CD38 inhibitor 78c   中文名称: CD38抑制剂 1

humanCD38 (IC50 = 7.3 nM; mouse CD38 (IC50 = 1.9 nM); WT hCD38 (Ki = 0.3 nM)[1]
CD38 (NADase/ADP-ribosyl cyclase). 78c is a reversible, uncompetitive inhibitor of CD38. Against recombinant human CD38, the inhibition constant (Kᵢ) for the hydrolase activity is 9.7 ± 1.5 nM, and for the cyclase activity is 100 ± 28 nM (10-fold less potent). Against murine CD38, the Kᵢ is in the low nanomolar range (approximately 3.6 nM). [1,2]

酶抑制动力学：78c作为非竞争性抑制剂，结合于酶-底物复合物，同时降低CD38对NAD⁺的表观Vₘₐₓ和Kₘ。抑制可逆。反应产物烟酰胺(NAM)降低表观V₀并增加78c的Kᵢ，而ADP-核糖(ADPR)和环ADP-核糖(cADPR)对这些动力学参数无显著影响。[2]
对相关酶的特异性：78c在高达50 nM浓度下不抑制CD157（又称BST-1）的活性，无论使用NAD⁺还是烟酰胺核糖(NR)作为底物。在高达50 nM浓度下也不抑制海兔（Aplysia californica）的ADP-核糖环化酶。[2]
对其他NAD⁺代谢酶的影响：78c在有效抑制CD38的浓度下（高达100 nM）对重组PARP1、SIRT1或NAMPT无直接抑制或刺激作用。[2]
细胞NAD⁺水平：在野生型小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)中，78c（0.2 μM，24小时）使NAD⁺水平几乎翻倍。在CD38敲除MEFs中，78c对NAD⁺水平无影响。[2]
NAD⁺升高的机制：在共培养实验中，上室为CD38⁺ Jurkat T细胞，下室为CD38⁻ AML12肝细胞，78c（0.5 μM）显著增加AML12细胞的NAD⁺水平。这一效应在加入NAD⁺前体NMN后增强。当上室293T细胞过表达CD38时，78c逆转了CD38介导的NMN向AML12细胞可用性的耗竭。[2]
下游信号通路影响：在表达CD38的293T细胞中，78c（0.5 μM，24小时）逆转了CD38诱导的p65乙酰化和全细胞乙酰化增加，这一效应被sirtuin抑制剂烟酰胺和EX-527阻断。在A549细胞中，78c激活AMPK通路（增加pAMPK），降低p70S6K和ERK磷酸化。[2]
78c通过抑制CD38 NADase活性增加NAD+水平。 78c是一种有效的、可逆的、非竞争性的CD38抑制剂。 78c是CD38的特异性抑制剂，不直接影响参与NAD+代谢的其他酶的活性或表达[2]。

老年小鼠组织NAD⁺升高：在2岁小鼠中，78c治疗（10 mg/kg，腹腔注射，每日两次，持续14周）显著增加多个组织的NAD⁺水平，包括肝脏（>5倍）、骨骼肌（>1.2倍）、脾脏和心脏。在年轻小鼠（3月龄）中，78c对NAD⁺水平影响甚微。[1,2]
改善葡萄糖稳态：78c治疗的老年小鼠表现出改善的葡萄糖耐量、降低的胰岛素水平、降低的HOMA-IR指数和增加的胰岛素敏感性。这些效应被NAMPT抑制剂FK866联合给药阻断，证实其依赖于NAD⁺合成。在早衰P44⁺/⁺小鼠中，78c也改善了葡萄糖耐量。[2]
改善身体功能和肌肉结构：78c治疗1岁和2岁小鼠使最大跑步距离和工作量几乎翻倍，增加力竭时间，改善自发活动能力。肌肉ATP水平和ATP/O₂偶联增加。组织学上，78c减少了中心核数量（减少>70%）、CD45⁺炎症细胞浸润（减少>70%）和坏死肌纤维（减少>70%），并使肌纤维大小分布正常化。纤维化相关基因表达降低。[2]
改善心脏功能：在2岁小鼠中，78c治疗（10周）逆转了与年龄相关的射血分数和缩短分数下降，减少收缩期左心室容积(LVVs)和等容收缩时间(IVCT)，将这些参数恢复至接近年轻小鼠水平。[2]
提高生存率：78c治疗提高了加速衰老Bub1bᴴ/⁺小鼠模型的总体生存率。[2]
减少端粒相关DNA损伤：在78c治疗（14周）的老年小鼠肝脏和骨骼肌中，端粒相关灶（TAF，γH2A.X与端粒探针共定位）显著减少，表明DNA损伤减少。[2]
激活长寿通路：在78c治疗的老年小鼠脾脏和骨骼肌中，AMPK被激活，赖氨酸残基的泛乙酰化、泛琥珀酰化和泛丙二酰化降低，p70S6K和ERK磷酸化降低。脾脏中蛋白PARylation增加。[2]
口服 CD38 抑制剂（30 mg/kg；2 小时和 6 小时）可显着提高肝脏和肌肉中的 NAD 水平[1]。

CD38水解酶活性测定：使用荧光底物ε-NAD⁺（烟酰胺1,N⁶-乙烯腺嘌呤二核苷酸）测定CD38活性。转化为ε-ADPR后通过荧光监测（激发300 nm，发射410 nm）。抑制研究中，重组人CD38或组织裂解液与不同浓度78c在50 μM ε-NAD⁺存在下孵育。[2]
CD38环化酶活性测定：使用烟酰胺鸟嘌呤二核苷酸(NGD)作为底物测定环化酶活性。转化为环GDP-核糖(cGDPR)后通过荧光监测（激发300 nm，发射410 nm）。[2]
CD157活性测定：使用重组人CD157，通过监测262 nm吸光度的降低测定NR或NAD⁺的水解，方法参见Preugschat et al. (2014)。[2]
PARP1活性测定：使用商业化比色试剂盒测定PARP1活性。重组PARP1与NAD⁺和组蛋白底物在存在或不存在78c或PARP抑制剂olaparib的情况下孵育。[2]
SIRT1活性测定：使用荧光试剂盒（Enzo Life Sciences）测定SIRT1活性。重组SIRT1与荧光底物和NAD⁺在存在或不存在78c或SIRT1抑制剂suramin的情况下孵育。[2]
NAMPT活性测定：使用商业化比色试剂盒（MBL International）按说明书测定NAMPT活性。[2]
pIC50测定人和小鼠CD38酶的生化分析细节[1]
CD38抑制剂通过比色法检测其抑制人CD38酶活性的能力。人CD38的细胞外结构域在毕赤酵母中表达并纯化至均匀性。酶活性测定在总容积为20 μL的384孔板上进行。将200 nL DMSO中一定浓度的试验化合物送入测定板孔。板的第6列和第18列含有不含化合物的DMSO，分别作为高信号和低信号对照（未添加CD38）。使用Multidrop Combi向板中添加所有检测试剂，每次添加后摇板3-5 s。反应开始前，CD38 （0.8 nM）与10 μL含100 mM HEPES、pH 7.4、4 mM EDTA、1 mM CHAPS的化合物孵育30 min。在10 μL的溶液中加入5 mM的乙酸钠、pH为4.5、1 mM的CHAPS、200 μM的NAD和500 μM的GW323424X，引发反应。两种添加物的溶液每天从单个成分的浓缩库存中新鲜制备。实验最终浓度为50 mM HEPES， 2 mM EDTA, 1 mM CHAPS， 2.5 mM乙酸钠，100 μM NAD, 250 μM GW323434X, 0.4 nM CD38。GW323434X是一种4-吡啶基化合物，作为亲核试剂参与NAD上烟酰胺的碱交换反应，形成一种新的二核苷酸，在405 nm处吸收。这种新型发色团的催化形成在Envision微孔板阅读器上通过读取两个时间点的吸光度来跟踪，通常在反应的前45分钟内相隔30分钟。这些时间点是根据经验建立的，以确保确定的速率在产品形成的线性范围内。使用ActivityBase XE （Abase XE）以以下方式执行数据分析。15和45分钟读取的数据通过对每个板孔进行45分钟读取值减去15分钟读取值的减法处理。使用公式100 × (（U - C1)/(C2 - C1)）将非控制井的结果值转换为抑制率%，其中U为测试井的值，C1为高信号（第6列）控制井的值的平均值，C2为低信号（第18列）控制井的值的平均值。绘制抑制百分比(y)与抑制剂浓度(x)的关系曲线，并使用以下四个参数方程进行曲线拟合：y = A + ((B - A)/(1 + (10x/10C)D))，其中A为最小响应，B为最大响应，C为log10IC50， D为Hill斜率。每种化合物的结果记录为pIC50值（上式中的−C）。对于本文中的数据，将pIC50值换算为摩尔IC50值，公式为IC50 = 10-pIC50。对IC50值进行统计[1]。
重组小鼠CD38胞外结构域在CHO - CGE细胞中表达并纯化至均匀性。利用酶在低体积384孔检测板上以10 μL的体积进行酶反应，用荧光法测定小鼠CD38抑制剂的pIC50值。该实验定量测定了CD38在45分钟的反应时间内催化NAD水解的速率是线性的。将100nl DMSO中一定浓度的试验化合物送入测定板孔。平板的第6列和第18列含有DMSO，分别作为低信号和高信号对照。柱18含有一种有效的小鼠CD38抑制剂来定义高信号（无酶活性）控制。使用Multidrop Combi向培养皿中添加化合物以外的其他成分，每次添加后摇晃培养皿3-5 s。反应开始前，CD38 （0.45 nM）与5 μL含20 mM HEPES、pH 7.2、1 mM EDTA和1 mM CHAPS的化合物孵育30 min。在5 μL的溶液中加入20 mM HEPES、pH 7.2、1 mM EDTA、1 mM CHAPS和60 μM NAD，引发反应。实验最终浓度为HEPES 20 mM， pH 7.2, EDTA 1 mM, CHAPS 1 mM, NAD 30 μM，小鼠CD38 0.225 nM。反应时间结束后，用乙醇脱氢酶（ADH）将NAD转化为NADH，定量测定NAD的残留量。ADH在5 μL中加入9U/mL ADH、90 mM焦磷酸钠、pH 8.8、90 mM乙醇、1 mM EDTA和1 mM CHAPS。加入5 μL 1 M HEPES， pH 7.0, 1.0 mM EDTA和1 mM含0.8 M二硫代糖醇（DTT）的CHAPS，阻断乙醇脱氢酶反应，在Envision平板读取仪（激发340 nm，发射460 nm）上测量NADH荧光。四种添加物的溶液都是每天从单个成分的浓缩原液中新鲜制备的，DTT是每天从新鲜原液中制备的。

细胞NAD⁺测定：细胞在10%三氯乙酸(TCA)中裂解，离心，上清用有机溶剂（1,1,2-三氯-1,2,2-三氟乙烷:三辛胺，3:1）萃取去除TCA。水相用1M Tris（pH 8.0）中和，使用基于刃天青还原为试卤灵的循环法测定NAD⁺。[2]
共培养实验：AML12细胞（CD38⁻）接种于Transwell板下室。CD38⁺ Jurkat T细胞或转染CD38的293T细胞接种于上室。78c（0.5-1 μM）加入上室，随后加入NMN（100 μM）。24小时后收集AML12细胞进行NAD⁺测定。[2]
Western blot分析：细胞或组织裂解液在NETN缓冲液（20 mM Tris-HCl pH 8.0，100 mM NaCl，1 mM EDTA，0.5% Nonidet P-40）中加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂制备。对于乙酰化、琥珀酰化和丙二酰化研究，加入5 mM烟酰胺和5 μM曲古抑菌素A。对于PARylation研究，加入100 μM鞣酸。蛋白经SDS-PAGE分离，转至PVDF膜，用特异性抗体检测。[2]
转染和药物处理：HEK293T细胞使用Lipofectamine转染Flag-CD38、Flag-p65或HA-p53质粒。20小时后，细胞用78c（0.5 μM）、olaparib（5 μM）、EX-527（5 μM）或烟酰胺（5 mM）处理24小时。[2]

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HEK293T分别用0.5 μM 78c、5 μM olaparib （LC Laboratories）、5 μM EX-527 （Tocris）或5 μM烟酰胺处理24小时。MEFs用0.2 μM 78c处理24小时。A549细胞分别用DMSO、78c （0.2 ~ 0.5 μM）或5 μM奥拉帕尼处理24小时。A549和293T细胞在含0.5% FBS的培养基中用药物处理，mef在含10% FBS的培养基中处理。为了检测CD38i的可逆性，A549细胞用载药或0.5 μM 78c处理16小时。然后将细胞洗净，加（78c）或不加（78c+release） 78c再孵育8小时。对照细胞在整个处理期间放置在载具中。处理后，制备细胞裂解液用于测量CD38活性。共培养实验中，AML12细胞下腔镀，HEK293T或Jurkat T细胞上腔镀。转染CD38质粒的方法如上所述。在加入100 μM NMN前4小时向上腔中加入0.5-1 μM 78c。4小时后，两个腔室一起再孵育20小时。然后收集AML12细胞进行NAD+检测。在AML12细胞与重组CD38在细胞培养基中孵育的实验中，第一步是将重组蛋白（100ng/mL）与1 μM 78c在含1% FBS的细胞培养基中，37°C孵育30分钟。30分钟后，将重组蛋白-78c混合物加入细胞中，加入100μM NMN。18小时后，收集AML12细胞进行NAD+检测或Western blot。[2]

给药方案：将78c腹腔注射给C57BL/6小鼠（3、12和22-26月龄）和ICR小鼠（1岁），剂量为10 mg/kg/次，每日两次，持续4至14周。对照组小鼠注射溶剂（5% DMSO、15% PEG400、80% 15%羟丙基-γ-环糊精，溶于pH 6.0的柠檬酸缓冲液）。短期治疗组小鼠每日两次注射15 mg/kg/次，持续8天。[2]
\n与FK866联合用药：老年C57BL/6小鼠每日一次腹腔注射FK866（25 mg/kg/次）、78c（10 mg/kg/次，每日两次）或二者联合用药，持续10周。溶剂对照组注射相应的溶剂。 [2]
\n NAD⁺ 前体组合：老年小鼠在灌胃给予 NR（100 mg/kg）前 16 小时接受单次腹腔注射 78c（10 mg/kg），并在给予 NR 的同时再次接受 78c（10 mg/kg）。6 小时后处死小鼠。[2]
\n 葡萄糖耐量试验 (ipGTT)：治疗 7 周后，小鼠禁食 16 小时，然后腹腔注射 20% 葡萄糖溶液（1.5 g/kg 体重）。分别于注射后 0、20、30、60 和 120 分钟测量血糖。[2]
\n 胰岛素敏感性试验 (ipIST)：治疗 4 周后，小鼠禁食 6 小时，然后腹腔注射胰岛素（0.5 单位/kg）。分别于 0、20、30、60 和 120 分钟时测量血糖。[2]
\n丙酮酸耐量试验 (PTT)：治疗 9 周后，小鼠禁食 6 小时，然后腹腔注射丙酮酸 (1.5 g/kg)。分别于 0、20、30、60 和 120 分钟时测量血糖。[2]
\n跑步机运动试验：治疗 8 周后，小鼠适应跑步机（坡度 5°，速度 10 m/min，每天 5 分钟，连续 3 天）。力竭定义为小鼠即使受到电击也无法继续在跑步机上运动。计算跑步距离、时间、最大速度和做功量。采用下坡力竭方案（-10° 坡度）测定乳酸和肌酸激酶水平。 [2]
\n NAD⁺ 测定的组织收集：取约 20 mg 组织，在 10% 三氯乙酸中匀浆，离心，用有机溶剂（1,1,2-三氯-1,2,2-三氟乙烷：三辛胺，3:1）萃取上清液以去除三氯乙酸。用 1M Tris（pH 8.0）中和水相，用于 NAD⁺ 循环测定。[2]

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\n\n\n\n动物/疾病模型： 饮食诱导肥胖 (DIO) C57Bl6 小鼠 [1]
剂量： 30 mg/kg
给药途径： 口服一次。
实验结果：在2小时和6小时时间点，肝脏和肌肉中的NAD水平显著升高。

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\n\nCD38抑制剂（78c）通过腹腔注射（ip，10 mg/kg/次）的方式，每天两次，持续4至14周，给予C57BL/6（3、12和22至26月龄）和ICR（1岁）小鼠。3月龄、1岁和2岁小鼠接受78c治疗长达14周。78c与FK866联合用药10周。由于P44+/+早衰小鼠衰老加速，因此接受78c治疗4周。短期治疗中，小鼠每天两次，每次15 mg/kg，持续8天。对照组小鼠注射了溶剂（5% DMSO、15% PEG400、80% 15% 羟丙基-γ-环糊精（溶于 pH 6.0 的柠檬酸缓冲液））。我们还测定了多种组织和血浆中化合物 78c 的浓度。样品和标准品均采用含内标的乙腈进行蛋白质沉淀提取。上清液用 0.1% 甲酸水溶液稀释后，注入高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）系统进行分离和定量。分析物与基质组分采用反相色谱法分离，色谱柱为 30×2.1 mm、5 μm 的 Fortis Pace C18，采用梯度洗脱，流速为 0.8 mL/min。串联质谱分析在配备电喷雾电离接口的 SCIEX™ 三重四极杆质谱仪上进行，采用正离子模式。数据采集和分析使用 Analyst® 软件（SCIEX™）完成。测量结果如下：血浆（0.007 μg/mL）；脑（0.000 μg/g）；心脏（0.003 μg/g）；肾脏（0.005 μg/g）；肝脏（0.024 μg/g）；胰腺（0.002 μg/g）；脾脏（0.0048 μg/g）。我们还观察到，在用不同浓度的 78c 处理的培养细胞的细胞提取物中可以检测到 78c。[2]

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\n\nNAMPT 抑制剂：老年 C57BL/6 小鼠接受 FK866（25 mg/kg/剂量，腹腔注射，每日一次）、78c（10 mg/kg/剂量，腹腔注射，每日两次）或 FK866 和 78c 的组合（相同剂量）治疗 10 周。对照组小鼠分别注射等量的FK866溶剂（1%羟丙基-β-环糊精，12%丙二醇）和78c溶剂（5% DMSO，15% PEG400，80% 15%羟丙基-γ-环糊精（溶于pH 6.0的柠檬酸缓冲液）），一组小鼠接受78c治疗，另一组小鼠接受78c（10 mg/kg/次，腹腔注射，每日两次）和FK866（25 mg/kg/次，腹腔注射，每日一次）的联合治疗。

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\n\nNAD+前体：对于烟酰胺单核苷酸（NMN）治疗，C57BL/6小鼠通过灌胃给予单剂量NMN（500 mg/kg）或溶剂（PBS）。2小时后处死小鼠，并收集组织。在烟酰胺核苷 (NR) 的研究中，老年 C57BL/6 小鼠预先接受单剂量 78c（10 mg/kg，腹腔注射）处理。16 小时后，小鼠灌胃给予 NR（100 mg/kg），并再次注射 78c（10 mg/kg）。分别在给予 NR 前、30 分钟、1 小时、2 小时和 6 小时后采集血液样本。对照组小鼠分别接受 NR（200 mg/kg）、78c（10 mg/kg/次，共 2 次）或溶剂（NR=PBS；78c=5% DMSO、15% PEG400、80% 羟丙基-γ-环糊精）。小鼠在给予 78c 和 NR 6 小时后处死，并收集组织。[2]

[1]. Discovery, Synthesis, and Biological Evaluation of Thiazoloquin(az)olin(on)es as Potent CD38 Inhibitors. J Med Chem. 2015 Apr 23;58(8):3548-71.

[2]. A Potent and Specific CD38 Inhibitor Ameliorates Age-Related Metabolic Dysfunction by Reversing Tissue NAD+ Decline. Cell Metab. 2018;27(5):1081-1095.e10.

合成了一系列噻唑喹啉酮类化合物，发现它们对CD38具有强效抑制活性。其中几种化合物还表现出良好的药代动力学性质，并能提高血浆、肝脏和肌肉组织中的NAD水平。特别是，给饮食诱导肥胖（DIO）的C57Bl6小鼠服用化合物78c后，在2小时时间点，肝脏中的NAD水平较对照组提高了5倍以上，肌肉中的NAD水平提高了1.2倍以上。本文所述的化合物是迄今为止文献报道的小分子化合物中CD38抑制活性最强的。这些抑制剂有助于更详细地评估通过抑制CD38提高NAD水平如何影响NAD缺乏状态下的生理机能。[1]衰老的特征是代谢功能障碍和虚弱的发生。最近的研究表明，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）的减少是导致年龄相关代谢衰退的关键因素。我们近期证实，NADase CD38 在与年龄相关的 NAD+ 水平下降中起着核心作用。本文中，我们发现一种高效且特异性的噻唑喹啉酮类 CD38 抑制剂 78c 能够逆转与年龄相关的 NAD+ 水平下降，并改善多种衰老相关的生理和代谢指标，包括葡萄糖耐量、肌肉功能、运动能力和心脏功能。这些研究对象为自然衰老和加速衰老的小鼠模型。78c 的生理效应依赖于组织中的 NAD+ 水平，并且可通过抑制 NAD+ 合成而逆转。78c 能够提高 NAD+ 水平，从而激活与长寿和健康寿命相关的因子，例如 sirtuins、AMPK 和 PARPs。此外，在接受 78c 治疗的动物中，我们观察到一些对健康寿命产生负面影响的信号通路（例如 mTOR-S6K 和 ERK）受到抑制，并且端粒相关的 DNA 损伤（细胞衰老的标志）也得到减轻。我们的研究结果共同详细阐述了一种预防和/或逆转与年龄相关的 NAD+ 下降和随后的代谢功能障碍的新型药物策略。[2]

C22H27N3O3S

413.5331

413.18

C, 63.90; H, 6.58; N, 10.16; O, 11.61; S, 7.75

1700637-55-3

1700637-55-3;MDK-7553 HCl;

118736856

Light yellow to brown solid powder

3

91.9

1

6

7

29

594

0

CN1C2=C(C=C(C=C2)C3=CN=CS3)C(=CC1=O)NC4CCC(CC4)OCCOC

VJQALSOBHVEJQM-QAQDUYKDSA-N

InChI=1S/C22H27N3O3S/c1-25-20-8-3-15(21-13-23-14-29-21)11-18(20)19(12-22(25)26)24-16-4-6-17(7-5-16)28-10-9-27-2/h3,8,11-14,16-17,24H,4-7,9-10H2,1-2H3/t16-,17-

4-(((1r,4r)-4-(2-methoxyethoxy)cyclohexyl)amino)-1-methyl-6-(thiazol-5-yl)quinolin-2(1H)-one

CD38 inhibitor 78c; Compound-78c; CD38 inhibitor 1; 1700637-55-3; CD38-IN-78c; CHEMBL3426034; 4-((trans-4-(2-Methoxyethoxy)cyclohexyl)amino)-1-methyl-6-(thiazol-5-yl)quinolin-2(1H)-one; 4-[[trans-4-(2-Methoxyethoxy)cyclohexyl]amino]-1-methyl-6-(5-thiazolyl)-2(1H)-quinolinone; 4-(((1r,4r)-4-(2-Methoxyethoxy)cyclohexyl)amino)-1-methyl-6-(thiazol-5-yl)quinolin-2(1H)-one; compound 78c; CD38i_78c; 78c

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~25 mg/mL (~60.46 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (6.05 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (6.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 4 中的溶解度: 10 mg/mL (24.18 mM) in Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。

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配方 5 中的溶解度: 10 mg/mL (24.18 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。