NQ301   中文名称: NQ-301

"[1]. Synthesis, Biochemistry, and Computational Studies of Brominated Thienyl Chalcones: A New Class of Reversible MAO-B Inhibitors. ChemMedChem. 2016 Jun 6;11(11):1161-71. 链接: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27159243 请找到上述文章的全文(比如从https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/ 或者出版社原文), 随后将这些文章中关于 TB5 这个药物的体内外药理/生物活性、药物代谢性质、毒性及相关实验流程按照下面的详细要求提炼出来。 一、提取信息的详细要求（请仔细阅读，完全按照下述要求来提取）： 1）一定要阅读全文，不能只看摘要； 2）提取的信息分成英文（全英文）和中文两个版本； 3）字段如果文献未描述，就不用列出来; 4) 将药物名称嵌入加粗代码, 如药物名称; 5) 来自不同文献的内容后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等”； 6）同一个字段里面如果有几种不同的内容或实验步骤描述，请在不同内容或实验步骤之间插入分隔符
； 7) IC50、Ki、EC50、给药浓度/剂量等数值信息必须准确，如果不确定，宁可不提供； 8）仅提取指定文献里包含的此药物信息，不要将其他文献的信息放进来； 8）也不要引用指定文献之外的其他文献； 9）请务必准确、实事求是和详细，不要凭空捏造和幻想。一定不要提供不存在的假数据，我要的是真实数据，有就是有，没有就没有。 二、要提取的字段及具体要求按照如下格式（请仔细阅读，完全按照下述要求来提取）： Target: 提炼出这个药物的作用靶点/靶标，并将不同靶标的IC50、Ki、EC50等信息放在括号里面（这些数据也不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）；不同文献的靶点用
分开。 In Vitro：描述体外活性的详细实验结果（如抗增殖活性、酶/靶点活性、细胞活性、western blot, PCR、免疫组织化学、凋亡、克隆形成、作用机制等；数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）, 不同的体外实验结果分别描述，详细描述； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。 In Vivo：描述体内活性的详细实验结果(如体内药效、作用机制等；数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测), 不同的体内实验结果分别描述，详细描述； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。 Enzyme Assay： 关于酶（或者蛋白/受体）活性实验 或者靶点结合实验（如激酶活性、SPR、ITC、HTRF等；数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）的详细流程描述 (在原描述的基础上改变说法重新描述，不要只提取一两句话), 不同的实验分别描述，详细描述，不同实验之间嵌入分行代码
；另外，不要出现试剂/药物的供应商的名称； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。 Cell Assay： 关于细胞实验（如抗增殖、Cell viability/antiproliferative, western blot, PCR、免疫组织化学、凋亡、克隆形成实验等；数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）详细流程的描述(在原描述的基础上改变说法重新描述，不要只提取一两句话), 不同的细胞实验分别描述，详细描述，不同实验之间嵌入分行代码
；另外，不要出现试剂/药物的供应商的名称； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。 Animal Protocol: 关于动物实验(如体内药效实验、体内药代实验等)详细流程的描述(在原描述的基础上改变说法重新描述，不要只提取一两句话), 包括药物溶解配方/剂型、给药频率、途径等（数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）；不同的动物实验分别描述，详细描述，不同实验之间嵌入分行代码
；另外，不要出现试剂/药物的供应商的名称； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。 ADME/Pharmacokinetics：关于这个药物的体内外药物代谢特征（PK性质），如吸收、分布、代谢、排泄、半衰期、口服生物利用度等参数（数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测），不同的ADME性质分别描述，详细描述，不同的药代参数之间嵌入分行代码
； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。 Toxicity/Toxicokinetics：关于这个药物的体内外毒性/副作用信息，如半数致死量、肝肾毒性、药物药物相互作用、血浆蛋白结合度（protein binding）等（数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测），不同的性质分别描述，详细描述； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。 Additional Info：除了上述信息之外的其他和这个药物相关的信息，如背景介绍、作用机制、疗效、适应症、FDA警示信息，不同类别信息分别描述，详细描述； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。"

NQ301 可抑制兔血小板对胶原 (10 mg/mL)、U46619 (1 mg/mL) 和花生四烯酸 (100 mg/mL) 攻击的反应，浓度依赖性 IC50 值为 0.60±0.02、0.58±分别为 0.04 和 0.78 ±0.04 μM。 NQ301 对暴露于花生四烯酸的血小板形成血栓素 B2 具有浓度依赖性的有效抑制作用，但对前列腺素 D2 的产生没有影响，表明血栓素 A2 合酶受到抑制。除了调节血小板中花生四烯酸的释放潜力和 12-羟基-5,8,10,14-二十碳四烯酸的形成外，NQ301 还能够通过血栓素 A2/前列腺素 H2 受体阻断来抑制血栓素 A2 合酶活性[1] 。 NQ301 不是直接阻止纤维蛋白原-GPIIb/IIIa 复合物结合，而是抑制细胞内途径以防止血小板聚集。除了显着提高活化血小板中的血小板 cAMP 水平外，NQ301 还显着降低 ATP 分泌和胞质 Ca2+ 浓度的升高。 NQ301 的抗血小板作用可能是通过增强 cAMP 的产生、抑制活化血小板中的 ATP 分泌以及阻断胞浆 Ca2+ 动员来介导的[2]。

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对兔血小板TXA2受体和合成酶的抑制作用：NQ301（0.1-10 μM）呈剂量依赖性抑制兔血小板膜上[³H]-SQ29548与TXA2受体的结合，10 μM时最大抑制率约90%；同时呈剂量依赖性降低花生四烯酸（100 μM）刺激兔血小板生成的TXA2（以稳定代谢产物TXB2衡量），10 μM时TXB2生成抑制率约85%。此外，NQ301（0.1-10 μM）可剂量依赖性抑制TXA2类似物U46619（0.1 μM）诱导的血小板聚集，IC₅₀约1.5 μM [1]
- 通过抑制细胞内Ca²⁺动员发挥抗血小板作用（兔血小板）：NQ301（0.3-30 μM）呈剂量依赖性抑制多种激动剂诱导的血小板聚集：凝血酶（0.1 U/mL，IC₅₀约3.2 μM）、A23187（Ca²⁺载体，1 μM，IC₅₀约4.5 μM）、胶原（1 μg/mL，IC₅₀约5.1 μM）。采用Fura-2/AM负载的血小板检测显示，NQ301（10 μM）可显著降低凝血酶诱导的细胞内Ca²⁺升高：抑制细胞内钙库释放Ca²⁺约60%，抑制Ca²⁺内流约55%；同时可降低A23187诱导的Ca²⁺升高约40%，但对佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯（PMA，0.1 μM）诱导的Ca²⁺非依赖性血小板聚集无影响 [2]

大鼠FeCl₃诱导颈动脉血栓模型中的抗血栓作用：采用雄性Wistar大鼠（250-300 g）。静脉注射NQ301（剂量0.3、1、3 mg/kg）可剂量依赖性降低血栓重量，与对照组（血栓重量约4.2 mg）相比，0.3 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg组血栓重量分别约为3.1 mg、2.0 mg、1.2 mg。NQ301（3 mg/kg，静脉注射）可使出血时间较对照组延长约1.5倍，但对平均动脉血压（MABP）和心率（HR）无显著影响 [1]

TXA2合成酶活性测定：将兔血小板匀浆并离心，获取微粒体组分（作为酶来源）。反应体系包含微粒体组分、花生四烯酸（底物）及不同浓度的NQ301（0.01-100 μM），37°C孵育15分钟后，加入冰甲醇终止反应。采用特异性放射免疫分析（RIA）试剂盒检测体系中TXB2（TXA2稳定代谢产物）的浓度，通过绘制NQ301浓度与TXB2生成率（相对于对照组）的剂量-效应曲线，计算TXA2合成酶抑制作用的IC₅₀ [1]
- TXA2受体结合实验：通过匀浆和离心制备兔血小板膜。结合反应在含血小板膜组分、[³H]-SQ29548（特异性TXA2受体配体，0.5 nM）及不同浓度NQ301（0.01-100 μM）的缓冲液中进行；非特异性结合通过加入过量未标记SQ29548（10 μM）测定。25°C孵育60分钟后，用玻璃纤维滤膜过滤分离结合态与游离态配体，通过液体闪烁计数器检测滤膜上的放射性强度，采用Cheng-Prusoff方程计算NQ301的Ki值 [1]

兔血小板聚集实验（TXA2相关作用检测）：采集新鲜兔血，与3.8%柠檬酸钠按9:1体积比混合抗凝。150 × g离心10分钟制备富血小板血浆（PRP），3000 × g进一步离心15分钟制备贫血小板血浆（PPP），并用PPP将PRP中血小板计数调整为3×10⁸个/mL。采用浊度法在37°C、1000 rpm持续搅拌条件下检测聚集：PRP与NQ301（0.1-10 μM）预孵育5分钟后，加入U46619（0.1 μM）诱导聚集，以PPP为0%聚集、PRP为100%聚集计算聚集率，通过剂量-效应曲线求得IC₅₀ [1]
- 兔血小板聚集实验（Ca²⁺相关作用检测）：按上述方法制备兔PRP，加入NQ301（0.3-30 μM）并在37°C预孵育5分钟，分别加入凝血酶（0.1 U/mL）、A23187（1 μM）或胶原（1 μg/mL）诱导聚集，采用浊度法检测。对于PMA诱导的聚集，PRP与NQ301（10 μM）预孵育5分钟后加入PMA（0.1 μM），监测聚集30分钟 [2]
- 兔血小板细胞内Ca²⁺浓度测定：兔PRP与Fura-2/AM（5 μM）在避光条件下37°C孵育30分钟，离心后将负载Fura-2的血小板重悬于含Ca²⁺缓冲液（1 mM CaCl₂）或无Ca²⁺缓冲液（1 mM EGTA）中。采用荧光分光光度计检测荧光强度（激发波长340 nm和380 nm，发射波长510 nm）：血小板悬液与NQ301（1-30 μM）孵育5分钟后，加入凝血酶（0.1 U/mL）或A23187（1 μM），根据340 nm与380 nm处荧光强度比值（F340/F380）计算细胞内Ca²⁺浓度 [2]

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Rat FeCl₃-induced carotid artery thrombosis model: Male Wistar rats (250-300 g) were anesthetized with pentobarbital sodium (40 mg/kg, intraperitoneal injection). The right carotid artery was exposed, and a 2 mm segment of the artery was wrapped with filter paper soaked in 10% FeCl₃ solution for 5 minutes to induce thrombosis. NQ301 was dissolved in normal saline (0.9% NaCl) and administered intravenously via the tail vein at doses of 0.3, 1, or 3 mg/kg, 10 minutes before the application of FeCl₃ (the control group received normal saline alone). Two hours after FeCl₃ treatment, the rats were euthanized, and the segment of the carotid artery containing the thrombus was excised, blotted dry, and weighed. For bleeding time measurement, the tip of the rat's tail was transected 5 mm from the end, and the time until bleeding ceased (no visible bleeding for 30 seconds) was recorded before and after NQ301 administration. MABP and HR were monitored throughout the experiment via a cannulated femoral artery [1]

[1]. An antithrombotic agent, NQ301, inhibits thromboxane A2 receptor and synthase activity in rabbit platelets. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 2005 Sep;97(3):162-7.

[2]. Antiplatelet effect of 2-chloro-3-(4-acetophenyl)-amino-1,4-naphthoquinone (NQ301): a possible mechanism through inhibition of intracellular Ca2+ mobilization. Biol Pharm Bull. 2001 Jun;24(6):618-22.

NQ301 is an antithrombotic agent with a dual mechanism of action: it simultaneously inhibits TXA2 receptor binding and TXA2 synthase activity in platelets. This dual inhibition avoids the potential "shunt" effect associated with single TXA2 synthase inhibitors (which may lead to the accumulation of prostaglandin H2 and activation of other pro-aggregatory receptors), thereby enhancing its antiplatelet and antithrombotic efficacy [1]
- The antiplatelet effect of NQ301 is partially mediated by the inhibition of intracellular Ca²⁺ mobilization. It reduces both Ca²⁺ release from intracellular stores and Ca²⁺ influx across the plasma membrane, which are critical steps in platelet activation and aggregation. The lack of effect on PMA-induced (Ca²⁺-independent) platelet aggregation confirms that NQ301 specifically targets Ca²⁺-dependent pathways in platelets [2]

C18H12CLNO3

325.75

325.051

130089-98-4

781109

White to off-white solid powder

2.9

63.2

1

4

3

23

561

0

LSQZKIQSQHZVQS-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H12ClNO3/c1-10(21)11-6-8-12(9-7-11)20-16-15(19)17(22)13-4-2-3-5-14(13)18(16)23/h2-9,20H,1H3

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 0.71 mg/mL (2.18 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 7.1 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80 +，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。