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Exo1

别名: Exo1; Exo 1; 75541-83-2; 461681-88-9; methyl 2-[(4-fluorobenzoyl)amino]benzoate; Exo-1; methyl 2-(4-fluorobenzamido)benzoate; 2-(4-Fluorobenzoylamino)benzoic acid methyl ester; Benzoic acid, 2-[(4-fluorobenzoyl)amino]-, methyl ester; Exo-1
目录号: V4001 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
Exo-1 (Exo1) 是一种新型、有效、可逆的胞吐作用抑制剂，用作胞吐途径的化学抑制剂。
Exo1 CAS号: 75541-83-2
产品类别: Ras
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
10 mM * 1 mL in DMSO
1mg
5mg
10mg
25mg
50mg
100mg
250mg
500mg
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纯度: ≥98%

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产品说明书
产品描述
Exo-1 (Exo1) 是一种新型、有效、可逆的胞吐作用抑制剂，用作胞吐途径的化学抑制剂。它通过激活高尔基体 ARF 1（ADP-核糖基化因子）GTP 酶发挥作用。 Exo1 诱导高尔基体快速塌陷至内质网，从而急剧抑制内质网发出的交通。与 Brefeldin A (BFA) 一样，Exo1 诱导 ADP-核糖基化因子 (ARF) 1 从高尔基体膜快速释放，但对跨高尔基体网络的组织影响较小。 Exo1 的作用机制与 BFA 不同。与 BFA 不同，Exo1 不会诱导 CtBP/Bars50 的 ADP-核糖基化，也不会干扰基于高尔基体的 ARF 特异的鸟嘌呤核苷酸交换因子的活性。因此，Exo1 可以将 Bars50 的脂肪酸交换活性与控制高尔基管的 ARF1 活性区分开来。
生物活性&实验参考方法
靶点
exocytosis; Golgi; ARF-1
Exo1 modifies the GTPase activity of Golgi ARF1. Exo1 offers a separate method of interfering with Golgi activity because it blocks a portion of the membrane events that BFA blocks, although it appears to target a different protein target and likely has different side effects. Exo1 Disrupts Golgi structures to disrupt vesicular traffic from the ER to the Golgi apparatus. Exo1 has an IC50 of about 20 μM, which inhibits exocytosis. Exo1 inhibits newly synthesized proteins like VSVGts-GFP, transferrin, and MHC class I from acquiring endoglycosidase H resistance[1].
体外研究 (In Vitro)
Exo1 修饰高尔基体 ARF1 的 GTP 酶活性。 Exo1 提供了一种干扰高尔基体活性的单独方法，因为它阻断了 BFA 阻断的部分膜事件，尽管它似乎针对不同的蛋白质靶点并且可能具有不同的副作用。 Exo1 破坏高尔基体结构，破坏从内质网到高尔基体的囊泡交通。 Exo1 的 IC50 约为 20 μM，可抑制胞吐作用。 Exo1 抑制新合成的蛋白质（如 VSVGts-GFP、转铁蛋白和 MHC I 类）获得内切糖苷酶 H 抗性[1]。
在BSC1细胞的VSVGts-GFP运输实验中，Exo1 抑制胞吐作用的IC₅₀约为20 µM [1]
Exo1 (100 µM) 能像BFA一样，诱导高尔基体内容物（如GalT-GFP）迅速重新分布回内质网，延时荧光显微镜观察证实此点 [1]
Exo1 处理导致ARF1-GFP和包被蛋白复合物I (COPI) 从高尔基体膜上快速解离，半衰期小于1分钟，与BFA类似 [1]
与BFA不同，Exo1 (100 µM) 在处理后2分钟内不诱导反式高尔基体网络相关包被蛋白（GGA3, AP-1, AP-3, 网格蛋白）的快速释放 [1]
与BFA不同，Exo1 不会使标记有内化转铁蛋白的内体膜形成管状结构 [1]
在体外交换实验中，Exo1 (100 µM) 不干扰几种ARF-GEF的鸟嘌呤核苷酸交换活性 [1]
用AlF₄ (AlCl₃ + NaF) 预处理会阻断 Exo1 (100 µM) 诱导野生型ARF1-GFP从高尔基体膜解离的能力 [1]
一个GTP酶缺陷的ARF1突变体 (ARF1[Q71L]-GFP) 对 Exo1 (100 µM) 的敏感性降低，仅表现出短暂且不完全的从高尔基体膜解离，并能阻止COPI的解离 [1]
表达ARF1[Q71L]可以挽救 Exo1 (100 µM) 存在下VSVGts-GFP从内质网的输出，并防止高尔基体塌陷 [1]
Exo1 (100 µM) 不诱导CtBP/Bars50的ADP-核糖基化，而BFA会诱导 [1]
Exo1 对高尔基体的影响是可逆的；化合物移除30分钟后，高尔基体标记物在核周区域重新出现 [1]
酶活实验
色氨酸荧光法测定GDP/GTP交换。[1]
如上所述，进行了用于测量GTP与ARF1D17结合的荧光测定，该GTP结合由在F190Y、A191S、S198M和P208D位置突变的ARF核苷酸结合位点开放器（ARNO）的sec7结构域刺激。用100 mM的Exo1或10 mM的BFA测定具有100 nM重组ARNO sec7结构域的ARF1D17（5 mM）。
鸟嘌呤核苷酸交换试验[1]
整个膜。将含有5 mg蛋白质和不同量化合物的高尔基体膜与4 mM肉豆蔻酰化重组ARF1和100 mM GTP[g-35S]在30°C下孵育15分钟。通过闪烁计数测量与过滤器结合的放射性，并用在没有重组ARF的情况下结合的量对结果进行校正（背景<20%）。 重组GFB1、BFA抑制ARF-GEF 1和ARF[1]
如前所述，在30°C下，在50 mM Hepes（pH 7.5）、100 mM KCl、1 mM MgCl2、1 mM DTT、1.5 mg/ml唑连素囊泡和4 mM 5'-[g-硫代]-三磷酸（GTP[gS]）的存在下进行反应，其中掺有[35S]GTP[gS]（1250 Ci/mmol），最终比活度为3´105 cpm/pmol。反应中含有DMSO（终浓度2.5%）或溶解在DMSO中的指定浓度的BFA或Exo1。通过加入2mM牛ARF3/1或2mM重组肉豆蔻酰化人ARF5引发反应。通过稀释到2ml冰冷的洗涤缓冲液（50mM Hepes，pH 7.5/100mM KCl/10mM MgCl2）中终止反应（15ml）。通过0.45 mM硝化纤维膜过滤样品，然后用2 ml洗涤缓冲液冲洗四次，对结合的ARF-GTP[gS]进行定量。在LS 6500中分析了3毫升液体闪烁剂中的干燥过滤器。在减去仅含有唑连蛋白囊泡、仅M1和仅ARF-GEF的测定中测量的背景值后，计算ARF上负载的GEF依赖性GTP的量。[1]
如所述纯化牛ARF（ARF3和ARF1的混合物）和重组肉豆蔻酰化人ARF5。如所述纯化含有BFA抑制的ARF-GEF 1的Sec7结构域的六组氨酸标记片段。通过将编码全长GBF1的片段亚克隆到表达GST的pCEP4的修饰版本中，构建了GST标记的GBF1形式。在含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解缓冲液（PBS/0.1%Triton X-100/1 mM PMSF）中提取表达GST-GBF1的HEK-293单层。按照制造商的说明，使用谷胱甘肽琼脂糖对GST-GFB1进行部分纯化。通过1500´g离心回收的珠子用2体积的裂解缓冲液洗涤两次，用不含洗涤剂的缓冲液洗涤一次。用含有10mM谷胱甘肽的洗涤缓冲液洗脱结合物质，并如前所述进行测定。
使用ARF-GEF的重组SEC7结构域进行了鸟嘌呤核苷酸交换实验。通过相对荧光强度的增加（例如使用mant-GTP）监测GTP加载到ARF1上。测试了 Exo1 (100 µM) 和 BFA (10 µM) 的效果。Exo1 对交换速率没有抑制作用，而BFA抑制了60% [1]
测试了 Exo1 对体外GTP酶激活蛋白刺激的ARF1-GTP水解的敏感性，发现不敏感 [1]
细胞实验
内切糖苷酶H（Endo H）敏感性[1]
在6-cm培养皿中生长的细胞（106）在40°C下用VSVGts-GFP腺病毒转导过夜。之后，在40°C下用140 mCi 35S反式（ICN）脉冲标记细胞30分钟，然后在32°C下与或不与100 mMExo1或5 mM BFA一起孵育不同时间，并对新合成的蛋白质进行内切H敏感性处理。
延时荧光显微镜[1]
将细胞铺在25mm玻璃盖玻片上，并用适当的GFP融合蛋白转染。在37°C下16-24小时后，在METAMORPH的控制下，使用滨松ER电荷耦合器件相机，用尼康E300倒置显微镜（20´0.45数值孔径物镜）在活细胞中采集37°C的荧光图像。对于解离实验，在添加Exo1之前10分钟和之后30分钟收集图像。为了测量与膜相关的GFP信号量，我们首先对每张图像应用阈值，这样只有高于细胞质背景的信号才被认为可以确定积分强度。第一幅图像中的信号（100%）用于对剩余时间点的值进行归一化。没有对可能的光漂白进行校正，因为在此期间没有检测到明显的变化。在大多数情况下，我们给出了三个独立实验中4-6个细胞的平均值。
高通量表型筛选：将BSC1细胞与VSVGts-GFP腺病毒混合，接种于384孔板。通过针转移机器人加入化合物（来自化合物库）。细胞在40°C（VSVGts-GFP无法输出的非许可温度）培养，然后转移到32°C以允许同步输出。固定后，通过自动荧光显微镜获取图像，并目视评分对VSVGts-GFP运输的抑制情况 [1]
剂量反应实验：表达VSVGts-GFP的BSC1细胞在40°C与不同浓度的 Exo1 孵育，然后转移到32°C培养3小时。测量VSVGts-GFP递送到细胞表面的相对效率以确定IC₅₀ [1]
延时荧光显微镜：用 Exo1 (100 µM) 或 BFA (5 µM) 处理表达细胞器标记物（如ARF1-GFP, GalT-GFP, GGA3-GFP）的BSC1细胞。间隔拍摄图像以监测蛋白质解离和细胞器形态变化（如高尔基体管状化和塌陷）的动态过程 [1]
内切糖苷酶H抗性实验：对细胞进行脉冲标记，在存在或不存在 Exo1 (100 µM) 或 BFA (5 µM) 的情况下进行追踪，然后裂解。免疫沉淀VSVGts-GFP并用内切糖苷酶H处理，以评估其获得抗性的情况，抗性表明其通过了高尔基体 [1]
免疫荧光和细胞器标记物分析：用针对各种细胞器标记物的抗体（如转铁蛋白用于内体，组织蛋白酶D用于溶酶体，GM130用于高尔基体基质）染色固定细胞，以评估 Exo1 作用的特异性 [1]
ARF1重装载实验：表达ARF1[Q71L]-GFP的细胞用BFA预处理以使其从高尔基体释放。BFA洗脱后，将细胞与对照培养基或 Exo1 (100 µM) 孵育，并随时间监测ARF1[Q71L]-GFP重新定位到高尔基体的情况 [1]
参考文献

[1]. Exo1: a new chemical inhibitor of the exocytic pathway. Proc Natl Acad Sci U S A. 2003 May 27;100(11):6469-74.
其他信息
2-[[(4-fluorophenyl)-oxymethyl]amino]benzoate belongs to the benzamide class of compounds.
Exo1 was identified from a phenotypic screening of 10,240 drug-like molecules that are inhibitors of the exocytotic pathway [1].
Its closely related analog 3-(4-fluorobenzoylamino)-benzoate (m-Exo1) did not show significant activity in this assay, indicating structure-activity specificity [1].
A small structure-activity relationship (SAR) study of 234 related compounds failed to identify a more effective analog [1].
Exo1 has been proposed as a complementary research tool to BFA because it affects some BFA-sensitive events (endoplasmic reticulum-Golgi transport), but with a different mechanism of action and lacks some of the effects of BFA (e.g., trans-Golgi network/endosome tubularization, CtBP/Bars50 ADP ribosylation). [1]
The proposed main mechanism is that Exo1 interferes with the ARF1 GTPase cycle downstream of GTP loading, possibly by enhancing the ineffective cycle of GTP hydrolysis or by preventing the formation of the effective ARF1-GTP-GAP-cargo-COPI complex required for vesicle formation. [1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C15H12FNO3
分子量
273.26
精确质量
273.08
元素分析
C, 65.93; H, 4.43; F, 6.95; N, 5.13; O, 17.56
CAS号
75541-83-2
相关CAS号
75541-83-2
PubChem CID
310557
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.298 g/cm3
沸点
333.9ºC at 760 mmHg
闪点
155.8ºC
LogP
2.937
tPSA
55.4
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
4
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
20
分子复杂度/Complexity
353
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O=C(OC)C1=CC=CC=C1NC(C2=CC=C(F)C=C2)=O
InChi Key
KIAPWMKFHIKQOZ-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C15H12FNO3/c1-20-15(19)12-4-2-3-5-13(12)17-14(18)10-6-8-11(16)9-7-10/h2-9H,1H3,(H,17,18)
化学名
methyl 2-[(4-fluorobenzoyl)amino]benzoate
别名
Exo1; Exo 1; 75541-83-2; 461681-88-9; methyl 2-[(4-fluorobenzoyl)amino]benzoate; Exo-1; methyl 2-(4-fluorobenzamido)benzoate; 2-(4-Fluorobenzoylamino)benzoic acid methyl ester; Benzoic acid, 2-[(4-fluorobenzoyl)amino]-, methyl ester; Exo-1
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: ~10mM
Water: N/A
Ethanol: N/A
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.6595 mL 18.2976 mL 36.5952 mL
5 mM 0.7319 mL 3.6595 mL 7.3190 mL
10 mM 0.3660 mL 1.8298 mL 3.6595 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
NCT Number Recruitment interventions Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT04491240 Completed Drug: EXO 1 inhalation
Drug: EXO 2 inhalation		 Covid19
COVID-19		 State-Financed Health Facility
"Samara Regional Medical Center Dinasty"		 July 20, 2020 Phase 1
Phase 2
生物数据图片

  • Exo1

    Exit of VSVGts-GFP from the ER is inhibited by Exo1.


    Exo1

    Exo1 does not induce the ADP-ribosylation of Bars50.2003 May 27;100(11):6469-74.

  • Exo1

    Exo1 induces tubulation and collapse of the Golgi apparatus but not endosomes and TGN.

  • Exo1

    Exo1 acts on ARF1-GTPase through a different mechanism compared with BFA.2003 May 27;100(11):6469-74.

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