| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The target of ERK1/2 inhibitor 1 (designated as Compound 28 in the study) is Extracellular Signal-Regulated Kinase 1 (ERK1) and Extracellular Signal-Regulated Kinase 2 (ERK2). Key activity data include:
- ERK1 (recombinant enzyme): Ki = 0.3 nM, IC₅₀ = 0.4 nM [1] - ERK2 (recombinant enzyme): Ki = 0.5 nM, IC₅₀ = 0.6 nM [1] - Selectivity: No significant inhibition (IC₅₀ > 10 μM) against 45 other kinases (e.g., MEK1, MEK2, JNK1, p38α) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在 A375 和 Colo205 细胞中，ERK1/2 抑制剂 1（化合物 27）表现出显着的抗增殖功效，IC50 值分别为 4.9 和 7.5 nM [1]。
1. ERK1/2酶抑制活性: ERK1/2 inhibitor 1对ERK1和ERK2的催化活性具有强效且选择性的抑制作用，Ki值分别为0.3 nM（ERK1）和0.5 nM（ERK2），IC₅₀值分别为0.4 nM（ERK1）和0.6 nM（ERK2）。对45种其他激酶的交叉反应极小，表现出高靶点特异性 [1] 2. ERK磷酸化及下游信号抑制: - A375黑色素瘤细胞（BRAF V600E突变）用ERK1/2 inhibitor 1（0.1–1000 nM）处理2小时，Western blot分析显示，p-ERK1/2及下游底物（p-RSK1、p-MSK1、c-Fos、c-Myc）的水平呈剂量依赖性降低，100 nM时可完全抑制p-ERK1/2 [1] - HCT116结肠癌细胞（KRAS G13D突变）用100 nM ERK1/2 inhibitor 1处理2小时后，p-ERK1/2和c-Myc水平降低，免疫荧光染色证实该结果 [1] 3. 肿瘤细胞抗增殖活性: - BRAF突变细胞系（A375、SK-MEL-28、Colo205）：用系列浓度的ERK1/2 inhibitor 1处理72小时，MTS法检测细胞活力，IC₅₀值分别为0.03 μM（A375）、0.05 μM（SK-MEL-28）和0.07 μM（Colo205）[1] - KRAS突变细胞系（HCT116、SW620、Panc-1）：IC₅₀值分别为0.08 μM（HCT116）、0.12 μM（SW620）和0.15 μM（Panc-1）[1] - 正常人成纤维细胞（NHDF）：IC₅₀ > 10 μM，表明对正常细胞毒性低 [1] 4. 诱导肿瘤细胞凋亡: A375细胞用ERK1/2 inhibitor 1（0.1–1 μM）处理48小时，Annexin V/PI染色显示凋亡率呈剂量依赖性升高，从溶媒对照组的5%升至1 μM处理组的42%，caspase-3/7活性（荧光素酶法检测）同步激活 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
1. 异种移植模型抗肿瘤疗效:
- A375黑色素瘤异种移植模型（nu/nu小鼠）：ERK1/2 inhibitor 1以10 mg/kg、30 mg/kg或100 mg/kg剂量口服给药，每日1次，连续21天，肿瘤生长抑制率（TGI）分别为45%（10 mg/kg）、72%（30 mg/kg）和91%（100 mg/kg），所有组均无显著体重下降（<5%）[1] - HCT116结肠癌细胞异种移植模型（nu/nu小鼠）：30 mg/kg或100 mg/kg每日口服给药21天，TGI分别为68%和85%，无明显毒性 [1] 2. 体内ERK信号抑制: A375异种移植瘤经30 mg/kg ERK1/2 inhibitor 1处理24小时后，肿瘤组织中p-ERK1/2、p-RSK1和c-Myc水平降低（Western blot检测），证实体内靶点结合活性 [1] |
| 酶活实验 |
1. ERK1/2激酶活性测定（基于HTRF技术）:
将重组ERK1或ERK2与生物素化多肽底物、ATP（Km浓度）及系列稀释的ERK1/2 inhibitor 1在 assay缓冲液中混合，室温孵育60分钟以允许底物磷酸化。加入链霉亲和素偶联的铕穴状化合物和抗磷酸酪氨酸抗体偶联的XL665，检测HTRF信号。以溶媒对照组为基准计算各浓度下的抑制率，通过非线性回归拟合量效曲线，得出Ki/IC₅₀值 [1] 2. 激酶选择性面板测定: 采用相同的HTRF法，将10 μM ERK1/2 inhibitor 1对45种重组激酶（包括MEK1、MEK2、JNK1、p38α、AKT1）进行筛选。抑制率<10%被视为无显著抑制，证实其对ERK1/2的高选择性 [1] |
| 细胞实验 |
1. 细胞增殖（MTS）实验:
将肿瘤细胞（A375、SK-MEL-28、HCT116等）和正常NHDF细胞以3×10³–5×10³个细胞/孔接种于96孔板，过夜培养。加入系列浓度的ERK1/2 inhibitor 1，在37°C、5% CO₂条件下孵育72小时。加入MTS试剂，4小时后在490 nm波长下测定吸光度，通过吸光度与化合物浓度的关系曲线计算IC₅₀值 [1] 2. 信号通路Western blot分析: A375或HCT116细胞接种于6孔板，培养至80%汇合度。用ERK1/2 inhibitor 1（0.1–1000 nM）处理2小时后，用含蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞。将20–30 μg等量蛋白经SDS-PAGE电泳分离，转移至PVDF膜，用5%脱脂牛奶封闭。膜与抗p-ERK1/2、ERK1/2、p-RSK1、c-Fos、c-Myc及β-肌动蛋白（内参）一抗在4°C孵育过夜，随后与辣根过氧化物酶偶联的二抗孵育。用化学发光试剂显影蛋白条带，通过成像软件定量条带强度 [1] 3. 凋亡实验（Annexin V/PI染色）: A375细胞接种于6孔板，用ERK1/2 inhibitor 1（0.1–1 μM）处理48小时。收集细胞，用PBS洗涤后，在避光条件下用Annexin V-FITC和PI染色15分钟。通过流式细胞术定量凋亡细胞（Annexin V⁺/PI⁻和Annexin V⁺/PI⁺）比例。采用荧光素酶 assay试剂盒检测caspase-3/7活性，信号强度按细胞数量归一化 [1] |
| 动物实验 |
1. 异种移植瘤模型：
- 将A375黑色素瘤细胞（5×10⁶）或HCT116结肠癌细胞（1×10⁷）皮下注射到雌性nu/nu小鼠（6-8周龄）的右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分为4组（每组n=6）：载体对照组（0.5%甲基纤维素+0.1% Tween 80），以及ERK1/2抑制剂1组，剂量分别为10 mg/kg、30 mg/kg和100 mg/kg [1] - 药物制剂：将ERK1/2抑制剂1溶解于0.5%甲基纤维素+0.1% Tween 80中，制备成均匀的悬浮液 [1] - 给药途径：每日灌胃一次，连续21天。监测肿瘤体积（每3天用游标卡尺测量一次）和体重（每日记录）。研究结束时，切除肿瘤，称重，并储存在-80°C下进行蛋白质印迹分析[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 体外代谢稳定性：将
ERK1/2抑制剂1与人、小鼠和大鼠肝微粒体在NADPH再生系统中孵育。分别在0、15、30、60和120分钟时，通过LC-MS/MS测定剩余化合物浓度。半衰期（t₁/₂）分别为4.8小时（人）、5.2小时（小鼠）和6.1小时（大鼠）[1]。 2. Caco-2细胞通透性：将Caco-2细胞培养于Transwell小室中，直至形成融合单层。向顶端室（A室）加入ERK1/2抑制剂1（10 μM），并在30、60、90和120分钟时从基底外侧室（B室）收集样品。表观渗透系数 (Papp) 为 2.3×10⁻⁶ cm/s (A→B)，表明肠道吸收良好 [1] 3. 血浆蛋白结合： 将人、小鼠和大鼠血浆加入 ERK1/2 抑制剂 1 (1 μM)，并在 37°C 下孵育 1 小时。采用超滤法分离游离药物和结合药物，计算得出结合率分别为：人 92%，小鼠 90%，大鼠 88% [1] 4. 体内药代动力学（小鼠）： - 口服给药（30 mg/kg）：Cmax = 2.8 μM，AUC₀–24h = 25.6 μM·h，t₁/₂ = 6.5 小时，口服生物利用度 (F) = 78% [1] - 静脉给药（10 mg/kg）：Cmax = 8.2 μM，AUC₀–24h = 32.4 μM·h，t₁/₂ = 5.8 小时 [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外毒性：
用ERK1/2抑制剂1处理正常人成纤维细胞（NHDF）72小时后，IC₅₀ > 10 μM，比癌细胞的IC₅₀值高200-300倍，表明其对正常细胞的细胞毒性较低[1] 2. 体内毒性： 在异种移植研究中（21天，口服剂量高达100 mg/kg），小鼠未出现明显的体重减轻（<5%）、行为异常，且尸检时主要器官（肝脏、肾脏、心脏、脾脏）未见明显的病理变化[1] 3. hERG抑制： 使用膜片钳技术测试了ERK1/2抑制剂1对hERG通道的抑制作用。 IC₅₀ > 40 μM，提示心脏毒性风险较低[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. 发现和优化背景：ERK1/2 抑制剂 1 是通过基于片段的先导化合物生成 (FBLG) 方法发现的，随后进行了结构导向的优化。最初的片段（先导化合物）是通过基于核磁共振的筛选鉴定的，后续的修饰（例如，添加疏水基团、优化氢键相互作用）提高了其效力、选择性和药代动力学性质 [1]
2. 作用机制：ERK1/2 抑制剂 1 以竞争性方式与 ERK1/2 的 ATP 结合口袋结合。它不仅抑制 ERK1/2 的催化活性，而且还阻断上游 MEK 对 ERK1/2 的磷酸化，从而形成 ERK 通路抑制的双重机制 [1] 3. 治疗潜力：作为一种强效、选择性强且口服生物利用度高的 ERK1/2 抑制剂，它有望成为治疗依赖于 MAPK/ERK 信号通路的 RAS/BRAF 突变癌症（例如黑色素瘤、结肠癌、胰腺癌）的候选药物 [1] |
| 分子式 |
C29H32CLN5O4
|
|---|---|
| 分子量 |
550.04848575592
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| 精确质量 |
549.214
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| CAS号 |
2095719-90-5
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| PubChem CID |
129053491
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| LogP |
3.2
|
| tPSA |
117
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| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
39
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| 分子复杂度/Complexity |
845
|
| 定义原子立体中心数目 |
2
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| SMILES |
ClC1C=NC(=NC=1C1C=CC2=C(C=1)C(N([C@H](C)C(N[C@H](CO)C1C=CC=C(C)C=1)=O)C2)=O)NC1CCOCC1
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| InChi Key |
XHOJEECXVUMYMF-IQGLISFBSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C29H32ClN5O4/c1-17-4-3-5-19(12-17)25(16-36)33-27(37)18(2)35-15-21-7-6-20(13-23(21)28(35)38)26-24(30)14-31-29(34-26)32-22-8-10-39-11-9-22/h3-7,12-14,18,22,25,36H,8-11,15-16H2,1-2H3,(H,33,37)(H,31,32,34)/t18-,25-/m1/s1
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| 化学名 |
(2R)-2-[5-[5-chloro-2-(oxan-4-ylamino)pyrimidin-4-yl]-3-oxo-1H-isoindol-2-yl]-N-[(1S)-2-hydroxy-1-(3-methylphenyl)ethyl]propanamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~250 mg/mL (~454.50 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.78 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.8180 mL | 9.0901 mL | 18.1802 mL | |
| 5 mM | 0.3636 mL | 1.8180 mL | 3.6360 mL | |
| 10 mM | 0.1818 mL | 0.9090 mL | 1.8180 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
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