NQ301   中文名称: NQ-301

"[1]. Synthesis, Biochemistry, and Computational Studies of Brominated Thienyl Chalcones: A New Class of Reversible MAO-B Inhibitors. ChemMedChem. 2016 Jun 6;11(11):1161-71. 链接: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27159243 请找到上述文章的全文(比如从https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/ 或者出版社原文), 随后将这些文章中关于 TB5 这个药物的体内外药理/生物活性、药物代谢性质、毒性及相关实验流程按照下面的详细要求提炼出来。 一、提取信息的详细要求（请仔细阅读，完全按照下述要求来提取）： 1）一定要阅读全文，不能只看摘要； 2）提取的信息分成英文（全英文）和中文两个版本； 3）字段如果文献未描述，就不用列出来; 4) 将药物名称嵌入加粗代码, 如药物名称; 5) 来自不同文献的内容后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等”； 6）同一个字段里面如果有几种不同的内容或实验步骤描述，请在不同内容或实验步骤之间插入分隔符
； 7) IC50、Ki、EC50、给药浓度/剂量等数值信息必须准确，如果不确定，宁可不提供； 8）仅提取指定文献里包含的此药物信息，不要将其他文献的信息放进来； 8）也不要引用指定文献之外的其他文献； 9）请务必准确、实事求是和详细，不要凭空捏造和幻想。一定不要提供不存在的假数据，我要的是真实数据，有就是有，没有就没有。 二、要提取的字段及具体要求按照如下格式（请仔细阅读，完全按照下述要求来提取）： Target: 提炼出这个药物的作用靶点/靶标，并将不同靶标的IC50、Ki、EC50等信息放在括号里面（这些数据也不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）；不同文献的靶点用
分开。 In Vitro：描述体外活性的详细实验结果（如抗增殖活性、酶/靶点活性、细胞活性、western blot, PCR、免疫组织化学、凋亡、克隆形成、作用机制等；数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）, 不同的体外实验结果分别描述，详细描述； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。 In Vivo：描述体内活性的详细实验结果(如体内药效、作用机制等；数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测), 不同的体内实验结果分别描述，详细描述； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。 Enzyme Assay： 关于酶（或者蛋白/受体）活性实验 或者靶点结合实验（如激酶活性、SPR、ITC、HTRF等；数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）的详细流程描述 (在原描述的基础上改变说法重新描述，不要只提取一两句话), 不同的实验分别描述，详细描述，不同实验之间嵌入分行代码
；另外，不要出现试剂/药物的供应商的名称； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。 Cell Assay： 关于细胞实验（如抗增殖、Cell viability/antiproliferative, western blot, PCR、免疫组织化学、凋亡、克隆形成实验等；数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）详细流程的描述(在原描述的基础上改变说法重新描述，不要只提取一两句话), 不同的细胞实验分别描述，详细描述，不同实验之间嵌入分行代码
；另外，不要出现试剂/药物的供应商的名称； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。 Animal Protocol: 关于动物实验(如体内药效实验、体内药代实验等)详细流程的描述(在原描述的基础上改变说法重新描述，不要只提取一两句话), 包括药物溶解配方/剂型、给药频率、途径等（数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测）；不同的动物实验分别描述，详细描述，不同实验之间嵌入分行代码
；另外，不要出现试剂/药物的供应商的名称； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。 ADME/Pharmacokinetics：关于这个药物的体内外药物代谢特征（PK性质），如吸收、分布、代谢、排泄、半衰期、口服生物利用度等参数（数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测），不同的ADME性质分别描述，详细描述，不同的药代参数之间嵌入分行代码
； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。 Toxicity/Toxicokinetics：关于这个药物的体内外毒性/副作用信息，如半数致死量、肝肾毒性、药物药物相互作用、血浆蛋白结合度（protein binding）等（数据不能造假，文献说是多少就是多少，不要瞎编和推测），不同的性质分别描述，详细描述； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。 Additional Info：除了上述信息之外的其他和这个药物相关的信息，如背景介绍、作用机制、疗效、适应症、FDA警示信息，不同类别信息分别描述，详细描述； 不同文献的内容/描述后面加上参考文献及分行代码如 “[1]
”或“[2]
等。"

NQ301 可抑制兔血小板对胶原 (10 mg/mL)、U46619 (1 mg/mL) 和花生四烯酸 (100 mg/mL) 攻击的反应，浓度依赖性 IC50 值为 0.60±0.02、0.58±分别为 0.04 和 0.78 ±0.04 μM。 NQ301 对暴露于花生四烯酸的血小板形成血栓素 B2 具有浓度依赖性的有效抑制作用，但对前列腺素 D2 的产生没有影响，表明血栓素 A2 合酶受到抑制。除了调节血小板中花生四烯酸的释放潜力和 12-羟基-5,8,10,14-二十碳四烯酸的形成外，NQ301 还能够通过血栓素 A2/前列腺素 H2 受体阻断来抑制血栓素 A2 合酶活性[1] 。 NQ301 不是直接阻止纤维蛋白原-GPIIb/IIIa 复合物结合，而是抑制细胞内途径以防止血小板聚集。除了显着提高活化血小板中的血小板 cAMP 水平外，NQ301 还显着降低 ATP 分泌和胞质 Ca2+ 浓度的升高。 NQ301 的抗血小板作用可能是通过增强 cAMP 的产生、抑制活化血小板中的 ATP 分泌以及阻断胞浆 Ca2+ 动员来介导的[2]。

---

对兔血小板TXA2受体和合成酶的抑制作用：NQ301（0.1-10 μM）呈剂量依赖性抑制兔血小板膜上[³H]-SQ29548与TXA2受体的结合，10 μM时最大抑制率约90%；同时呈剂量依赖性降低花生四烯酸（100 μM）刺激兔血小板生成的TXA2（以稳定代谢产物TXB2衡量），10 μM时TXB2生成抑制率约85%。此外，NQ301（0.1-10 μM）可剂量依赖性抑制TXA2类似物U46619（0.1 μM）诱导的血小板聚集，IC₅₀约1.5 μM [1]
- 通过抑制细胞内Ca²⁺动员发挥抗血小板作用（兔血小板）：NQ301（0.3-30 μM）呈剂量依赖性抑制多种激动剂诱导的血小板聚集：凝血酶（0.1 U/mL，IC₅₀约3.2 μM）、A23187（Ca²⁺载体，1 μM，IC₅₀约4.5 μM）、胶原（1 μg/mL，IC₅₀约5.1 μM）。采用Fura-2/AM负载的血小板检测显示，NQ301（10 μM）可显著降低凝血酶诱导的细胞内Ca²⁺升高：抑制细胞内钙库释放Ca²⁺约60%，抑制Ca²⁺内流约55%；同时可降低A23187诱导的Ca²⁺升高约40%，但对佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯（PMA，0.1 μM）诱导的Ca²⁺非依赖性血小板聚集无影响 [2]

大鼠FeCl₃诱导颈动脉血栓模型中的抗血栓作用：采用雄性Wistar大鼠（250-300 g）。静脉注射NQ301（剂量0.3、1、3 mg/kg）可剂量依赖性降低血栓重量，与对照组（血栓重量约4.2 mg）相比，0.3 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg组血栓重量分别约为3.1 mg、2.0 mg、1.2 mg。NQ301（3 mg/kg，静脉注射）可使出血时间较对照组延长约1.5倍，但对平均动脉血压（MABP）和心率（HR）无显著影响 [1]

TXA2合成酶活性测定：将兔血小板匀浆并离心，获取微粒体组分（作为酶来源）。反应体系包含微粒体组分、花生四烯酸（底物）及不同浓度的NQ301（0.01-100 μM），37°C孵育15分钟后，加入冰甲醇终止反应。采用特异性放射免疫分析（RIA）试剂盒检测体系中TXB2（TXA2稳定代谢产物）的浓度，通过绘制NQ301浓度与TXB2生成率（相对于对照组）的剂量-效应曲线，计算TXA2合成酶抑制作用的IC₅₀ [1]
- TXA2受体结合实验：通过匀浆和离心制备兔血小板膜。结合反应在含血小板膜组分、[³H]-SQ29548（特异性TXA2受体配体，0.5 nM）及不同浓度NQ301（0.01-100 μM）的缓冲液中进行；非特异性结合通过加入过量未标记SQ29548（10 μM）测定。25°C孵育60分钟后，用玻璃纤维滤膜过滤分离结合态与游离态配体，通过液体闪烁计数器检测滤膜上的放射性强度，采用Cheng-Prusoff方程计算NQ301的Ki值 [1]

兔血小板聚集实验（TXA2相关作用检测）：采集新鲜兔血，与3.8%柠檬酸钠按9:1体积比混合抗凝。150 × g离心10分钟制备富血小板血浆（PRP），3000 × g进一步离心15分钟制备贫血小板血浆（PPP），并用PPP将PRP中血小板计数调整为3×10⁸个/mL。采用浊度法在37°C、1000 rpm持续搅拌条件下检测聚集：PRP与NQ301（0.1-10 μM）预孵育5分钟后，加入U46619（0.1 μM）诱导聚集，以PPP为0%聚集、PRP为100%聚集计算聚集率，通过剂量-效应曲线求得IC₅₀ [1]
- 兔血小板聚集实验（Ca²⁺相关作用检测）：按上述方法制备兔PRP，加入NQ301（0.3-30 μM）并在37°C预孵育5分钟，分别加入凝血酶（0.1 U/mL）、A23187（1 μM）或胶原（1 μg/mL）诱导聚集，采用浊度法检测。对于PMA诱导的聚集，PRP与NQ301（10 μM）预孵育5分钟后加入PMA（0.1 μM），监测聚集30分钟 [2]
- 兔血小板细胞内Ca²⁺浓度测定：兔PRP与Fura-2/AM（5 μM）在避光条件下37°C孵育30分钟，离心后将负载Fura-2的血小板重悬于含Ca²⁺缓冲液（1 mM CaCl₂）或无Ca²⁺缓冲液（1 mM EGTA）中。采用荧光分光光度计检测荧光强度（激发波长340 nm和380 nm，发射波长510 nm）：血小板悬液与NQ301（1-30 μM）孵育5分钟后，加入凝血酶（0.1 U/mL）或A23187（1 μM），根据340 nm与380 nm处荧光强度比值（F340/F380）计算细胞内Ca²⁺浓度 [2]

---

大鼠FeCl₃诱导颈动脉血栓模型：雄性Wistar大鼠（250-300 g）用戊巴比妥钠（40 mg/kg，腹腔注射）麻醉。暴露右侧颈动脉，用浸有10% FeCl₃溶液的滤纸包裹2 mm长的动脉段5分钟以诱导血栓形成。将NQ301溶于生理盐水（0.9% NaCl）中，于FeCl₃给药前10分钟经尾静脉注射，剂量分别为0.3、1或3 mg/kg（对照组仅注射生理盐水）。FeCl₃处理2小时后，处死大鼠，切取含有血栓的颈动脉段，吸干水分并称重。为了测量出血时间，在大鼠尾尖5毫米处切断尾尖，记录给药前后出血停止（30秒内无可见出血）的时间。在整个实验过程中，通过插管的股动脉监测平均动脉压（MABP）和心率（HR）[1]

[1]. An antithrombotic agent, NQ301, inhibits thromboxane A2 receptor and synthase activity in rabbit platelets. Basic Clin Pharmacol Toxicol. 2005 Sep;97(3):162-7.

[2]. Antiplatelet effect of 2-chloro-3-(4-acetophenyl)-amino-1,4-naphthoquinone (NQ301): a possible mechanism through inhibition of intracellular Ca2+ mobilization. Biol Pharm Bull. 2001 Jun;24(6):618-22.

NQ301 是一种具有双重作用机制的抗血栓药物：它能同时抑制血小板中 TXA2 受体的结合和 TXA2 合成酶的活性。这种双重抑制避免了单一 TXA2 合成酶抑制剂可能产生的“分流”效应（该效应可能导致前列腺素 H2 的积累和其他促聚集受体的激活），从而增强了其抗血小板和抗血栓疗效[1]。NQ301 的抗血小板作用部分是通过抑制细胞内 Ca²⁺ 动员实现的。它既能减少细胞内 Ca²⁺ 的释放，又能减少 Ca²⁺ 跨质膜的内流，而这两个步骤是血小板活化和聚集的关键步骤。对 PMA 诱导的（Ca²⁺ 非依赖性）血小板聚集无影响证实了 NQ301 特异性靶向血小板中的 Ca²⁺ 依赖性通路 [2]

C18H12CLNO3

325.75

325.051

130089-98-4

781109

White to off-white solid powder

2.9

63.2

1

4

3

23

561

0

LSQZKIQSQHZVQS-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H12ClNO3/c1-10(21)11-6-8-12(9-7-11)20-16-15(19)17(22)13-4-2-3-5-14(13)18(16)23/h2-9,20H,1H3

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 0.71 mg/mL (2.18 mM) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 7.1 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80 +，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。