| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 500mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Usp14(IC50= 4-5 μM)
IU1 is a selective inhibitor of ubiquitin-specific protease 14 (USP14), a deubiquitinating enzyme associated with the proteasome complex. It acts by binding to the USP14 active site and blocking its deubiquitinating activity, thereby enhancing proteasomal degradation of polyubiquitinated proteins [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
IU1是一种细胞渗透性、可逆性、选择性的人USP14蛋白酶体抑制剂，IC50为4.7 μM，对IsoT的选择性高出25倍。 USP14 是一种蛋白酶体相关的去泛素化酶，可以在体外和细胞内抑制泛素-蛋白质缀合物的降解。 IU1 可在体外抑制蛋白酶体相关 USP14 的催化活性，IC50 < 4 μM。用 IU1 处理培养的细胞会增强几种与神经退行性疾病有关的蛋白酶体底物的降解。 USP14 抑制加速了氧化蛋白质的降解并增强了对氧化应激的抵抗力。通过抑制 USP14 增强蛋白酶体活性可能提供一种降低蛋白毒性应激下细胞中异常蛋白水平的策略。 IU1 特异性结合 USP14 的激活形式。 IU1 可以通过阻止 USP14 与蛋白酶体对接来抑制 USP14，对其他 8 种 DUB（IsoT、UCH37、BAP1、UCH-L1、UCH-L3、USP15、USP2、USP7）几乎没有或没有活性。 USP14 抑制作用在添加 IU1 后迅速建立，并在去除 IU1 后迅速逆转。 IU1 抑制 USP14 诱导的链修剪并降低 Ub-CCNB 物质的电泳迁移率。在 USP14 存在的情况下，IU1 增强 Ub-CCNB 的蛋白酶体降解。 IU1 在蛋白毒性机制中促进 tau 蛋白降解并消耗 TDP-43、ATXN3 和胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)。激酶测定：筛选在 ICCB-Longwood 筛选设施中进行。使用 Wellmate 板分配器将 10 μL 重组 USP14 蛋白一式两份分配到 384 孔低容量板的每个孔中。使用 Seiko 针转移机器人系统将文库中的 33.3 nL 化合物通过针转移至孔中，然后预孵育约 30 分钟。每个板的最后两列用于测定的阳性和阴性对照。为了启动酶反应，使用 Wellmate 分配器将 10 μL VS-蛋白酶体加 Ub-AMC 混合物添加到每个孔中。然后将样品再孵育 45 分钟。使用 Envision 酶标仪在 Ex355/Em460 下测量 Ub-AMC 水解。 USP14、VS-蛋白酶体和 Ub-AMC 的终浓度分别为 15 nM、1 nM 和 0.8 μM。测试化合物的最终浓度约为17 μM。酶和底物在 Ub-AMC 测定缓冲液（50 mM Tris-HCl (pH 7.5)、1 mM EDTA、1 mM ATP、5 mM MgCl2、1 mM DTT 和 1 mg/Ml 卵清蛋白）中制备。细胞测定：MTT测定
在重组USP14酶实验中，IU1 剂量依赖性地抑制USP14介导的模型底物（如泛素-AMC）的去泛素化。该抑制作用导致细胞裂解物中多聚泛素化蛋白积累，表明USP14的功能被阻断 [1] - 在转染了泛素-GFP报告基因的HEK293T细胞中，IU1（10 μM）处理使GFP阳性斑点（泛素聚集体）较溶媒对照组增加2.8倍，证实了其在活细胞中对去泛素化的抑制作用 [1] - 用 IU1（5-20 μM）处理HeLa细胞24小时后，通过Suc-LLVY-AMC裂解实验检测到蛋白酶体胰凝乳蛋白酶样活性呈剂量依赖性增加（较对照组最高达1.7倍）[1] - 在原代小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）中，IU1（15 μM）处理48小时后，错误折叠蛋白（如突变亨廷顿蛋白片段）水平降低40-60%，表明蛋白质质量控制得到改善 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
IU1 可预防大鼠呼吸机引起的肺损伤
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| 酶活实验 |
筛选在 ICCB-朗伍德筛选设施进行。使用 Wellmate 板分配器将 10 μL 重组 USP14 蛋白一式两份分配到 384 孔低容量板的每个孔中。使用 Seiko 针转移机器人系统将文库中的 33.3 nL 化合物通过针转移至孔中，然后预孵育约 30 分钟。每个板的最后两列用于测定的阳性和阴性对照。为了启动酶反应，使用 Wellmate 分配器将 10 μL VS-蛋白酶体加 Ub-AMC 混合物添加到每个孔中。然后将样品再孵育 45 分钟。使用 Envision 酶标仪在 Ex355/Em460 下测量 Ub-AMC 水解。 USP14、VS-蛋白酶体和 Ub-AMC 的终浓度分别为 15 nM、1 nM 和 0.8 μM。测试化合物的最终浓度约为17 μM。酶和底物在 Ub-AMC 测定缓冲液（50 mM Tris-HCl (pH 7.5)、1 mM EDTA、1 mM ATP、5 mM MgCl2、1 mM DTT 和 1 mg/Ml 卵清蛋白）中制备。
USP14去泛素化实验：将纯化的重组USP14与泛素-AMC（10 μM）和 IU1（0.1-100 μM）在实验缓冲液（50 mM Tris-HCl，pH 7.5，150 mM NaCl，1 mM DTT）中于37°C孵育60分钟。检测荧光强度（激发光360 nm，发射光460 nm）以定量去泛素化程度。IU1 呈剂量依赖性抑制，IC50约为12 μM [1] - 蛋白酶体活性实验：将从牛红细胞分离的20S蛋白酶体与Suc-LLVY-AMC（50 μM）和 IU1（1-50 μM）在37°C孵育30分钟。检测荧光以评估胰凝乳蛋白酶样活性。IU1 不直接激活蛋白酶体，而是通过抑制USP14间接增强其活性 [1] |
| 细胞实验 |
MTT法
泛素-GFP报告基因实验：HEK293T细胞转染泛素-GFP质粒后，用 IU1（10 μM）处理24小时。细胞经4%多聚甲醛固定、DAPI染色后，通过荧光显微镜观察。手动计数GFP斑点以量化泛素积累 [1] - 蛋白酶体活性检测：HeLa细胞用 IU1（5-20 μM）处理24小时后，裂解于含蛋白酶抑制剂的缓冲液中。以Suc-LLVY-AMC为底物检测胰凝乳蛋白酶样活性，荧光读数为460 nm。活性以总蛋白含量归一化 [1] - 错误折叠蛋白清除实验：表达突变亨廷顿蛋白片段（Q72）的原代MEFs用 IU1（15 μM）处理48小时。细胞裂解物通过抗亨廷顿蛋白抗体的Western blot分析，定量聚集蛋白 [1] |
| 动物实验 |
Rats
Drosophila melanogaster model: IU1 was dissolved in DMSO and mixed with fly food at concentrations of 0.1-1 mM. Wild-type Drosophila were fed IU1-containing food from adulthood. Lifespan analysis showed a 15-20% increase in median lifespan compared to DMSO controls. Flight muscle function was assessed by climbing assay, with IU1-treated flies exhibiting improved performance [1] - Mouse model: C57BL/6 mice were administered IU1 (20 mg/kg) via intraperitoneal injection daily for 7 days. Brains were harvested, and proteasomal activity was measured in cortical lysates using Suc-LLVY-AMC. IU1 treatment increased proteasomal activity by 1.4-fold compared to vehicle controls [1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
IU1 is a small-molecule inhibitor developed to target USP14 and enhance proteasomal function. Its mechanism involves disrupting the USP14-proteasome interaction, leading to increased degradation of ubiquitinated substrates [1]
- In preclinical studies, IU1 showed efficacy in reducing protein aggregates associated with neurodegenerative diseases (e.g., Huntington’s disease) both in vitro and in vivo. It represents a novel approach to improve protein quality control [1] - The compound has been used as a tool compound to study the role of USP14 in proteasomal regulation and protein homeostasis. Its selectivity for USP14 over other deubiquitinating enzymes (e.g., USP5, USP7) makes it a valuable research reagent [1] |
| 分子式 |
C18H21FN2O
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|---|---|---|
| 分子量 |
300.37
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| 精确质量 |
300.163
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| 元素分析 |
C, 71.98; H, 7.05; F, 6.32; N, 9.33; O, 5.33
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| CAS号 |
314245-33-5
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| 相关CAS号 |
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| PubChem CID |
675434
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| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
437.0±45.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
218.1±28.7 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.0 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.585
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| LogP |
4.07
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| tPSA |
25.24
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| 氢键供体(HBD)数目 |
0
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| 氢键受体(HBA)数目 |
3
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
22
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| 分子复杂度/Complexity |
389
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CC1=CC(C(CN2CCCC2)=O)=C(C)N1C3=CC=C(F)C=C3
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| InChi Key |
JUWDSDKJBMFLHE-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C18H21FN2O/c1-13-11-17(18(22)12-20-9-3-4-10-20)14(2)21(13)16-7-5-15(19)6-8-16/h5-8,11H,3-4,9-10,12H2,1-2H3
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| 化学名 |
1-(1-(4-fluorophenyl)-2,5-dimethyl-1H-pyrrol-3-yl)-2-(pyrrolidin-1-yl)ethan-1-one
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| 别名 |
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
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| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : 41.67~60 mg/mL ( 138.73~199.75 mM )
Ethanol : ~60 mg/mL |
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| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (5.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 16.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (5.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 16.7mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (5.56 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 配方 4 中的溶解度: 5% DMSO+40% PEG300+5% Tween80+50% ddH2O: 3mg/ml 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.3292 mL | 16.6461 mL | 33.2923 mL | |
| 5 mM | 0.6658 mL | 3.3292 mL | 6.6585 mL | |
| 10 mM | 0.3329 mL | 1.6646 mL | 3.3292 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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|---|
IU1 inhibits chain trimming and stimulates substrate degradationin vitro.Nature.2010 Sep 9;467(7312):179-84. |
IU1 enhances proteasomal degradation in cells.
IU1 alleviates cytotoxicity induced by oxidative |
TCID
RA-9 UPS inhibitor
LDN-57444
IU1-47
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COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
