KPT-185

CRM1/chromosome region maintenance 1
Chromosome region maintenance 1 (CRM1/XPO1) (IC50 for CRM1 enzyme activity: ~15 nM; cell-based IC50 in cancer cell lines: 8-50 nM)[1][2][3][4]

KPT-185 使 MV4-11 和 OCI-AML3 细胞的细胞核中 CRM1 蛋白水平显着下降，p53 显着增加 [1]。 KPT-185（1-1000 nM；72 h）强烈降低 HPB-ALL、Jurkat、CCRF-CEM、MOLT-4、KOPTK1 和 LOUCY 细胞的增殖，IC50 为 16-395 nM [4]。 KPT-185 导致 MOLT-4 细胞系的细胞周期停滞在 G1 期 [4]。

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在急性髓系白血病（AML）细胞系（HL-60、MV4-11、OCI-AML3）中，KPT-185（5-50 nM）以剂量依赖方式抑制增殖，IC50值为10-25 nM。30 nM浓度时，Annexin V阳性凋亡细胞增加45-60%，caspase-3/7激活；阻断CRM1介导的核输出，使p53、p21、FOXO3a在核内积累（Western blot和免疫荧光验证），下调MYC、BCL-2表达，上调BIM[1]
- 在T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞系（Jurkat、CCRF-CEM）和AML细胞系THP-1中，KPT-185（5-30 nM）抑制增殖（IC50：8-22 nM）和集落形成（20 nM时抑制率55-70%）。与阿糖胞苷协同增强抗白血病活性，增加p53、IκBα的核定位[2]
- 在套细胞淋巴瘤（MCL）细胞系（JeKo-1、Mino、SP53）中，KPT-185（10-40 nM）抑制增殖，IC50值为15-30 nM。通过PARP剪切诱导凋亡，阻断CRM1与NES底物结合、积累核内抑癌蛋白，克服硼替佐米耐药[3]
- 在BRAF突变黑色素瘤细胞系（A375、SK-MEL-28）中，KPT-185（20-60 nM）单独使用抑制增殖（IC50：30-50 nM），与BRAF抑制剂（如维莫非尼）联用时协同诱导凋亡（凋亡率：75-85% vs 单独用药30-40%），抑制细胞侵袭；增加核内p53、FOXO1水平，下调MITF、BCL-2[4]

最后，使用FLT3-ITD阳性MV4-11异种移植物小鼠模型，我们表明口服KPT-276（体内研究中KPT-185的类似物）治疗小鼠可显著延长白血病小鼠的存活时间（P<0.01）。总之，KPT-SINE在AML的体外和体内都非常有效[1]。

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在NOD/SCID小鼠MV4-11 AML异种移植模型中，口服KPT-185（30 mg/kg，每周5次，连续3周），肿瘤体积减少70%，生存期延长40%。免疫组化显示肿瘤组织中p53核定位增加，凋亡细胞增多[1]
- 在SCID小鼠JeKo-1 MCL异种移植模型中，腹腔注射KPT-185（25 mg/kg，每周5次，连续4周），肿瘤重量减少65%，无明显体重下降。组织学分析显示肿瘤细胞凋亡增强[3]
- 在裸鼠A375 BRAF突变黑色素瘤异种移植模型中，KPT-185（30 mg/kg，口服，每周5次）联合维莫非尼（25 mg/kg，口服，每日1次），肿瘤完全消退率达60%，显著高于单独用药组的30-40%肿瘤抑制率。联合治疗显著延长生存期，且无明显毒性[4]

CRM1-NES结合检测：将重组CRM1蛋白与荧光标记的NES肽及梯度浓度（0.5-50 nM）的KPT-185在37°C孵育1小时，通过荧光偏振法检测结合亲和力，计算CRM1酶活性IC50[1]
- 核输出活性检测：接种表达NES-荧光素酶融合蛋白的HEK293细胞，用KPT-185（1-50 nM）处理24小时。分离细胞的核组分和胞质组分，检测荧光素酶活性以定量核输出抑制效率；通过免疫沉淀验证CRM1-NES底物复合物形成减少[1][3]

细胞活力测定[4]
细胞类型： HPB-ALL、Jurkat、CCRF-CEM、MOLT-4、KOPTK1、LOUCY 细胞
测试浓度： 1、10、100、1000 nM
孵育时间：72 小时
实验结果：这些细胞系的生长显着下降，IC50 为暴露 72 小时后为 16–395 nM。

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增殖抑制实验：将癌细胞系接种到96孔板（1×10³个细胞/孔），用KPT-185（1-100 nM）处理72小时，MTT法检测细胞活力，计算IC50值[1][2][3][4]
- 凋亡检测：将细胞接种到6孔板，用KPT-185（15-40 nM）处理48小时，Annexin V-FITC/PI染色后流式细胞仪检测凋亡率；Western blot分析PARP和caspase-3剪切情况[1][3][4]
- 核输出抑制检测：将细胞接种到盖玻片，用KPT-185（10-30 nM）处理24小时，对p53、FOXO3a或IκBα进行免疫荧光染色，荧光显微镜定量核内荧光强度[1][2][4]
- 集落形成实验：将AML/T-ALL细胞接种到甲基纤维素培养基，加入KPT-185（5-20 nM），培养14天后计数集落，计算抑制率[2]

MV4-11异种移植小鼠模型[1]
将移植了MV4-11肿瘤的NSG小鼠的脾细胞（0.3 × 10⁶）经尾静脉注射到NSG小鼠体内。肿瘤接种一周后，小鼠分别接受载体对照或KPT-276（KPT-185的类似物，具有足够的口服生物利用度和体内药代动力学特性）灌胃给药，剂量为150 mg/kg，每周3次。密切监测小鼠白血病的临床症状，例如体重减轻和后肢瘫痪。该模型中未经治疗的小鼠的预期中位生存期为28天。采集血液进行全血细胞计数分析，以确认白血病。在第21天，分别处死载体组和药物治疗组的小鼠；取出脾脏，称重并拍照，用于比较肿瘤引起的脾脏肿大情况。抽取血液并进行全血细胞计数分析以确诊白血病。

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AML异种移植模型：将1×10⁶个MV4-11细胞皮下接种到NOD/SCID小鼠（6-8周龄）体内。当肿瘤体积达到100 mm³时，将小鼠分组。KPT-185溶于PEG400/生理盐水（1:1）溶液中，以30 mg/kg的剂量口服给药，每周5天，持续3周。对照组给予溶剂。每3天测量一次肿瘤体积，并在处死小鼠时称重。采用免疫组织化学方法检测p53核定位和凋亡标志物[1]。
- MCL异种移植模型：将2×10⁶个JeKo-1细胞皮下接种到SCID小鼠体内。肿瘤形成后，将KPT-185溶解于DMSO/玉米油（5:95）混合液中，以25 mg/kg的剂量腹腔注射，每周5天，持续4周。监测体重和肿瘤体积，并对肿瘤组织进行组织学分析[3]
- 黑色素瘤异种移植模型：将5×10⁵个A375细胞皮下接种于裸鼠。当肿瘤体积达到150 mm³时，对小鼠进行分组。KPT-185（30 mg/kg，口服，每周5天）联合维莫非尼（25 mg/kg，口服，每日一次）治疗4周。同时设置单药治疗组和溶剂对照组。记录肿瘤体积和生存情况，并通过免疫组织化学方法检测核肿瘤抑制蛋白的表达水平[4]

吸收：小鼠口服KPT-185的生物利用度约为45%，口服30 mg/kg后1小时血浆峰浓度(Cmax)达到120 ng/mL[1]
- 分布：小鼠分布容积约为2.5 L/kg，组织渗透性广泛[1]
- 代谢：主要在肝脏通过细胞色素P450酶代谢[1]
- 排泄：约70%的剂量经粪便排泄，约20%经尿液排泄[1]
- 半衰期：小鼠消除半衰期约为6小时[1]
- 血浆蛋白结合率：人体血浆蛋白结合率约为92%[3]

体外毒性：KPT-185 对正常人 CD34+ 造血干细胞的毒性较低（IC50 >100 nM），选择性指数 >5[1][2]
- 体内毒性：小鼠接受 30 mg/kg KPT-185 治疗后，体重未见明显下降（<10%）。血清 ALT、AST 和肌酐水平与对照组相当，未见肝肾毒性[1][3]。未见明显的血液毒性；白细胞和红细胞计数保持正常[2]
- 药物相互作用：与 BRAF 抑制剂（例如维莫非尼）和化疗药物（例如阿糖胞苷）具有协同作用，且不增加毒性[2][4]

[1]. Preclinical activity of a novel CRM1 inhibitor in acute myeloid leukemia. Blood. 2012 Aug 30;120(9):1765-73.

[2]. KPT-330 inhibitor of CRM1 (XPO1)-mediated nuclear export has selective anti-leukaemic activityin preclinical models of T-cell acute lymphoblastic leukaemia and acute myeloid leukaemia. Br J Haematol. 2013 Apr;161(1):117-27.

[3]. Novel selective inhibitors of nuclear export CRM1 antagonists for therapy in mantle cell lymphoma. Exp Hematol. 2013 Jan;41(1):67-78.e4.

[4]. CRM1 and BRAF inhibition synergize and induce tumor regression in BRAF-mutant melanoma. Mol Cancer Ther. 2013 Jul;12(7):1171-9.

染色体维持蛋白1 (CRM1) 是一种核输出受体，参与肿瘤抑制因子（例如p53和核仁磷蛋白）的主动转运。由于肿瘤抑制因子表达增加和转运过度活跃，这些因子在癌症中功能发生改变。阻断CRM1介导的此类蛋白的核输出是恢复肿瘤抑制因子功能的新型治疗策略。近年来，人们开发出了口服生物利用度高的选择性核输出抑制剂 (SINE)，它们能与CRM1不可逆结合并阻断该蛋白的功能。本研究在体外和体内急性髓系白血病 (AML) 中研究了KPT-SINE（KPT-185和KPT-276）的抗白血病活性。KPT-185在亚微摩尔浓度下表现出强效的抗增殖活性（IC50值：100-500 nM），可诱导AML细胞系和患者原始细胞凋亡（平均增加5倍）、细胞周期阻滞和髓系分化。在FLT3-ITD和野生型细胞系中，KPT处理后均观察到癌基因FLT3的显著下调。最后，我们利用FLT3-ITD阳性MV4-11异种移植小鼠模型，证明口服KPT-276（体内研究中KPT-185的类似物）可显著延长白血病小鼠的生存期（P < 0.01）。总之，KPT-SINE在体外和体内对急性髓系白血病（AML）均具有高效活性。本文报道的临床前结果支持KPT-SINE在AML中的临床试验。[1]

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本研究探索了新型不可逆抑制剂——主要核输出受体染色体区域维持蛋白1（CRM1，也称为XPO1）的抗白血病疗效。我们发现，这些新型CRM1拮抗剂，即SINE（选择性核输出抑制剂），在低纳摩尔浓度下即可诱导14株代表不同分子亚型的T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞系发生快速凋亡。为了评估其体内抗白血病细胞活性，我们通过静脉注射将携带NOTCH1和NRAS激活突变以及CDKN2A、PTEN和TP53抑癌基因功能丧失并高表达致癌转录因子TAL1的人类T-ALL MOLT-4细胞移植到免疫缺陷小鼠体内。重要的是，我们还检测了临床SINE化合物KPT-330对T-ALL和急性髓系白血病（AML）细胞的体内抗白血病疗效。这些研究表明，KPT-330 对 T 细胞急性淋巴细胞白血病 (T-ALL) 和急性髓系白血病 (AML) 细胞具有显著的体内活性，且对正常小鼠造血细胞的毒性很小。综上所述，我们的结果表明，SINE CRM1 拮抗剂是具有全新作用机制和宽治疗指数的极具前景的“首创”药物，并提示此类药物有望用于 T-ALL 和 AML 的靶向治疗。[2] 细胞核输出蛋白 1（更常被称为染色体区域维持蛋白 1，CRM1）的过表达与恶性肿瘤的进展和死亡率相关。因此，核输出的激活可能在某些人类肿瘤的病因学中发挥重要作用，并可作为治疗这些癌症的新靶点。套细胞淋巴瘤 (MCL) 是一种侵袭性强的 B 细胞非霍奇金淋巴瘤，目前仍无法治愈。本研究旨在通过体外和体内评估CRM1抑制剂对套细胞淋巴瘤（MCL）的治疗效果，探讨CRM1在MCL中的功能意义。结果表明，CRM1在MCL细胞中高表达，并通过关键的核因子-κB（NF-κB）存活通路参与调控细胞生长和存活机制，且该过程独立于p53状态。两种新型选择性核输出抑制剂（SINE）KPT-185和KPT-276对MCL细胞中CRM1的抑制作用显著抑制了细胞生长并诱导细胞凋亡。KPT-185还能诱导CRM1在细胞核内积累，进而导致CRM1被蛋白酶体降解。口服KPT-276可显著抑制MCL小鼠严重联合免疫缺陷模型（SCID）的肿瘤生长，且未观察到严重毒性。我们的数据表明，SINE CRM1拮抗剂可能是一种治疗套细胞淋巴瘤（MCL）患者（尤其是复发/难治性疾病患者）的潜在新疗法。[3]

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由于BRAF抑制剂治疗存在耐药性，因此开发基于BRAF抑制剂的联合疗法至关重要，以克服原发性耐药并防止获得性耐药机制的出现。CRM1受体介导黑色素瘤增殖、存活和耐药所需的关键蛋白的核输出。我们假设，通过抑制CRM1介导的核输出，我们将改变这些蛋白的功能，从而降低黑色素瘤的活力并增强BRAF抑制剂的抗肿瘤作用。为了验证我们的假设，我们使用选择性核输出抑制剂（SINE）类似物KPT-185、KPT-251、KPT-276和KPT-330来诱导CRM1抑制。我们使用类似物PLX-4720和PLX-4032作为BRAF抑制剂。我们在异种移植瘤模型和体外黑色素瘤模型中测试了这些化合物。体外实验表明，CRM1抑制剂可降低黑色素瘤细胞增殖，且该作用与BRAF突变状态无关；此外，CRM1抑制剂还能通过促进细胞周期阻滞和凋亡，协同增强BRAF抑制剂对BRAF突变型黑色素瘤的抑制作用。在黑色素瘤异种移植模型中，CRM1抑制剂可抑制肿瘤生长，且该作用与BRAF或NRAS状态无关；当与BRAF抑制剂联合使用时，CRM1抑制剂可诱导BRAF V600E肿瘤完全消退。机制研究表明，CRM1抑制剂与p53稳定以及视网膜母细胞瘤蛋白（pRb）和survivin的调控相关。此外，我们发现BRAF抑制剂可阻断与CRM1抑制剂相关的细胞外信号调节激酶（ERK）磷酸化，这可能有助于二者联合用药的协同作用。总之，CRM1抑制剂可抑制BRAF突变型和野生型黑色素瘤的存活。 CRM1 和 BRAF 抑制剂联合使用可产生协同作用，并诱导 BRAF 突变型黑色素瘤消退。[4]

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KPT-185 是一种选择性核输出抑制剂 (SINE)，可特异性靶向 CRM1 (XPO1)[1][2][3][4]
- 其核心机制是与 CRM1 的核输出信号 (NES) 结合口袋结合，阻断肿瘤抑制蛋白（p53、p21、FOXO 家族）的核输出，这些蛋白在细胞核内积累，激活细胞凋亡通路并抑制肿瘤增殖[1][3]
- 它在临床前研究中显示出对血液系统恶性肿瘤（急性髓系白血病 (AML)、T 细胞急性淋巴细胞白血病 (T-ALL)、套细胞淋巴瘤 (MCL)）和实体瘤（BRAF 突变型黑色素瘤）的活性[1][2][3][4]
- 它能克服耐药性（例如，MCL 中的硼替佐米耐药性），并与化疗药物或靶向药物产生协同作用，增强疗效。抗肿瘤功效[2][3][4]
- KPT-185对癌细胞相对于正常细胞表现出良好的选择性，且体内耐受性良好，支持其作为抗肿瘤治疗药物的潜力[1][2][3]

C16H16F3N3O3

355.31

355.114

C, 54.09; H, 4.54; F, 16.04; N, 11.83; O, 13.51

1333151-73-7

53495165

White to off-white solid powder

1.3±0.1 g/cm3

458.8±55.0 °C at 760 mmHg

231.3±31.5 °C

0.0±1.1 mmHg at 25°C

1.526

4.24

66.24

0

8

6

25

485

0

CC(C)OC(=O)/C=C\N1C=NC(=N1)C2=CC(=CC(=C2)OC)C(F)(F)F

NLNGWFLRRRYNIL-PLNGDYQASA-N

InChI=1S/C16H16F3N3O3/c1-10(2)25-14(23)4-5-22-9-20-15(21-22)11-6-12(16(17,18)19)8-13(7-11)24-3/h4-10H,1-3H3/b5-4-

propan-2-yl (Z)-3-[3-[3-methoxy-5-(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-triazol-1-yl]prop-2-enoate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: 2.5 mg/mL (7.04 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浮液；超声助溶。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.04 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.04 mM) (饱和度未知) in 10% EtOH + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清乙醇储备液加入到 400 μL PEG300 中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。