BTK (IC50=0.5 nM)
Ibrutinib Racemate targets Bruton's tyrosine kinase (Btk), a key enzyme in the B-cell receptor signaling pathway. Ibrutinib covalently and irreversibly binds to Btk, inhibiting its activity and blocking B-cell proliferation and survival. This mechanism underlies its efficacy in treating B-cell malignancies such as mantle cell lymphoma and chronic lymphocytic leukemia.

伊马替尼（PCI-32765）特异性抑制B细胞活性和信号传导。它能阻止Btk（IC50=11 nM）的自身磷酸化、Btk的生理底物PLCγ（IC50=29 nM）的磷酸化以及下游激酶ERK（IC50=13 nM）的磷酸化[1]。伊马替尼（PCI-32765）抑制BCR激活的原代B细胞的生长（IC50=8 nM）。伊布替尼（PCI-32765）抑制FcγR刺激后原代单核细胞中TNFα、IL-1β和IL-6的产生（IC50分别为2.6、0.5和3.9 nM）[3]。 BTK 的半胱氨酸 481（C481）与伊马替尼结合，其最佳 IC50 值为 0.5 nM。丝氨酸的羟基与伊马替尼不相容，C481S 突变使 BTK-C481S 磷酸化的 IC50 值从 2.2 nM 提高到 1 μM。体外实验表明，伊布替尼是一种高效的 Btk 抑制剂，IC₅₀ 值为 0.5 nM。预计其外消旋体与纯对映体具有相似的活性。其活性通过纯化的 Btk 酶激酶抑制试验和基于细胞的 B 细胞增殖及信号传导检测进行评估。

在胶原诱导性关节炎小鼠模型中，伊布替尼（PCI-32765）（3.125–50 mg/kg，口服）可完全抑制疾病进展并降低循环自身抗体水平。在MRL-Fas(lpr)狼疮模型中，伊布替尼（PCI-32765）可预防自身抗体的形成和肾脏疾病的进展。在MRL-Fas(lpr)小鼠模型中，伊布替尼（PCI-32765）（3.125–50 mg/kg，口服）可改善肾脏疾病并减少自身抗体的产生[1]。与T细胞相比，伊布替尼（PCI-32765）（0.1 μM）对B细胞具有选择性细胞毒性作用，但可调节活化T细胞的细胞因子产生。此外，它还能抑制活化的慢性淋巴细胞白血病（CLL）细胞的增殖。在治疗性胶原诱导关节炎（CIA）模型中，伊布替尼（PCI-32765）的半数有效剂量（ED50）为2.6 mg/kg/天，可强效且呈剂量依赖性地逆转关节炎炎症。伊布替尼（PCI-32765）还能预防CAIA模型中的临床关节炎[3]。

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在体内，伊布替尼是一种口服生物利用度高的抗癌药物，已获批用于治疗B细胞淋巴瘤。它在套细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病和华氏巨球蛋白血症中均显示出显著的临床疗效。外消旋体可用作分析方法开发和质量控制的参考标准。

将激酶、33P-ATP、伊布替尼和底物[0.2 mg/mL poly(EY) (4:1)]孵育1小时后，采用33P过滤结合试验测定体外激酶IC50值。

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B细胞受体(BCR)信号通路在慢性淋巴细胞白血病(CLL)中异常激活。布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)对BCR信号通路至关重要，在基因敲除小鼠模型中，其突变具有相对B细胞特异性的表型。本文中，我们证明与正常B细胞相比，CLL中BTK蛋白和mRNA显著过表达。尽管BTK在CLL细胞中并非始终处于组成型激活状态，但BCR或CD40信号通路的激活伴随着该通路的有效激活。使用不可逆BTK抑制剂PCI-32765，我们证实CLL细胞中存在轻微的细胞凋亡，且高于正常B细胞。未观察到PCI-32765对T细胞存活的影响。用PCI-32765处理CD40或BCR激活的CLL细胞可抑制BTK酪氨酸磷酸化，并有效阻断该激酶激活的下游存活通路，包括ERK1/2、PI3K和NF-κB。此外，PCI-32765在体外抑制CLL细胞的激活诱导增殖，并有效阻断来自微环境的CLL细胞存活信号，包括可溶性因子（CD40L、BAFF、IL-6、IL-4和TNF-α）、纤连蛋白结合和基质细胞接触。基于这些综合数据，未来有必要在慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者的临床试验中，使用不可逆抑制剂PCI-32765靶向BTK。[3]

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伊布替尼消旋体的体外激酶抑制试验采用纯化的Btk酶进行。将激酶与肽底物和ATP在递增浓度的化合物存在下孵育。测量磷酸化程度，并根据抑制曲线计算IC₅₀（0.5 nM）。

B细胞和T细胞。CD20+ B细胞和CD3+ T细胞通过阴性选择法（RosetteSep，纯度>90%）从外周血单核细胞（PBMC）的白细胞层中纯化，并冻存于含10% DMSO的培养基中。细胞在37℃下解冻，并在生长培养基（含10%胎牛血清的RPMI培养基）中培养。B细胞用山羊抗人IgM F(ab′)2片段（10 μg/mL；Invitrogen）刺激，T细胞用抗CD3/CD28包被的磁珠（Dynabeads）刺激，磁珠与细胞的比例为1:1。细胞用PE-CD69（BD Biosciences）染色，并通过流式细胞术分析，以活淋巴细胞为门控。在实验过程中，浓度低于 10 μM 的 PCI-32765 并未降低 B 细胞或 T 细胞的活力，尽管 PCI-32765 确实阻断了抗 IgM 刺激对 B 细胞存活的轻微促进作用。在洗脱实验中，细胞用 10 倍体积的生长培养基洗涤三次，该方案已被证实能够完全洗去 PCI-29732（一种可逆性 Btk 抑制剂）对 BCR 信号传导的抑制作用。[1]

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使用 Ramos 或 Raji 细胞等 B 细胞系进行伊布替尼消旋体的体外细胞实验。用该化合物处理细胞，并通过蛋白质印迹法检测 Btk 磷酸化水平。使用 [³H]-胸苷掺入法或 MTT 法评估 B 细胞增殖。使用膜联蛋白 V 染色评估细胞凋亡。

关节炎和狼疮模型。[1]雄性DBA/1小鼠用II型胶原蛋白加弗氏佐剂免疫，21天后加强免疫。当至少一只爪子出现明显肿胀时，将小鼠纳入研究并随机分组。每天一次口服伊布替尼（PCI-32765）或地塞米松（0.2 mg/kg），持续11天。根据爪子肿胀的程度和范围，对小鼠进行关节炎评分（0-5分）。采用ELISA法（Chondrex和Bethyl试剂盒）检测小鼠抗II型胶原蛋白抗体和总IgG水平。雌性MRL/MpJ-Faslpr小鼠从第8周到第20周每天一次灌胃给予伊布替尼（PCI-32765）。每周监测蛋白尿。在第20周，收集血清并分析BUN（IDEXX试剂盒）和小鼠抗dsDNA抗体水平。肾脏组织学评分依据既定标准进行。在所有测试剂量水平下均未观察到药物引起的体重减轻。这些研究在博尔德生物病理学中心按照已批准的动物护理方案进行。结果以平均值±标准误（SEM）表示。组间统计学差异采用重复测量单因素方差分析（ANOVA）或使用GraphPad Prism软件进行单因素方差分析，并进行Tukey或Bonferroni多重比较事后检验。

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犬自发性淋巴瘤。[1]犬自发性淋巴瘤研究已获得科罗拉多州立大学机构动物护理和使用委员会以及科罗拉多州立大学兽医教学医院临床审查委员会的批准。科罗拉多州立大学动物癌症中心收治的犬只（均为犬主所有）符合以下纳入标准：(i) 经组织学或细胞学确诊为B细胞淋巴瘤（免疫组化或流式细胞术检测CD21和CD79a，或PCR检测单克隆Ig基因重排）；(ii) 常规实验室检查显示器官功能良好；(iii) 入组时东部肿瘤协作组（ECOG）改良体能状态评分为0或1。排除标准包括：(i) T细胞或null细胞免疫表型；(ii) 入组前3周内接受过化疗；(iii) 入组前6周内接受过放疗；(iv) 入组前72小时内使用过皮质类固醇。所有犬主均在入组前签署了知情同意书。伊布替尼（PCI-32765）每日给药，直至疾病进展。药物为40 mg和200 mg硬胶囊，采用标准药用辅料制备。动物每周复查一次，持续4周，之后每两周复查一次。肿瘤负荷定义为所有靶病灶最长径之和。根据兽医合作肿瘤学组（VCOG）制定的犬外周淋巴结淋巴瘤疗效评估标准（RECIST标准改编版），评估疗效（完全缓解/部分缓解/疾病稳定/疾病进展）。不良事件根据VCOG不良事件通用术语（CTA）1.0版进行记录和前瞻性分级。药效学分析中，血液采集于CPT管中，并使用标准方法纯化外周血单核细胞（PBMC）。PBMC沉淀物经速冻后储存于-80℃。肿瘤活检组织储存于-80℃，随后在PBS溶液中研磨后进行分析。 PBMC 或肿瘤细胞裂解后，取 50 μg 可溶性蛋白用 PCI-33880 进行标记，方法如前所述。

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雄性 DBA1/1OlaHsd 小鼠于第 0 天和第 21 天注射含牛 II 型胶原的弗氏完全佐剂。第 21 至 35 天，当每只小鼠的平均临床评分达到 1.5 分（满分 5 分）时，将小鼠随机分组。入组后开始给予伊布替尼（PCI-32765）治疗（1.56-12.5 mg/kg，口服），持续 18 天。每天对每只小鼠的每只爪进行临床评分。临床评分标准如下：0 分 = 正常；1 分 = 一只后爪或前爪关节受累或出现轻微弥漫性红斑和肿胀；2 分 = 两只后爪或前爪关节受累或出现轻度弥漫性红斑和肿胀； 3级=三个后爪或前爪关节受累，或中度弥漫性红斑和肿胀；4级=显著弥漫性红斑和肿胀，或四个趾关节受累；5级=整个爪子严重弥漫性红斑和严重肿胀，趾关节无法弯曲。[3]

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伊布替尼外消旋体通常不进行体内动物实验，因为该外消旋体用作分析标准而非药理学工具。对于活性对映体伊布替尼，体内研究在B细胞淋巴瘤小鼠异种移植模型中进行。该化合物经口服给药，并通过测量肿瘤体积来评估疗效。

吸收
口服后，伊布替尼迅速吸收，血浆峰浓度 (Cmax)、达峰时间 (tmax) 和曲线下面积 (AUC) 分别约为 35 ng/ml、1-2 小时和 953 mg·h/ml。
排泄途径
给药剂量的约 7.8% 累积经尿液排出，大部分在给药后 24 小时内排出。给药剂量的约 80% 累积经粪便排出，主要在首次给药后 48 小时内排出。首次给药后168小时内，约88.5%的给药剂量被排出体外。
分布容积
伊布替尼的稳态分布容积约为10,000升。
清除率
肾功能正常的患者，清除率范围为112至159毫升/分钟。
代谢/代谢物
根据可能的代谢物，已确定了三种代谢途径。这些途径包括苯基羟基化（M35）、哌啶环开环和伯醇还原（M34），以及氧化为羧酸和乙烯环氧化，随后水解为二氢二醇（PCI-45227）。后一种代谢物的BTK抑制活性也降低了15倍。伊布替尼主要通过CYP3A5和CYP3A4代谢，CYP2D6代谢作用较小。伊布替尼自2014年起作为一种治疗白血病的新药上市。伊布替尼（商品名：伊布替尼）主要在肝脏中通过CYP3A4同工酶代谢，少量通过CYP2D6代谢。同时服用伊布替尼和食用含有强效抑制CYP3A4同工酶的次级代谢产物的食物可能会显著影响药物的毒性。本文列出了相关食物。生物半衰期：伊布替尼的消除半衰期约为4-6小时。

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伊布替尼外消旋体的药代动力学特性与口服生物利用度高的伊布替尼相似。该化合物的分子量为440.50，分子式为C₂₅H₂₄N₆O₂。应避光保存于-80℃。外消旋体用作分析方法开发的参考标准品。

毒性概述
识别和用途：伊布替尼是一种口服酪氨酸激酶抑制剂，可不可逆地结合并抑制酪氨酸蛋白激酶 BTK（布鲁顿酪氨酸激酶）。BTK 在 B 细胞受体信号传导功能中起着至关重要的作用，因此是维持和扩增各种 B 细胞恶性肿瘤的关键。使用伊布替尼靶向 BTK 是治疗这些恶性肿瘤的有效策略。伊布替尼（商品名：伊布替尼）适用于治疗至少接受过一种既往治疗的套细胞淋巴瘤 (MCL) 或慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 患者。它也适用于治疗伴有 17p 缺失的 CLL 患者和华氏巨球蛋白血症 (WM) 患者。人体暴露和毒性：人体研究表明，伊布替尼可增强化疗和免疫疗法的疗效，且不会增加毒性。伊布替尼对多发性骨髓瘤（MM）患者的恶性浆细胞具有细胞毒性。此外，伊布替尼治疗可显著增强硼替佐米和来那度胺化疗的细胞毒活性。已报道的超敏反应包括过敏性休克（致命）、荨麻疹和血管性水肿。套细胞淋巴瘤（MCL）患者若在伊布替尼治疗后病情进展，预后较差，挽救治疗的缓解率低且缓解持续时间短。伊布替尼可抑制生发中心B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤（GCB-DLBCL）细胞系的增殖，并通过抑制BCR信号通路和激活caspase-3诱导细胞凋亡。此外，研究发现伊布替尼治疗可减弱肿瘤细胞中趋化因子CCL3和CCL4的产生。不同细胞系对伊布替尼的敏感性各不相同。有趣的是，伊布替尼治疗后p-ERK水平（而非基础Btk表达水平）的降低与不同的药物敏感性相关。伊布替尼可能是一种潜在的GCB-DLBCL治疗药物，而p-ERK水平的降低可能成为预测治疗反应的有效生物标志物。伊布替尼与R-CHOP方案（化疗方案按所用药物的字母顺序命名：利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星（羟基柔红霉素）、长春新碱（长春新碱）、泼尼松龙）联合使用耐受性良好，并改善了B细胞非霍奇金淋巴瘤患者的治疗反应。动物研究：在每日分别接受 560 mg 和 420 mg 伊布替尼治疗的大鼠中，当伊布替尼暴露量分别为套细胞淋巴瘤 (MCL) 患者报告剂量的 14 倍和慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 或华氏巨球蛋白血症 (WM) 患者报告剂量的 20 倍时，出现畸形。在较低暴露量下观察到胎儿体重降低。

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肝毒性
在伊布替尼治疗 CLL 和套细胞淋巴瘤患者的上市前临床试验中，治疗期间血清酶升高的发生率为 20% 至 30%，与对照组相似，且升高通常较轻（低于正常值上限的 5 倍），并可自行恢复。在多项对照试验中，未报告具有临床意义的肝损伤或因肝毒性而提前终止治疗的情况。伊布替尼的主要毒性与酪氨酸激酶受体抑制剂相似，包括出血和骨髓抑制。伊布替尼会降低外周血淋巴细胞计数，导致淋巴细胞减少和中性粒细胞减少，但对血清免疫球蛋白水平的影响甚微，且上市前研究未发现其与结核病复发或机会性感染相关。然而，随着伊布替尼的获批和广泛应用，已有罕见的急性肝损伤病例报告，包括急性肝衰竭和严重的乙型肝炎复发。肝损伤的潜伏期从数周到9个月不等。损伤类型为肝细胞性，但其病程与典型的急性肝炎样损伤不同，更类似于伴有早期肝衰竭的急性肝坏死。
概率评分：D（可能是临床上显著肝损伤的罕见病因）。

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妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于伊布替尼在哺乳期临床应用的信息。由于伊布替尼与血浆蛋白的结合率超过97%，其在母乳中的浓度可能较低。生产商建议在伊布替尼治疗期间以及末次给药后一周内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到已发表的信息。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到已发表的信息。

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蛋白结合
伊布替尼与血浆蛋白的不可逆结合率随时间逐渐增加，在首次给药后8小时达到给药剂量的25%。研究表明，伊布替尼主要与白蛋白结合，也与α1-酸性糖蛋白（α1-AGP）结合。伊布替尼与血浆蛋白的不可逆蛋白结合率高达给药剂量的97.3%。

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由于伊布替尼外消旋体是伊布替尼的消旋混合物，因此未单独报告其毒理学数据。伊布替尼的安全性已通过临床应用得到充分证实，常见不良反应包括腹泻、疲劳和出血。该外消旋体在研究应用中用作分析标准，在所用浓度下毒性风险极低。

[1]. Honigberg LA, et al. The Bruton tyrosine kinase inhibitor PCI-32765 blocks B-cell activation and is efficacious in models of autoimmune disease and B-cell malignancy. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010 Jul 20;107(29):13075-80.
[2]. Herman SE, et al. Bruton tyrosine kinase represents a promising therapeutic target for treatment of chronic lymphocytic leukemia and is effectively targeted by PCI-32765. Blood. 2011 Jun 9;117(23):6287-96.
[3]. Chang BY, et al. The Bruton tyrosine kinase inhibitor PCI-32765 ameliorates autoimmune arthritis by inhibition of multiple effector cells. Arthritis Res Ther. 2011 Jul 13;13(4):R115.
[4]. Sun Y, et al. PROTAC-induced BTK degradation as a novel therapy for mutated BTK C481S induced ibrutinib-resistant B-cell malignancies. Cell Res. 2018 Jul;28(7):779-781

1-[3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1-吡唑并[3,4-d]嘧啶基]-1-哌啶基]-2-丙烯-1-酮是一种芳香醚。
另见：伊布替尼（注：已移至此处）。

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伊布替尼外消旋体（PCI-32765 外消旋体）是伊布替尼的外消旋混合物，CAS 编号为 936563-87-0，分子式为 C₂₅H₂₄N₆O₂，分子量为 440.50。伊布替尼是一种强效的 Btk 抑制剂，IC₅₀ 为 0.5 nM，已获准用于治疗 B 细胞淋巴瘤。该外消旋体用作分析参考标准。

C₂₅H₂₄N₆O₂

440.50

440.196

936563-87-0

Ibrutinib;936563-96-1;Ibrutinib-d5;1553977-17-5

16126651

White to off-white solid powder

4.736

99.16

1

6

5

33

678

0

C=CC(=O)N1CCCC(C1)N2C3=NC=NC(=C3C(=N2)C4=CC=C(C=C4)OC5=CC=CC=C5)N

XYFPWWZEPKGCCK-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H24N6O2/c1-2-21(32)30-14-6-7-18(15-30)31-25-22(24(26)27-16-28-25)23(29-31)17-10-12-20(13-11-17)33-19-8-4-3-5-9-19/h2-5,8-13,16,18H,1,6-7,14-15H2,(H2,26,27,28)

1-[3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]piperidin-1-yl]prop-2-en-1-one

PCI-32765 Racemate; PCI32765 Racemate; 936563-87-0; PCI-32765 Racemate; Ibrutinib Racemate; PCI-32765 (Racemate); Ibrutinib (Racemate); 1-[3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]piperidin-1-yl]prop-2-en-1-one; PCI-32765 (Ibrutinib); 1-{3-[4-amino-3-(4-phenoxyphenyl)pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]piperidin-1-yl}prop-2-en-1-one; PCI 32765 Racemate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~25 mg/mL (~56.75 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.68 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。