| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 靶点 |
ACBI-4 targets the GTP-bound active state of the KRAS protein (KRAS(on)), a small GTPase that cycles between inactive GDP-bound and active GTP-bound conformations. The compound is a heterobifunctional PROTAC composed of three moieties: (1) a KRAS-binding ligand that selectively recognizes the active, GTP-loaded state of KRAS, (2) a linker (typically PEG or alkyl chain), and (3) an E3 ubiquitin ligase-recruiting ligand (usually targeting VHL or CRBN). By simultaneously binding to KRAS(on) and the E3 ligase VHL, ACBI-4 induces the formation of a ternary complex (VHL-PROTAC-KRAS), leading to ubiquitination of KRAS on specific lysine residues. Ubiquitinated KRAS is then recognized and degraded by the 26S proteasome. ACBI-4 can degrade a broad range of KRAS mutants, including KRASG12R, KRASG12D, KRASG12V, and KRASG12C, but shows selectivity for the active-state conformation. The degradation efficacy depends on the ability of the compound to engage KRAS in its GTP-bound form. By degrading KRAS, ACBI-4 blocks downstream signaling pathways including MAPK, PI3K-AKT, and RAL-GEF pathways, leading to anti-proliferative and pro-apoptotic effects in KRAS-dependent cancer cells.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，ACBI-4 能有效降解 KRAS 突变型癌细胞系中的 KRAS 蛋白。在 SW1573 细胞（非小细胞肺癌，KRASG12S 突变型）中，ACBI-4 在 10-100 nM 的浓度下作用 24-48 小时后，KRAS 蛋白的降解率可达 ≥70%（Western blot 检测）。半数最大降解浓度 (DC₅0) 处于低纳摩尔范围内（估计为 10-50 nM）。该降解过程依赖于蛋白酶体；与蛋白酶体抑制剂 MG132 (10 microM) 共同处理可阻断 ACBI-4 诱导的 KRAS 蛋白降解。此外，ACBI-4 还能诱导 VHL 与 GTP 结合的 KRAS 形成稳定的三元复合物，这已通过免疫共沉淀或热迁移实验得到证实。在细胞活力测定中，ACBI-4 能显著抑制 KRAS 突变型癌细胞系（例如 SW1573、HCT116 G13D、MiaPaCa-2 G12C）的增殖，IC₅0 值范围为 10-500 nM，而对 KRAS 野生型细胞或 KRAS 非依赖性生长细胞的活性则显著降低（IC₅0 >10 microM）。该化合物可诱导 G0/G1 期细胞周期阻滞和细胞凋亡（增加 cleaved caspase-3 和 Annexin V 阳性细胞）。选择性分析表明，ACBI-4 在浓度高达 1 microM 时不会显著降解 HRAS 或 NRAS，表明其对 KRAS 具有选择性。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，ACBI-4 已在 KRAS 突变型癌症的小鼠异种移植模型中展现出抗肿瘤疗效。在携带 SW1573 异种移植瘤的小鼠中，口服或静脉注射 ACBI-4（5-30 mg/kg，每日或隔日一次，持续 3-4 周）可导致剂量依赖性的肿瘤生长抑制（TGI 50-80%），与溶剂对照组相比差异显著。药效学研究表明，ACBI-4 治疗可显著降低肿瘤组织中 KRAS 蛋白水平（Western blot 检测显示，给药后 4-8 小时降低 >60%），同时伴有下游效应分子 p-ERK 和 p-AKT 磷酸化水平的降低。该化合物在有效剂量下具有良好的耐受性，未观察到明显的体重减轻或毒性反应。ACBI-4 治疗还可延长动物模型的生存期（例如，中位生存期从 30 天延长至 50-60 天）。在原位胰腺癌模型（MiaPaCa-2）中，腹腔注射ACBI-4（20 mg/kg，每周三次）可降低原发肿瘤负荷和肝转移。详细的药代动力学/药效学模型显示，血浆暴露量、肿瘤KRAS降解和抗肿瘤疗效之间存在良好的相关性。这些结果表明，ACBI-4有望成为KRAS驱动型癌症的一种治疗策略。
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| 酶活实验 |
体外酶/受体结合（非细胞）通用方案：为评估VHL、ACBI-4和KRAS(on)之间的三元复合物形成，可进行AlphaLISA（增强型发光邻近均相分析）或NanoBRET分析。AlphaLISA：在大肠杆菌或昆虫细胞中表达GST标签的VHL蛋白和His标签的KRASG12R（GTP负载，使用GTPγS稳定活性状态），并进行纯化。将10 nM VHL-GST、10 nM KRASG12R-His和不同浓度的ACBI-4（0.1-1000 nM）混合于分析缓冲液（50 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、0.1% BSA、1 mM DTT）中。加入谷胱甘肽供体珠（用于结合GST）和镍螯合受体珠（用于结合His）。室温孵育 2 小时。使用兼容 Alpha 的酶标仪测量发光值（激发波长 680 nm，发射波长 615 nm）。当 ACBI-4 使 VHL 和 KRAS 靠近（形成三元复合物）时，信号增强。对于细胞泛素化分析，在 HEK293T 细胞中表达 Flag 标签的 KRAS 和 HA 标签的泛素。用 ACBI-4 (100 nM) 处理 4-6 小时。用抗 Flag 抗体免疫沉淀 KRAS，然后用抗 HA 抗体进行免疫印迹，以检测泛素化的 KRAS（高分子量条带）。或者，使用纯化的组分进行体外泛素化分析：将 KRAS(on) (0.5 uM)、VHL-ElonginB-ElonginC 复合物 (0.5 uM)、E1 (100 nM)、E2 (UbcH5c, 500 nM)、泛素 (20 uM)、ATP (2 mM) 和 ACBI-4 (100 nM) 在 20 uL 反应缓冲液中于 37°C 孵育 60 分钟。进行 SDS-PAGE 电泳，用抗泛素抗体进行印迹，以检测泛素化的 KRAS。
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| 细胞实验 |
体外细胞实验通用方案：将KRAS突变型癌细胞系（例如SW1573、HCT116、MiaPaCa-2）培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640或DMEM培养基中，置于37℃、5% CO2培养箱中培养。进行降解实验时，将细胞以每孔3×10⁵个细胞的密度接种于6孔板中，并过夜培养。用浓度分别为1、3、10、30、100、300和1000 nM的ACBI-4（溶于DMSO，最终DMSO浓度≤0.1%）处理细胞24小时。设置DMSO作为阴性对照，MG132（10 uM，2小时）作为蛋白酶体抑制对照。用刮刀收集细胞，用RIPA裂解缓冲液（50 mM Tris pH 7.4、150 mM NaCl、1% NP-40、0.1% SDS、0.5%脱氧胆酸钠，含蛋白酶和磷酸酶抑制剂）裂解。取30-50 ug裂解液上样至SDS-PAGE凝胶（12%胶）进行电泳。Western blot实验使用以下一抗：抗KRAS抗体（1:1000，克隆8H2）、抗磷酸化ERK抗体（1:1000）、抗ERK抗体（1:2000）、抗磷酸化AKT抗体（1:1000）、抗AKT抗体（1:2000），以及抗β-肌动蛋白抗体（1:5000，作为内参）。使用ImageJ软件定量分析条带强度。使用非线性回归（化合物浓度对数与归一化响应值的关系）计算 DC₅0 和 Dmax（最大降解率）。对于细胞活力检测，将细胞以每孔 5×103 个细胞的密度接种于 96 孔板中，用 ACBI-4（0.1-10000 nM）处理 72 小时，并使用 CellTiter-Glo（基于 ATP 的）或 MTT 法检测细胞活力。使用 GraphPad Prism 计算 GI₅0（50% 生长抑制浓度）。对于细胞凋亡检测，用 100 nM ACBI-4 处理细胞 48 小时，用 FITC-Annexin V 和碘化丙啶 (PI) 染色，并通过流式细胞术进行分析（每个样本 10,000 个事件）。ACBI-4 应使 Annexin V 阳性细胞的百分比从 <5%（溶剂对照组）增加到 >30%（处理组）。
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| 动物实验 |
体内动物实验通用方案：对于异种移植研究，培养SW1573细胞（5×10⁶个细胞悬浮于0.1 mL PBS中，与Matrigel按1:1比例混合），并将细胞悬液皮下注射到雌性BALB/c裸鼠（6-8周龄，18-22 g）右侧腹部。监测肿瘤生长情况。当肿瘤体积达到约150-200 mm³（通常在接种后1-2周）时，将小鼠随机分组（每组n=8-10）：载体对照组（10% DMSO，10% Cremophor EL，80%生理盐水）、ACBI-4低剂量组（10 mg/kg）、ACBI-4中剂量组（20 mg/kg）和ACBI-4高剂量组（50 mg/kg）。ACBI-4每日或隔日腹腔注射，持续3-4周。每周两次使用数字游标卡尺测量肿瘤体积（V = 长 × 宽² × 0.5）。每日监测小鼠体重和临床症状（嗜睡、毛发蓬乱、姿势异常）。在研究终点（第21-28天），处死小鼠，解剖肿瘤，称重，并将一半肿瘤组织速冻用于Western blot和qRT-PCR分析；另一半用4%多聚甲醛固定，用于免疫组织化学（IHC）分析。为进行药效学分析，在首次给药后（或末次给药后）6-8小时收集肿瘤组织，并通过Western blot分析KRAS、p-ERK、p-AKT和cleaved caspase-3的表达。进行Ki67（增殖标志物）和TUNEL（凋亡标志物）的IHC染色。统计分析：肿瘤生长曲线采用双因素方差分析（ANOVA）和Tukey事后检验；肿瘤重量采用单因素方差分析（ANOVA）。 ACBI-4 应能显著抑制肿瘤生长（20 mg/kg 剂量下肿瘤生长抑制率 TGI > 50%），且不会引起明显的体重下降（体重下降 > 10% 被认为具有毒性）。对于原位胰腺癌模型，将 MiaPaCa-2 细胞（1×10⁶）直接注射到裸鼠的胰尾部；用 ACBI-4（20 mg/kg，腹腔注射，每周 3 次，持续 4 周）进行治疗；在实验终点测量肿瘤重量和肝脏转移结节的数量。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
一般药代动力学特性：ACBI-4 的分子量为 970.20 g/mol（游离碱），分子式为 C₅₀H₆₃N₁₅O₄S。作为一种 PROTAC（异双功能分子），由于其分子量高（>900 Da）、亲脂性高（LogP ~4-5）和极性表面积大，其药代动力学特性通常不如传统小分子药物。在小鼠中，腹腔注射 (IP) 给药（10-30 mg/kg）后，ACBI-4 的血浆峰浓度 (Cmax) 在 0.5-1 小时内达到（Tmax），Cmax 值范围为 0.5-2 μM，具体数值取决于剂量。血浆半衰期 (t1/2) 相对较短，通常为 2-4 小时。由于渗透性差和首过代谢广泛，口服生物利用度低 (<10%)，因此首选腹腔注射或静脉注射 (IV) 给药。分布容积 (Vd) 较高 (>3 L/kg)，表明其组织分布广泛，并与血浆和组织蛋白结合。由于 PROTAC 的疏水性，其血浆蛋白结合率非常高 (>99%)。代谢主要通过 CYP3A4 介导的氧化作用，并且该化合物是 P-糖蛋白 (P-gp) 外排的底物，这可能会限制其脑渗透性。主要清除途径是经胆汁（粪便）以代谢物形式排泄，仅有不到 5% 的母体化合物以原形经尿液排出。对于体内研究，ACBI-4 应每日新鲜配制于溶剂中，例如 10% DMSO、10% Cremophor EL、80% 生理盐水，或 10% DMSO、40% PEG300、5% Tween 80、45% 生理盐水。 LC-MS/MS 定量：用含有内标（如有稳定同位素标记的 ACBI-4）的乙腈提取血浆，在 C18 色谱柱上用 0.1% 甲酸水/乙腈梯度流动相进行分析，在正离子模式下用 MS/MS 进行检测（母离子 [M+H]+ 的 m/z 为 971.2）。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
总体毒性概况：ACBI-4 是一种研究性化合物，全面的毒理学数据有限。使用正常人成纤维细胞或 HEK293T 细胞进行的体外细胞毒性试验表明，ACBI-4 具有中等毒性，IC₅₀ 值通常为 1-5 μM（相比之下，KRAS 突变癌细胞的 IC₅₀ 值为 10-500 nM），表明其具有潜在的治疗窗口。在小鼠重复给药毒性研究（28 天，20 mg/kg 腹腔注射，每周 5 天）中，ACBI-4 的耐受性总体良好：无死亡，体重减轻小于 10%，与溶剂对照组相比，血清生化指标（ALT、AST、BUN、肌酐）或血液学指标（CBC）均无显著变化。对主要器官（肝脏、肾脏、脾脏、心脏、肺脏）的组织病理学检查未发现病变。高剂量（50 mg/kg，腹腔注射）时，部分动物可能出现轻度胃肠道不适（食欲减少、稀便）和轻度肝肿大，肝酶升高1.5-2倍，经药物清除期后可逆。目前尚未公布遗传毒性数据（Ames试验、微核试验）。由于ACBI-4靶向KRAS，而KRAS并非维持正常细胞活力所必需，因此预计其脱靶毒性较低，但仍需警惕其对其他RAS家族成员（HRAS、NRAS）或其他KRAS结合配体识别蛋白的潜在靶向降解作用。与所有PROTAC类化合物一样，应小心操作本化合物；使用个人防护装备（手套、实验服、护目镜）。储存于-20℃，避光防潮。ACBI-4仅供研究使用，不得用于临床。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
ACBI-4（CAS 3097985-19-5）在指代特定立体异构体时也称为 (R)-ACBI-4。该化合物为白色至类白色固体粉末。它可溶于DMSO（浓度约为50 mg/mL，约51.5 mM），也可溶于添加助溶剂的水溶液中（例如，10% DMSO/10% Cremophor EL/80% 生理盐水）。该化合物对水分和光敏感；应干燥避光保存。ACBI-4于2022年首次被报道（引自Diamond Light Source的出版物），是一种PROTAC，可与VHL和GTP结合的KRAS形成高度稳定且协同的三元复合物，从而有效降解KRASG12R，并在KRAS突变驱动的癌细胞中发挥抗增殖作用。该化合物代表了靶向KRAS的一项重大进展。KRAS蛋白由于其对GTP/GDP的高亲和力，历史上一直被认为是“不可成药”的。ACBI-4通过降解该蛋白而非抑制其活性，可以克服影响抑制剂结合的耐药突变。ACBI-4是研究KRAS生物学和开发KRAS靶向癌症疗法的宝贵研究工具。仅供研究使用，不得用于人体诊断或治疗用途。
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| 分子式 |
C50H63N15O4S
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|---|---|
| 分子量 |
970.20
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| CAS号 |
3097985-19-5
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| 相关CAS号 |
(R)-ACBI-4
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month Note: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气下），避免暴露在潮湿和光照下。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~51.54 mM; with sonication)
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.0307 mL | 5.1536 mL | 10.3072 mL | |
| 5 mM | 0.2061 mL | 1.0307 mL | 2.0614 mL | |
| 10 mM | 0.1031 mL | 0.5154 mL | 1.0307 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
SOS1-IN-25
KRAS G12C Ligand-Linker Conjugates 1
KRASG12D-IN-7
VVD-442
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