Acetylcholinesterase (AChE)

多奈哌齐（E2020 游离碱）的毒蕈碱拮抗剂活性通过其浓度依赖性抑制人 SHSY5Y 神经母细胞瘤细胞中卡巴胆碱刺激的细胞内 Ca2+ 浓度增加来证明。一旦大鼠腹腔注射多奈哌齐，震颤和流涎就会出现剂量依赖性增加，表明明显的胆碱能行为，ED50为6μmol/kg。多奈哌齐的 ED50 为 50 μmol/kg，口服时效果稍差 [2]。根据最近的一项研究，多奈哌齐可以保护人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 免受 H2O2 造成的细胞损伤。这有可能用于治疗与心脏和大脑相关的疾病中的氧化应激[3]。

将新型乙酰胆碱酯酶抑制剂多奈哌齐和NXX-066的体外和体内效果与他克林进行了比较。使用电鳗中纯化的乙酰胆碱酯酶，他克林和多奈哌齐都被证明是可逆的混合型抑制剂，与酶上的类似位点结合。相反，NXX-066是一种不可逆的非竞争性抑制剂。所有三种化合物都是大鼠脑乙酰胆碱酯酶的有效抑制剂（IC50[nM]；他克林：125+/-23；NXX-066:148+/-15；多奈哌齐：33+/-12）。他克林也是一种强效的丁酰胆碱酯酶抑制剂。多奈哌齐和他卡林取代了大鼠脑匀浆中[3H]哌仑西平的结合（IC50值[微M]；他卡林：0.7；多奈哌齐尔：0.5），但NXX-066在该M1毒蕈碱位点的效力约低80倍。对卡巴胆碱刺激神经母细胞瘤细胞[Ca2+]i增加的研究表明，多奈哌齐和他克林都是M1拮抗剂。配体结合表明，在其他神经递质位点，任何药物都没有可能具有药理学意义的活性。对大鼠腹膜内施用这些化合物产生了唾液分泌和震颤的剂量依赖性增加（ED50[微mol/kg]；他克林：15，NXX-066:35，多奈哌齐：6），其中NXX-066对震颤具有最持久的影响。口服给药后，NXX-066起效最慢，但作用持续时间最长。相对效力也发生了变化，他克林的效力较低（ED50[微摩尔/千克]；他克林：200，NXX-066:30，多奈哌齐：50）。唾液分泌仅在他克林治疗的动物中严重。使用大脑皮层的体内微透析，发现NXX-066和他克林都会产生细胞外乙酰胆碱的显著增加（至少30倍），在他克林后2小时和NXX-066后4小时内，细胞外乙酰胆碱保持升高[2]。

本研究旨在比较多奈哌齐和其他一些用于治疗阿尔茨海默病的胆碱酯酶（ChE）抑制剂对乙酰胆碱酯酶（AChE）和丁酰胆碱酯酶（BuChE）的体外抑制作用。氨基甲酸酯衍生物毒扁豆碱和利瓦斯汀需要预培养以表现出适当的抗ChE活性。毒扁豆碱对ChE的最大抑制作用在30-60分钟内出现，而利瓦斯汀对AChE和BuChE活性的抑制作用分别在48和6小时后达到峰值。在每种ChE抑制剂的最佳测定条件下，对AChE活性的抑制效力（IC50）的顺序为：毒扁豆碱（0.67 nM）>利瓦斯汀（4.3 nM。苄基哌啶衍生物多奈哌齐和TAK-147对乙酰胆碱酯酶表现出比BuChE高的选择性。氨基甲酸酯衍生物表现出中等的选择性，而4-氨基吡啶衍生物tacrine和ipideacrine没有表现出选择性。这些ChE抑制剂对AChE活性的抑制效力可能说明了它们在体内的潜在活性[1]。

胆碱酯酶抑制剂对SHSY5Y人神经母细胞瘤细胞钙通量的影响[2]
将SHSY5Y细胞维持在Eagles Minimum Essential Medium和Hams F-12培养基（1:1）中，所述培养基补充有10%胎牛血清、2%l-谷氨酰胺、1%非必需氨基酸和20mM Hepes pH 7.4。为了收获细胞，取出培养基，用10ml Hank平衡盐溶液冲洗单层，并用细胞刮刀从烧瓶底部刮去。将得到的悬浮液在4°C下以250×g离心5分钟，并将得到的颗粒重悬在由6ml磷酸盐缓冲盐水组成的负载缓冲液中，该缓冲液含有2mM EDTA、10μM Fluo-3AM和0.02%pluronic F-127 pH 7.4。在37°C下用Fluo3的乙酰乙酸乙酯衍生物（Fluo-3AM）加载细胞15分钟。在4°C下以250×g离心5分钟后，将所得颗粒重悬于含有CaCl2（0.5 mM）和葡萄糖（10 mM）的pH 7.4的含氧Hepes Ringer缓冲液中。然后将细胞悬浮液在室温下再孵育20分钟，以使Fluo-3AM水解，以250×g离心5分钟，并如前所述重新悬浮在氧化的Hepes–Ringer缓冲液中。将等分试样（2ml）的细胞悬浮液置于石英试管中，并在室温下搅拌平衡1分钟。记录基础荧光，之后加入测试试剂。使用Hamilton注射器进行20微升的添加，允许连续测量荧光信号。背景荧光不受该过程的影响。在激发505nm：发射530nm下测量荧光。通过加入10μM钙离子载体4-溴钙霉素测量最大荧光。然后使用MnCl2（1mM）猝灭荧光信号。

行为观察[2]
采用Hunter等人（1989）描述的方法评估震颤和流涎。简而言之，将不同剂量的胆碱酯酶抑制剂注射到各组动物体内，并进行观察。记录震颤（评分0-3）和流涎（以10 mg为单位）。2.9.采用体内微透析法测定大鼠脑内细胞外乙酰胆碱。
使用单独制备的同心探针，其基本与Hutson等人（1985）描述的方法相同，不同之处在于植入时未使用导向组件，并且将内部玻璃毛细管替换为熔融石英管（VS-150-075-1D）。透析膜长4mm，直径约为0.2mm。在室温下，将微透析探针置于 60 μM 乙酰胆碱溶液中，以 1.0 μl/min 的流速灌注，体外乙酰胆碱回收率为 17.9±2.4%。
将探针横向植入用 2% 氟烷/O₂/N₂O 混合气体（1:2）麻醉的大鼠皮层，并用 Kopf 立体定位仪固定，牙棒位于耳间零点下方 3.3 mm 处。探针水平植入右侧皮层：耳间零点前方 7.7 mm，侧方 4.2 mm，颅骨表面下方 1.3 mm，并用两颗螺钉和牙科水泥固定在颅骨上。术后，将动物饲养在有机玻璃盒中，直至次日开始微透析操作。在每次实验结束时，通过注射卢克索尔快速蓝（Luxol Fast blue）目视检查探针轨迹，以验证探针的位置。
使用哈佛22型微升注射泵，以1 μl/min的流速灌注人工脑脊液（成分：NaCl 125 mM，KCl 2.5 mM，MgCl2 1.18 mM，CaCl2 1.26 mM）或高钾脑脊液（成分：NaCl 27.5 mM，KCl 100 mM，MgCl2 1.18 mM，CaCl2 1.26 mM）。人工脑脊液不含乙酰胆碱酯酶抑制剂。每30分钟收集一次灌注液，并置于冰上保存。前60分钟的透析液被弃去，接下来的3次30分钟的透析液收集作为腹腔注射他克林（21 μmol/kg）或NXX-066（106 μmol/kg）前的基线样本。乙酰胆碱的测定采用高效液相色谱法，该方法与Potter等人（1983）最初描述的方法类似。乙酰胆碱经分析离子交换柱分离后，在填充有共价连接有乙酰胆碱酯酶（AChE）和胆碱氧化酶的聚合物基质的4.1×30 mm分析柱内转化为过氧化氢。生成的过氧化氢通过在铂电极上氧化进行电化学检测，电位为+500 mV（相对于Ag/AgCl参比电极）。流动相组成为3.4 mM H3PO4（85%）和5 mM Kathon CG（1%）；用NaOH调节pH至8.5。 0.6 ml/min 的流速确保了酶反应器内 ACh 定量转化为 H₂O₂。峰值由 Kontron 积分仪记录。脑透析液中的 ACh 采用标准曲线法进行定量。色谱柱上低至 0.6 pmol 的 ACh 浓度均可被可靠地检测到。
多奈哌齐在注射前溶解于 0.9% (w/v) NaCl 溶液（生理盐水）中。

吸收、分布和排泄
口服多奈哌齐后，经胃肠道缓慢吸收。达峰时间（Tmax）为3至4小时，生物利用度为100%，给药后15至21天内达到稳态血药浓度。一项药代动力学研究测得的Tmax为4.1±1.5小时。根据加拿大专论，5毫克多奈哌齐片剂的Cmax估计为8.34纳克/毫升。 5 mg 多奈哌齐片剂的 AUC 测定值为 221.90-225.36 ng·hr/mL。
在一项对健康成年人进行放射性标记多奈哌齐给药的研究中，57% 的放射性物质在尿液中检出，5% 在粪便中检出。
多奈哌齐 5 mg 剂量的分布容积为 11.8 ± 1.7 L/kg，10 mg 剂量的分布容积为 11.6 ± 1.91 L/kg。它主要分布于血管外间隙。多奈哌齐可穿过血脑屏障，上述剂量下脑脊液中的浓度为 15.7%。根据FDA药品说明书，多奈哌齐的稳态分布容积为12-16 L/kg。
根据FDA药品说明书，该药的平均表观血浆清除率为0.13-0.19 L/hr/kg。健康受试者服用5 mg多奈哌齐后，血浆清除率为0.110±0.02 L/h/kg。10例酒精性肝硬化患者的血浆清除率较10例健康受试者平均下降20%。4例严重肾功能损害患者与4例健康受试者相比，血浆清除率未见显著变化。
多奈哌齐吸收良好，相对口服生物利用度为100%，3-4小时达到血浆峰浓度。每日一次，1-10 mg剂量范围内，药代动力学呈线性关系。食物和给药时间（早晨或晚上服用）均不影响盐酸多奈哌齐片的吸收速率或程度。
……平均表观血浆清除率 (Cl/F) 为 0.13 L/hr/kg。多次给药后，多奈哌齐在血浆中的蓄积量为 4 至 7 倍，并在 15 天内达到稳态。稳态分布容积为 12 L/kg。
在一项针对 10 例病情稳定的酒精性肝硬化患者的研究中，盐酸多奈哌齐的清除率较 10 例年龄和性别匹配的健康受试者降低了 20%。
在一项针对 11 例中重度肾功能损害患者（肌酐清除率 < 18 mL/min/1.73 m²）的研究中，盐酸多奈哌齐的清除率与 11 例年龄和性别匹配的健康受试者无差异。
有关多奈哌齐（共 12 项）的更多吸收、分布和排泄（完整）数据，请访问 HSDB 记录页面。

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代谢/代谢物
多奈哌齐主要通过肝脏首过代谢，主要由 CYP3A4 代谢，此外还有 CYP2D6 参与代谢。此后，发生O-脱烷基化、羟基化、N-氧化、水解和O-葡萄糖醛酸化等反应，生成多种代谢物，这些代谢物的半衰期与原药相似。一项放射性标记多奈哌齐的药代动力学研究表明，约53%的血浆放射性以原药形式存在，11%被鉴定为代谢物6-O-去甲基多奈哌齐，后者对乙酰胆碱酯酶的抑制效力与原药相似。该药物主要代谢为四种主要代谢物，其中两种被认为具有药理活性，此外还代谢为多种无活性和未鉴定的代谢物。多奈哌齐既可以原药经尿液排出，也可以广泛代谢为四种主要代谢物（其中两种已知具有活性）和一些次要代谢物（并非所有次要代谢物都已被鉴定）。多奈哌齐经CYP450同工酶2D6和3A4代谢，并发生葡萄糖醛酸化。服用¹⁴C标记的多奈哌齐后，血浆放射性（以给药剂量的百分比表示）主要以完整多奈哌齐（53%）和6-O-去甲基多奈哌齐（11%）的形式存在。据报道，6-O-去甲基多奈哌齐在体外抑制乙酰胆碱酯酶（AChE）的程度与多奈哌齐相同，且在血浆中的浓度约为多奈哌齐的20%。
本研究旨在探讨人体单次口服5 mg（液体）含有未标记和¹⁴C标记多奈哌齐混合物的多奈哌齐盐酸盐后，其代谢和消除情况。……在每种基质中，回收剂量中未改变的多奈哌齐占最大比例。研究确定了三条代谢途径：(i) O-脱烷基化和羟基化生成代谢物M1和M2，随后葡萄糖醛酸化生成代谢物M11和M12；(ii) 水解生成代谢物M4；(iii) N-氧化生成代谢物M6。在血浆中，母体化合物约占每次采样期间回收剂量的25%，也占累积回收剂量的25%。回收的残留物中羟基化代谢物M1和M2的含量分别高于其葡萄糖醛酸苷结合物M11和M12。在尿液中，母体化合物平均占每次混合样本回收剂量的17%，也占总回收剂量的17%。主要代谢物是水解产物M4，其次是葡萄糖醛酸苷结合物M11和M12。在粪便中，母体化合物也占主导地位，但仅占回收剂量的1%。粪便中大部分放射性物质为未鉴定的极性极强的代谢物，这些代谢物保留在薄层色谱原位。在提取的代谢物中，羟基化产物M1和M2含量最高，其次是水解产物M4和N-氧化产物M6。多奈哌齐主要在肝脏代谢，其母体药物及其代谢物的主要排泄途径是肾脏，因为79%的回收剂量存在于尿液中，其余21%存在于粪便中。此外，母体化合物多奈哌齐是尿液中的主要排泄产物。多奈哌齐的主要代谢产物包括M1和M2（分别通过O-脱烷基化和羟基化生成）、M11和M12（分别通过M1和M2的葡萄糖醛酸化生成）、M4（通过水解生成）和M6（通过N-氧化生成）。
多奈哌齐已知的人体代谢产物包括6-O-去甲基多奈哌齐、5,6-二甲氧基-2-(哌啶-4-基甲基)-2,3-二氢茚-1-酮和5-O-去甲基多奈哌齐。
多奈哌齐在肝脏中通过CYP450同工酶2D6和3A4代谢，并进行葡萄糖醛酸化。主要代谢物 6-O-去甲基多奈哌齐据报道在体外对乙酰胆碱酯酶 (AChE) 的抑制作用与多奈哌齐相同。
消除途径：多奈哌齐既以原形经尿液排出，也广泛代谢为四种主要代谢物（其中两种已知具有活性）和一些次要代谢物（并非所有次要代谢物都已被鉴定）。
半衰期：70 小时

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生物半衰期
根据多项研究结果和美国食品药品监督管理局 (FDA) 的多奈哌齐说明书，多奈哌齐的平均消除半衰期约为 70 小时。一项药代动力学研究确定其平均末端半衰期为 81.5±22.0 小时。
多奈哌齐的消除半衰期约为 70 小时。
一位 79 岁患有阿尔茨海默病的女性因过量服用多奈哌齐而出现急性胆碱能症状入院。 （45 mg）多奈哌齐（DPZ）……入院时血浆DPZ浓度为54.6 ng/mL，约90小时后逐渐降至正常范围。DPZ的计算半衰期约为55小时……

毒性概述
多奈哌齐是一种胆碱酯酶或乙酰胆碱酯酶 (AChE) 抑制剂。胆碱酯酶抑制剂（或“抗胆碱酯酶”）可抑制乙酰胆碱酯酶的活性。由于乙酰胆碱酯酶具有重要的生理功能，干扰其活性的化学物质是强效神经毒素，低剂量即可引起唾液分泌过多和流泪，随后出现肌肉痉挛，最终导致死亡。神经毒气和许多杀虫剂中使用的物质已被证实可通过与乙酰胆碱酯酶活性位点中的丝氨酸结合而发挥作用，从而完全抑制该酶的活性。乙酰胆碱酯酶可分解神经递质乙酰胆碱，乙酰胆碱在神经和肌肉连接处释放，使肌肉或器官放松。乙酰胆碱酯酶抑制的结果是乙酰胆碱积聚并持续发挥作用，从而导致神经冲动持续传递，肌肉收缩无法停止。最常见的乙酰胆碱酯酶抑制剂是含磷化合物，其设计目的是与酶的活性位点结合。其结构要求包括一个带有两个亲脂基团的磷原子、一个离去基团（例如卤化物或硫氰酸盐）和一个末端氧原子。

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肝毒性
在几项大型临床试验中，与安慰剂治疗相比，多奈哌齐治疗并未增加血清酶升高的发生率。此外，与维持较低剂量的患者相比，剂量从每日 10 mg 增加到 23 mg 后，ALT 升高的发生率也没有增加。然而，自多奈哌齐应用于临床以来，已有几例临床上明显的肝毒性个案报道。起病时间短（1至6周），血清酶升高模式为胆汁淤积型或混合型。病情可能严重，伴有持续性黄疸和瘙痒（病例1），但尚未见死亡病例报道。免疫过敏和自身免疫特征不常见。
可能性评分：D（可能是临床上明显的肝损伤的罕见病因）。

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蛋白结合
多奈哌齐的蛋白结合率为96%，其中约75%与白蛋白结合，约21%与α1-糖蛋白结合。

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药物相互作用
酮康唑和奎尼丁分别是CYP450 3A4和2D6的抑制剂，它们在体外可抑制多奈哌齐的代谢。奎尼丁是否具有临床作用尚不清楚。在一项为期7天的交叉研究中，18名健康志愿者服用酮康唑后，多奈哌齐的平均浓度（AUC0-24和Cmax）升高了36%。这种浓度升高的临床意义尚不明确。
胆碱酯酶抑制剂与琥珀酰胆碱、类似的神经肌肉阻滞剂或胆碱能激动剂（如贝他尼醇）合用时，可能产生协同作用。
CYP2D6和CYP3A4诱导剂（例如苯妥英钠、卡马西平、地塞米松、利福平和苯巴比妥）可能增加盐酸多奈哌齐的清除率。
一名75岁患有阿尔茨海默病的男性患者，已接受胆碱酯酶抑制剂多奈哌齐治疗14个月，计划在全身麻醉下行左半结肠切除术。手术过程中，琥珀酰胆碱诱导的肌肉松弛作用持续时间延长，即使使用高于患者体重推荐剂量的阿曲库铵，其疗效仍然不足。术前10个月、1个月和10天进行的胆碱酯酶血液检测显示，该酶的活性持续时间逐渐缩短。这种效应在胆碱酯酶抑制剂（如新斯的明和多奈哌齐）中已有报道，可以解释琥珀酰胆碱作用持续时间延长的原因。排除其他导致阿曲库铵耐药的原因后，我们得出结论：多奈哌齐或其代谢产物作用于肌肉斑块，阻断乙酰胆碱水解，从而拮抗阿曲库铵的作用。
有关多奈哌齐的更多药物相互作用（完整）数据（共7项），请访问HSDB记录页面。

[1]. Comparison of inhibitory activities of donepezil and other cholinesterase inhibitors on acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase in vitro. Methods Find Exp Clin Pharmacol, 2000. 22(8): p. 609-13.

[2]. A comparative study in rats of the in vitro and in vivo pharmacology of the acetylcholinesterase inhibitors tacrine, donepezil and NXX-066. Neuropharmacology, 1999. 38(1): p. 181-93.

[3]. Donepezil protects endothelial cells against hydrogen peroxide-induced cell injury. CNS Neurosci Ther, 2012. 18(2): p. 185-7.

治疗用途
胆碱酯酶抑制剂；促智药
盐酸多奈哌齐片适用于治疗阿尔茨海默病型痴呆。已证实其对轻度至中度阿尔茨海默病患者有效。/美国产品标签包含/
/EXPTL Ther:/ ... 多奈哌齐已正式获准用于治疗轻度至中度及重度阿尔茨海默病 (AD)，并已被证明对早期阿尔茨海默病、血管性痴呆、帕金森病痴呆/路易体痴呆以及多发性硬化症相关的认知症状有效。此外，一项研究表明，多奈哌齐可能延缓轻度认知障碍（阿尔茨海默病的前驱症状）患者的阿尔茨海默病发病。

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药物警告
已知对盐酸多奈哌齐或哌啶衍生物过敏的患者禁用盐酸多奈哌齐片。
由于其药理作用，胆碱酯酶抑制剂可能对窦房结和房室结产生迷走神经兴奋作用。这种作用可能表现为心动过缓或心脏传导阻滞，无论患者是否存在已知的潜在心脏传导异常。已有报道称，使用盐酸多奈哌齐可能引起晕厥。
胆碱酯酶抑制剂的主要作用是增加胆碱能活性，从而可能增加胃酸分泌。因此，应密切监测患者是否存在活动性或隐匿性胃肠道出血的症状，尤其是有溃疡病史或同时服用非甾体类抗炎药（NSAIDs）等溃疡风险增加的患者。
盐酸多奈哌齐的药理特性可导致腹泻、恶心和呕吐，这是其可预见的副作用。这些副作用在每日10毫克剂量组中比每日5毫克剂量组更常见。大多数情况下，这些副作用轻微且短暂，有时持续一至三周，并在继续使用盐酸多奈哌齐后消退。
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药效学
多奈哌齐通过抑制乙酰胆碱酯酶，改善阿尔茨海默病患者的认知和行为症状，包括冷漠、攻击性、意识混乱和精神病。

C24H29NO3

379.492

379.214

C, 75.96; H, 7.70; N, 3.69; O, 12.65

120014-06-4

(R)-Donepezil;142698-19-9;(S)-Donepezil;142057-80-5;Donepezil-d7 hydrochloride;1261394-20-0;Donepezil-d5;1128086-25-8;Donepezil Hydrochloride;120011-70-3

3152

White to off-white solid powder

1.1±0.1 g/cm3

527.9±50.0 °C at 760 mmHg

207ºC

273.1±30.1 °C

0.0±1.4 mmHg at 25°C

1.578

4.71

38.77

0

4

6

28

510

0

ADEBPBSSDYVVLD-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H29NO3/c1-27-22-14-19-13-20(24(26)21(19)15-23(22)28-2)12-17-8-10-25(11-9-17)16-18-6-4-3-5-7-18/h3-7,14-15,17,20H,8-13,16H2,1-2H3

2-((1-benzylpiperidin-4-yl)methyl)-5,6-dimethoxy-2,3-dihydro-1H-inden-1-one

HSDB 7743; HSDB-7743; HSDB7743

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~33.33 mg/mL (~87.83 mM)
H2O : ~2 mg/mL (~5.27 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。