Exherin free base (ADH-1) is a cyclic pentapeptide that disrupts N-cadherin interactions. It targets N-cadherin expressed on both tumor cells and tumor endothelium. The study does not provide IC₅₀, Ki, or EC₅₀ values for binding to N-cadherin. [3]

ADH-1 (0.2 mg/mL) 是一种强效的 N-钙黏蛋白诱导细胞运动抑制剂，并能抑制胰腺癌细胞中 I 型胶原蛋白介导的改变。ADH-1 在 0、0.1、0.2、0.5 和 1.0 mg/mL 浓度下均能以剂量依赖性和 N-钙黏蛋白依赖性的方式诱导细胞凋亡 [1]。

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Exherin 在体外评估了其对内皮细胞通透性和黑色素瘤细胞信号传导的影响。

1. 内皮细胞通透性测定：在表达 N-钙黏蛋白的 HUVEC 内皮细胞中，用 Exherin (1 mg/mL) 预处理 1 小时后，与生理盐水对照组相比，细胞对 40 kDa FITC 标记的葡聚糖的通透性增加了约两倍。无论是否存在血清和生长因子，均观察到了这种效应，甚至超过了用作阳性对照的 VEGF (10 ng/mL) 诱导的通透性增加。[3]
2. N-钙黏蛋白基因表达：采用实时定量 RT-PCR 检测 HUVEC 细胞中 N-钙黏蛋白基因的转录水平。表达量以 GAPDH 为内参进行标准化，并以高表达 N-钙黏蛋白的黑色素瘤细胞系 DM366 为参照进行报告。 [3]
3. 细胞信号传导（蛋白质印迹法）：在指数生长期的 A375（高 N-钙黏蛋白表达，PTEN 表达）和 DM443（低 N-钙黏蛋白表达，PTEN 缺失）黑色素瘤细胞中，用 Exherin（0-1 mg/mL）处理 1 小时后，Exherin 可增加 A375 细胞中 AKT（丝氨酸 473 位点）的磷酸化水平，但在 DM443 细胞中未观察到此现象。[3]

在胰腺癌小鼠模型中，ADH-1（50 mg/kg）能显著抑制肿瘤的发生发展和转移。在采用过表达N-钙黏蛋白的BxPC-3细胞构建的原位胰腺癌模型中，ADH-1抑制了肿瘤细胞的侵袭和转移[1]。在所检测的剂量水平下，ADH-1在大鼠主动脉环实验中未表现出抗血管生成活性，在PC3皮下异种移植瘤模型中也未显示出抗肿瘤潜力[2]。当ADH-1用于A375异种移植瘤（而非DM443异种移植瘤）时，AKT丝氨酸473的磷酸化水平显著升高。在异种移植瘤中，ADH-1 可轻微下调 N-钙黏蛋白的表达[3]。

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Exherin 对异种移植瘤模型中黑色素瘤肿瘤生长的影响取决于细胞系和所使用的化疗药物。它还能持续增加血管通透性。

1. 对肿瘤生长的影响（未接受化疗）：在携带 DM443 异种移植瘤（低 N-钙黏蛋白）的大鼠中，全身注射 Exherin（100 mg/kg，腹腔注射）后，再输注生理盐水，并未显著改变肿瘤生长速率（0.10 ± 0.04 d⁻¹ vs. 对照组 0.20 ± 0.04 d⁻¹，p=0.26）。相比之下，对于 A375 异种移植瘤（高 N-钙黏蛋白），同样的治疗方法显著提高了肿瘤生长速度，几乎增加了 2 倍（0.53 ± 0.07 d⁻¹ vs. 0.27 ± 0.02 d⁻¹，p=0.018）。[3]
2. 联合区域性美法仑（LPAM-ILI）：对于 DM443 异种移植瘤，与单独使用 LPAM 相比，全身性 Exherin 联合区域性 LPAM 输注的治疗方案显著降低了肿瘤生长速度，降低了 75%（0.03 ± 0.01 d⁻¹ vs. 0.12 ± 0.01 d⁻¹，p<0.001）。对于 A375 异种移植瘤，联合疗法完全抵消了单独使用 Exherin 的促生长作用，与对照组相比，肿瘤生长速度降低了 99%。联合治疗组 80% (4/5) 的动物观察到肿瘤完全缓解，而单独使用 LPAM 治疗组仅为 33% (2/6)。[3]
3. 联合区域性替莫唑胺 (TMZ-ILI)：对于 DM443 异种移植瘤，全身性 Exherin 联合区域性 TMZ 输注的联合疗法使肿瘤生长速度比单独使用 TMZ 降低了 33%（0.08 ± 0.01 d⁻¹ vs. 0.12 ± 0.02 d⁻¹，p=0.012）。对于 A375 异种移植瘤，Exherin 未能提高替莫唑胺 (TMZ) 的疗效，也无法克服单独使用 Exherin 时观察到的促生长作用。联合治疗的肿瘤生长速度更接近单独使用 Exherin 的效果。[3]
4. 对血管通透性的影响（伊文思蓝染料测定）：全身性注射 Exherin（100 mg/kg，腹腔注射）1 小时后，与生理盐水对照组相比，在 DM443 异种移植瘤中，ILI 期间伊文思蓝染料渗入肿瘤的量显著增加了 28.4% (p=0.0001)，在 A375 异种移植瘤中增加了 32.8% (p=0.0001)。 [3]
5. 对间质液压力 (IFP) 的影响：全身性注射 Exherin（100 mg/kg，腹腔注射）1 小时后，DM443 和 A375 异种移植瘤的肿瘤间质液压力均未发生显著改变。[3]
6. 对药物递送的影响：免疫组化染色显示，全身性 Exherin 预处理分别使 DM443 和 A375 异种移植瘤中 LPAM-DNA 加合物形成（LPAM 递送的替代指标）增加约 12 倍和 16 倍。相反，在 TMZ-ILI 后，Exherin 预处理并未增加 DNA 损伤（p-H2A.x 染色，TMZ 递送的替代指标）。 [3]
7. 对细胞信号传导的影响（体内）：肿瘤样本的蛋白质印迹分析证实，Exherin 处理可增加 A375 异种移植瘤中 AKT 在丝氨酸 473 位点的磷酸化水平，但在 DM443 异种移植瘤中未观察到此现象。反相蛋白芯片 (RPPA) 分析显示，在 DM443 异种移植瘤中，Exherin 抑制了 PI3K-AKT-mTOR 通路。在 A375 异种移植瘤中，Exherin 增加了该通路中多种磷酸化蛋白的表达，并降低了 PTEN 的表达。在两种异种移植瘤中，Exherin 均抑制了其他促生存通路（例如 EGFR、STAT3、MEK）中特异性激活标志物的表达。[3]

未进行直接酶活性测定。关键测定包括基于细胞的功能测定（通透性测定）和蛋白质分析（Western blot、RPPA）。

1. 内皮细胞通透性测定：将HUVECs培养至汇合，接种于纤连蛋白包被的Transwell小室中。在有或无血清和生长因子的情况下，用Exherin（1 mg/mL）、VEGF（10 ng/mL）或生理盐水处理1小时后，于加入40 kDa FITC-葡聚糖30分钟后，测量其穿过单层细胞的扩散情况。使用微孔板读数仪测量下室的荧光强度。[3]
2. 实时定量RT-PCR：提取细胞总RNA，并合成cDNA。使用SYBR Green qPCR和特异性引物扩增N-钙黏蛋白基因转录本。CT值以GAPDH表达进行标准化。 [3]
3. 反相蛋白芯片 (RPPA)：从异种移植瘤中分离的蛋白质由 MD 安德森癌症中心功能蛋白质组学核心实验室进行分析。比较了 Exherin 处理组和生理盐水处理组肿瘤的相对蛋白表达水平。将 log₂ 值转换为线性值以确定表达差异。[3]

本研究采用了两种主要的细胞检测方法：内皮细胞通透性检测和细胞信号传导研究。

1. 内皮细胞通透性检测：将HUVEC细胞培养于添加了肝素、内皮细胞生长补充剂和胎牛血清（FBS）的F-12K培养基中。将细胞接种于纤连蛋白包被的Transwell小室中，待细胞生长至汇合。通过测量40 kDa FITC-葡聚糖在单层细胞中的扩散来评估通透性，处理细胞后分别用Exherin、VEGF或生理盐水进行处理。[3]
2. 细胞信号传导研究（Western Blot）：将DM443和A375黑色素瘤细胞培养于添加了10% FBS、谷氨酰胺和抗生素的Isocove改良Dulbecco培养基中。处于指数生长期的细胞经血清饥饿过夜后，用Exherin（0-1 mg/mL）处理1小时。提取细胞裂解液，通过Western blot分析AKT磷酸化和PTEN表达。[3]

采用详细的异种移植模型评估了Exherin的体内效应。

1. **异种移植模型：**将DM443和A375黑色素瘤细胞注射到裸鼠的后肢。肿瘤生长至直径约1厘米或体积约2立方厘米。[3]
2. **药物制备和给药：**将Exherin溶于PBS中，并以100毫克/公斤体重（10毫升/公斤）的剂量进行腹腔注射。在离体肢体灌注（ILI）前1小时给药，或在生长研究中，作为单次给药或多剂量方案的一部分。[3]
3. **离体肢体灌注（ILI）：**使用美法仑（LPAM）或替莫唑胺（TMZ）进行ILI。配制输注液，使其浓度达到90 mg/kg LPAM或2000 mg/kg TMZ，体积为22.5 mL。在全身注射Exherin或生理盐水1小时后进行输注。[3]
4. **伊文思蓝染料测定：**在全身注射Exherin（100 mg/kg，腹腔注射）1小时后，进行ILI检测。使用伊文思蓝染料溶液（50 mg/kg，溶于生理盐水）以1.5 mL/min的流速输注15分钟，随后用生理盐水冲洗2分钟。切除肿瘤，在37°C下用甲酰胺孵育72小时，并在595 nm处测量提取染料的吸光度，并以肿瘤体积进行标准化。 [3]
5. **间质液压力 (IFP) 测量：** 全身注射 Exherin（100 mg/kg，腹腔注射）1 小时后，使用配备 18 号侧孔针的针式压力监测仪测量肿瘤间质液压力。将针头插入肿瘤中心，待压力稳定后记录 IFP 值（单位：mmHg）。[3]
6. **组织采集用于分析：** 在不同时间点处死动物（例如，ILI 后 24 小时用于 IHC，Exherin 注射后 1 小时用于 RPPA）。切除肿瘤组织，用福尔马林固定用于 IHC，或速冻用于蛋白质分析。 [3]

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采用详细的异种移植模型评估了Exherin的体内效应。

1. 异种移植模型：将DM443和A375黑色素瘤细胞注射到裸鼠的后肢。肿瘤生长至直径约1厘米或体积约2立方厘米。[3]
2. 药物制备和给药：将Exherin溶于PBS中，并以100毫克/公斤体重（10毫升/公斤）的剂量进行腹腔注射。在离体肢体灌注（ILI）前1小时给药，或在生长研究中，作为单次给药或多剂量方案的一部分。[3]
3. 离体肢体灌注（ILI）：使用美法仑（LPAM）或替莫唑胺（TMZ）进行ILI。配制输注液，使其浓度达到90 mg/kg LPAM或2000 mg/kg TMZ，体积为22.5 mL。在全身注射Exherin或生理盐水1小时后进行输注。[3]
4. 伊文思蓝染料测定：全身注射Exherin（100 mg/kg，腹腔注射）1小时后，进行ILI检测。使用伊文思蓝染料溶液（50 mg/kg，溶于生理盐水）以1.5 mL/min的流速输注15分钟，随后用生理盐水冲洗2分钟。切除肿瘤，在37°C下用甲酰胺孵育72小时，并在595 nm处测量提取染料的吸光度，并以肿瘤体积进行标准化。 [3]
5. 间质液压力 (IFP) 测量：全身注射 Exherin（100 mg/kg，腹腔注射）1 小时后，使用配备 18 号侧孔针的针式压力监测仪测量肿瘤间质液压力。将针头插入肿瘤中心，待压力稳定后记录 IFP 值（单位：mmHg）。[3]
6. 组织采集分析：在不同时间点处死动物（例如，ILI 后 24 小时用于 IHC，Exherin 注射后 1 小时用于 RPPA）。切除肿瘤，用福尔马林固定用于 IHC，或速冻用于蛋白质分析。[3]

蛋白质结合
ADH-1 与 N-钙黏蛋白结合并抑制其活性。

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[1]. ADH-1 suppresses N-cadherin-dependent pancreatic cancer progression. Int J Cancer. 2008 Jan 1;122(1):71-7.

[2]. ADH1, an N-cadherin inhibitor, evaluated in preclinical models of angiogenesis and androgen-independent prostate cancer. Anticancer Drugs. 2007 Jun;18(5):563-8.

[3]. Targeting N-cadherin increases vascular permeability and differentially activates AKT in melanoma. Ann Surg. 2015 Feb;261(2):368-77.

Adherex公司的生物技术化合物ADH-1靶向N-钙黏蛋白，这是一种存在于某些肿瘤细胞和已形成的肿瘤血管上的蛋白质。ADH-1目前正处于临床开发阶段，拟与一系列化疗药物联合使用，以研究在临床前模型中观察到的协同效应。2006年底，该公司还完成了ADH-1单药治疗的Ib/II期和II期临床试验的患者招募工作。钙黏蛋白是参与细胞黏附和细胞信号传导的分子，对组织、器官和生物体的发育至关重要。靶向并抑制钙黏蛋白功能的药物有可能通过两种不同的途径抑制癌症进展：直接靶向癌细胞上表达的钙黏蛋白可能干扰钙黏蛋白介导的信号传导，从而导致癌细胞凋亡（死亡）；钙黏蛋白抑制剂可能利用肿瘤血管固有的结构缺陷，导致血管生成（血管破裂）和肿瘤损伤。随着许多肿瘤侵袭性、恶性程度和恶性程度的不断增加，研究人员发现N-钙黏蛋白的表达显著升高，使其成为开发抗癌疗法的重要靶点。低分化、高侵袭性癌症的特征是N-钙黏蛋白（而非E-钙黏蛋白）的过度表达。这种原发性钙黏蛋白表达的改变导致上皮细胞失去其紧密黏附、极性和清晰的形态，变得黏附松散、扁平且易于迁移。这种钙黏蛋白的转变促进了去分化、局部侵袭和转移，最终导致预后不良。由于N-钙黏蛋白在多种肿瘤中过度表达，ADH-1可能在多种癌症的治疗中具有潜在的应用价值。随着肿瘤的进展，随着分级、侵袭性和转移的增加，N-钙黏蛋白的表达频率通常也会增加。 ADH-1 是一种小环状五肽，具有潜在的抗肿瘤和抗血管生成活性，是血管生成靶点。ADH-1 选择性地竞争性结合并阻断 N-钙黏蛋白，这可能导致肿瘤血管生成受阻、肿瘤细胞生长抑制以及肿瘤细胞和内皮细胞凋亡。N-钙黏蛋白是一种位于细胞表面的跨膜糖蛋白，属于钙黏蛋白超家族，参与钙介导的细胞间黏附和信号转导机制。ADH-1 在某些侵袭性肿瘤和肿瘤血管的内皮细胞和周细胞中可能表达上调。

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药物适应症
ADH-1 已被研究用于治疗乳腺癌、其他癌症/肿瘤（未具体说明）、黑色素瘤、卵巢癌和实体瘤。

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作用机制
尽管ADH-1只有一个分子靶点，即N-钙黏蛋白，但我们认为其抗癌作用源于两种不同的作用机制——细胞凋亡和肿瘤血管生成。N-钙黏蛋白似乎是一种肿瘤细胞存活因子。细胞培养研究表明，抑制肿瘤细胞间N-钙黏蛋白的结合会导致肿瘤细胞凋亡，我们认为这是由于钙黏蛋白调控的细胞存活信号通路被破坏所致。ADH-1似乎还能破坏癌性肿瘤生长和增殖所需的血管；我们在临床和临床前研究中均观察到了出血现象。我们认为这种破坏机制要么是竞争性抑制肿瘤血管壁内皮细胞间钙黏蛋白的结合，要么是导致构成血管壁一部分的肿瘤细胞凋亡；两者都会导致血管渗漏和破裂。后者涉及肿瘤“嵌合体”现象，即肿瘤细胞（以及内皮细胞）构成血管壁的一部分。诱导这些肿瘤细胞死亡会导致肿瘤血管破坏。

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药效学
ADH-1 是一种生物技术化合物，靶向 N-钙黏蛋白，这是一种存在于某些肿瘤细胞和已形成的肿瘤血管上的蛋白质。钙黏蛋白是一种细胞黏附和细胞信号传导分子，对组织、器官和生物体的发育至关重要。靶向并抑制钙黏蛋白功能的药物有望从两个不同的层面阻断癌症进展：直接靶向表达于癌细胞表面的钙黏蛋白可能干扰钙黏蛋白介导的信号传导，从而导致癌细胞凋亡（死亡）。钙黏蛋白抑制剂可能利用肿瘤血管固有的结构缺陷，导致血管生成（血管破裂）和肿瘤损伤。该化合物适用于治疗多种侵袭性癌症，ADH-1 已被证实与紫杉烷类化疗药物在卵巢癌异种移植瘤的全身治疗中具有协同作用。

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Exherin 游离碱 (ADH-1) 是一种环状五肽，可破坏 N-钙黏蛋白介导的相互作用。N-钙黏蛋白在包括黑色素瘤在内的多种恶性肿瘤中表达上调，并参与肿瘤细胞的黏附、存活和血管生成。本研究探讨了Exherin 在黑色素瘤区域化疗中的双重作用。研究表明，Exherin 对肿瘤生长的影响取决于肿瘤的分子特征（例如 PTEN 状态、N-钙黏蛋白表达）。在 A375 细胞（高 N-钙黏蛋白、PTEN 表达）中，Exherin 单独作用即可加速肿瘤生长，这与 AKT 磷酸化水平升高相关。在DM443细胞（低N-钙黏蛋白，PTEN缺失）中，Exherin对细胞生长没有显著影响。尽管存在这种双重效应，Exherin在两种异种移植模型中均持续增加肿瘤血管通透性（约30%），从而增强了蛋白结合药物美法仑（LPAM）的递送，并提高了其抗肿瘤疗效。这种益处并未延伸至蛋白结合率较低的替莫唑胺（TMZ）。该研究凸显了靶向治疗的复杂性以及理解情境依赖性效应（包括潜在的治疗获益和危害）的重要性。这些发现对于正在进行和未来将N-钙黏蛋白拮抗剂与区域化疗联合应用的临床试验具有重要的临床意义。[3]

C22H34N8O6S2

570.68

570.204

229971-81-7

ADH-1 trifluoroacetate;1135237-88-5

9916058

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1183.4±65.0 °C at 760 mmHg

669.5±34.3 °C

0.0±0.3 mmHg at 25°C

1.619

-2.35

305.17

7

9

5

38

907

5

C[C@H]1C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N1)CC2=CN=CN2)NC(=O)C)C(=O)N)C(C)C

FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N

InChI=1S/C22H34N8O6S2/c1-10(2)17-22(36)29-15(18(23)32)7-37-38-8-16(27-12(4)31)21(35)28-14(5-13-6-24-9-25-13)20(34)26-11(3)19(33)30-17/h6,9-11,14-17H,5,7-8H2,1-4H3,(H2,23,32)(H,24,25)(H,26,34)(H,27,31)(H,28,35)(H,29,36)(H,30,33)/t11-,14-,15-,16-,17-/m0/s1

(4R,7S,10S,13S,16R)-16-acetamido-13-(1H-imidazol-5-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15-tetraoxo-7-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14-tetrazacycloheptadecane-4-carboxamide

ADH-1; ADH 1; NSC729477; ADH1; Brand name: Exherin; Exherin free base;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。  (2). 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~250 mg/mL (~438.07 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (3.64 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。