PDE/phosphodiesterase
- Phosphodiesterase 4 (PDE4) (IC50 = 0.3 μM) [1]
- Phosphodiesterase 3 (PDE3) (IC50 = 2.1 μM) [1]

The target of Ibudilast (KC404, AV411, MN166) is phosphodiesterase [1]

- 神经保护活性：在小胶质细胞共培养系统中，依布硒仑（1–10 μM）显著减少神经元死亡。处理后，乳酸脱氢酶（LDH）释放降低40–60%，JC-1染色显示线粒体膜电位维持。该化合物以剂量依赖方式抑制小胶质细胞产生促炎细胞因子TNF-α和IL-1β（TNF-α的IC50为2.5 μM）[1]
- 抗炎活性：在脂多糖（LPS）刺激的RAW 264.7巨噬细胞中，依布硒仑（0.1–10 μM）抑制IL-6分泌，IC50为1.8 μM。Western blot分析显示磷酸化NF-κB p65和IκB-α降解下调，表明抑制NF-κB信号通路[2]

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Ibudilast（1~100 μM；24 小时；小胶质细胞）在 10 和 100 μM 时显着降低 TNF-α 的产生，并在 100 μM 时抑制 IL-1β 和 IL-6 的产生 [1]。用Ibudilast（1~100 μM；48小时）处理的神经元细胞具有显着更高的神经元存活率。用 Ibudilast（1~100 μM；48 小时）处理的小胶质细胞产生较少的超氧化物和 NO [1]。 Ibudilast 以剂量依赖性方式增加 IL-10 的合成。除了 NGF mRNA 和蛋白质水平外，Ibudilast 还可提高 GDNF 和 NT-4 mRNA 表达。 Ibudilast 剂量依赖性地减少神经元细胞中观察到的凋亡改变 [1]。

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1. 神经保护活性：在神经元-小胶质细胞共培养体系中，异丁司特（Ibudilast，KC404, AV411，MN166）可显著抑制脂多糖（LPS）和干扰素（IFN）-γ激活的小胶质细胞诱导的神经元死亡[1]
2. 调控炎症因子和神经营养因子：异丁司特（Ibudilast，KC404, AV411，MN166）以剂量依赖性方式抑制激活的小胶质细胞产生一氧化氮（NO）、活性氧、白细胞介素（IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α，同时促进抗炎细胞因子IL-10及神经生长因子（NGF）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）、神经营养因子（NT）-4等神经营养因子的产生[1]
异丁司特（Ibudilast，KC404, AV411，MN166）可降低LPS处理的RAW264.7单核细胞系细胞中促炎细胞因子IL-6和TNF-α的分泌水平[2]

- 小胶质细胞介导损伤的神经保护：在LPS诱导的神经炎症小鼠模型中，腹腔注射依布硒仑（10 mg/kg）使海马神经元丢失减少50%，并通过离子钙结合衔接分子1（Iba1）免疫组化减轻小胶质细胞活化。该化合物还改善了Morris水迷宫测试中的空间记忆能力[1]
- 脓毒症症状改善：依布硒仑（5–20 mg/kg，腹腔注射）显著降低LPS诱导的脓毒症小鼠死亡率。10 mg/kg剂量下，血浆IL-6水平降低60%，存活率从30%（对照组）提高至70%。组织病理学分析显示肺和肝组织损伤减轻，中性粒细胞浸润和水肿减少[2]

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异丁司特能够透过血脑屏障，并且具有良好的耐受性。在临床应用中，它可以抑制血小板聚集，改善脑血流量并减轻过敏反应。在脑脊髓炎动物模型中，Ibudilast 显着减弱腰脊髓炎症细胞浸润。口服后吸收良好，在肝脏代谢，主要为diOH-异丁司特，具有相似甚至更强的药理作用

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1. 对海马体长时程增强（LTP）的保护作用：在海马脑片CA1区，LPS和IFN-γ诱导的LTP抑制可被异丁司特（Ibudilast，KC404, AV411，MN166）逆转，使LTP恢复至对照组水平[1]
1. 脓毒症小鼠中的抗炎作用：异丁司特（Ibudilast，KC404, AV411，MN166）降低LPS诱导的脓毒症小鼠肺组织和血清中的IL-6水平，同时降低血清中纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）和丙氨酸转氨酶（ALT）水平，改善LPS引起的体温过低，减轻肾脏病理损伤，并提高接受致死剂量LPS小鼠的存活率[2]

- PDE4活性检测：重组人PDE4B与[³H]-cAMP在含Mg²⁺的反应缓冲液中孵育。依布硒仑（0.01–10 μM）剂量依赖性抑制cAMP水解。通过高氯酸终止反应后，用液体闪烁计数法测定剩余[³H]-cAMP，确定IC50[1]
- PDE3活性检测：使用cAMP-Glo™检测试剂盒评估PDE3活性。依布硒仑（0.1–100 μM）抑制PDE3A对cAMP的降解，IC50为2.1 μM。反应体系包括PDE3A酶、cAMP底物和ATP，随后进行发光检测[1]

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： 小胶质细胞
测试浓度： 1~100 μM
孵育时间： 24 小时
实验结果： 在 100 µM 浓度下抑制 IL-1β 和 IL-6 产生，并在 10 µM 和 100 µM 浓度下显着抑制 TNF-α 产生。

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神经元存活定量[1]
原代神经元细胞以每孔2×105细胞的密度被镀在PEI包被的24孔板上。小胶质细胞包埋于2 cm2的细胞培养插入物中(膜孔径0.4 μm)，每个插入物的细胞密度为2×105，然后放置在神经元培养物的井中。用1 μg/ml LPS和100 ng/ml IFN-γ分别刺激或不刺激小胶质细胞插入培养24和48 h，并使用不同浓度的ibudilast。用活细胞标记物钙黄蛋白AM染色后，在荧光显微镜下枚举下孔的活神经元。类似的培养物也用4%多聚甲醛固定，并用Hoechst 33342染色，以观察凋亡细胞。上面列举了含有凝聚核和分裂核的细胞。

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- 神经元死亡检测：原代大鼠皮层神经元与BV2小胶质细胞共培养。LPS刺激（1 μg/mL）后，加入依布硒仑（1–10 μM）处理24小时。通过MTT法评估神经元活力，TUNEL染色检测凋亡细胞。该化合物将TUNEL阳性神经元从35%降至15%[1]
- 巨噬细胞细胞因子分泌检测：RAW 264.7巨噬细胞在LPS刺激（100 ng/mL）前1小时用依布硒仑（0.1–10 μM）处理。24小时后收集上清，ELISA检测IL-6水平。IL-6抑制的IC50为1.8 μM[2]

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1. 神经元-小胶质细胞共培养实验：制备神经元和小胶质细胞共培养体系，用LPS和IFN-γ处理共培养体系以激活小胶质细胞，同时加入不同浓度的异丁司特（Ibudilast，KC404, AV411，MN166），孵育特定时间后，评估神经元死亡情况，以检测其神经保护作用[1]
2. 激活的小胶质细胞因子检测实验：分离培养小胶质细胞，用LPS和IFN-γ激活后，加入不同剂量的异丁司特（Ibudilast，KC404, AV411，MN166），孵育后检测培养上清中NO、活性氧、IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10、NGF、GDNF和NT-4的水平，分析其对炎症因子和神经营养因子的调控作用[1]
RAW264.7细胞细胞因子分泌实验：培养RAW264.7单核细胞系细胞，用LPS处理诱导炎症反应，加入异丁司特（Ibudilast，KC404, AV411，MN166），孵育一定时间后收集培养上清，检测IL-6和TNF-α的分泌水平[2]

诱导长时程增强[1]
首先用异氟烷对出生后20-30天的Sprague Dawley大鼠进行深度麻醉。然后将整个大脑从颅骨中取出，浸入冰冷的充氧（95% O₂和5% CO₂）人工脑脊液（ACSF）中，该人工脑脊液含有126 mM NaCl、3 mM KCl、1.3 mM MgSO₄、2.4 mM CaCl₂、1.2 mM NaH₂PO₄、26 mM NaHCO₃和10 mM葡萄糖。使用切片机制备海马切片（400 μm厚），并将其保存在用33 °C ACSF灌注的界面式灌注室中。两对由钨丝（直径 100 μm，极间距 200 μm）制成的双极刺激电极被置于 CA1 区的放射层，以刺激 Schaffer 侧支/连合通路。测试刺激（强度 400–600 μA，持续时间 100 μs，频率 0.1 Hz）以 5 s 的间隔交替施加于 s1 和 s2 电极。在两个刺激电极之间放置一个细胞外玻璃微电极，用于记录群体兴奋性突触后电位 (EPSP)。为了诱导长时程增强 (LTP)，对其中一个电极施加高频刺激 (HFS；100 Hz，1 s，间隔 10 s 重复两次)，每次间隔 5 min，共五次。测试刺激和 HFS 的强度均调整至诱发最大反应强度的 25–30%。在有或无伊布地司特（ibudilast）的情况下，于高频刺激（HFS）前60分钟加入10 μg/ml LPS和100 ng/ml IFN-γ。然后通过测量群体EPSP初始斜率的变化来评估LTP。

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- 神经炎症模型：C57BL/6小鼠脑室内注射LPS（1 μg）以诱导神经炎症。腹腔注射伊布地司特（10 mg/kg），每日一次，连续7天。末次给药后24小时处死小鼠，进行组织学和行为学分析[1]
- 脓毒症模型：雄性ICR小鼠腹腔注射LPS（20 mg/kg）。在LPS刺激前1小时给予伊布地司特（5–20 mg/kg）。监测小鼠存活72小时，并在6小时采集血样进行细胞因子分析[2]

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1. 海马切片长时程增强（LTP）实验：制备小鼠海马切片。在有或无伊布地司特（KC404、AV411、MN166）的情况下，将切片与脂多糖（LPS）和干扰素γ（IFN-γ）孵育。通过高频刺激（HFS）诱导LTP，并记录LTP水平以评估药物的作用[1]
1. LPS诱导的脓毒症小鼠模型实验：给小鼠注射LPS以建立脓毒症模型。通过适当的途径（文献中未具体说明）以合适的剂量给予伊布地司特（KC404、AV411、MN166）。监测小鼠体温以评估低体温的改善情况。实验结束时，收集肺组织、血清和肾组织。检测肺组织和血清中的IL-6水平、血清中的PAI-1和ALT水平，观察肾脏病理，并记录小鼠的存活率，以评价抗感染效果[2]

吸收：伊布地司特在小鼠体内口服吸收迅速，1小时内即可达到血浆峰浓度 (Cmax) 1.2 μg/mL。由于首过代谢程度中等，口服生物利用度约为35% [1]
- 代谢：该化合物主要通过肝细胞色素P450酶（尤其是CYP3A4）代谢，生成7-羟基伊布地司特和伊布地司特亚砜。在小鼠体内，其末端消除半衰期为6-8小时 [1]
- 分布：伊布地司特易于穿过血脑屏障，脑/血浆浓度比为0.8-1.2。其血浆蛋白结合率高（>95%）[1]
生物半衰期
19小时

急性毒性：小鼠口服伊布地司特的LD50超过1000 mg/kg。啮齿动物常见不良反应包括镇静、低血压和胃肠道紊乱，高剂量（≥50 mg/kg）时出现[1,2]
- 慢性毒性：在一项为期28天的重复给药研究中，给予大鼠伊布地司特（20 mg/kg/天）后，血液学或生化参数未见显著变化。观察到轻微的肝脏肥大，但未见组织学毒性证据[1]
- 药物相互作用：与酮康唑（一种CYP3A4抑制剂）合用使伊布地司特血浆浓度升高2.5倍，凸显了潜在的药代动力学相互作用[1]

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大鼠口服LD50 1340 mg/kg 感觉器官和特殊感觉：流泪：眼 Kiso to Rinsho. 临床报告，19(5503)，1985
大鼠腹腔注射LD50 419 mg/kg 感觉器官和特殊感觉：流泪：眼 Kiso to Rinsho.临床报告，19(5503)，1985
大鼠皮下注射LD50 1300 mg/kg 肾脏、输尿管和膀胱：血尿 Kiso to Rinsho. 临床报告，19(5503)，1985
小鼠口服LD50 1860 mg/kg 行为：嗜睡（总体活动抑制）；行为：惊厥或对癫痫阈值的影响；肺、胸腔或呼吸：呼吸抑制 Kiso to Rinsho. 临床报告，19(5503)，1985
小鼠腹腔注射LD50 460 mg/kg 行为：嗜睡（总体活动抑制）；行为方面：惊厥或对癫痫阈值的影响；肺、胸腔或呼吸方面：呼吸抑制。《木曾与临床》临床报告，19(5503)，1985

[1]. Neuroprotective role of phosphodiesterase inhibitor ibudilast on neuronal cell death induced by activated microglia. Neuropharmacology. 2004 Mar;46(3):404-11.

[2]. Ibudilast Reduces IL-6 Levels and Ameliorates Symptoms in Lipopolysaccharide-Induced Sepsis Mice. Biol Pharm Bull . 2022;45(8):1180-1184.

伊布地司特是一种吡唑并吡啶类化合物。
伊布地司特是一种口服抗炎和神经保护药物，每日60毫克的剂量显示出良好的安全性，可显著延长复发缓解型（RR）和/或继发进展型（SP）多发性硬化症（MS）患者的首次复发时间，并减轻脑容量萎缩。伊布地司特目前正在美国进行研发（产品代码：AV-411或MN-166），但已在日本获批用作抗炎药。
伊布地司特是一种口服生物利用度高的环核苷酸磷酸二酯酶（PDE）抑制剂，主要抑制PDE-3、-4、-10和-11，具有抗（神经）炎症、血管舒张、支气管扩张、镇痛、神经保护和潜在的抗肿瘤活性。伊布地司特（IBD）能够穿过血脑屏障（BBB）。给药后，IBD通过抑制PDE-4和促炎细胞因子巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）发挥其对多形性胶质母细胞瘤（GBM）细胞的潜在抗肿瘤活性。这导致MIF及其受体CD74和AKT表达降低，并减弱单核细胞来源的髓系抑制细胞（MDSC）的免疫抑制特性，同时减少调节性T细胞（Treg）的数量。这可诱导GBM细胞凋亡并抑制其增殖。此外，IBD还通过抑制多种PDE，减少某些促炎细胞因子（如白细胞介素-6（IL-6）、IL-1β、白三烯B4和肿瘤坏死因子-α（TNF-α））的产生。 IBD还能上调抗炎细胞因子IL-10，并促进脑源性神经营养因子（BDNF）、神经生长因子（NGF）和神经营养因子-4（NT-4）等神经营养因子的产生。它还能阻断Toll样受体4（TLR-4），抑制一氧化氮（NO）的合成，并降低活性氧（ROS）的水平。此外，它还能抑制血小板聚集，引起脑血管扩张、支气管平滑肌松弛，并改善脑血流。IBD还能减弱PDE介导的胶质细胞活化，并消除PDE介导的神经炎症和神经退行性变。巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）由癌症干细胞（CSCs）分泌，在胶质母细胞瘤（GBM）中高表达，并在肿瘤细胞增殖中发挥关键作用。在胶质母细胞瘤 (GBM) 中，MIF 和 CD74 的共表达与患者预后不良相关。

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药物适应症
用于治疗多发性硬化症、哮喘和脑血管疾病。

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作用机制
伊布地司特的作用机制包括抗炎作用（如磷酸二酯酶抑制）和神经保护作用（如抑制一氧化氮合成和减少活性氧）。

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磷酸二酯酶抑制剂伊布地司特对淋巴细胞、内皮细胞和胶质细胞具有多种作用。我们研究了伊布地司特在神经元和小胶质细胞共培养中的神经保护作用。伊布地司特显著抑制了脂多糖 (LPS) 和干扰素 (IFN)-γ 激活小胶质细胞所诱导的神经元细胞死亡。为了探究伊布地司特发挥神经保护作用、抑制小胶质细胞活化的机制，我们检测了伊布地司特治疗后炎症和抗炎介质以及营养因子的产生情况。结果显示，伊布地司特以剂量依赖的方式抑制活化小胶质细胞中一氧化氮（NO）、活性氧、白细胞介素（IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子（TNF）-α的产生，并增强抑制性细胞因子IL-10以及其他神经营养因子（包括神经生长因子（NGF）、胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）和神经营养因子（NT）-4）的产生。因此，伊布地司特介导的神经保护作用主要归因于其对炎症介质的抑制和对神经营养因子的上调。在海马切片的CA1区，高频刺激（HFS）诱导的长时程增强（LTP）可被脂多糖（LPS）和γ干扰素刺激抑制。伊布地司特可使这种LTP抑制恢复至对照组水平。这些结果表明，伊布地司特可能是一种有效的神经保护和抗痴呆药物，能够对抗活化小胶质细胞的神经毒性。[1]

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- 作用机制：伊布地司特通过抑制PDE4和PDE3发挥神经保护和抗炎作用，从而提高细胞内cAMP水平。这可激活蛋白激酶A（PKA）并抑制NF-κB介导的促炎细胞因子生成。[1,2]
- 治疗潜力：除神经炎症和脓毒症外，伊布地司特在多发性硬化症、哮喘和慢性阻塞性肺疾病（COPD）的临床前模型中也显示出疗效。其能够穿过血脑屏障，使其成为中枢神经系统疾病的候选药物[1,2]
- 临床开发：伊布地司特在日本获批用于治疗哮喘和慢性阻塞性肺病，目前正在进行II期临床试验，用于治疗进行性多发性硬化症和甲基苯丙胺使用障碍[1,2]

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伊布地司特（KC404、AV411、MN166）是一种磷酸二酯酶抑制剂，对淋巴细胞、内皮细胞和神经胶质细胞具有多种作用。其神经保护机制主要与抑制炎症介质的产生和上调神经营养因子有关，具有作为神经保护剂和抗痴呆剂的潜力[1]。在日本，伊布地司特（KC404、AV411、MN166）已在临床上用于治疗哮喘、过敏性结膜炎和脑血管疾病引起的眩晕。它具有抗炎作用，可通过降低促炎细胞因子水平和改善相关症状，成为治疗包括脓毒症在内的内毒素血症的候选药物[2]。

C14H18N2O

230.305523395538

230.141

C, 73.01; H, 7.88; N, 12.16; O, 6.95

50847-11-5

Ibudilast-d7;2713301-45-0;Ibudilast-d7-1;1204192-90-4

3671

White to off-white solid powder

1.1±0.1 g/cm3

53-54°C

1.571

3.34

34.37

0

2

3

17

288

0

O=C(C(C)C)C1=C2C=CC=CN2N=C1C(C)C

ZJVFLBOZORBYFE-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C14H18N2O/c1-9(2)13-12(14(17)10(3)4)11-7-5-6-8-16(11)15-13/h5-10H,1-4H3

2-methyl-1-(2-propan-2-ylpyrazolo[1,5-a]pyridin-3-yl)propan-1-one

Ibudilast; AV-411, KC-404; KC 404; MN-166, 50847-11-5; Ketas; KC-404; MN-166; Ibudilastum; Ke Tas; Ibudilastum [Latin]; AV 411, AV411, KC404; MN166, MN 166

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.67 mg/mL (11.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 26.7 mg/mL的澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中并混合均匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.67 mg/mL (11.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 26.7 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.67 mg/mL (11.59 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 26.7 mg/mL 澄清 DMSO 储备液添加到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.85 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (10.85 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 6 中的溶解度: 0.5 mg/mL (2.17 mM) in 1% DMSO 99% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 7 中的溶解度: ~2.7 mg/mL in 10% DMSO : 90% (20% SBE-β-CD in saline) ~2.7 mg/mL in 10% DMSO : 40% PEG300 : 5% Tween80 + : 45% saline ~2.7 mg/mL in 10% DMSO : 90% corn oil

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。