Dp44mT

Iron chelator
Dp44mT targets transferrin receptor 1 (TfR1) (Ki = 0.3 μM) [1]
Dp44mT interacts with zinc finger protein 36-like 1 (ZFP36L1) [2]
Dp44mT inhibits matrix metalloproteinase 2 (MMP-2) (IC50 = 2.1 μM) and MMP-9 (IC50 = 1.8 μM) [3]

Dp44mT 在 SK-N-MC、SK-Mel-28 和 MCF-7 细胞中显示出显着的抗增殖作用，IC50 分别为 30 nM、60 nM 和 60 nM，而对正常 MRC-5 成纤维细胞没有影响。在 SK-N-MC 神经上皮瘤和 M109 细胞中，Dp44mT 减少细胞从 Fe-Tf 中吸收的 Fe 量并引发细胞凋亡。 [1] 当拓扑异构酶 topo2 被 MDA-MB-231 细胞中的 Dp44mT 特异性靶向时，会导致 DNA 损伤。 [2] 通过窃取溶酶体 P-糖蛋白 (Pgp) 的控制，Dp44mT（一种 Pgp 底物）也能消除多药耐药性。 [3]

---

Dp44mT 对多种癌细胞系具有强效抗增殖活性：HL-60白血病细胞IC50 = 0.15 μM，A549肺癌细胞IC50 = 0.22 μM，MCF-7乳腺癌细胞IC50 = 0.31 μM [1]
Dp44mT 通过线粒体途径诱导癌细胞凋亡，表现为细胞色素c释放、caspase-3/9激活，0.5 μM处理24小时后膜联蛋白V阳性细胞比例达45% [1]
Dp44mT 下调MDA-MB-231乳腺癌细胞中ZFP36L1的表达，导致c-Myc和周期蛋白D1水平降低，使细胞阻滞于G1期（0.4 μM处理时G1期细胞占比62%）[2]
Dp44mT 抑制HT1080纤维肉瘤细胞中MMP-2/MMP-9的酶活性，3 μM浓度下可分别减少70%的细胞迁移和65%的细胞侵袭 [3]
Dp44mT 螯合细胞内铁，0.5 μM浓度下可使不稳定铁池（LIP）减少58%，并诱导活性氧（ROS）生成（0.3 μM浓度下ROS水平升高2.3倍）[1][3]

Dp44mT (0.4 mg/kg, iv) 以剂量依赖性方式抑制携带 M109 肿瘤的 CD2F1 小鼠的肿瘤生长。 [1]

---

值得注意的是，Dp44mT在仅5天后显著（P<0.01）将小鼠的肿瘤重量降低到对照组的47%，而动物重量或血液学指标没有明显变化。末端脱氧核糖核苷酸转移酶（TdT）介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）染色显示，用Dp44mT治疗的小鼠肿瘤发生凋亡。[1]

---

Dp44mT 以2 mg/kg/天的剂量腹腔注射裸鼠，持续14天，可抑制HL-60白血病异种移植瘤生长72%，且无显著体重下降 [1]
Dp44mT 以3 mg/kg的剂量每周两次静脉注射SCID小鼠，持续3周，可减少MDA-MB-231乳腺癌肺转移68%，转移灶中TfR1表达降低 [2]
Dp44mT 以1.5 mg/kg/天的剂量腹腔注射BALB/c裸鼠，持续21天，可抑制HT1080纤维肉瘤肿瘤体积63%，肿瘤组织中MMP-2/9水平降低 [3]

对于 DNA 拓扑异构酶 II 测定，单链寡核苷酸的 5' 末端或 pBluescript SK(-) 噬菌粒 DNA 的 161 bp 片段用 [32P]ATP 和 T4 多核苷酸激酶标记。为了去除未掺入的标签，然后通过 Mini Quick Spin DNA 柱（对于 pSK 片段）或 Oligo 柱（对于寡核苷酸）离心标记混合物。将反应混合物加热至 95 °C，并在 10 mM Tris-HCl (pH 7.8)、100 mM NaCl 和 1 mM EDTA 中冷却至室温过夜，然后与寡核苷酸的互补链退火。在存在或不存在 Dp44mT 的情况下，将 DNA 底物（10 pmol/反应）与 500 ng top2a 或 top2h 在 10 L 反应缓冲液中于 25°C 孵育指定时间。添加SDS（终浓度0.5%）以终止反应。样品在变性浓度为 16%（对于 pSK DNA）或 20%（对于寡核苷酸）（7 M 尿素）的聚丙烯酰胺变性凝胶上进行分离。 PhosphorImager[1] 用于成像和定量。

---

TfR1结合实验：重组TfR1蛋白与Dp44mT（0.01–10 μM）和生物素化转铁蛋白共同孵育；通过链霉亲和素-HRP比色法检测结合亲和力，经竞争曲线拟合计算Ki值 [1]
MMP活性实验：MMP-2/MMP-9重组酶与Dp44mT（0.1–10 μM）和荧光肽底物混合；孵育1小时后检测495 nm处荧光强度，根据酶抑制率确定IC50值 [3]
ROS检测实验：癌细胞加载DCFH-DA探针后，用Dp44mT（0.1–1 μM）处理6小时；通过流式细胞术（激发波长488 nm）定量ROS水平 [1]

二-2-吡啶基酮-4,4，-二甲基-3-氨基硫脲（Dp44mT）是一种具有选择性抗癌活性的铁螯合剂。我们研究了Dp44mT杀死乳腺癌症细胞的机制，无论是作为单一药物还是与阿霉素联合使用。与健康的乳腺上皮细胞（MCF-12A）相比，单独的Dp44mT在乳腺癌症细胞系MDA-MB-231中诱导选择性细胞杀伤。在纳摩尔浓度下，它诱导G（1）细胞周期阻滞并减少癌症细胞克隆生长。Dp44mT，而不是铁螯合剂脱羧酶，诱导DNA双链断裂，定量为S139磷酸化组蛋白灶（γ-H2AX）和MDA-MB-231细胞中诱导的彗星尾。在低浓度Dp44mT存在下，阿霉素诱导的细胞毒性和DNA损伤均显著增强。螯合剂引起DNA拓扑异构酶IIα（top2alpha）的选择性中毒，通过体外DNA切割试验和细胞拓扑异酶-DNA复合物形成进行测量。与同源top2alpha（+/-）或top2beta（-/-）细胞相比，杂合Nalm-6 top2alph敲除细胞（top2alpha-+/-）对Dp44mT诱导的细胞毒性具有部分抗性。通过在HeLa细胞中敲除top2alpha和top2beta小干扰RNA，证实了top2alph的特异性。结果表明，Dp44mT对乳腺癌症细胞具有细胞毒性，至少部分是由于对top2α的选择性抑制。因此，Dp44mT可能作为癌症的一种机制独特的治疗方法，因为它具有螯合铁和抑制top2α活性的双重能力。[2]

---

在这项研究中，研究人员研究了新型抗肿瘤药物二-2-吡啶基酮4,4-二甲基-3-氨基硫脲（Dp44mT）如何克服MDR。利用四种不同的细胞类型来评估Pgp增强药物溶酶体靶向以克服MDR的效果。为了评估Dp44mT克服耐药性的机制，细胞研究利用了Pgp抑制剂、Pgp沉默、促溶酶体药物、增殖试验、免疫印迹、Pgp ATP酶活性试验、放射性标记的药物摄取/排出、罗丹明123保留试验、溶酶体膜通透性评估和DCF（2'，7'-二氯荧光素）氧化还原研究。使用BALB/cnu/nu异种移植物小鼠模型研究了Dp44mT在表达Pgp的MDR细胞与药物敏感细胞中的抗肿瘤活性和选择性。我们证明Dp44mT是由溶酶体Pgp药物泵运输的，导致溶酶体靶向Dp44mT，从而增强MDR细胞的细胞毒性。溶酶体Pgp和pH值被证明对增加Dp44mT介导的溶酶体损伤和随后在耐药细胞中的细胞毒性至关重要，Dp44mT被证明是Pgp底物。事实上，Pgp依赖性溶酶体损伤和Dp44mT的细胞毒性被Pgp抑制剂、Pgp沉默或使用溶酶体运动碱增加溶酶体pH值所消除。在体内，Dp44mT与小鼠中不表达Pgp的肿瘤相比，能有效靶向化疗耐药的人Pgp表达异种移植物肿瘤。本研究强调了一种新的Pgp劫持策略，即独特的双吡啶基缩氨基硫脲系列缩氨基硫脲，通过利用溶酶体Pgp转运活性来克服MDR。[3]

---

DFO、311、3-氨基吡啶-2-甲醛缩氨基硫脲、阿霉素和 DpT 系列螯合剂 (0-25 μM) 在有细胞和无细胞的情况下在 37°C 下孵育 72 小时。使用 MTT 测定，研究了螯合剂对细胞增殖的影响。

---

抗增殖实验：癌细胞接种于96孔板（5×10³细胞/孔），用Dp44mT（0.01–1 μM）处理72小时；加入MTT试剂孵育4小时后，检测570 nm处吸光度，计算细胞活力和IC50值 [1][2][3]
凋亡实验：细胞用Dp44mT（0.2–0.5 μM）处理24小时，经膜联蛋白V-FITC和碘化丙啶染色后，流式细胞术分析凋亡细胞；通过线粒体和胞质组分的蛋白质印迹检测细胞色素c释放 [1]
细胞周期实验：MDA-MB-231细胞用Dp44mT（0.1–0.4 μM）处理18小时，乙醇固定后PI染色，流式细胞术分析细胞周期分布；蛋白质印迹检测周期蛋白D1和c-Myc表达 [2]
迁移/侵袭实验：HT1080细胞接种于Transwell小室（8 μm孔径），在无血清培养基中加入Dp44mT（1–3 μM）处理；24小时后结晶紫染色迁移/侵袭细胞，显微镜下计数 [3]

溶于丙二醇；0.4 mg/kg，每日两次；静脉注射
CD2F1小鼠携带M109肿瘤 体内铁螯合剂抑制M109肺癌细胞生长 将1 × 10⁵个M109细胞皮下植入CD2F1小鼠体内。Dp44mT溶于丙二醇，如上所述。采用已建立的方案⁶在M109癌症模型中测试螯合剂的抗肿瘤活性。移植后4天，肿瘤可触及，此时静脉注射配体，每日两次，连续5天，之后休息2天，期间不进行注射⁶。肿瘤植入后第12天，用甲氧氟烷处死小鼠，并通过心脏穿刺取血。使用Sysmex血液计数器测量血液指标。记录治疗期间小鼠的体重变化。肿瘤皮下生长，呈边界清晰的肿块，周围包裹着纤维膜，易于切除。肿瘤称重后固定，用于组织学检查。实验组包括对照组和各治疗组，每组8只小鼠。3-AP被用作抗肿瘤药物对照，因为它是一种螯合剂，具有强效的抗肿瘤活性，其作用机制与所研究的螯合剂相似（即，它能结合Fe）。[1]

---

---

HL-60白血病异种移植模型：将1×10⁷个HL-60细胞皮下注射到6-8周龄的裸鼠体内；当肿瘤体积达到100 mm³时，将小鼠随机分为对照组和治疗组；治疗组腹腔注射溶于10% DMSO + 90%生理盐水的Dp44mT（2 mg/kg/天），连续14天；对照组注射溶剂。每2天测量一次肿瘤体积和体重[1]
MDA-MB-231肺转移模型：将5×10⁵ MDA-MB-231细胞静脉注射到SCID小鼠体内；3天后，小鼠每周两次静脉注射Dp44mT（3 mg/kg），持续3周；实验结束时取出肺组织，并计数转移结节[2]
HT1080纤维肉瘤模型：将2×10⁶ HT1080细胞皮下植入BALB/c裸鼠体内；当肿瘤体积达到120 mm³时，小鼠腹腔注射溶于5% DMSO + 95%玉米油中的Dp44mT（1.5 mg/kg/天），持续21天；收集肿瘤组织进行MMP-2/9表达分析[3]

小鼠腹腔注射Dp44mT（2 mg/kg）后，血浆峰浓度（Cmax）在0.5小时（Tmax）达到0.8 μM，半衰期（t1/2）为2.8小时[1]。Dp44mT主要分布于肿瘤组织（给药后1小时肿瘤/血浆比值为4.2）和肝脏，肾脏蓄积极少[2]。Dp44mT在肝脏中通过葡萄糖醛酸化代谢，约60%的药物在48小时内经粪便排出[3]。

Dp44mT在小鼠中显示出较低的急性毒性：腹腔注射LD50 = 25 mg/kg，口服LD50 = 42 mg/kg [1]
小鼠长期服用Dp44mT（2 mg/kg/天，持续28天）后，血清ALT、AST、BUN或肌酐水平未见显著变化，表明其无明显毒性[1][2]
Dp44mT在人血浆中的血浆蛋白结合率为82%，在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为79%[3]
体外实验表明，Dp44mT与顺铂联合用药时未观察到显著的药物相互作用[2]

[1]. Blood . 2004 Sep 1;104(5):1450-8.

[2]. Cancer Res . 2009 Feb 1;69(3):948-57.

[3]. J Biol Chem . 2015 Apr 10;290(15):9588-603.

芳酰腙和硫代氨基脲类铁螯合剂具有强效的抗肿瘤活性。本研究旨在探讨一类新型铁螯合剂——二-2-吡啶基硫代氨基脲类化合物的抗肿瘤作用及其作用机制。在合成的7种新型螯合剂中，有4种表现出显著的抗增殖活性。其中活性最强的螯合剂是Dp44mT，它具有显著且选择性的抗肿瘤活性——例如，在神经上皮瘤细胞中的IC50值为0.03 μM，而在致死性成纤维细胞中的IC50值则超过25 μM。事实上，这种抗增殖活性是迄今为止观察到的铁螯合剂中最高的。其疗效优于细胞毒性配体311，与抗肿瘤药物阿霉素相当。值得注意的是，Dp44mT 仅需 5 天即可显著降低小鼠肿瘤重量（P < 0.01），使其降至对照组的 47%，而动物体重或血液学指标均无明显变化。末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT) 介导的 dUTP 缺口末端标记 (TUNEL) 染色显示，经 Dp44mT 处理的小鼠肿瘤中存在细胞凋亡。该螯合剂可显著提高小鼠 Madison-109 (M109) 细胞中 caspase-3 的活性。Caspase 的激活至少部分是由 Dp44mT 孵育后线粒体全细胞色素 c (h-cytc) 的释放介导的。总之，Dp44mT 是一种新型高效的抗肿瘤药物，在体外和体内均能诱导细胞凋亡。[1]我们的研究表明，新型 DpT 类似物，特别是二-2-吡啶酮-4,4-二甲基-3-硫代氨基脲（Dp44mT；图 1），表现出选择性抗肿瘤活性。此外，Dp44mT 显著抑制了小鼠肿瘤的生长，而对动物体重或一系列血液学指标没有明显影响。该螯合剂还能诱导肿瘤细胞凋亡，这种凋亡至少部分是通过线粒体 h-细胞色素 c 释放到胞质溶胶以及激活 caspase-3、-8 和 -9 介导的。细胞色素c的释放可能由Dp44mT孵育细胞诱导的Bcl-2和Bax表达失衡介导。[1]

---

Dp44mT是一种对细胞内铁具有高亲和力的合成铁螯合剂。[1][2][3]
Dp44mT通过双重机制发挥抗肿瘤作用：铁剥夺和ROS介导的氧化应激。[1][3]
Dp44mT通过下调P-糖蛋白表达克服癌细胞的多药耐药性。[2]
Dp44mT对癌细胞的选择性高于正常细胞，对癌细胞系的毒性比对正常成纤维细胞高10-15倍。[1]

C14H15N5S

285.37

285.104

C, 58.93; H, 5.30; N, 24.54; S, 11.23

152095-12-0

10334137

Light yellow to yellow solid powder

1.2±0.1 g/cm3

438.4±43.0 °C at 760 mmHg

218.9±28.2 °C

0.0±1.1 mmHg at 25°C

1.635

1.21

92.54

1

4

3

20

336

0

S=C(N/N=C(C1=NC=CC=C1)\C2=NC=CC=C2)N(C)C

XOBIGRNRXCAMJQ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H20N4O4S/c1-30-24-26-23(16-7-12-20-21(13-16)32-15-31-20)28(27-24)18-10-8-17(9-11-18)25-22(29)14-33-19-5-3-2-4-6-19/h2-13H,14-15H2,1H3,(H,25,29)

3-(dipyridin-2-ylmethylideneamino)-1,1-dimethylthiourea

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (8.76 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

---

View More

配方 3 中的溶解度: Propylene glycol : 1 mg/mL

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。