Gamabufotalin

别名: 和蟾蜍他灵; 日蟾蜍他灵;日蟾蜍他灵;和蟾毒他灵;日蟾蜍他灵对照品;日蟾毒它灵;日蟾蜍他灵,和蟾蜍他灵;日蟾蜍他灵,和蟾蜍他灵 Gamabufotalin
目录号: V30502 纯度: ≥98%
Gamabufotalin (Gamabufagin) 是蟾蜍毒液中的主要蟾蜍甾烯,由于其稳定性和低毒性而广泛应用于癌症相关研究。
Gamabufotalin CAS号: 465-11-2
产品类别: New2
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
Gamabufotalin (Gamabufagin) 是蟾蜍毒液中的主要蟾蜍甾烯,由于其稳定性和低毒性而广泛应用于癌症相关研究。 Gamabufotalin 通过抑制 VEGFR-2 信号通路的激活来抑制血管生成。
生物活性&实验参考方法
靶点
- Gamabufotalin targets the IKKβ/NF-κB signaling pathway [1]
- Gamabufotalin targets the STAT3/Mcl-1 signaling pathway [2]
- Gamabufotalin targets ATP1A3 (specifically the Thr794 residue) and the AQP4 pathway [3]
- Gamabufotalin targets the VEGFR-2 signaling pathway (IC50 for VEGFR-2 kinase inhibition: ~1.5 μM) [4]
体外研究 (In Vitro)
- 肺癌细胞(A549、H460)实验:华蟾毒它灵(Gamabufotalin)(0.5–5 μM)剂量依赖性抑制细胞增殖(IC50:~2.5 μM,MTT法)。它通过抑制IKKβ磷酸化及NF-κB核转位(免疫荧光),下调COX-2蛋白和mRNA表达(western blot、RT-PCR);5 μM 华蟾毒它灵(Gamabufotalin)使COX-2 mRNA较对照组减少约70% [1]
- 乳腺癌细胞(MDA-MB-231、MCF-7)实验:华蟾毒它灵(Gamabufotalin)(1–4 μM)敏化细胞对TRAIL诱导的凋亡。3 μM时,通过抑制STAT3磷酸化及下调Mcl-1(western blot),使TRAIL诱导的凋亡率增加约45%(Annexin V-FITC/PI染色);≤3 μM 华蟾毒它灵(Gamabufotalin)单独使用对细胞活力无显著影响 [2]
- 胶质母细胞瘤细胞(U87、U251)实验:华蟾毒它灵(Gamabufotalin)(0.5–3 μM)增强替莫唑胺(TMZ)敏感性。1.8 μM 华蟾毒它灵(Gamabufotalin)联合处理时,TMZ的IC50从~80 μM降至~25 μM(MTT法)。它降低ATP1A3表达并激活AQP4通路(western blot),促进TMZ诱导的DNA损伤 [3]
- 人脐静脉内皮细胞(HUVEC)实验:华蟾毒它灵(Gamabufotalin)(0.5–4 μM)抑制VEGF诱导的血管生成。2 μM时,通过抑制VEGFR-2磷酸化及下游AKT/ERK信号(western blot),使管形成减少约60%(管形成实验)、细胞迁移减少约55%(Transwell实验);抑制HUVEC增殖的IC50:~2 μM [4]
体内研究 (In Vivo)
- 裸鼠肺癌移植瘤(A549)实验:华蟾毒它灵(Gamabufotalin)(5、10 mg/kg,腹腔注射,每2天1次,持续21天)较对照组减少肿瘤体积约65%、重量约60%(卡尺测量、称重)。肿瘤组织中p-IKKβ、核NF-κB及COX-2表达下调(免疫组化、western blot)[1]
- 裸鼠胶质母细胞瘤移植瘤(U87)实验:小鼠接受华蟾毒它灵(Gamabufotalin)(4、8 mg/kg,腹腔注射,每2天1次)+ TMZ(20 mg/kg,口服,每日1次)处理28天。高剂量联合组较单独TMZ组减少肿瘤体积约75%;肿瘤组织中ATP1A3降低、AQP4升高(western blot)[3]
- 鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)及裸鼠乳腺癌移植瘤(MDA-MB-231)实验:CAM模型中,华蟾毒它灵(Gamabufotalin)(2、4 mg/kg)使血管密度减少约40%、60%(显微镜观察)。移植瘤模型中,4 mg/kg 华蟾毒它灵(Gamabufotalin)(腹腔注射,每2天1次,持续21天)较对照组减少肿瘤微血管密度约55%(CD31免疫组化)[4]
酶活实验
- IKKβ激酶活性实验:重组人IKKβ与ATP(10 μM)、IKKβ特异性底物肽及华蟾毒它灵(Gamabufotalin)(0.5–5 μM)在37°C孵育45分钟,加入终止缓冲液终止反应,ELISA检测磷酸化底物;华蟾毒它灵(Gamabufotalin)抑制IKKβ活性的IC50约1.8 μM [1]
- VEGFR-2激酶活性实验:重组人VEGFR-2(激酶结构域)与ATP(5 μM)、荧光底物及华蟾毒它灵(Gamabufotalin)(0.5–4 μM)在37°C孵育60分钟,检测磷酸化底物的荧光强度(激发光485 nm,发射光535 nm);华蟾毒它灵(Gamabufotalin)抑制VEGFR-2的IC50约1.5 μM [4]
细胞实验
- 肺癌细胞(A549)实验:96孔板接种细胞(5×10³个/孔),用华蟾毒它灵(Gamabufotalin)(0.5–5 μM)处理72小时,MTT法测活力。6孔板细胞用5 μM 华蟾毒它灵(Gamabufotalin)处理24小时,western blot分析p-IKKβ、NF-κB、COX-2,免疫荧光检测NF-κB核转位 [1]
- 乳腺癌细胞(MDA-MB-231)凋亡实验:6孔板细胞用华蟾毒它灵(Gamabufotalin)(1–4 μM)预处理12小时,再加入TRAIL(10 ng/mL)处理24小时。Annexin V-FITC/PI染色+流式细胞术检测凋亡,western blot分析p-STAT3、Mcl-1 [2]
- 胶质母细胞瘤细胞(U87)药敏实验:96孔板细胞用华蟾毒它灵(Gamabufotalin)(0.5–3 μM)+ TMZ(10–100 μM)处理72小时,MTT法计算IC50。细胞用1.8 μM 华蟾毒它灵(Gamabufotalin)处理24小时后裂解,western blot分析ATP1A3、AQP4 [3]
- HUVEC血管生成实验:Matrigel包被的96孔板接种HUVEC,用华蟾毒它灵(Gamabufotalin)(0.5–4 μM)+ VEGF(20 ng/mL)处理6小时,显微镜计数管形成数量。HUVEC用华蟾毒它灵(Gamabufotalin)处理12小时后接种于Transwell上室(8 μm孔径),下室加VEGF,染色计数迁移细胞 [4]
动物实验
肺癌异种移植(A549)方案:将1×10⁷个A549细胞皮下注射到4-6周龄的BALB/c裸鼠体内。当肿瘤体积达到约100 mm³时,每组6只小鼠(n=6)腹腔注射Gamabufotalin(5、10 mg/kg),每2天一次,持续21天。每3天测量一次肿瘤体积(长×宽²/2);处死小鼠,称量肿瘤重量,并收集组织进行分析[1]
- 胶质母细胞瘤异种移植(U87)方案:将2×10⁶个U87细胞皮下注射到裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 150 mm³ 时,小鼠(每组 n=6)接受 Gamabufotalin(4、8 mg/kg,腹腔注射,每 2 天一次)+ TMZ(20 mg/kg,口服,每日一次)治疗,持续 28 天。测量肿瘤体积,并收集组织进行蛋白质印迹分析 [3]
- 乳腺癌异种移植(MDA-MB-231)方案:小鼠皮下注射 1×10⁷ 个 MDA-MB-231 细胞。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时,小鼠接受 Gamabufotalin 4 mg/kg,腹腔注射,每 2 天一次,持续 21 天。切除肿瘤,并通过 CD31 免疫组化检测微血管密度 [4]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
体外毒性:≤5 μM 的Gamabufotalin对正常人肺成纤维细胞 (MRC-5) 或 HUVEC 细胞无显著细胞毒性(MTT 法,细胞活力 >80%)[1,4]
- 体内毒性:在裸鼠实验(21-28 天)中,≤10 mg/kg 的Gamabufotalin未引起显著体重减轻(<5% vs. 对照组)或心脏、肝脏、肾脏的异常病理变化(苏木精-伊红染色)[1,3,4]
参考文献

[1]. Gamabufotalin, a bufadienolide compound from toad venom, suppresses COX-2 expression through targeting IKKβ/NF-κB signaling pathway in lung cancer cells. Mol Cancer. 2014 Aug 31;13:203.

[2]. Bufadienolide compounds sensitize human breast cancer cells to TRAIL-induced apoptosis via inhibition of STAT3/Mcl-1 pathway. Apoptosis. 2011 Apr;16(4):394-403.

[3]. Gamabufotalin induces a negative feedback loop connecting ATP1A3 expression and the AQP4 pathway to promote temozolomide sensitivity in glioblastoma cells by targeting the amino acid Thr794. Cell Prolif. 2020;53(1):e12732.

[4]. Gamabufotalin, a major derivative of bufadienolide, inhibits VEGF-induced angiogenesis by suppressing VEGFR-2 signaling pathway. Oncotarget. 2016;7(3):3533-3547.

其他信息
γ-布福苷是一种甾类内酯。它在功能上与蟾蜍内酯相关。
据报道,在蟾蜍(Bufo bufo)、绿蟾蜍(Bufotes viridis)和其他有相关数据的生物体中均发现了加马蟾蜍毒素(Gamabufotalin)。
- 加马蟾蜍毒素是一种从蟾蜍毒液(Venenum Bufonis)中分离得到的蟾蜍二烯内酯化合物[1]
- 加马蟾蜍毒素通过阻断STAT3/Mcl-1抗凋亡通路,增强TRAIL诱导的乳腺癌细胞凋亡,从而克服TRAIL耐药性[2]
- 加马蟾蜍毒素通过负反馈环路促进胶质母细胞瘤对替莫唑胺的敏感性:靶向ATP1A3 Thr794 → 减少ATP1A3 → 激活AQP4 → 增强替莫唑胺诱导的DNA损伤[3]
- 加马蟾蜍毒素具有抗血管生成作用通过抑制 VEGFR-2/AKT/ERK 信号通路,支持其在血管生成依赖性肿瘤治疗中的潜力[4]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C24H34O5
分子量
402.5238
精确质量
402.24
CAS号
465-11-2
PubChem CID
259803
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.3±0.1 g/cm3
沸点
595.8±50.0 °C at 760 mmHg
闪点
203.4±23.6 °C
蒸汽压
0.0±3.8 mmHg at 25°C
折射率
1.612
LogP
1.99
tPSA
90.9
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
5
可旋转键数目(RBC)
1
重原子数目
29
分子复杂度/Complexity
773
定义原子立体中心数目
9
SMILES
C[C@]12CC[C@@H](C[C@H]1CC[C@@H]3[C@@H]2[C@@H](C[C@]4([C@@]3(CC[C@@H]4C5=COC(=O)C=C5)O)C)O)O
InChi Key
FMTLOAVOGWSPEF-KJRPADTMSA-N
InChi Code
InChI=1S/C24H34O5/c1-22-9-7-16(25)11-15(22)4-5-18-21(22)19(26)12-23(2)17(8-10-24(18,23)28)14-3-6-20(27)29-13-14/h3,6,13,15-19,21,25-26,28H,4-5,7-12H2,1-2H3/t15-,16+,17-,18-,19-,21-,22+,23-,24+/m1/s1
化学名
5-[(3S,5R,8R,9S,10S,11R,13R,14S,17R)-3,11,14-trihydroxy-10,13-dimethyl-1,2,3,4,5,6,7,8,9,11,12,15,16,17-tetradecahydrocyclopenta[a]phenanthren-17-yl]pyran-2-one
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~50 mg/mL (~124.22 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.4843 mL 12.4217 mL 24.8435 mL
5 mM 0.4969 mL 2.4843 mL 4.9687 mL
10 mM 0.2484 mL 1.2422 mL 2.4843 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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