Doxofylline exerts its effects by targeting multiple molecules, including sirtuin 1 (SIRT1) and phosphodiesterase 4 (PDE4), while showing low affinity for adenosine A1 receptors.
- For SIRT1: It enhances SIRT1 activity [1]
- For PDE4: It acts as a selective inhibitor with an IC50 value of approximately 7.5 μM (measured using recombinant human PDE4 and [³H]-cAMP as substrate) [3]
- For adenosine A1 receptors: It has minimal binding affinity, with a Ki value > 100 μM (significantly higher than theophylline, which has a Ki of ~10 μM for A1 receptors) [3]

Doxofylline（5、10 µM；48 小时）可减少 16HBE 细胞中 PGE2、NO 释放和线粒体 ROS 生成，显示出对 LPS 诱导的上皮炎症的强大保护作用[1]。 LPS 诱导的 NADPH 氧化酶亚基和 TXNIP 16HBE 细胞的表达可被多索茶碱抑制（5、10 µM；48 小时）[1]。 Doxofylline（5、10 µM；48 小时）可减弱 LPS 介导的 SIRT1 减少，并防止 LPS 诱导的 NLRP3 炎性体激活以及 IL-1b 和 IL-18 分泌[1]。在 BM 细胞中，多索茶碱（0.1–10 µM；15 分钟）可显着抑制 fMLP（甲酰基-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸）诱导的白细胞迁移[2]。

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多索茶碱（Doxofylline） 通过SIRT1抑制人肺支气管上皮细胞（HBEpC）中LPS诱导的NLRP3炎症小体活化。HBEpC细胞先用多索茶碱（10、50、100 μM）预处理2小时，再用LPS（1 μg/mL）刺激24小时后：
- Western blot检测显示NLRP3、ASC和剪切型caspase-1（p20）蛋白水平呈浓度依赖性降低（如100 μM 多索茶碱 较单纯LPS组使NLRP3蛋白减少约65%） [1]
- RT-PCR检测显示NLRP3和IL-1β mRNA表达降低（100 μM 多索茶碱 使IL-1β mRNA减少约70%） [1]
- ELISA检测显示细胞上清液中IL-1β释放减少（100 μM 多索茶碱 使IL-1β减少约60%） [1]
- SIRT1敲低（通过siRNA）可消除上述抑制效应，证实其依赖SIRT1介导 [1]
- 多索茶碱（Doxofylline） 抑制PDE4活性并升高细胞内cAMP水平。在重组人PDE4实验中，1–100 μM 多索茶碱 浓度依赖性降低PDE4介导的cAMP水解（7.5 μM时抑制活性50%） [3]
- 多索茶碱（Doxofylline） 对HBEpC细胞无显著细胞毒性。MTT实验显示，24小时处理浓度高达200 μM时，细胞存活率仍>90%，排除非特异性细胞死亡干扰 [1]

在小鼠中，多索茶碱（0.3、1 mg/kg；腹腔注射；单次）可减少 LPS 在肺部引起的炎症[2]。 Doxofylline（0.3 mg/kg；腹腔注射；预处理；单次）可抑制体内 LPS 诱导的 ICAM-1 的产生，并显着降低细胞对血管组织的粘附[2]。

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多索茶碱（Doxofylline） 减轻小鼠LPS诱导的肺炎症。6–8周龄雄性BALB/c小鼠分为5组：对照组、单纯LPS组、LPS+多索茶碱（10、20、40 mg/kg，腹腔注射）组。LPS（5 mg/kg，鼻内滴注）前1小时给予多索茶碱，24小时后收集样本：
- 支气管肺泡灌洗液（BALF）分析显示，炎症细胞总数呈剂量依赖性减少（如40 mg/kg 多索茶碱 较LPS组减少约55%），中性粒细胞减少约60%，巨噬细胞减少约45% [2]
- BALF中细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）水平降低：40 mg/kg 多索茶碱 使TNF-α减少约70%，IL-6减少约65%，IL-1β减少约60% [2]
- 肺组织病理显示，多索茶碱 处理组肺泡充血、间质水肿和炎症细胞浸润程度减轻 [2]
- 多索茶碱（Doxofylline） 改善哮喘和COPD临床前模型的气道功能。在卵清蛋白（OVA）诱导的哮喘小鼠中，口服多索茶碱（30 mg/kg/天，连续14天）使对乙酰甲胆碱的气道高反应性（AHR）降低约40%，BALF中嗜酸性粒细胞浸润减少约50% [3]
- 多索茶碱（Doxofylline） 减少COPD模型的黏液高分泌。在香烟烟雾诱导的COPD大鼠中，口服多索茶碱（50 mg/kg/天，连续8周）使支气管上皮MUC5AC蛋白表达减少约55%（免疫组化检测） [3]

PDE4活性抑制实验：将重组人PDE4（PDE4B亚型）与含50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、10 mM MgCl₂、1 μM [³H]-cAMP（底物）及系列浓度多索茶碱（Doxofylline）（0.1–100 μM）的反应体系在37°C孵育30分钟。加入0.2 M EDTA（pH 8.0）终止反应，用硫酸锌和氢氧化钡沉淀未水解的[³H]-cAMP，收集上清液（含[³H]-5'-AMP）。通过液体闪烁计数法检测放射性，计算相对于溶剂对照组的PDE4活性百分比，将剂量-反应曲线拟合至sigmoid模型确定IC50 [3]
- SIRT1活性增强实验：HBEpC细胞用冰浴RIPA缓冲液裂解，离心收集上清液（含SIRT1）。SIRT1活性反应体系包括细胞裂解液（20 μg蛋白）、50 μM荧光底物（如AMC偶联肽）、1 mM NAD⁺（辅酶）和多索茶碱（10–100 μM），37°C孵育60分钟后检测荧光强度（激发光360 nm，发射光460 nm）。SIRT1活性以相对于溶剂对照组的倍数变化表示（100 μM 多索茶碱 使SIRT1活性增加约2.3倍） [1]

细胞活力测定[1]
细胞类型： 16HBE 细胞
测试浓度： 5、10 µM
孵育时间： 48 小时
实验结果： 以剂量依赖性方式减弱 LPS 诱导的 NO 和 PGE2。对 LPS 诱导的线粒体 ROS 产生和 NADPH 氧化酶亚基表达产生剂量依赖性抑制。以剂量依赖性方式在蛋白质水平抑制 LPS 诱导的 TXNIP 表达和 NLRP3 炎性体激活。抑制 LPS 诱导的 IL-1b 和 IL-18 分泌。

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细胞活力测定[2]
细胞类型： BM 细胞（来自初始小鼠）
测试浓度： 0.1-10 µM
孵育时间：15 分钟（预处理）
实验结果：显着抑制 BM 细胞响应 fMLP 的阳性迁移。

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HBEpC细胞LPS诱导NLRP3炎症小体活化实验：
1. HBEpC细胞在含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中，37°C（5% CO₂）培养至80%融合 [1]
2. 细胞用多索茶碱（Doxofylline）（10、50、100 μM）或溶剂（DMSO，终浓度<0.1%）预处理2小时 [1]
3. 加入LPS（1 μg/mL）诱导炎症，继续孵育24小时 [1]
4. 蛋白检测：用含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞，BCA法测蛋白浓度；取30 μg蛋白经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，用抗NLRP3、ASC、剪切型caspase-1（p20）、SIRT1及β-肌动蛋白（内参）一抗孵育，再用HRP偶联二抗孵育，化学发光法显影条带 [1]
5. mRNA检测：TRIzol试剂提取总RNA，逆转录为cDNA后，用NLRP3、IL-1β及GAPDH（内参）特异性引物进行实时荧光定量PCR（qPCR），2⁻ΔΔCt法计算相对mRNA水平 [1]
6. IL-1β释放检测：收集细胞上清液，用商品化ELISA试剂盒检测IL-1β浓度 [1]
- HBEpC细胞活力实验：96孔板接种细胞（5×10³个/孔），用多索茶碱（0–200 μM）处理24小时。每孔加MTT试剂（5 mg/mL），37°C孵育4小时后弃上清，加DMSO溶解甲瓒结晶，检测570 nm吸光度，细胞活力=（处理组吸光度/对照组吸光度）×100% [1]

动物/疾病模型：雄性 balb/c（Bagg ALBino）小鼠（6 至 8 周龄）[2]。
剂量：0.3、1 mg/kg
给药途径：腹腔注射；单次。
实验结果：显著抑制中性粒细胞的迁移以及 IL-6 和 TNF-α 向肺腔的释放。使骨髓白细胞数量增加至与生理盐水处理组相似的水平。与 LPS 处理组小鼠相比，循环白细胞数量显著减少。显著减少支气管周围区域的中性粒细胞聚集。

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动物/疾病模型：雄性 balb/c（Bagg ALBino）小鼠（6 至 8 周龄）[2]。
剂量：0.3 mg/kg
给药途径：腹腔注射；预处理；单次给药。
实验结果：显著降低了细胞与血管组织的黏附，但未影响小鼠血管壁上细胞的滚动。显著降低了LPS诱导的ICAM-1表达。

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小鼠LPS诱导的肺部炎症模型：
1. 将雄性BALB/c小鼠（6-8周龄，20-25 g）随机分为5组（每组n=6）：正常对照组（鼻内给予生理盐水+腹腔注射生理盐水）、LPS组（鼻内给予LPS+腹腔注射生理盐水）和多索茶碱组（鼻内给予LPS+腹腔注射多索茶碱10、20、40 mg/kg）[2]
2. 将多索茶碱溶于无菌生理盐水中（浓度调整至确保注射体积相同：0.1 mL/10 g体重）[2]
3. 在鼻内滴注LPS（5 mg/kg，溶于生理盐水，50 μL/只小鼠）[2]
4. LPS滴注24小时后，用异氟烷麻醉小鼠。通过注入和抽取0.5 mL生理盐水（3次）进行支气管肺泡灌洗（BAL）以收集BALF[2]
5. 将BALF离心（1500 × g，10分钟，4°C）以分离细胞和上清液：使用血细胞计数器测量总细胞计数；在吉姆萨染色细胞涂片上进行细胞分类计数；上清液储存于-80°C，用于通过ELISA检测细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）[2]
6. 切取肺组织，用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片（5 μm），并用苏木精-伊红（HE）染色进行组织病理学分析[2]
- OVA诱导的哮喘小鼠模型：
1. 雌性C57BL/6小鼠（6-8周龄）于第0天和第7天腹腔注射OVA（10 μg）和氢氧化铝（2 mg）进行致敏[3]
2. 从第14天到第20天，每天用雾化OVA（1%生理盐水）激发小鼠30分钟[3]
3. 将多索茶碱（15、30 mg/kg）溶于生理盐水中从第 14 天到第 20 天，每天一次通过灌胃给药（在 OVA 激发前 30 分钟）[3]
4. 第 21 天，使用全身容积描记仪测量气道高反应性 (AHR)（乙酰甲胆碱浓度：0、3.125、6.25、12.5、25 mg/mL）；收集支气管肺泡灌洗液 (BALF) 进行嗜酸性粒细胞计数[3]

吸收、分布和排泄
重复给药后，多索茶碱约4天达到稳态。慢性支气管炎成人患者每日两次口服400 mg多索茶碱，持续5天后，稳态血浆峰浓度（Cmax）范围为5.78至20.76 mcg/mL。达峰时间（Tmax）为1.19 ± 0.19小时。健康受试者的多索茶碱绝对生物利用度为63 ± 25%。
由于肝脏代谢广泛，口服剂量中仅有不到4%以原形经尿液排出。
慢性支气管炎成人患者静脉注射100 mg多索茶碱后，其分布相较短。由于甲基黄嘌呤类药物分布于全身各组织，因此可在母乳和胎盘中检测到多索茶碱。
每日两次口服400 mg多索茶碱，连续服用5天后，总清除率为555.2 ± 180.6 mL/min。

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代谢/代谢物
多索茶碱被认为主要经肝脏代谢，肝脏代谢占总药物清除率的90%。健康受试者口服400 mg多索茶碱后，在血清和尿液中检测到了β-羟甲基茶碱。该循环代谢物不具有任何显著的药理活性。

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生物半衰期
在慢性支气管炎成人患者中，单次静脉注射100 mg多索茶碱（10分钟内注射完毕）后，多索茶碱的消除半衰期为1.83 ± 0.37小时。在慢性支气管炎成人患者中，每日两次口服 400 mg，连续服用 5 天后，平均消除半衰期为 7.01 ± 0.80 小时。

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口服吸收：多索茶碱在人体口服后吸收良好，口服生物利用度约为 90%（范围 85–95%）。给药后 1–2 小时（Tmax）达到血浆峰浓度 (Cmax)，Cmax 随口服剂量（200 mg 至 800 mg）呈线性增加（例如，口服 400 mg 可使 Cmax 达到约 8 μg/mL）[3]
- 分布：多索茶碱在人体内的分布容积 (Vd) 约为 0.8–1.0 L/kg，表明与其他黄嘌呤衍生物相比，其组织渗透性有限。多索茶碱穿过血脑屏障（BBB）的能力极低，脑血浆浓度比约为0.1 [3]
- 代谢：多索茶碱主要在肝脏中通过细胞色素P450（CYP）酶代谢，其中以CYP1A2最为主要（约占代谢的70%）。主要代谢产物是1-甲基黄嘌呤，无活性。与茶碱不同，多索茶碱几乎不经CYP2E1或CYP3A4代谢，从而降低了药物相互作用的风险[3]
- 排泄：约70-80%的多索茶碱及其代谢产物在24小时内经尿液排出，主要以1-甲基黄嘌呤及其葡萄糖醛酸苷结合物的形式排出。在健康成人中，多索茶碱的消除半衰期 (t1/2) 为 7-8 小时，比茶碱 (t1/2 ~3-5 小时) 长 [3]
- 食物效应：高脂饮食不会显著影响多索茶碱的吸收程度（AUC 变化 <10%），但可能会使达峰时间 (Tmax) 延迟约 1 小时 [3]

蛋白质结合
在 pH 7.4 时，血浆蛋白结合率约为 48%。

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急性毒性：多索茶碱急性毒性较低。小鼠和大鼠的口服半数致死量 (LD50) > 2000 mg/kg，犬的口服半数致死量 (LD50) > 1500 mg/kg。在人体单次口服剂量高达 1000 mg/kg 时，未观察到死亡或严重临床症状（例如，惊厥、呼吸抑制）[3]。
- 慢性毒性：在一项为期 13 周的大鼠重复给药研究中（口服剂量分别为 50、100 和 200 mg/kg/天），未观察到与治疗相关的体重、食物摄入量或器官重量（肝脏、肾脏、肺）的变化。所有剂量组的血清ALT、AST、BUN和肌酐（肝肾功能指标）水平均在正常范围内[3]
- 血浆蛋白结合率：多索茶碱的血浆蛋白结合率中等，在人血浆中的结合率约为40%（范围35-45%）。由于其结合亲和力较低，因此不会置换其他高蛋白结合率的药物（例如华法林、苯妥英钠）[3]
- 药物相互作用：多索茶碱的药物相互作用极少。与CYP1A2抑制剂（例如氟伏沙明）合用可使其AUC增加约2倍，而与CYP1A2诱导剂（例如吸烟）合用可使其AUC降低约30%。与β2受体激动剂（例如沙丁胺醇）或吸入性皮质类固醇（例如布地奈德）未观察到显著的相互作用[3]
- 中枢神经系统（CNS）毒性：与茶碱不同，多索茶碱引起的CNS刺激极小。在治疗剂量（每日两次，每次400-800毫克）下，由于其对腺苷A1受体的亲和力低且血脑屏障穿透性有限，失眠、焦虑或震颤的发生率<5%（而茶碱为15-20%）[3]

[1]. The protective effect of doxofylline against lipopolysaccharides (LPS)-induced activation of NLRP3 inflammasome is mediated by SIRT1 in human pulmonary bronchial epithelial cells. Artif Cells Nanomed Biotechnol. 2020 Dec;48(1):687-694.

[2]. Doxofylline, a novofylline inhibits lung inflammation induced by lipopolysacharide in the mouse. Pulm Pharmacol Ther. 2014 Apr;27(2):170-8.

[3]. Doxofylline: a promising methylxanthine derivative for the treatment of asthma and chronic obstructive pulmonary disease. Expert Opin Pharmacother. 2009 Oct;10(14):2343-56.

多索茶碱是一种氧嘌呤类药物，是黄嘌呤的衍生物，其N-1和N-3位甲基化，N-7位带有1,3-二氧戊环-2-基甲基，用于治疗哮喘。它具有支气管扩张、镇咳和抗哮喘的功效。其功能与7H-黄嘌呤类似。
多索茶碱是一种甲基黄嘌呤衍生物，其7位带有二氧戊环基团。作为一种用于治疗哮喘的药物，多索茶碱在动物和人体研究中显示出与茶碱相似的疗效，但副作用显著更少。与其他黄嘌呤衍生物不同，多索茶碱与腺苷α-1或α-2受体的结合力很低，且缺乏兴奋作用。与茶碱相比，多索茶碱对腺苷受体亲和力的降低可能是其安全性更好的原因。与茶碱不同，多索茶碱不影响钙离子内流，也不拮抗钙通道阻滞剂的作用，这或许可以解释其心脏不良反应较少的原因。多索茶碱的抗哮喘作用主要通过抑制磷酸二酯酶 (PDE) 的活性来实现。

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药物适应症
适用于治疗慢性阻塞性肺疾病 (COPD)、支气管哮喘和伴有痉挛性支气管成分的肺部疾病。

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作用机制
多索茶碱的主要作用机制尚不明确。其作用机制之一被认为是通过抑制磷酸二酯酶活性，从而提高 cAMP 水平并促进平滑肌松弛。一项采用非线性色谱、前沿分析和分子对接的研究表明，多索茶碱与 β2 肾上腺素能受体存在相互作用。受体中的丝氨酸169和丝氨酸173残基被认为是多索茶碱的关键结合位点，氢键在此形成。多索茶碱通过介导β2肾上腺素能受体的作用，诱导血管舒张和气道平滑肌舒张。此外，一项大鼠研究表明，多索茶碱可能通过减轻炎症介质血小板活化因子（PAF）诱导的胸膜炎而发挥抗炎作用。有研究表明，多索茶碱可能在减弱白细胞渗出方面发挥重要作用，小鼠临床前研究也支持这一观点，这些研究表明，体内和体外给予多索茶碱均可抑制白细胞穿过血管内皮细胞的迁移。与茶碱不同，多索茶碱不抑制肿瘤坏死因子诱导的气道平滑肌细胞（ASM）分泌白细胞介素（IL）-8。

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药效学
多索茶碱是一种甲基黄嘌呤类支气管扩张剂，其强效支气管扩张活性与茶碱相当。动物研究表明，多索茶碱可减轻支气管收缩、炎症反应以及血小板激活因子刺激下血栓素A2（TXA2）的释放。多索茶碱不直接抑制任何组蛋白去乙酰化酶 (HDAC) 或已知的磷酸二酯酶 (PDE) 同工酶，也不拮抗 A2 或 A2 受体。据报道，其对腺苷 A1、A2A 和 A2B 受体的亲和力均高于 100 µM。仅在高浓度下，它才表现出对 PDE2A1 的抑制作用和对腺苷 A2A 受体的拮抗作用。一项研究表明，多索茶碱与 β2-肾上腺素能受体相互作用，诱导血管舒张和气道平滑肌舒张。在犬类研究中，多索茶碱在不影响心率和呼吸频率的剂量下降低了气道反应性。

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作用机制：多索茶碱通过两条主要途径发挥抗炎和支气管扩张作用：(1)抑制PDE4，增加细胞内cAMP水平，激活PKA，抑制促炎介质（例如TNF-α、IL-6）的释放，并减少平滑肌收缩；(2)增强SIRT1活性，使NLRP3去乙酰化，从而抑制NLRP3炎症小体的激活，并减少IL-1β的产生（IL-1β对LPS诱导的肺部炎症至关重要）[1, 3]
- 治疗适应症：多索茶碱已获准用于治疗哮喘和慢性阻塞性肺疾病（COPD）。它通过改善气道通畅性和减轻气道炎症来缓解呼吸困难、喘息和咳嗽等症状。与茶碱相比，多索茶碱具有更好的安全性（中枢神经系统和心血管副作用更少）[3]
- 临床疗效：在一项针对慢性阻塞性肺疾病 (COPD) 患者的随机对照试验 (RCT) 中，口服多索茶碱（400 mg，每日两次，持续 12 周）与安慰剂相比，可使第一秒用力呼气容积 (FEV1) 增加约 15%，急性加重频率降低约 40% [3]
- 与其他黄嘌呤类药物的比较：多索茶碱与茶碱在三个关键方面有所不同：(1) 对 PDE4 的选择性高于其他 PDE 同工酶；(2) 对腺苷 A1 受体的亲和力较低（减少中枢神经系统和心血管副作用）； （3）不同的代谢途径（以CYP1A2为主，最大限度减少与其他药物的相互作用）[3]
- 在NLRP3炎症小体调控中的作用：多索茶碱是少数几种被证实能靶向NLRP3炎症小体的黄嘌呤衍生物之一。这种独特的作用使其除了能扩张支气管外，还能有效治疗其他炎症性肺部疾病，例如LPS诱导的急性肺损伤（ALI）[1]

C11H14N4O4

266.25

266.101

69975-86-6

Doxofylline-d6;1219805-99-8;Doxofylline-d4;1346599-13-0

50942

White to off-white solid powder

1.6±0.1 g/cm3

505.2±53.0 °C at 760 mmHg

144-146ºC

259.3±30.9 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.700

-0.7

80.28

0

5

2

19

398

0

HWXIGFIVGWUZAO-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C11H14N4O4/c1-13-9-8(10(16)14(2)11(13)17)15(6-12-9)5-7-18-3-4-19-7/h6-7H,3-5H2,1-2H3

7-(1,3-dioxolan-2-ylmethyl)-1,3-dimethylpurine-2,6-dione

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.39 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 65 mg/mL (244.13 mM) in PBS (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶 (<60°C).

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。