GW2580 (SC203877)

c-FMS (IC50 = 60 nM)
Colony-Stimulating Factor 1 Receptor (cFMS, CSF-1R) (IC50 = 1.6 nM for recombinant human cFMS kinase); no significant activity against EGFR, MET, VEGFR2 (IC50 > 1000 nM) [1]
- Confirmed cFMS as primary target (tumor-infiltrating myeloid cell model; no additional IC50 values) [2]
- Confirmed cFMS targeting (arthritic rat model; consistent with [1]’s IC50) [3]

GW2580 在体外以 0.06 μM 完全抑制人 cFMS 激酶。 GW2580抑制CSF-1刺激的M-NFS-60骨髓肿瘤细胞、血清刺激的NSO骨髓肿瘤细胞、CSF-1刺激的新鲜分离的人单核细胞和VEGF刺激的人脐静脉血管内皮细胞的生长，IC50为0.33、13.5，分别为 0.47 和 12 μM。 1 μM GW2580 完全抑制 CSF-1 诱导的小鼠 M-NFS-60 骨髓细胞和人单核细胞的生长，并完全抑制人破骨细胞、大鼠颅骨和大鼠胎儿长骨培养物中的骨降解。 GW2580 抑制用 10 ng/mL 刺激的 RAW264.7 鼠巨噬细胞中的 CSF1R 磷酸化，IC50 约为 10 NM。 GW2580 还抑制 TRKA 活性，IC50 为 0.88 μM。激酶测定：将 10 μM 酶、100 μM ATP 和 5 mM MgCl2 在 50 mM Tris HCL 中室温孵育 90 分钟，通过自磷酸化激活酶。酶反应在 Biomek 2000 上使用圆底聚苯乙烯 96 孔板在 45 μL 体积中进行。将 1 μL DMSO 中的化合物或单独的 DMSO 添加到含有 30 μL 1.5× 底物反应混合物的每个孔中，其中含有50 mM Mops（3-[N-吗啡啉]丙磺酸），pH 7.5，15 mM MgCl2，6 μM 肽底物，生物素-EAIYAPFAKKK-NH2 7.5 mM DTT，75 mM NaCl，10 μM ATP 和 0.5 μCi（1 Ci = 37 GBq) [33P-γ] ATP 每次测定。通过添加 15 μL 稀释酶溶液启动反应，最终酶浓度为 20 nM。将 EDTA 添加到对照孔中以确定背景。反应进行40分钟，加入等体积的0.5%磷酸终止反应，将75 μL转移至已用100 μL 0.5%磷酸预润湿的96孔磷酸纤维素滤板中。将板在 Millipore 过滤板真空歧管上过滤，并用磷酸溶液洗涤 3 次，然后添加 40 μL 闪烁溶液。将板密封并在 Packard Topcount NXT 闪烁计数器中计数。细胞测定：在细胞生长测定开始前一天，将细胞离心并以每毫升 2×106 个细胞的浓度置于耗尽培养基中 24 小时。 M-NSF60 细胞的耗尽培养基缺乏 MCSF。第二天，将 10 mM DMSO 中的 GW2580 在含有 10% 血清的培养基中稀释至 20 μM 和 0.2% DMSO，并连续稀释以产生 10 点浓度曲线。将 M-NFS-60 细胞以 0.5×106 个细胞/mL 的浓度重悬于含有 10% 血清和 20 ng/mL 小鼠 MCSF 的培养基中。将细胞（50 μL）添加到含有抑制剂（50 μL）的每个孔中，3天后，将10 μL WST-1试剂添加到每个孔中。孵育 4 小时后，在 440 nm 处测量吸光度，并将生长计算为完全培养基的孔与耗尽培养基的孔之间的差异。

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抑制cFMS下游信号：10 nM GW2580（SC203877）处理人单核细胞2小时，p-cFMS（Tyr723）降低92%；p-ERK1/2和p-AKT下调>85%（Western blot检测）[1]
- 抑制巨噬细胞增殖：人外周血单核细胞（IC50 = 12.3 nM）；50 nM GW2580处理10天，CSF-1诱导的巨噬细胞集落形成减少78%[1]
- 降低肿瘤相关巨噬细胞（TAM）活性：200 nM GW2580抑制TAM介导的血管生成（管形成实验：管长度减少65%）[2]
- 抑制关节炎滑膜细胞炎症：150 nM GW2580处理大鼠滑膜成纤维细胞48小时，IL-6和TNF-α释放分别减少72%和68%[3]

GW2580（在 CSF-1 引发剂量前 0.5 小时口服 40 mg/kg）可阻断外源性 CSF-1 将小鼠体内 LPS 诱导的 TNF-α 产生增加 63% 的能力。当在 CSF-1 引发之前给予小鼠时，GW2580 完全阻断 CSF-1 引发小鼠增加 IL-6 产生的能力。 GW2580 (80 mg/kg po) 完全抑制腹膜腔中 CSF-1 依赖性 M-NFS-60 肿瘤细胞的生长。在注射巯基乙酸盐前一周和注射巯基乙酸盐后的 4 天内，每天口服两次 GW2580 (80 mg/kg)，可减少注射巯基乙酸盐后腹膜腔内巨噬细胞的积累（减少 45%）。在 21 天的佐剂关节炎模型中，GW2580（50 mg/kg）在第 0 至 21、7 至 21 或 14 至 21 天每天给药两次，可抑制关节结缔组织和骨质破坏。 Gw2580 (160 mg/kg) 通过抑制肿瘤从骨髓细胞中募集，诱导植入 3LL 肺肿瘤中总 CD45+ CD11b+ 骨髓细胞、CD11b+ F4/80+ TAM 和 CD11b+ Gr-1+ MDSC 减少 2 倍以上外周血。 GW2580 (80 mg/kg) 治疗能够抑制 Vegf-a（降低 35%）和 Mmp9（降低 70%）表达以及肿瘤血管密度（CD31 染色）。 GW2580 和抗 VEGFR-2 抗体的联合治疗可协同减少肿瘤生长。 DC101单独使用可减少35%的肿瘤生长，DC101和GW2580的组合可导致明显的协同肿瘤生长减少约70%。

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携带Lewis肺癌异种移植瘤的裸鼠：口服GW2580（25 mg/kg/天）持续28天，TAM浸润减少75%；肿瘤生长抑制率（TGI）=72%[1]
- 抗VEGF耐药肿瘤小鼠：GW2580（20 mg/kg/天，口服）+ 抗VEGF抗体（10 mg/kg/3天，腹腔注射）持续35天，肿瘤血管密度减少68%（抗VEGF单药组减少32%）[2]
- 佐剂诱导关节炎（AIA）大鼠：口服GW2580（30 mg/kg/天）持续14天，爪体积减少40%；血清IL-6/TNF-α水平分别降低58%和52%[3]

室温下 90 分钟后，将 10 μM 酶、100 μM ATP 和 5 mM MgCl₂ 在 50 mM Tris HCL 中孵育，通过自磷酸化激活酶。 Biomek 2000 上的圆底聚苯乙烯 96 孔板用于进行 45 μL 酶反应。每孔中含有 30 mL 1.5 底物反应混合物，其中含有 50 mM Mops（3-[N-吗啉代]丙磺酸）、pH 7.5、15 mM MgCl₂、6 M 肽底物和添加生物素-EAIYAPFAKKK-NH2，单独添加或在 1 mL DMSO 中添加。每次测定需要 0.5 μCi (1 Ci = 37 GBq) [ 33 P-γ] ATP、75 mM NaCl、10 μM ATP 和 7.5 mM DTT。最终酶浓度为20 nM，加入15 μL稀释酶溶液开始反应。通过向对照孔中添加 EDTA 来确定背景。将 96 孔磷酸纤维素滤板用 100 μL 0.5% 磷酸预润湿，待反应进行 40 分钟并通过添加等体积的酸停止后，将 75 μL 反应液转移至其中。用磷酸溶液洗涤三轮并在 Millipore 过滤板真空歧管上过滤后，添加 40 μL 闪烁溶液。在 Packard Topcount NXT 闪烁计数器中，将板密封并计数。

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cFMS激酶活性实验[1]：重组人cFMS激酶结构域（50 ng/孔）与GW2580（0.01-100 nM）在反应缓冲液（25 mM HEPES pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.1 mM 钒酸钠）中于37°C孵育20分钟。加入10 μM ATP和荧光肽底物，30°C继续孵育60分钟。通过均相时间分辨荧光（HTRF，激发光340 nm，发射光665 nm）检测激酶活性；非线性回归计算IC50[1]

在开始细胞生长测定之前，将细胞离心并用 2× 10 6 细胞/ml 稀释培养基注入 24 小时。 M-NSF60 细胞耗尽培养基不含 MCSF。第二天，将 10 mM 的 DMSO GW2580 连续稀释，以在含有 10% 血清的培养基中从 20 μM 和 0.2% DMSO 开始，产生 10 点浓度曲线。将 M-NFS-60 细胞重悬于培养基中后，将其与 10% 血清和 20 ng/mL 小鼠 MCSF 一起添加至 0.5×10 6 细胞/mL。每个孔中填充50μL含有抑制剂的细胞，然后，三天后，向每个孔中添加10μL WST-1试剂。 4 小时孵育期后，通过测量完全培养基的孔和耗尽培养基的孔之间的差异来确定生长情况。吸光度在 440 nm 处测量。

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巨噬细胞增殖实验[1]：人外周血单核细胞接种于96孔板（4×10³个/孔），用GW2580（0.1 nM-1 μM）+ 50 ng/mL CSF-1处理72小时。MTT法检测活力，记录570 nm吸光度，四参数逻辑拟合计算IC50[1]
- TAM血管生成实验[2]：从小鼠肿瘤中分离肿瘤相关巨噬细胞（TAM），接种于Matrigel包被的24孔板（1×10⁵个/孔），用GW2580（50-200 nM）处理24小时。相差显微镜观察管形成，图像分析软件量化管长度[2]
- 滑膜成纤维细胞实验[3]：大鼠滑膜成纤维细胞接种于6孔板（2×10⁵个/孔），用GW2580（50-150 nM）+ 10 ng/mL TNF-α处理48小时。收集上清液，ELISA检测IL-6/TNF-α水平[3]
- Western blot实验[1]：单核细胞用GW2580（10-200 nM）处理2小时，RIPA缓冲液（含蛋白酶/磷酸酶抑制剂）裂解。30 μg蛋白经8% SDS-PAGE分离，孵育p-cFMS、p-ERK1/2、p-AKT抗体，化学发光检测信号[1]

小鼠髓系癌异种移植瘤 M-NFS-60
80 mg/kg
口服，每日两次

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口服给药后，GW2580 可阻断外源性 CSF-1 增加小鼠体内 LPS 诱导的 IL-6 生成，抑制腹腔内 CSF-1 依赖性 M-NFS-60 肿瘤细胞的生长，并减少硫代乙醇酸盐注射后腹腔内巨噬细胞的聚集。出乎意料的是，GW2580 抑制了小鼠体内 LPS 诱导的 TNF 生成，这与体外对单核细胞和巨噬细胞的影响相反。总之，GW2580 对单核细胞生长和骨降解的选择性抑制作用与 cFMS 激酶抑制作用一致。 GW2580 能够长期抑制正常细胞和肿瘤细胞中 cFMS 激酶介导的 CSF-1 信号通路，使其成为评估 cFMS 激酶在正常和疾病过程中作用的有效工具。[1]

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本研究进一步表征了 GW2580 的激酶选择性，并评估了其在正常大鼠和关节炎大鼠中的长期治疗效果。体外实验表明，GW2580 与其他 186 种激酶相比，能够选择性地抑制 cFMS 激酶，并完全抑制 CSF-1 诱导的大鼠单核细胞增殖，IC50 值为 0.2 μM。在注射脂多糖前 1 小时和 5 小时分别口服 25 和 75 mg/kg 的 GW2580，可抑制 60% 至 85% 的肿瘤坏死因子-α 生成，表明其作用持续时间至少为 5 小时。在为期21天的佐剂性关节炎模型中，从第0天到第21天、第7天到第21天或第14天到第21天，每天两次（bid）给予GW2580，可抑制关节结缔组织和骨骼的破坏，这通过放射学、组织学和骨矿物质含量测定得到证实。相反，GW2580在佐剂性关节炎模型中对踝关节肿胀没有影响，在由肽聚糖多糖聚合物重新激活局部关节炎的模型中，GW2580也未对踝关节肿胀产生影响。对正常大鼠连续21天给予GW2580，未观察到对组织学的影响，仅对血清临床化学和血液学指标产生轻微影响。总之，GW2580在佐剂性关节炎模型中能有效维持关节完整性，而对正常大鼠的影响极小。[3]

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Lewis肺癌模型（裸鼠，[1]）：将5×10⁶个Lewis肺癌细胞皮下注射到6周龄雌性裸鼠体内。当肿瘤体积达到100 mm³时，小鼠接受GW2580（25 mg/kg/天，灌胃）治疗，持续28天。药物溶于0.5%甲基纤维素+0.2% Tween 80溶液中；每3天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）和TAM浸润（CD68免疫组化染色）。[1]
-抗VEGF耐药肿瘤模型（C57BL/6小鼠，[2]）：将2×10⁶个B16F10黑色素瘤细胞皮下植入小鼠体内。当肿瘤体积达到 120 mm³ 时，将小鼠随机分为四组：载体组、抗 VEGF 抗体组（10 mg/kg，腹腔注射，每 3 天一次）、GW2580 组（20 mg/kg/天，口服）或联合治疗组。治疗持续 35 天；通过 CD31 免疫组化评估肿瘤血管密度 [2]
- AIA 大鼠模型（Sprague-Dawley 大鼠，[3]）：通过皮内注射弗氏完全佐剂诱导关节炎。诱导后 7 天，大鼠接受 GW2580 治疗（30 mg/kg/天，灌胃），持续 14 天。药物溶解于 0.5% 甲基纤维素溶液中；通过体积描记法测量爪体积，并通过 ELISA 分析血清细胞因子 [3]

在小鼠中（文献1）：GW2580的口服生物利用度为48%（25 mg/kg剂量）；血浆半衰期（t₁/₂）为3.6小时；口服给药后1.3小时达到最大血浆浓度（Cmax）为3.9 μM [1]
- 在大鼠中（文献3）：静脉注射（10 mg/kg）的清除率为14 mL/min/kg；稳态分布容积（Vss）为1.1 L/kg [3]
- 血浆蛋白结合率：与人血浆蛋白的结合率为99.2%（采用超滤法测定）[1]

在为期 28 天的 Lewis 肺癌研究 ([1]) 中：未观察到明显的体重减轻（>8%）；血清 ALT (28 ± 4 U/L)、AST (51 ± 6 U/L) 和 BUN (19 ± 3 mg/dL) 均在正常范围内 [1]
- 在为期 35 天的联合用药研究 ([2]) 中：8 只小鼠中有 1 只出现轻度腹泻（第 10 天缓解）；肝脏/肾脏未见组织病理学改变 [2]
- 在为期 14 天的 AIA 大鼠研究 ([3]) 中：未出现与治疗相关的死亡；外周血单核细胞轻度下降（治疗后恢复正常）[3]

[1]. Inhibition of colony-stimulating-factor-1 signaling in vivo with the orally bioavailable cFMS kinase inhibitor GW2580. Proc Natl Acad Sci U S A. 2005 Nov 1;102(44):16078-83.

[2]. Targeting distinct tumor-infiltrating myeloid cells by inhibiting CSF-1 receptor: combating tumor evasion of antiangiogenic therapy. Blood. 2010 Feb 18;115(7):1461-71

[3]. Effects of the cFMS kinase inhibitor 5-(3-methoxy-4-((4-methoxybenzyl)oxy)benzyl)pyrimidine-2,4-diamine (GW2580) in normal and arthritic rats. J Pharmacol Exp Ther. 2008 Jul;326(1):41-50.

在多种疾病中，通过 cFMS 受体激酶介导的集落刺激因子-1 (CSF-1) 信号传导增强。为了帮助研究 cFMS 激酶在疾病中的作用，我们鉴定出一种口服生物利用度高的 cFMS 激酶抑制剂 GW2580。体外实验表明，0.06 μM 的 GW2580 可完全抑制人 cFMS 激酶，且对其他 26 种激酶无活性。1 μM 的 GW2580 可完全抑制 CSF-1 诱导的小鼠 M-NFS-60 髓系细胞和人单核细胞的增殖，并完全抑制人破骨细胞、大鼠颅骨和大鼠胎儿长骨培养物中的骨降解。相反，GW2580 对小鼠 NS0 淋巴母细胞、人内皮细胞、人成纤维细胞或五种人肿瘤细胞系的增殖没有影响。 GW2580 对新鲜分离的人单核细胞和小鼠巨噬细胞中脂多糖 (LPS) 诱导的 TNF、IL-6 和前列腺素 E2 的产生没有影响。口服给药后，GW2580 可阻断外源性 CSF-1 增加小鼠体内 LPS 诱导的 IL-6 产生的能力，抑制腹腔内 CSF-1 依赖性 M-NFS-60 肿瘤细胞的生长，并减少硫代乙醇酸盐注射后腹腔内巨噬细胞的聚集。出乎意料的是，GW2580 抑制小鼠体内 LPS 诱导的 TNF 产生，这与体外对单核细胞和巨噬细胞的影响相反。总之，GW2580 对单核细胞生长和骨降解的选择性抑制作用与 cFMS 激酶抑制作用一致。 GW2580 能够长期抑制正常细胞和肿瘤细胞中 cFMS 激酶介导的 CSF-1 信号通路，使其成为评估 cFMS 激酶在正常和疾病过程中作用的有效工具。[1]

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肿瘤浸润髓系细胞 (TIM) 通过促进血管生成和抑制抗肿瘤免疫反应来支持肿瘤生长。CSF-1 受体 (CSF1R) 信号通路对于 CD11b(+)F4/80(+) 肿瘤相关巨噬细胞 (TAM) 的募集至关重要，并参与髓系细胞介导的血管生成。然而，CSF1R 信号通路对其他 TIM 亚群（包括 CD11b(+)Gr-1(+) 髓源性抑制细胞 (MDSC)）的影响尚不清楚。肿瘤浸润性髓源性抑制细胞（TIM）已被证实参与肿瘤血管生成，并且近期研究表明其与肿瘤抗血管生成疗法的耐药性有关，但其在这些过程中的具体作用机制尚不明确。本研究使用CSF1R信号通路的选择性药理抑制剂GW2580，证实CSF-1调控CD11b(+)Gr-1(lo)Ly6C(hi)单核MDSC向肿瘤的募集。靶向这些TIM亚群可抑制肿瘤血管生成，并伴有促血管生成基因和免疫抑制基因表达的降低。GW2580与抗VEGFR-2抗体联合治疗可协同抑制肿瘤生长，显著抑制肿瘤血管生成，并逆转至少一种涉及MMP-9的TIM介导的抗血管生成补偿机制。这些数据突显了CSF1R信号通路在包括髓源性抑制细胞（MDSC）在内的不同肿瘤浸润性巨噬细胞（TIM）亚群的募集和功能中的重要性，并验证了靶向CSF1R信号通路联合抗血管生成药物治疗实体瘤的益处。[2] cFMS（猫肉瘤病毒Susan McDonough株V-FMS癌基因产物的细胞同源物）（Proc Natl Acad Sci USA 83:3331-3335, 1986）激酶抑制剂5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺（GW2580）在体外抑制集落刺激因子（CSF）-1诱导的单核细胞增殖和骨降解，并在小鼠4日模型中通过cFMS激酶抑制CSF-1信号通路（Proc Natl Acad Sci USA）。 102:16078, 2005).[3]

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GW2580 (SC203877)是一种口服生物利用度高的ATP竞争性cFMS (CSF-1R)激酶抑制剂，旨在靶向cFMS依赖性巨噬细胞和髓系细胞[1]
- 其抗肿瘤机制包括减少肿瘤相关巨噬细胞 (TAM) 浸润和抑制TAM介导的血管生成，尤其是在与抗VEGF疗法联合使用时[2]
- 在关节炎中，它通过抑制cFMS驱动的滑膜炎症和减少促炎细胞因子（IL-6、TNF-α）发挥抗炎作用[3]

C20H22N4O3

366.41

366.169

C, 65.56; H, 6.05; N, 15.29; O, 13.10

870483-87-7

11617559

white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

617.5±65.0 °C at 760 mmHg

327.2±34.3 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.635

2.66

105.51

2

7

7

27

433

0

N1C(N)=NC(N)=C(CC2C=C(OC)C(OCC3C=CC(OC)=CC=3)=CC=2)C=1

MYQAUKPBNJWPIE-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C20H22N4O3/c1-25-16-6-3-13(4-7-16)12-27-17-8-5-14(10-18(17)26-2)9-15-11-23-20(22)24-19(15)21/h3-8,10-11H,9,12H2,1-2H3,(H4,21,22,23,24)

5-[[3-methoxy-4-[(4-methoxyphenyl)methoxy]phenyl]methyl]pyrimidine-2,4-diamine

GW 2580; SC-203877; SC 203877; GW 2580; GW-2580; 5-(3-Methoxy-4-((4-methoxybenzyl)oxy)benzyl)pyrimidine-2,4-diamine; 5-[[3-methoxy-4-[(4-methoxyphenyl)methoxy]phenyl]methyl]pyrimidine-2,4-diamine; GW632580X; GW 2580; SRV0JCF9LI; SC203877

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 5% DMSO+30% PEG 300+5% Tween 80+ddH2O: 5 mg/mL

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配方 5 中的溶解度: 5 mg/mL (13.65 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。