Topoisomerase I ( IC50 = 0.975 μg/mL )

Exatecan Mesylate 在体外表现出对拓扑异构酶 I 的有效抑制作用以及对 32 种恶性细胞系的功效。 Exatecan Mesylate 的抗增殖活性分别比 SN-38 或 SK&F 10486-A 高约 6 倍和 28 倍。 [1]

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Exatecan 的 IC50 为 0.975 μg/mL，使其成为拓扑异构酶 I 的强抑制剂。exatecan 甲磺酸盐 (DX- 8951f）[1]。 exatecan mesylate (DX-8951f) 对 PC-6 和 PC-6/SN2-5 细胞的细胞毒作用通过平均 GI50 值分别为 0.186 和 0.395 ng/mL 得到证实。在 PC-6 和 PC-6/SN2-5 细胞中，exatecan mesylate (34 nM) 可稳定 DNA-TopoI 复合物 [3]。

在小鼠中，当用于对抗人胃腺癌 SC-6 异种移植物时，以 4 天为间隔给予三种静脉注射剂量的 Exatecan Mesylate 比 CPT-11 或 SK&F 10486-A 具有更强的抗肿瘤活性。此外，它还击败了 P-糖蛋白介导的多药耐药性。这些发现表明 Exatecan Mesylate 是一种有前途的治疗药物，具有很强的抗肿瘤活性。 [1]

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在具有肿瘤细胞但无毒性死亡的小鼠模型中，甲磺酸exatecan（DX-8951f，3.325-50 mg/kg，静脉注射）显示出抗肿瘤功效[1]。在 MIA-PaCa-2 早期模型和 BxPC-3 早期模型中，exatecan Mesylate（15、25 mg/kg，静脉注射）显着抑制 MIA-PaCa 和 BxPC-3 原发肿瘤的生长。在BxPC-3晚期癌症模型中，甲磺酸exatecan（15、25mg/kg，静脉注射）完全根除肺转移并显着减少BxPC-3淋巴转移[2]。

SDS 缓冲液（10 mM HEPES、2 mM 原钒酸盐、10 mM NaF、10 mM 焦磷酸盐、1 mMPMSF、10 µg/mL 亮抑肽、10% 2-巯基乙醇、10% 甘油、8% SDS、42 mM Tris-HCl、0.002%溴酚蓝，pH 7.4）用于裂解细胞（5×10⁶）。使用 7.5% 聚丙烯酰胺凝胶分离整个细胞裂解物中的蛋白质，然后印迹到硝酸纤维素膜上。首先，将辣根过氧化物酶缀合的蛋白 A 应用到膜上，然后进行抗 Topo I 人抗体处理。 ECL 试剂用于检测 Topo I 特异性条带。为了获得核提取物，使用冰冷缓冲液（2 mM K₂HPO₄、5 mM MgCl _{清洗 577 个细胞2}、150 mM NaCl、1 mM EGTA、0.1 mM 二硫苏糖醇），在含有 0.35% Triton-X100 和 PMSF 的缓冲液中复溶，随后置于冰上 10 分钟。将获得的裂解物离心，随后将沉淀物在含有 0.35 M NaCl 的缓冲液中于 4°C 下孵育一小时。蛋白质测定试剂盒用于测量离心（18,000 g，10 分钟）后上清液（核提取物）的蛋白质浓度。使用抗 Topo I 抗体进行蛋白质印迹分析来分析相同数量的核蛋白[3]。

MTT法用于测量生长抑制实验中孵育期结束时的活细胞数，该实验在96孔平底微孔板中进行。以 500–20,000000 个细胞/孔在 150 μL 培养基中接种并培养 24 小时（P388、CCRF-CEM 和 K562 细胞 4 小时）后，药物（例如 Exatecan Mesylate 在 150 μL 培养基/孔中）或单独添加培养基（作为对照），并将细胞再培养 3 天。将板孵育 4 小时，并在添加 MTT（20 μL/孔，5 mg/mL，磷酸盐缓冲盐水中）后以 800 g 离心 5 分钟。然后除去培养基，并将形成的蓝色染料溶解在 150 μL DMSO 中。 3550 型酶标仪用于测量 540 nm 处的吸光度[1]。

为了进行治疗，在原位植入BxPC-3-GFP和MIA-PaCa-2-GFP三周后，将小鼠随机分为五组，每组五只。第一组为阴性对照组，不进行任何医疗干预。第二组和第三组分别给予依沙替康甲磺酸盐，剂量分别为25 mg/kg和15 mg/kg。第四组和第五组分别给予LY 188011，剂量分别为300 mg/kg和150 mg/kg。在原位植入BxPC-3-GFP六周后，将小鼠随机分为三组，每组二十只，进行治疗。第一组为阴性对照组，不进行任何医疗干预。第三组给予LY 188011，剂量为300 mg/kg/次；第二组给予依沙替康甲磺酸盐，剂量为25 mg/kg/次。两种药物的给药方案均为每周一次，持续三周，停药两周，然后再继续服用三周。在早期和晚期癌症模型中，每周测量原发肿瘤的大小和体重。肿瘤体积的计算公式为 a × b² × 0.5，其中 a 和 b 分别代表肿瘤的长径和短径。研究结束后，处死小鼠并进行检查。我们记录每只小鼠的最终肿瘤重量以及原发肿瘤和转移灶的直接 GFP 图像。TWt 和 TWc 分别代表治疗组和对照组的平均肿瘤重量，肿瘤生长指数 (IR) 的计算公式为 IR (%) = (1 − TWt/TWc) × 100[2]。

[1]. A new water-soluble camptothecin derivative, DX-8951f, exhibits potent antitumor activity against human tumors in vitro and in vivo. Jpn J Cancer Res. 1995 Aug;86(8):776-82.

[2]. Efficacy of camptothecin analog DX-8951f (Exatecan Mesylate) on human pancreatic cancer in an orthotopic metastatic model. Cancer Res. 2003 Jan 1;63(1):80-5.

[3]. DX-8951f, a water-soluble camptothecin analog, exhibits potent antitumor activity against a human lung cancer cell line and its SN-38-resistant variant. Int J Cancer. 1997 Aug 7;72(4):680-6.

无水依沙替康甲磺酸盐是依沙替康的无水甲磺酸盐形式，依沙替康是一种半合成的水溶性喜树碱衍生物，具有抗肿瘤活性。给药后，依沙替康甲磺酸盐通过稳定拓扑异构酶I与DNA之间的可裂解复合物并抑制DNA断裂的重新连接来抑制拓扑异构酶I的活性，从而抑制DNA复制并诱导细胞凋亡。
另见：依沙替康甲磺酸盐（注释已移至）。

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依沙替康是一种吡喃并吲哚喹啉类化合物。
依沙替康已用于研究肉瘤、白血病、淋巴瘤、肺癌和肝癌等多种癌症的治疗试验。

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喜树碱的半合成衍生物CPT-11对淋巴瘤、肺癌、结直肠癌、胃癌、卵巢癌和宫颈癌均表现出强大的抗肿瘤活性。 CPT-11是一种前药，在体内经羧酸酯酶等酶的作用转化为活性代谢物SN-38。我们合成了一种水溶性非前药形式的喜树碱类似物DX-8951f。该化合物对32种恶性细胞系均表现出较高的体外活性，并具有显著的拓扑异构酶I抑制作用。DX-8951f的抗增殖活性（以平均GI50值表示）分别比SN-38和SK&F 10486-A（拓扑替康）高约6倍和28倍。这三种喜树碱衍生物在32种细胞系中表现出相似的差异反应模式，即它们的体外细胞毒性谱几乎相同。在人胃腺癌SC-6异种移植瘤模型中，以4天为间隔静脉注射三次DX-8951f的抗肿瘤活性优于CPT-11或SK&F 10486-A。此外，它还能克服P-糖蛋白介导的多药耐药性。这些数据表明DX-8951f具有很高的抗肿瘤活性，是一种潜在的治疗药物。[1]

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我们在胰腺癌原位转移小鼠模型中测定了喜树碱类似物DX-8951f的抗肿瘤和抗转移疗效。DX-8951f在该模型中对两种人胰腺癌细胞系均显示出疗效。这些细胞系经绿色荧光蛋白转导，从而能够在体内高分辨率地观察肿瘤和转移灶的生长。DX-8951f的研究包括早期和晚期癌症模型。在早期模型中，使用人胰腺癌细胞系MIA-PaCa-2和BxPC-3，当原位原发肿瘤直径约为7 mm时开始治疗。DX-8951f对MIA-PaCa-2和BxPC-3均有显著疗效。相比之下，胰腺癌的标准治疗药物2',2'-二氟脱氧胞苷（吉西他滨）对MIA-PaCa-2疗效不佳。虽然吉西他滨对BxPC-3原发肿瘤的生长有显著抑制作用，但对转移灶无效。在晚期疾病模型中，使用BxPC-3，当原位原发肿瘤直径为13 mm时开始治疗。DX-8951f对BxPC-3原发肿瘤呈剂量依赖性疗效显著。 DX-8951f 在晚期模型中也展现出抗转移活性，显著降低了淋巴结转移的发生率，并消除了肺转移。相比之下，吉西他滨对原发肿瘤的疗效仅为中等，且在晚期模型中对原发和转移部位均无效。因此，DX-8951f 对这种极难治疗的疾病的原发和转移性生长均具有高效性，且疗效显著高于胰腺癌的标准治疗药物吉西他滨。因此，DX-8951f 具有重要的临床应用前景，并且比目前使用的喜树碱类似物 CPT-11 具有更多优势，后者需要代谢活化且具有毒性。[2] 我们此前报道过，新型水溶性喜树碱类似物 DX-8951f 可显著抑制多种人类和小鼠肿瘤的体外和体内生长。 DX-8951f 的抗肿瘤作用和拓扑异构酶 I 抑制活性均强于其他现有的喜树碱类似物。本研究采用逐步筛选系统，从人燕麦癌细胞系 PC-6 中构建了 SN-38 耐药细胞系 PC-6/SN2-5，并研究了该细胞系的耐药机制，随后比较了喜树碱类似物对该细胞系的抗肿瘤活性。PC-6/SN2-5 细胞对 SN-38（耐药倍数 32 倍）和 SK&F 104864（拓扑替康；耐药倍数 14 倍）具有耐药性，但对 CPT-11（耐药倍数 3 倍）和 DX-8951f（耐药倍数 2 倍）的耐药性较低。亲代细胞的拓扑异构酶 I 蛋白水平和拓扑异构酶 I 活性与耐药细胞相似。通过流式细胞术或高效液相色谱法测定细胞内药物浓度，证实PC-6/SN2-5细胞中SN-38和拓扑替康的细胞内积累显著降低，而DX-8951f的细胞内积累仅略有降低。此外，DX-8951f能够稳定完整PC-6/SN2-5细胞及其亲代细胞中可裂解复合物的形成，而SN-38和拓扑替康在耐药细胞中则没有这种作用。我们的数据表明，PC-6/SN2-5细胞可能通过降低细胞内药物积累而获得对喜树碱类似物的耐药性，而DX-8951f可能具有克服喜树碱类化合物诱导的这种耐药机制的潜力。[3]

C25H26FN3O7S

531.553248882294

531.148

C, 56.49; H, 4.93; F, 3.57; N, 7.91; O, 21.07; S, 6.03

169869-90-3

197720-53-9 (mesylate dihydrate); 169869-90-3 (mesylate); 171335-80-1; 144008-87-7 (HCl); 171335-80-1; 169869-90-3 (mesylate); 197720-53-9 (mesylate dihydrate); 144008-87-7 (HCl)

6918249

Yellow solid powder

3.758

170.19

3

10

1

37

1040

2

S(C)(=O)(=O)O.FC1C=C2C3=C(C=1C)CC[C@@H](C3=C1C(C3=CC4=C(COC([C@@]4(CC)O)=O)C(N3C1)=O)=N2)N([H])[H]

BICYDYDJHSBMFS-GRGFAMGGSA-N

InChI=1S/C24H22FN3O4.CH4O3S/c1-3-24(31)14-6-18-21-12(8-28(18)22(29)13(14)9-32-23(24)30)19-16(26)5-4-11-10(2)15(25)7-17(27-21)20(11)19;1-5(2,3)4/h6-7,16,31H,3-5,8-9,26H2,1-2H3;1H3,(H,2,3,4)/t16-,24-;/m0./s1

(1S,9S)-1-amino-9-ethyl-5-fluoro-9-hydroxy-4-methyl-1,2,3,9,12,15-hexahydro-10H,13H-benzo[de]pyrano[3',4'

DX-8951; DX 8951; DX8951

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 11.8~12.5 mg/mL (22.1~23.5 mM)
Water: ~12.5 mg/mL

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。