INT (Iodonitrotetrazolium chloride) 中文名称: 硝基氯化四氮唑蓝

别名: Iodonitrotetrazolium chloride; 146-68-9; Iodonitrotetrazolium; 2-(4-Iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-phenyltetrazolium chloride; Iodonitrotetrazolium violet; INT; Iodonitrotetrazolium purple; Iodonitro tetrazolium; 硝基氯化四氮唑蓝;碘硝基四唑;碘硝基氯化四氮唑蓝;碘硝基四唑紫; 2-(对碘代苯)-3-(对硝基苯)-5-苯基氯化四氮唑;碘硝基氯化四氮唑;碘硝基四氮唑;碘硝基四氮唑紫;碘硝基紫四唑;对碘硝基四氮唑紫; 氯化碘硝基四氮唑;碘代硝基四唑兰;2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基-四唑氯;2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基四唑氯;2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基氯化四唑;（INT）碘硝基四唑紫;2-(4-Iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-phenyltetrazolium Chloride 2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基氯化四唑;2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-...;碘硝基氯化四氮唑蓝(INT );碘硝基氯化四氮唑蓝（INT）;碘硝基四氮唑蓝;碘硝基四唑紫（INT）;硝基氯化四氮唑蓝INT;碘硝基氯化四氮唑蓝,2-(对碘苯基)-3-(对硝基苯基)-5-苯基四唑氯水合物,,2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基氯化四唑氯水合物;2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基氯化四唑氯水合物;对碘硝基四唑紫

目录号: V32771 纯度: ≥98%

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INT（氯化碘硝基四唑）可用于脱氢酶比色法测定电子受体。

INT (Iodonitrotetrazolium chloride) CAS号: 146-68-9
产品类别: New2

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Nature 2025, 643(8070):192-200.

Nature 2024 Dec 18.

Nature 2021, 597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022: 8, eabm9427.

Nat Neurosci 2024, 27:1468-1474.

Science Adv 2025, 11(33):eadr5199.

Nat Metab 2024, 6: 1108-1127.

Cell Stem Cell 2024, 31:106-126.e13.

Nature 597, 119–125 (2021)

Cell Stem Cell 2020,26(6):845-861.e12.

Science Trans Med 2023,15(701):eadd7872.

STTT 2023,8(1):91.

Cell Reports 2023,42(4):112313

Science Trans Med 2023, 15: eadd7872.

Cancer Cell 2021,39(4):529-547.e7.

Cancer Discov 2022,12(4):1106-1127.

Immunity 2023,56(3):620-634.e11.

Immunity 2024,57:2651-2668.e12.

J Am Chem Soc 2022,144:21831-21836.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

Science Adv 2022:8,eabm9427.

Nature 2021,597(7874):119-125.

Cell 2020,183:1202-1218.e25.

PNAS Nexus 2022,1(3):pgac063.

ACS Nano 2023,17(10):9110-9125.

Biomaterial 2023 Sep16:302:122333.

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产品描述

INT（氯化碘硝基四唑）可用于脱氢酶比色法测定电子受体。碘硝基四唑紫（Iodonitrotetrazolium chloride, INT, CAS号: 146-68-9）是一种四唑盐类显色剂，化学名为氯化-2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基-2H-四氮唑。分子式为C₁₉H₁₃ClIN₅O₂，分子量为505.70 g/mol。该化合物在脱氢酶催化下可被还原为红色的甲臜（formazan）结晶，是评估微生物活性和细胞活力的常用生化试剂。

生物活性&实验参考方法

靶点	Dye; Biochemical Assay Reagents INT acts as an electron acceptor, targeting the flavoprotein level of the respiratory chain. In cells or tissues with active dehydrogenase enzymes, INT replaces oxygen as an electron acceptor, intercepting electrons at the respiratory chain level and being reduced to red INT-formazan. This process is closely related to NADH dehydrogenase activity, with studies showing that NADH can serve as a substrate together with INT.
体外研究 (In Vitro)	随着公众对公共卫生和卫生的兴趣日益浓厚，检测细菌污染的防护设备需求量很大。本文开发了一种基于光纤的视觉指示细菌传感器（VIBS），其中嵌入了iodonitrotetrazolium chloride/氯化碘四唑，用于检测活细菌，并研究了其对革兰氏阴性大肠杆菌和革兰氏阳性藤黄微球菌的显色效果。基于Kubelka-Munk方程，通过光吸收系数与散射系数（K/S）来测量显色强度，并通过计算检测限（LOD）和定量限（LOQ）来检查不同膜的比色灵敏度。结果表明，VIBS与细菌之间的相互作用取决于膜的润湿性。疏水膜在高浓度革兰氏阴性大肠杆菌中显示出过度的相互作用，其细胞膜是亲脂性的。与疏水性和亲水性聚合物共混的膜对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌菌株都显示出线性比色反应，在测试的细菌浓度范围内表现出可靠的传感能力。这项研究具有重要意义，因为进行了探索性实验，以构想基于光纤的细菌传感器的概念验证，该传感器很容易应用于细菌构成威胁的各个领域[1]。 INT在体外可作为脱氢酶的底物被还原。在土壤脱氢酶活性测定中，INT被还原为INT-甲臜后，于464 nm波长下进行比色测定，该方法的甲臜产物高度稳定。在真菌孢子活力评估中，INT可被有活力的孢子吸收，通过呼吸作用在胞内还原沉积为亮红色的甲臜结晶，且该产物在波长515-565 nm具有可检测的荧光。研究显示，在20°C孵育条件下，INT-甲臜荧光可在孵育后1小时内被检测到，6小时达到最佳检测效果。在心肌线粒体中，INT与NADH共同孵育时，ATP可促进反应速率，而ADP和AMP无此效应。
体内研究 (In Vivo)	了解浮游生物呼吸的幅度和变异性是我们理解海洋碳循环的一个关键空白。为了验证INT还原法作为浮游生物呼吸的替代指标，我们编制并分析了一个数据集（n=376），该数据集同时测量了2-对（碘苯基）-3（硝基苯基）-5（苯基）氯化四唑盐（氯化碘四唑/INT）的溶解氧消耗（CRO2）和体内还原，涵盖了广泛的海洋区域和物理化学条件。数据被随机分为两个独立的亚组：三分之二的数据用于推导溶解氧消耗量和INT减少量之间的回归转换（“训练”数据集），三分之一的数据用于验证回归（“测试”数据集中）。使用“训练”数据集，对数转换溶解氧消耗率和对数转换INT减少率（INTT）之间存在显著关系（logCRO2=0.72logINTT+0.44，R2=0.69，n=249，p<0.001）。将应用前一个方程获得的估计耗氧率与“测试”数据集中测量的溶解氧消耗率进行比较，该数据集跨越了呼吸率的三个数量级范围。实测和估算的溶解氧消耗率之间没有显著差异，表明INT还原法可以作为天然浮游生物群落呼吸的替代指标。将数据除以温度和叶绿素a浓度的进一步分析表明，经验转换方程的预测能力在温度>8°C和叶绿素a含量>0.2μg L-1时增加，在较低的温度和叶绿素a浓度下降低。这项研究的结果证实了INT方法对天然浮游生物群落的充分性能和可靠性[3]。
酶活实验	描述了一种测定琥珀酸脱氢酶活性的分光光度测定方法，其中 iodonitrotetrazolium chloride 氯化碘四唑用作最终电子受体。通过测量由于四唑盐还原而形成的甲氮来测定酶活性。该测定是连续、快速、简单和灵敏的，可用于测定组织匀浆中的酶活性，或作为细胞分级程序中线粒体部分的标志[2]。开发了一种使用INT（碘硝基四唑氯）作为终末电子受体的连续比色法，用于测定琥珀酸脱氢酶活性。反应混合物包含三乙醇胺缓冲液（pH 8.3）、EDTA、氰化钾、INT、一种去垢剂（Cremophor EL）和琥珀酸。通过向混合物中加入线粒体悬浮液并在30°C孵育来启动反应。通过酶还原INT生成甲臜的过程，在500 nm波长下连续监测6分钟。平行进行不含琥珀酸的空白反应，并将其速率从样品速率中扣除。 INT-甲臜在500 nm处的摩尔吸光系数为19,300 M⁻¹ cm⁻¹，催化浓度使用公式U/ml = ΔA/min × 5.18计算。[2] 测试了INT浓度对酶活性的影响。在INT浓度为1至3 mmol/L之间观察到最大活性。浓度超过4 mmol/L会导致活性下降和反应线性丧失，表明存在抑制效应。在该测定中，计算出INT的米氏常数（Km）为0.19 mmol/L。[2] 非细胞体系中，INT常用作电子受体研究线粒体呼吸链活性。以鸽心肌线粒体为例，在2.2 mL反应体系中包含0.4-0.5 mg线粒体蛋白、0.22 M甘露醇、0.067 M蔗糖、0.02 M Tris-氯化物缓冲液、0.02 mM EDTA、0.5-3.0 mM INT以及38 μM NADH，于pH 7.2、28°C条件下孵育，使用呼吸抑制剂（阿米妥、鱼藤酮、抗霉素A、氰化物）研究电子传递途径，于540 nm波长下检测甲臜生成量。
细胞实验	在这项研究中，通过在聚合物膜中实施氯化碘四唑（INT），开发了一种视觉指示细菌传感器（VIBS）膜，以简单和合理的灵敏度显示细菌污染点。四唑盐（INT）用于基于代谢的测定，因为它在与活细胞的电子反应后被酶还原为红色或紫色甲氮[1]。在细胞活力检测中，INT可通过评估脱氢酶活性来反映细胞代谢状态。以黄瓜白粉病菌（Sphaerotheca fuliginea）分生孢子为例，将孢子悬浮液与0.5-1.0 mg/mL INT溶液混合，于20°C黑暗中孵育6-12小时。孵育后，通过显微镜观察孢子的红色甲臜染色情况，或在荧光显微镜下于515-565 nm波长检测甲臜荧光。活孢子因呼吸作用还原INT呈红色，而死孢子因膜通透性改变可能非特异性吸收染料，但染色模式与活孢子的均匀红色沉积不同。
药代性质 (ADME/PK)	INT为四唑盐类化合物，分子量为505.70 g/mol。其水溶性良好，但进入细胞后转化为不溶性的红色甲臜产物，在胞内沉积。该化合物主要通过人工提取进行检测。储存条件：应在2-8°C条件下密封避光保存。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)	INT具有刺激性。根据GHS分类信息，129份公司通报中有100%通报指出其吞咽有害（H302）；77.78%通报指出引起皮肤刺激（H315）和严重眼刺激（H319）；66.67%通报指出可能引起呼吸道刺激（H335）；44.44%通报指出皮肤接触有害（H312）和吸入有害（H332）；11.11%通报指出为易燃固体（H228）和疑似致癌物（H351）。主要供应商建议操作时佩戴防护手套、眼罩，避免吸入粉尘，如误吞应就医。
参考文献	[1]. Tetrazolium-Based Visually Indicating Bacteria Sensor for Colorimetric Detection of Point of Contamination. ACS Appl Mater Interfaces . 2022 Aug 24;14(33):38153-38161. [2]. Assay of succinate dehydrogenase activity by a colorimetric-continuous method using iodonitrotetrazolium chloride as electron acceptor. Anal Biochem . 1993 Aug 1;212(2):506-9. [3]. Validation of the in vivo Iodo-Nitro-Tetrazolium (INT) Salt Reduction Method as a Proxy for Plankton Respiration. Front. Mar. Sci. 2019, 6, 220 10.3389/fmars.2019.00220.
其他信息	碘硝基四唑氯化物是一种有机氯化物，其抗衡离子为碘硝基四唑。它可用作组织学染料。它含有碘硝基四唑。 INT 是一种四唑盐，可用作酶促反应中的电子受体。在本研究中，琥珀酸脱氢酶对 INT 的还原效率高于其他四唑盐，可生成有色甲臜产物。[2] 使用 INT 的优化检测方法具有连续、快速、简便和灵敏的优点，适用于测定组织匀浆中的酶活性，或作为亚细胞分级分离中的线粒体标记物。[2] INT是实验室常用的细胞活力指示剂，与MTT（噻唑蓝）类似，均基于活细胞中线粒体脱氢酶将四唑盐还原为有色甲臜的原理。INT的优势在于其甲臜产物为红色且具有荧光特性，便于同时进行光镜和荧光检测。该化合物在环境微生物学中作为土壤微生物生物量的间接指标有广泛应用。由于INT具有GHS警示分类，建议在通风橱中操作并做好个人防护。

*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性

化学信息 & 存储运输条件

分子式	C19H13CLIN5O2
分子量	505.6963
精确质量	504.98
CAS号	146-68-9
PubChem CID	64957
外观&性状	Yellow to brown solid powder
沸点	567.5ºC at 760 mmHg
熔点	240 °C (dec.)(lit.)
闪点	297ºC
蒸汽压	6.76E-13mmHg at 25°C
LogP	1.251
tPSA	80.41
氢键供体(HBD)数目	0
氢键受体(HBA)数目	5
可旋转键数目(RBC)	3
重原子数目	28
分子复杂度/Complexity	497
定义原子立体中心数目	0
SMILES	C1=CC=C(C=C1)C2=NN([N+](=N2)C3=CC=C(C=C3)[N+](=O)[O-])C4=CC=C(C=C4)I.[Cl-]
InChi Key	JORABGDXCIBAFL-UHFFFAOYSA-M
InChi Code	InChI=1S/C19H13IN5O2.ClH/c20-15-6-8-16(9-7-15)23-21-19(14-4-2-1-3-5-14)22-24(23)17-10-12-18(13-11-17)25(26)27;/h1-13H;1H/q+1;/p-1
化学名	2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-phenyltetrazol-3-ium;chloride
别名	Iodonitrotetrazolium chloride; 146-68-9; Iodonitrotetrazolium; 2-(4-Iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-phenyltetrazolium chloride; Iodonitrotetrazolium violet; INT; Iodonitrotetrazolium purple; Iodonitro tetrazolium;
HS Tariff Code	2934.99.9001
存储方式	Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意：请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。
运输条件	Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

溶解度数据

溶解度 (体外实验)	DMSO : ~83.33 mg/mL (~164.78 mM) H2O : soluble; 4-10 mg/mL Ethanol: ~30 mg/mL PBS: ~10 mg/mL
溶解度 (体内实验)	配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

溶解度 (体外实验)

DMSO : ~83.33 mg/mL (~164.78 mM)
H2O : soluble; 4-10 mg/mL
Ethanol: ~30 mg/mL
PBS: ~10 mg/mL

溶解度 (体内实验)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.11 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。

制备储备液		1 mg	5 mg	10 mg
	1 mM	1.9775 mL	9.8873 mL	19.7746 mL
	5 mM	0.3955 mL	1.9775 mL	3.9549 mL
	10 mM	0.1977 mL	0.9887 mL	1.9775 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器

质量

浓度

体积

分子量*

计算重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度

参见示例

使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？

在分子量（MW）框中输入350.26
在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。

浓度 (起始)

体积 (起始)

浓度 (终)

体积 (终)

计算重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：

在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
单击“计算”按钮
答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中

分子式

分子量

g/mol

计算重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4 c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：

要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。

分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：

分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。

配液体积

质量

配液浓度

计算重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
单击“计算”按钮
答案显示在体积框中

动物体内实验配方计算器（澄清溶液）

第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）

给药剂量 mg/kg

动物平均体重 g

每只动物给药体积 μL

动物数量

第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。

% DMSO

% Tween 80

% ddH₂O

计算重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH₂O，混匀澄清。

注意： (1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息

2010/2011 Trivalent Influenza Vaccination
CTID: NCT01304563
Phase: N/A
Status: Completed
Date: 2011-02-25