| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
VVD-442 targets the phosphatidylinositol 3-kinase alpha (PI3Kalpha, p110alpha) isoform and, more specifically, the interaction between RAS (KRAS, HRAS, or NRAS) and PI3K. The RAS/PI3K signaling axis is crucial for cell proliferation, survival, and metabolism. When RAS is activated by GTP binding, it binds to the RAS-binding domain (RBD) of PI3K p110alpha, recruiting PI3K to the plasma membrane and activating its lipid kinase activity. PI3K then generates phosphatidylinositol (3,4,5)-trisphosphate (PIP3), which activates AKT and downstream effectors (mTORC1, GSK3beta, FOXO). VVD-442 covalently modifies cysteine 242 in the RBD of p110alpha. This prevents RAS from binding to PI3K, thus blocking PI3K activation while leaving the catalytic activity of PI3K intact. By uncoupling PI3K from RAS signaling, VVD-442 selectively inhibits PI3K activation downstream of RAS without affecting other PI3K activators (e.g., receptor tyrosine kinases). The target is the p110alpha subunit of PI3K and the RAS-PI3K interaction interface.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，VVD-442 能有效抑制 RAS 驱动的 PI3K 活化。在利用纯化的重组 PI3K p110α（野生型或 C242S 突变型）和 RAS-GTP 进行的生化实验中，VVD-442 (0.01-10 uM) 能抑制 RAS 刺激的 PI3K 活性（通过 PIP3 生成量测定），IC₅0 值约为 50-200 nM。对于 C242S 突变体（半胱氨酸被丝氨酸取代），VVD-442 没有抑制作用，证实其活性需要与 C242 位点共价结合。在基于细胞的实验中，VVD-442 (0.1-10 uM) 可抑制具有活性 RAS 突变的癌细胞系（例如 HCT116 KRASG13D、A549 KRASG12S、MDA-MB-231 KRASG13D）中的 PI3K 信号通路。Western blot 检测显示，VVD-442 处理 4-6 小时后，p-AKT (Ser473) 和 p-S6K (Thr389) 的水平呈剂量依赖性降低，IC₅0 值为 0.5-2 uM。在 PI3K 被 RTK 激活的细胞（例如 HER2 扩增细胞、BT474）中，VVD-442 对 p-AKT 的影响极小（IC₅0 >10 uM），表明其对 RAS 依赖性 PI3K 激活具有选择性。在细胞活力检测（72 小时，MTT 法）中，VVD-442 可抑制 RAS 突变细胞系的增殖，IC₅0 为 1-5 uM，而对 RAS 野生型细胞的影响极小（IC₅0 >20 uM）。VVD-442 在 5 uM 浓度下可诱导 RAS 突变细胞凋亡（Annexin V 阳性和 cleaved caspase-3）。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，VVD-442 已在 RAS 突变型癌症的小鼠异种移植模型中进行了评估。在携带 HCT116 (KRASG13D) 异种移植瘤的小鼠中，与载体组相比，口服 VVD-442（30 mg/kg，每日一次，持续 21 天）可显著抑制肿瘤生长（TGI 降低 60-70%）。末次给药后 4 小时对肿瘤组织进行药效学分析显示，p-AKT (Ser473) 和 p-ERK 水平降低（降低 50-70%），Ki67 水平降低（增殖指数降低 40-50%），以及 cleaved caspase-3 水平升高（凋亡增加）。在 KRASG12D 驱动的胰腺癌异种移植瘤模型 (Panc02.13) 中，VVD-442（50 mg/kg，口服，每日一次）在 28 天后可使肿瘤体积减少 50%。在乳腺癌模型（MDA-MB-231、KRASG13D）中，VVD-442（30 mg/kg，口服）单药治疗活性有限（TGI 30-40%），但与曲美替尼（MEK抑制剂，1 mg/kg）联合用药可产生协同抑制作用（TGI 80-85%）。这些剂量下，小鼠体重未受到显著影响（体重减轻<10%）。治疗小鼠未观察到明显的毒性反应。该化合物口服吸收良好。这些结果表明，VVD-442有望成为靶向RAS驱动型癌症的有效药物。
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| 酶活实验 |
体外酶/受体结合（非细胞）通用方案：PI3K活性测定，配制反应缓冲液：40 mM HEPES（pH 7.4）、1 mM DTT、0.1% BSA 和 10 mM MgCl2。将重组PI3K p110α (10 nM) 与 VVD-442 (0.01-10 uM，溶于DMSO，DMSO终浓度<0.5%) 在缓冲液中于25℃孵育15分钟。加入活性RAS-GTP（KRASG12C负载GTPγS，100 nM），预孵育10分钟。加入25 uM ATP和25 uM磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸（PIP2；以脂质体形式）启动反应。于37℃孵育30分钟。加入 100 uL 0.5 M EDTA 终止反应。使用竞争性 PIP3 ELISA 试剂盒或 ADP-Glo 法定量 PIP3 的生成。为确定共价结合，将 PI3K p110α (100 nM) 与 VVD-442 (1 uM) 处理 1 小时，然后进行质谱分析，检测肽段上含有 C242 的 +608 Da 加合物（经胰蛋白酶消化后）。对于竞争性实验，预先用 N-乙基马来酰亚胺 (NEM, 100 uM) 孵育 PI3K 以封闭 C242，然后加入 VVD-442；活性不应受到抑制，证实了对 C242 的选择性。为研究结合动力学，使用固定在链霉亲和素芯片上的生物素化 PI3K p110α 进行表面等离子共振 (SPR) 分析。将 VVD-442 (0.1-10 uM) 流过芯片，并计算 Kd (估计 <100 nM)。
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| 细胞实验 |
体外细胞实验通用方案：将HCT116 (KRASG13D)细胞培养于含10% FBS的DMEM培养基中。以3×10⁵个细胞/孔的密度接种于6孔板中，并过夜培养。用不同浓度的VVD-442（0、0.3、1、3、10 uM）处理细胞4-6小时。用含有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解缓冲液裂解细胞。取30 ug蛋白进行SDS-PAGE电泳（8-10%凝胶），并用以下抗体进行免疫印迹：抗磷酸化AKT（Ser473）、总AKT、抗磷酸化S6K（Thr389）、总S6K、抗磷酸化ERK（Thr202/Tyr204）、总ERK和抗β-肌动蛋白。使用ImageJ软件定量分析条带强度。为检测细胞活力，将细胞接种于96孔板（5×103个细胞/孔），用VVD-442（0.01-50 uM）处理72小时，并进行MTT实验。使用非线性回归计算IC₅0值。为检测细胞凋亡，用5 uM VVD-442处理细胞48小时，用FITC-Annexin V和PI染色，并通过流式细胞术分析（10,000个事件）。为研究协同作用，用VVD-442（1-5 uM）+曲美替尼（0.1-1 uM）处理72小时，使用CompuSyn软件计算联合指数（CI）。为研究突变选择性，比较HCT116（KRAS突变型）细胞与HCT116（野生型KRAS）细胞（使用CRISPR校正细胞或同源细胞对）中p-AKT的水平。 VVD-442 仅在 KRAS 突变细胞中降低 p-AKT 水平。为了检测 VVD-442 在细胞中的靶点结合情况，可使用生物素标记的 VVD-442 探针从经 VVD-442 (10 uM, 4 h) 处理的细胞裂解液中捕获 PI3K p110α，然后通过蛋白质印迹法进行检测。
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| 动物实验 |
体内动物实验通用方案：异种移植研究采用雌性BALB/c裸鼠（6-8周龄，18-22 g）。将HCT116细胞（5×10⁶个，溶于0.1 mL PBS/Matrigel）皮下注射至小鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分为三组（每组n=8）：载体组（5% DMSO，10% Cremophor EL，85%生理盐水）、VVD-442组（10、30、50 mg/kg）和阳性对照组（曲美替尼1 mg/kg，口服）。VVD-442每日灌胃给药，持续21天。每周测量两次肿瘤体积（V = 长 × 宽² × 0.5）。每日监测小鼠体重和临床体征。在实验终点（第21天），处死小鼠，收集肿瘤组织，称重，并将一半组织速冻用于Western blot分析（p-AKT、p-ERK、cleaved caspase-3），另一半用福尔马林固定用于IHC分析（Ki67、TUNEL）。为进行PK/PD相关性研究，另取一组小鼠，单次口服给予VVD-442（30 mg/kg），分别于0、1、2、4、8、12和24小时处死。收集血浆和肿瘤组织；采用LC-MS/MS分析VVD-442浓度（参见PK部分），并采用Western blot分析p-AKT水平。联合用药研究中，小鼠接受VVD-442（30 mg/kg）+曲美替尼（1 mg/kg）治疗21天。生存期研究中，治疗直至肿瘤体积达到2000 mm³。统计分析：采用双因素方差分析分析肿瘤生长曲线，采用对数秩检验分析生存率。VVD-442 剂量为 30 mg/kg 时，肿瘤生长指数 (TGI) 应大于 60%，且无明显体重下降。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
一般药代动力学特性：VVD-442 的分子量为 607.94 g/mol，分子式为 C23H2₅BrClFN2O₅S2，LogP 值约为 4-5（亲脂性）。小鼠口服给药（30 mg/kg）后，该化合物迅速吸收，达峰时间 (Tmax) 为 1-2 小时，血药浓度峰值 (Cmax) 为 2-5 μM。口服生物利用度中等（30-50%）。血浆半衰期 (t1/2) 为 3-6 小时。分布容积 (Vd) 中等至高（2-4 L/kg），表明其组织分布良好。血浆蛋白结合率高（>95%）。主要代谢途径为 CYP3A4 和 CYP2D6（氧化、脱卤）。主要清除途径为胆汁排泄（粪便）。不足 10% 的药物以原形经尿液排出。该化合物可溶于DMSO（>20 mg/mL），可配制成5% DMSO/10% Cremophor EL/85%生理盐水溶液或0.5%甲基纤维素溶液用于口服给药。LC-MS/MS定量分析时，用含内标（例如VVD-442-d4）的乙腈提取血浆，在C18色谱柱上分离（0.1%甲酸水溶液/乙腈梯度洗脱），在正离子模式下检测（母离子[M+H]+ m/z 608 → 子离子m/z 425）。定量下限（LLOQ）为1-5 ng/mL。VVD-442粉末在-20℃下至少可稳定保存2年；DMSO储备液（10-50 mM）应储存于-80℃。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
总体毒性概况：VVD-442 是一种研究性化合物，毒理学数据有限。体外研究表明，其对正常人成纤维细胞的细胞毒性较低（IC₅₀ > 20 μM，MTT 72 小时）。在小鼠急性毒性研究中，单次口服 200 mg/kg 剂量未引起死亡或可观察到的毒性症状（无嗜睡、无癫痫发作）。LD₅₀ > 500 mg/kg。在一项为期 14 天的重复给药口服毒性研究（10、30、100 mg/kg/天）中，未观察到不良反应剂量 (NOAEL) 为 30 mg/kg/天。在 100 mg/kg/天剂量下，观察到轻度体重减轻（5-10%）、肝转氨酶轻度升高（ALT、AST 为正常值上限的 2 倍）以及轻度肝细胞空泡化（组织病理学检查）。在任何剂量下均未观察到对肾脏（BUN、肌酐）、心脏或血液系统的影响。目前尚无遗传毒性（Ames试验）数据。由于该化合物靶向RAS-PI3K相互作用，而该相互作用在基础条件下并非维持正常细胞活力所必需（KRAS对胚胎发育至关重要，但对成体组织稳态并非必需），因此预计靶向毒性较低。应遵循标准实验室安全防护措施（佩戴手套、实验服、护目镜）。VVD-442并非管制物质。请在-20℃下干燥避光保存。仅供研究使用，不得用于人体治疗。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
VVD-442 又称化合物 VVD-442。其分子式为 C23H2₅BrClFN2O₅S2，分子量为 607.94。该化合物含有一个溴苯基和一个磺酰基，可与 PI3K p110α 中的 C242 位点反应。它为白色至类白色粉末。HPLC 纯度 >98%。溶解度：DMSO ≥20 mg/mL，乙醇 ≥5 mg/mL，水 <0.1 mg/mL。VVD-442 是一种用于研究 RAS-PI3K 信号通路的科研工具。文献中（可能源于药物化学研究）将其描述为 RAS-PI3K 相互作用的共价抑制剂。目前尚未获准用于临床。该化合物对于解析RAS依赖性PI3K激活在癌症中的作用以及验证RAS-PI3K界面作为治疗靶点具有重要价值。仅供研究使用。
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| 分子式 |
C23H25BRCLFN2O5S2
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| 分子量 |
607.94
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| CAS号 |
3055318-88-9
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| 外观&性状 |
Typically exists as solids at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6449 mL | 8.2245 mL | 16.4490 mL | |
| 5 mM | 0.3290 mL | 1.6449 mL | 3.2898 mL | |
| 10 mM | 0.1645 mL | 0.8224 mL | 1.6449 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
SOS1-IN-25
KRAS G12C Ligand-Linker Conjugates 1
ACBI-4
KRASG12D-IN-7
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