肽被溶酶体酶（如组织蛋白酶B和L）分解，这些酶在肿瘤细胞中高度表达，因此假设DS-8201a被溶酶体酶切割并释放Dxd，Dxd在与HER2受体结合后特异性攻击肿瘤细胞中的靶分子，并在肿瘤细胞内内化。通过使用RPC，DS-8201a的DAR被确定为约8，这是传统链间半胱氨酸偶联的理论最大载药量。因此，在HIC图中观察到均匀的药物分布（图1B）。我们证实，Dxd在拓扑异构酶I的抑制活性方面比SN-38和DX-8951f更有效，这是通过拓扑异酶I介导的DNA松弛试验测量的（图1C）[3]。

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DS-8201a[3]
对癌症细胞生长的抑制作用 将DS-8201a对癌症细胞生长的抑制活性与体外与Dxd结合的抗HER2 Ab和对照IgG–ADC对各种人类癌症细胞系的抑制活性进行比较。首先通过流式细胞术分析评估细胞系KPL-4、NCI-N87、SK-BR-3和MDA-MB-468细胞表面HER2的表达（图2A）。KPL-4、NCI-N87和SK-BR-3的相对MFI分别为95.7、101.6和56.2，表明HER2在细胞表面上明确表达，而MDA-MB-468的相对MFI为1.0，表明MDA-MB-465中没有表达。观察到DS-8201a对HER2阳性KPL-4、NCI-N87和SK-BR-3具有显著的细胞生长抑制活性，IC50值分别为26.8、25.4和6.7 ng/mL，而对MDA-MB-468没有这种抑制作用，IC50值>10000 ng/mL（图2B）。尽管抗HER2抗体显示出对NCI-N87和SK-BR-3的细胞生长抑制活性，但这些活性比DS-8201a弱得多；NCI-N87和SK-BR-3的IC50值分别为204.2和65.9 ng/mL（图2B）。此外，对照IgG ADC在四种细胞系中均未显示出细胞生长抑制活性（图2B），尽管所有四种细胞株对有效载荷Dxd都很敏感（IC50:1.43 nmol/L-4.07 nmol/L）。这些结果表明，药物与抗HER2抗体结合显著增强了DS-8201a的细胞生长抑制活性，并且DS-8201a对HER2阳性细胞系显示出靶向特异性生长抑制作用。

测试了 [fam-] 曲妥珠单抗 deruxtecan 在表达 HER2 的异种移植肿瘤模型中的疗效。首次通过免疫组化（IHC）证实HCT116-Mock、HCT116-H2L或HCT116-H2H细胞裸鼠皮下肿瘤中HER2蛋白表达水平。以3.0 mg/kg剂量施用[fam-]曲妥珠单抗deruxtecan显着抑制由HCT116-H2L或HCT116-H2H细胞形成的肿瘤的生长，但不抑制由HCT116-Mock细胞形成的肿瘤的生长。第 24 天时，与 PBS 载体相比，[fam-] trastuzumab deruxtecan 对 HCT116-H2L 和 HCT116-H2H 细胞的抑制程度分别为 60% 和 93%。[fam-] trastuzumab deruxtecan 治疗对身体没有影响三组小鼠中任意一组的体重。因此，这些发现表明，异种移植模型中肿瘤对[fam-]曲妥珠单抗deruxtecan的敏感性取决于HER2表达水平，并且这种治疗与明显的毒性无关。

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DS-8201a（DXdis为有效载荷，10mg/kg，静脉注射）在HER2 IHC 1+/FISH阴性表达的HER2低表达ST565和ST313模型以及KPL4、JIMT-1和Capan-1的HER2阳性模型中显示出强大的抗肿瘤活性[3]。

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体内抗肿瘤活性[3]
在HER2阳性NCI-N87异种移植物模型中评估了DS-8201a的体内抗肿瘤活性DS-8201a以剂量依赖的方式诱导肿瘤生长抑制，单次剂量超过1mg/kg时肿瘤消退，而不会诱导小鼠的一般状况或体重变化出现任何异常（图2C）。在同一模型中，4 mg/kg的抗HER2抗体给药部分抑制了肿瘤生长，表明在第21天与对照组相比，肿瘤生长抑制率（TGI）为31%（图2D）。另一方面，DS-8201a明显显示出更有效的抗肿瘤疗效，表明在相同的4 mg/kg剂量下，TGI为99%，因此在体内和体外模型中都观察到药物偶联的疗效增强（图2D）。此外，DS-8201a的体内疗效取决于其HER2结合，因为对照IgG-ADC没有抑制肿瘤生长（图2D）。

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DS-8201a在低HER2表达肿瘤中的抗肿瘤活性[3]
T-DM1已被批准用于HER2阳性转移性癌症患者，根据当前指南，其定义为HER2 IHC 3+或IHC 2+/FISH阳性，并且在FISH阴性、HER2 1+和2+人群中，HER2靶向治疗的临床需求仍有待满足。因此，在具有不同HER2表达水平的各种小鼠异种移植物模型中评估了DS-8201a的抗肿瘤活性；KPL-4（强阳性）、JIMT-1（中度阳性）、Capan-1（弱阳性）和GCIY（阴性）（图4A和B）。还评估了具有与DS-8201a相同的药物接头和约一半DAR（DAR 3.4）的抗-HER2 ADC，以研究DAR对抗肿瘤活性的影响。虽然T-DM1仅对KPL4模型有效，但DS-8201a对所有具有KPL4、JIMT-1和Capan-1的HER2阳性模型有效。两种ADC在GCIY模型中均无效。抗HER2 ADC（DAR 3.4）抑制了所有HER2阳性模型的肿瘤生长，其疗效是HER2表达依赖性的。在HER2弱阳性Capan-1模型中，DS-8201a的疗效明显强于抗HER2 ADC（DAR 3.4）。这些结果表明，高DAR ADC DS-8201a能够将足够的有效载荷量递送到癌症细胞中，表明即使在低HER2水平下也具有细胞毒性。在HER2强阳性模型的情况下，即使是低DAR ADC也能够为细胞死亡提供足够的有效载荷。DS-8201a对HER2水平较高的肿瘤有效，因为其DAR约为8。为了在HER2低表达模型中确认DS-8201a的HER2特异性，在HER2高CFPAC-1模型中进行了竞争性抑制研究（图4C）。DS-8201a的疗效被抗HER2抗体的先前治疗所抵消，对照IgG ADC在比DS-8201a高3倍的剂量下没有抑制肿瘤生长。从这些结果中，证实了DS-8201a在HER2低表达模型中的HER2特异性。

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与PDX模型中的T-DM1的比较[3]
除了基于细胞系的异种移植物模型外，还进行了几次PDX评估，以更精确地评估临床效益。在癌症PDX模型中，NIBIO G016，DS-8201a表现出强大的抗肿瘤活性和肿瘤消退，但T-DM1没有（图5A）。由于该模型中的HER2状态为IHC 3+/FISH+，因此认为DS-8201a和T-DM1之间抗肿瘤疗效的差异是基于有效载荷的不同敏感性，这是由于每种有效载荷的作用机制不同。在癌症PDX模型中，尽管DS-8201a和T-DM1在HER2 IHC 2+/FISH阳性ST225模型中均有效，但在第21天，用DS-8201a而非T-DM1治疗的5只小鼠中有3只观察到肿瘤完全消退（图5B）。此外，DS-8201a在HER2 IHC 1+/FISH阴性表达的HER2低表达ST565和ST313模型中显示出抗肿瘤活性（图5C和D），但T-DM1没有。这一结果表明了与基于细胞系的异种移植物模型（如Capan-1和CFPAC-1）类似的趋势（图4B和C）。因此，在具有几种HER2表达水平的所有4种模型中，DS-8201a显示出比T-DM1更有效的抗肿瘤活性。这些结果表明，DS-8201a与T-DM1具有可区分的潜力，T-DM1在T-DM1不敏感和HER2低表达的肿瘤中显示出有效性，这是由于结合药物的不同作用机制和DS-8201a的高DAR造成的。

使用Freedom EVO200系统进行平行人工膜渗透性测定（PAMPA）。受体板的滤膜涂有GIT‐0脂质溶液。将DMSO（10mM）中的每种化合物溶液加入Prisma HT缓冲液中，获得5μM供体溶液（含有0.05%DMSO，pH 5.0和pH 7.4），然后放置在供体板上。受体板填充有受体沉缓冲液。将供体板堆叠在受体板上，并在25°C下孵育4小时。培养后，通过LC-MS/MS系统（API 4000）测量两个平板中的化合物浓度。使用PAMPA Evolution DP软件计算渗透系数（Peff；10−6 cm/s）。[1]

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拓扑异构酶I抑制试验[3]
SN-38、DX-8951f和DX-8951衍生物（DXd）是在内部合成的。根据之前的报告，SN-38、DX-8951f和DXd对人拓扑异构酶I的抑制活性是通过拓扑异酶I介导的DNA弛豫试验进行评估的。简而言之，重组人拓扑异构酶I与每种药物一起孵育5分钟。然后，加入超螺旋DNA pBR322，在25°C下孵育60分钟。在琼脂糖凝胶上电泳混合物后，用CCD成像仪测量超螺旋DNA的量。

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DS-8201a在血浆中的体外稳定性[3]
在小鼠、大鼠、猴子和人血浆中评估了37°C下浓度为10μg/mL的DS-8201a>在21天内释放DXd的速率。

将细胞接种在96孔板中，KPL‐4为1000个细胞/孔，MDA‐MB‐468为2000个细胞/孔。培养过夜后，加入每个ADC的连续稀释溶液。5天后，根据制造商的说明，使用来自Promega的CellTiter‐Glo发光细胞活力测定法评估细胞活力。在共培养研究中，将KPL‐4和MDA‐MB‐468细胞分别以1×105细胞和3×105细胞接种在6孔板中的2 mL/孔培养基中。孵育过夜后，从板中取出上清液，并以6mL/孔的速度加入每种ADC稀释剂（10nM）。培养5天后，从平板上分离活细胞，并使用细胞计数器测定每个孔中的细胞数。为了确定KPL‐4和MDA‐MD‐468细胞在总活细胞中的比例，用抗HER2/nue-FITC对细胞进行染色，并在冰上孵育20分钟。洗涤后，使用流式细胞仪测量2×104染色细胞的荧光信号。根据每个处理井中HER2阳性和HER2阴性细胞的数量和比例，计算KPL‐4或MDA‐MB‐468细胞的数量。[1]

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将细胞接种在96孔板中，KPL-4为1000个细胞/孔，MDA-MB-468为2000个细胞/孔。孵育过夜后，加入每种ADC的连续稀释溶液。5天后，根据制造商的说明，使用Promega的CellTiter̴Glo发光细胞存活率测定法评估细胞存活率。在共培养研究中，将KPL-4和MDA-MB-468细胞分别以1×105个细胞和3×105个电池接种在2 mL/孔培养基中的6孔板中。孵育过夜后，从培养板中取出上清液，以6mL/孔的速度加入每种ADC稀释剂（10nM）。培养5天后，从培养板上分离活细胞，并使用细胞计数器测定每个孔中的细胞数量。为了确定KPL-4和MDA-MD-468细胞在总活细胞中的比例，用抗HER2/nue FITC对细胞进行染色，并在冰上孵育20分钟。洗涤后，使用流式细胞仪测量2×104个染色细胞的荧光信号。根据每个处理孔中HER2阳性和HER2阴性细胞的数量和比例，计算KPL-4或MDA-MB-468细胞的数量。[1]

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96孔板每孔接种1000个细胞。在孵育一晚后加入DXd。CellTiter Glo发光细胞活力测定用于在六天后评估细胞活力。为了鉴定每个细胞系中的HER2表达，将FITC小鼠IgG1、κ同种型对照或抗HER2/neu FITC在冰上孵育30分钟。洗涤后，使用FACSCalibur分析标记的细胞。相对平均荧光强度（rMFI）的计算已完成[3]。

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细胞毒性试验[3]
将细胞以每孔1000个细胞的速度接种到96孔板上。孵育过夜后，加入每种稀释物质。根据制造商的说明，在6天后使用CellTiter Glo发光细胞存活率测定法评估细胞存活率。为了检测每个细胞系中的HER2表达，将细胞与FITC小鼠IgG1、κ同种型对照或抗HER2/neu FITC在冰上孵育30分钟，用FACSCalibur分析标记的细胞。相对平均荧光强度（rMFI）通过以下方程式计算：

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ELISA[3]
对于结合试验，免疫板在包被缓冲液中用2.5μg/mL His标记的HER2-ECD蛋白包被，并在4°C下保持过夜。洗涤后，将板封闭，并将每种连续稀释的物质加入孔中。在37°C下孵育1.5小时后，清洗平板，并在37°C下用HRP偶联的抗人IgG二抗孵育1小时。洗涤后，加入TMB溶液，用微孔板读数器测量每个孔中的A450。为了检测磷酸化Akt（pAkt），将SK-BR-3细胞在96孔板中预孵育4天，然后与每种物质孵育24小时。孵育后，根据制造商的说明，裂解细胞，并使用PathScan Phospho-Akt1（Ser473）夹心ELISA试剂盒和PathScan total-Akt1夹心ELISA试剂袋检测细胞间pAkt和总Akt。通过将处理过的归一化pAkt值除以未处理的归一化pAk值来计算每个样品孔的相对pAkt。

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ADCC评估[3]
使用来源于供体的人外周血单核细胞（PBMC）作为效应细胞，SK-BR-3细胞作为靶细胞，评估抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）活性。效应细胞（2×105个细胞）和51Cr标记的靶细胞（1×104个细胞）与每种物质一起孵育，指示效应：靶（E:T）比为20:1。孵育4小时后，通过培养上清液中的放射性测量ADCC活性。

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免疫印迹[3]
用每种物质处理KPL-4细胞。24、48或72小时后，收获细胞并用含有Halt蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物的M-PER裂解缓冲液裂解。 通过SDS-PAGE对样品进行装载和分离，并将其印迹到聚偏二氟乙烯膜上。将膜封闭，并用抗磷酸化Chk1（Ser345；133D3）兔单克隆抗体、抗Chk1（2G1D5）小鼠单克隆抗体、反切割PARP（Asp214）抗体、抗β-肌动蛋白（8H10D10）小鼠mAb、抗磷酸化组蛋白H2A探测过夜。X（Ser139）抗体和抗组蛋白H2A。4°C下的X抗体。然后，用SNAP皮内洗涤膜并用荧光标记的二抗孵育10分钟。使用Odyssey成像系统检测荧光信号。

体内异种移植研究
所有体内研究均按照机构动物护理和使用委员会的当地指南进行。使用5周龄的特定病原体清除级雌性CAnN.Cg-Foxn1nu/CrlCrlj小鼠（BALB/c裸鼠）。所有模型均通过皮下注射接种于小鼠侧腹建立。NCI-N87和MDA-MB-468-Luc模型分别通过注射悬浮于Matrigel基质中的5 × 10⁶和1 × 10⁷个细胞建立。NCI-N87模型接种6天后，MDA-MB-468-Luc模型接种9天后，根据肿瘤体积将荷瘤小鼠随机分为治疗组和对照组，并开始给药（第0天）。 每种ADC均以3或10 mg/kg的剂量，10 mL/kg的体积，静脉注射给小鼠。作为载体，使用与ADC相同体积的ABS缓冲液（10 mM醋酸盐缓冲液，5%山梨醇，pH 5.5）。肿瘤体积定义为1/2 × 长 × 宽²。[1]

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体内荧光素酶成像
将5 × 10⁶个NCI-N87细胞和1 × 10⁷个MDA-MB-468-Luc细胞悬浮于Matrigel基质中，接种到小鼠右侧腹部，总体积为100 μL。接种7天后，根据肿瘤体积将荷瘤小鼠随机分为治疗组和对照组，并开始给药（第0天）。每种ADC或载体均静脉注射给小鼠。每只小鼠的荧光素酶活性均使用体内成像系统每周测量两次，同时在静脉注射150 mg/kg荧光素10分钟后测量肿瘤长度。发光量使用分析软件分析，结果以平均辐射强度（p/s/cm²/sr）表示。在另一项研究中，除将混合物接种到小鼠右侧腹部外，还将密度为1.5 × 10⁷个细胞的MDA-MB-468-Luc细胞接种到小鼠左侧腹部。接种7天后，以与上述类似的方式进行给药和评估。[1] 小鼠：简而言之，将每种细胞悬液或肿瘤碎片皮下注射到特定病原体清除（SPF）的雌性裸鼠中。从第0天开始给药，待肿瘤生长到合适大小后，根据肿瘤体积将荷瘤小鼠随机分为治疗组和对照组。小鼠接受静脉注射DS-8201a（1或10 mg/kg，静脉注射；Dxd为有效载荷）。计算肿瘤生长抑制率（TGI，%）[1]。

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细胞系和患者来源的异种移植研究[3]
详细的研究步骤见补充材料。简而言之，将每种细胞悬液或肿瘤碎片皮下接种到特定病原体清除（SPF）雌性裸鼠体内。当肿瘤生长到适当体积后，根据肿瘤体积将荷瘤小鼠随机分为治疗组和对照组，并于第0天开始给药。每种物质均通过静脉注射给药。肿瘤生长抑制率（TGI，%）根据以下公式计算：

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食蟹猴体内DS-8201a的药代动力学[3]
采用经验证的配体结合试验测定血浆中DS-8201a和总抗体的浓度；定量下限为0.100 μg/mL。采用经验证的液相色谱-串联质谱（LC/MS-MS）法测定血浆中DXd的浓度；定量下限为0.100 ng/mL。DS-8201a以3.0 mg/kg的剂量静脉注射给雄性食蟹猴。给药后 672 小时内测量血浆中 DS-8201a、总抗体和 DXd 的浓度。

食蟹猴体内的药代动力学[3]
单次静脉注射DS-8201a后，血浆中DS-8201a浓度呈指数下降。DS-8201a和总抗体的稳态分布容积（Vss）接近血浆容积（数据未显示）。DS-8201a和总抗体的药代动力学特征未见明显差异，表明DS-8201a的肽连接子即使在DAR 8时在血浆中也保持稳定（图2E）。仅在有限的时间点检测到低水平的DXd（图2E）。

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体外血浆稳定性[3]
在小鼠、大鼠、猴和人血浆中，第21天DXd从DS-8201a中的释放率在1.2%至3.9%之间（图2F），与其他抗体偶联药物（ADC）如T-DM1、SGN-35（Brentuximab vedotin）和inotuzumab ozogamicin的释放率相当或更低（35-37）。这些结果表明DS-8201a在血浆中稳定。

DS-8201a 的安全性概况 [3]
在食蟹猴（DS-8201a 的交叉反应物种）和大鼠（抗原非结合物种；表 1）中进行了重复静脉给药（每 3 周一次，共 3 次）研究。在大鼠研究中，剂量高达 197 mg/kg（最大剂量）时，未发现死亡或危及生命的毒性。因此，动物严重毒性剂量 10% (STD10) 被认为 >197 mg/kg。在猴子研究中，一只雌性猴子在最高剂量 78.8 mg/kg 下于第 26 天因濒死而被实施安乐死。濒死的原因似乎是该动物状况恶化，包括体重和食物摄入量下降，以及骨髓毒性和肠道毒性。补充表S1显示了存活猴子肠道、骨髓和肺脏的显微镜检查结果。胃肠道毒性和骨髓毒性是拓扑异构酶I抑制剂临床应用中典型的剂量限制因素。DS-8201a对肠道的影响非常轻微，在剂量高达78.8 mg/kg时，所有动物均未出现明显的肠道病变。骨髓毒性仅在78.8 mg/kg剂量下出现，并伴有网织红细胞比例下降。在10 mg/kg和30 mg/kg剂量下，猴子的白细胞和红细胞计数均未见异常。重复给予猴子 DS-8201a 78.8 mg/kg 剂量后，引起中度肺毒性；在 ≥30 mg/kg 剂量下，经过 6 周恢复期后，毒性分级为轻度或极轻度。基于上述死亡率和毒性严重程度，猴子的最高非严重毒性剂量 (HNSTD) 被确定为 30 mg/kg。在与临床方案相对应的重复给药后，大鼠和猴子在剂量高达 197 mg/kg 和 30 mg/kg 时均耐受性良好，且非临床安全性数据符合人体试验的要求。

[1]. Bystander killing effect of DS-8201a, a novel anti-human epidermal growth factor receptor 2 antibody-drug conjugate, in tumors with human epidermal growth factor receptor 2 heterogeneity. Cancer Sci. 2016 Jul;107(7):1039-46.

[2]. METHOD FOR SELECTIVELY MANUFACTURING ANTIBODY-DRUG CONJUGATE. WO2017002776A1.

[3]. DS-8201a, A Novel HER2-Targeting ADC with a Novel DNA Topoisomerase I Inhibitor, Demonstrates a Promising Antitumor Efficacy with Differentiation from T-DM1. Clin Cancer Res. 2016 Oct 15;22(20):5097-5108.

抗体药物偶联物能够选择性且高效地将抗癌药物递送至肿瘤组织，并具有显著的抗肿瘤疗效和较宽的治疗窗口。DS-8201a 是一种靶向人表皮生长因子受体 2 (HER2) 的抗体药物偶联物，采用新型连接子-有效载荷系统，并结合强效拓扑异构酶 I 抑制剂依沙替康衍生物（DX-8951 衍生物，DXd）制备而成。它对曲妥珠单抗-美坦新 (T-DM1) 不敏感的患者来源异种移植瘤模型（无论 HER2 高表达还是低表达）均有效。本研究评估了 DS-8201a 的旁观者杀伤效应，并与 T-DM1 进行了比较。我们证实，DS-8201a 的有效载荷 DXd (1) 具有高膜渗透性，而 T-DM1 的有效载荷 Lys-SMCC-DM1 的膜渗透性较低。在体外HER2阳性KPL-4细胞和阴性MDA-MB-468细胞的共培养条件下，DS-8201a可杀死两种细胞，而T-DM1和低渗透性有效载荷的抗体药物偶联物anti-HER2-DXd(2)则无此作用。体内评估采用体内成像系统，将小鼠接种HER2阳性NCI-N87细胞和HER2阴性MDA-MB-468-Luc细胞的混合物。体内实验表明，DS-8201a可降低小鼠的荧光素酶信号，表明其抑制了MDA-MB-468-Luc细胞群；然而，T-DM1和anti-HER2-DXd(2)则无此作用。此外，证实DS-8201a对接种在NCI-N87肿瘤对面的MDA-MB-468-Luc肿瘤无效，这表明DS-8201a的旁观者杀伤效应仅在HER2阳性细胞附近的细胞中观察到，表明全身毒性方面无需过度担忧。这些结果表明，DS-8201a由于其高膜渗透性的有效载荷而具有强大的旁观者效应，并且对治疗对T-DM1无反应的HER2异质性肿瘤有益。[1]

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目的：开发了一种新型抗肿瘤候选药物——含有新型拓扑异构酶I抑制剂的抗HER2抗体药物偶联物DS-8201a，并对其临床前药理学特性进行了评估。
实验设计：在多种HER2阳性细胞系和患者来源的异种移植（PDX）模型中，评估了DS-8201a的体外和体内药理活性，并与T-DM1进行了比较。同时，还评估了其疗效的作用机制。本研究评估了DS-8201a在食蟹猴体内的药代动力学以及在大鼠和食蟹猴体内的安全性。
结果：DS-8201a表现出HER2表达依赖性的细胞生长抑制活性，并在HER2阳性胃癌NCI-N87模型中，单次给药剂量超过1 mg/kg即可诱导肿瘤消退。DS-8201a与HER2的结合活性和ADCC活性与未偶联的抗HER2抗体相当。DS-8201a还显示出对Akt磷酸化的抑制活性。DS-8201a可诱导Chk1和组蛋白H2A.X（DNA损伤标志物）的磷酸化。 DS-8201a 的药代动力学和安全性良好，在食蟹猴中，最高非严重毒性剂量为 30 mg/kg，表明 DS-8201a 在人体中具有良好的耐受性。DS-8201a 在 T-DM1 不敏感且 HER2 高表达的 PDX 模型中有效。DS-8201a（而非 T-DM1）对多种 HER2 低表达的乳腺癌 PDX 模型显示出抗肿瘤疗效。结论：DS-8201a 在多种 HER2 阳性模型中表现出强效的抗肿瘤活性，且具有良好的药代动力学和安全性。结果表明，DS-8201a 将成为一种有价值的疗法，具有治疗 T-DM1 不敏感的 HER2 阳性癌症和 HER2 低表达癌症的巨大潜力。Clin Cancer Res; 22(20); 5097-108. ©2016 AACR. [3]

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目前市售和临床开发中的大多数抗体偶联药物（ADC）都含有微管蛋白聚合抑制剂，例如T-DM1和SGN-35（Brentuximab vedotin；参考文献13）。我们合成了一种新型ADC，该ADC含有拓扑异构酶I抑制剂，其作用机制与微管蛋白聚合抑制剂不同，并采用了一种新型的自裂解连接子系统，该系统使用氨基亚甲基（AM）基团。虽然应用于SGN-35（Brentuximab vedotin）和其他几种ADC的其他可裂解连接子系统会释放含氨基的有效载荷，但这种AM自裂解连接子系统能够从DS-8201a中释放含有羟基的DXd。此外，这种新型连接子-有效载荷系统能够降低ADC的疏水性，并有助于提高其药物抗体比（DAR）。 T-DM1采用赖氨酸偶联和不可裂解系统，这与DS-8201a的系统截然不同。DS-8201a在体外和体内均显示出强大的HER2特异性疗效，并且通过药物偶联，其曲妥珠单抗的功能效果与T-DM1相当。此外，DS-8201a在大鼠和食蟹猴中的安全性研究表明，DS-8201a具有良好的耐受性。[3]

C52H56FN9O13

1034.05195617676

1,033.40

C, 60.40; H, 5.46; F, 1.84; N, 12.19; O, 20.11

1599440-13-7

Exatecan mesylate;169869-90-3;Deruxtecan-d6;2760715-89-5;Deruxtecan-d5;Exatecan mesylate dihydrate;197720-53-9; 171335-80-1; 144008-87-7 (HCl)

118305111

White to yellow solid powder

1.48±0.1 g/cm3

1491.1±65.0 °C

-0.4

301Ų

7

15

22

75

2360

3

FC1=CC2=C3C(=C1C)CC[C@@H](C3=C1C(C3=CC4[C@](C(=O)OCC=4C(N3C1)=O)(CC)O)=N2)NC(COCNC(CNC([C@H](CC1C=CC=CC=1)NC(CNC(CNC(CCCCCN1C(C=CC1=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O)=O

WXNSCLIZKHLNSG-MCZRLCSDSA-N

InChI=1S/C52H56FN9O13/c1-3-52(73)33-19-38-48-31(24-62(38)50(71)32(33)25-75-51(52)72)47-35(14-13-30-28(2)34(53)20-36(60-48)46(30)47)58-43(67)26-74-27-57-41(65)22-56-49(70)37(18-29-10-6-4-7-11-29)59-42(66)23-55-40(64)21-54-39(63)12-8-5-9-17-61-44(68)15-16-45(61)69/h4,6-7,10-11,15-16,19-20,35,37,73H,3,5,8-9,12-14,17-18,21-27H2,1-2H3,(H,54,63)(H,55,64)(H,56,70)(H,57,65)(H,58,67)(H,59,66)/t35-,37-,52-/m0/s1

Glycinamide, N-[6-(2,5-dihydro-2,5-dioxo-1H-pyrrol-1-yl)-1-oxohexyl]glycylglycyl-L-phenylalanyl-N-[[2-[[(1S,9S)-9-ethyl-5-fluoro-2,3,9,10,13,15-hexahydro-9-hydroxy-4-methyl-10,13-dioxo-1H,12Hbenzo[de]pyrano[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-1-yl]amino]-2-oxoethoxy]methyl]-

Deruxtecan; DS-8201a; DS8201a; DX-8951 derivative; Trastuzumab deruxtecan; DS 8201a; exatecan derivative; DX 8951; DX8951; Deruxtecan; 1599440-13-7; Mc-ggfg-dxd(1); 5SEB972CO4; Deruxtecan [USAN]; UNII-5SEB972CO4;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

注意： (1) 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。 (2) 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~35 mg/mL (~33.85 mM)
H2O : Insoluble (< 1 mg/mL)

配方 1 中的溶解度: 1.75 mg/mL (1.69 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 17.5 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL 生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 1.75 mg/mL (1.69 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 17.5mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 1.75 mg/mL (1.69 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 17.5 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 10% DMSO+ 40% PEG300+ 5% Tween-80+ 45% saline: 1.75 mg/mL (1.69 mM)

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。