L-161982

EP4; The target of L-161982 is the EP4 receptor (Prostaglandin E2 receptor subtype 4, PTGER4), a G protein-coupled receptor. This compound exhibits high selectivity for the EP4 receptor: it binds to human EP4 receptors with a Ki value of 0.024 μM, while showing significantly lower affinity for other prostanoid receptor family members (EP1 Ki=17 μM, EP2 Ki=23 μM, EP3 Ki=1.90 μM, DP Ki=5.10 μM, FP Ki=5.63 μM, TP Ki=0.71 μM, IP Ki=6.74 μM). This selectivity enables effective blockade of PGE2-mediated biological effects via the EP4 receptor.

L-161982（10 μM；2 小时）可抑制 PGE2 增强的 HCA-7 细胞增殖[1]。在 HCA-7 细胞中，L-161982（10 μM；1 小时）可阻断 PGE2 刺激的 ERK 磷酸化 [1]。在口腔鳞状细胞癌 Tca8113 细胞中，L-161982 导致细胞凋亡、细胞周期停滞，并抑制前列腺素 E2 诱导的增殖 [3]。

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研究发现，EP4受体激动剂PGE1-OH可以模拟PGE2拯救塞来昔布的抑制作用，并通过ERK磷酸化诱导细胞生长，而EP4受体拮抗剂L-161982可以完全阻断PGE2刺激的ERK磷酸和Tca8113细胞的增殖。此外，L-161982可能通过上调Bax和p21蛋白水平以及下调Bcl-2、CDK2和细胞周期蛋白A2蛋白水平，诱导细胞凋亡并阻断s期细胞周期进程。[1]
L-161982阻断PGE2刺激的HCA-7细胞增殖。[2]
L-161982阻断PGE2刺激的ERK磷酸化。[2]
L-161982可减弱ERK对CREB的磷酸化作用。[2]
L161982在体外抑制幼稚T细胞的Th17分化。[3]

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体外研究表明，L-161982 能够有效阻断 PGE2 诱导的细胞增殖和信号转导。在 HCA-7 结肠癌细胞中，10 μM L-161982 预处理 1 小时可完全阻断 PGE2 刺激的 ERK 磷酸化，预处理 2 小时可阻断 PGE2 诱导的细胞增殖。在口腔鳞状细胞癌 Tca8113 细胞中，L-161982（5-20 μM，处理 48-72 小时）以剂量和时间依赖性方式抑制细胞增殖，48 小时的 IC₅₀ 约为 15 μM，并可诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。此外，L-161982 还能抑制寨卡病毒在人脑微血管内皮细胞中的复制，且不引起细胞毒性。

在患有 CIA 的小鼠中，L-161982（5 mg/kg；腹腔注射；每天一次，持续 2 周）可减少关节炎病变的发生及其进展 [2]。

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L161982治疗减少了CIA小鼠的关节炎病变和病变进展。 L161982降低了CIA小鼠血浆和组织中IL-17和MCP-1的表达。 L161982增加了CIA小鼠Treg细胞的比例，但不能直接促进Treg细胞生长。[3]

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用L161982治疗的CIA小鼠表现出关节炎评分降低、关节肿胀、软骨表面开裂和关节腔结缔组织增生减少。CIA小鼠血浆和组织中IL-17和MCP-1降低，而脾脏和淋巴结中Treg细胞的比例增加。否则，L161982对Tregs增殖没有直接影响。 结论：尽管L161982的疗效不如塞来昔布，但它也能减轻CIA小鼠的踝关节炎症。L161982通过抑制IL-17和MCP-1、增加Treg细胞和减少炎症来降低CIA小鼠的RA严重程度[3]。

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L-161982 在多种动物模型中显示出体内活性。在胶原诱导的关节炎（CIA）小鼠模型中，L-161982（5 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续 2 周）可显著降低关节炎评分，减轻关节肿胀和软骨表面开裂，减少关节腔结缔组织增生，降低血浆和组织中 IL-17 及 MCP-1 水平，同时增加脾脏和淋巴结中 Treg 细胞的比例。在幼年大鼠中，L-161982（10 mg/kg/天）可抑制 PGE2 刺激的骨形成。在 LPS 活化的人巨噬细胞中，100 nM L-161982 可逆转 PGE2 的抗炎作用。

L-161982 的受体结合亲和力可通过放射性配体结合实验进行测定。标准流程为：1）制备表达人 EP4 受体或其他前列腺素受体亚型的细胞膜悬液；2）将 L-161982 溶解于 DMSO 后，用结合缓冲液稀释至不同浓度（0.1 nM - 100 μM）；3）加入放射性标记的示踪剂（如 [³H]-PGE2），在室温下孵育 60-120 分钟以达到结合平衡；4）通过快速真空过滤或离心终止反应，用冰冷缓冲液洗涤去除未结合的配体；5）使用液体闪烁计数器或 γ 计数器测定膜结合的放射性；6）通过竞争结合曲线计算 Ki 值。采用该方法测得 L-161982 对人 EP4 受体的 Ki 值为 0.024 μM。

细胞增殖测定 [1]
细胞类型： HCA-7 细胞
测试浓度： 10 μM
孵育时间： > 2 小时
实验结果： 阻断 PGE2 诱导的细胞增殖。

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细胞增殖试验[2]
如前所述，使用磺基罗丹明B（SRB）测定法测量不同处理对细胞增殖的反应。简而言之，将每孔约8×104个HCA-7细胞铺在6孔板上，并允许其生长24小时。随后，将细胞血清饥饿24小时，用L-161982（10μM）预孵育2小时，然后用PGE2刺激细胞72小时。然后，将活细胞在4°C下用冷50%三氯乙酸（终浓度10%）固定1小时。用去离子水洗涤细胞，并在室温下用0.4%SRB染料孵育10分钟进行染色。然后用1%乙酸洗涤细胞，用1M无缓冲Tris溶解结合的SRB染料，充分混合，并使用平板阅读器（Biomek@540nm）测量光密度（O.D.）。

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体外增殖试验[3]
通过阴性选择程序，使用CD4+CD25+调节性T细胞分离试剂盒从小鼠脾细胞中纯化CD4+CD24+细胞。细胞以每孔2 x 103个细胞的密度培养，并用0.5μg/ml可溶性小鼠抗CD3、1μg/ml抗CD28和700 pg/ml PEG2刺激，含或不含150 pg/ml L161982。在37°C和5%CO2下孵育五天后，用BrdU（100μM）冲击细胞，并在4小时后评估BrdU掺入情况。结果表示为405nm处的光密度（OD）。

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L-161982 的体外细胞实验流程如下：1）将目标细胞（如 HCA-7 结肠癌细胞、Tca8113 口腔鳞癌细胞或原代巨噬细胞）接种于培养板，在 37°C、5% CO₂ 条件下培养至对数生长期；2）用不同浓度的 L-161982（通常为 1-20 μM）预处理细胞 1-2 小时；3）加入激动剂 PGE2（通常为 1-10 μM）刺激细胞，继续培养特定时间（ERK 磷酸化检测为 15-30 分钟，细胞增殖检测为 48-72 小时）；4）对于 ERK 磷酸化检测，收集细胞裂解液通过 Western blot 检测 p-ERK 和总 ERK 水平；5）对于细胞增殖检测，通过 MTT 或 CCK-8 法测定细胞活力；6）对于凋亡检测，可通过流式细胞术（Annexin V/PI 双染）或 caspase 活性检测进行评估。

动物/疾病模型： 6～8周龄雌性DBA/1小鼠（胶原诱导性关节炎（CIA）小鼠模型）[1]
剂量： 5 mg/kg
给药途径： 腹腔注射（ip）；每日一次，持续2周
实验结果： 免疫后35天，关节肿胀减轻，关节炎评分降低。

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CIA小鼠模型的建立及给药方案[3]
将40只小鼠随机分为5组，每组8只：对照组和4个CIA组。对于CIA组，将200 μg溶于DMSO的鸡II型胶原蛋白与等体积的弗氏完全佐剂混合，并在冰浴中乳化。取100 μl该乳剂，经尾根部皮内注射，3周后进行加强免疫。模型对照组注射的乳剂添加了弗氏完全佐剂，但未添加鸡II型胶原蛋白，注射方法与实验组相同。其余CIA治疗组小鼠首先按CIA组处理，然后分别腹腔注射5 mg/kg L161982、灌胃200 U塞来昔布或腹腔注射100 μl PBS，方法与既往研究相同。所有注射均每日一次，持续2周。

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L-161982 的体内动物实验流程以胶原诱导的关节炎（CIA）小鼠模型为例：1）选用 6-8 周龄雄性 DBA/1 小鼠，在第 0 天和第 21 天注射牛 II 型胶原与完全 Freund 佐剂的乳化液诱导关节炎；2）当关节炎症状出现后（通常在第 21-28 天），将动物随机分为溶剂对照组和 L-161982 治疗组（每组 8-10 只）；3）L-161982 配制：通常使用 10% DMSO + 90% 玉米油作为溶剂，配制浓度为 0.5 mg/mL 的工作液；4）给药方案：L-161982 以 5 mg/kg 的剂量通过腹腔注射给药，每日一次，连续 2 周；5）评估指标：每周 2-3 次评估关节炎评分（0-4 分制），测量后爪厚度；治疗结束后处死动物，收集关节组织进行组织病理学检查（HE 染色、TRAP 染色）；检测血浆中炎症因子（IL-17、MCP-1）水平。

目前公开文献中关于 L-161982 的系统药代动力学参数报道较为有限。该化合物可溶于 DMSO，溶解度约为 150 mg/mL（229.11 mM），在 10% DMSO + 90% 玉米油中的溶解度约为 0.5 mg/mL（0.76 mM），适合腹腔注射给药。体内研究采用腹腔注射途径（5 mg/kg），每日一次，连续 2 周，显示出良好的体内活性和耐受性。该化合物体外实验使用浓度范围为 1-20 μM。详细的药代参数如半衰期、生物利用度、分布容积等尚需进一步研究确定。粉末形式在 -20°C 下可稳定保存 3 年，溶液在 -80°C 下可稳定保存 1 年。

根据材料安全数据表（MSDS），L-161982 被归类为非危险物质或混合物，未发现 GHS 危害分类。该化合物未被 NTP（国家毒理学计划）、IARC（国际癌症研究机构）、OSHA（职业安全与健康管理局）或 ACGIH（美国政府工业卫生学家会议）归类为致癌物。在体外细胞毒性评估中，L-161982 在有效作用浓度范围内（如 10 μM）对 HCA-7 细胞和 Tca8113 细胞未表现出明显细胞毒性。在动物研究中，L-161982（5 mg/kg，腹腔注射，连续 2 周）未报告明显的全身毒性反应。该产品仅供科研使用，不得用于人体或兽医用途。处理和储存时应使用适当的个人防护装备，并在通风良好的区域操作。

[1]. The EP4 antagonist, L-161,982, induces apoptosis, cell cycle arrest, and inhibits prostaglandin E2-induced proliferation in oral squamous carcinoma Tca8113 cells.J Oral Pathol Med. 2017 Nov;46(10):991-997.

[2]. The EP4 receptor antagonist, L-161,982, blocks prostaglandin E2-induced signal transduction and cell proliferation in HCA-7 colon cancer cells.Exp Cell Res. 2007 Aug 15;313(14):2969-79.

[3]. L161982 alleviates collagen-induced arthritis in mice by increasing Treg cells and down-regulating Interleukin-17 and monocyte-chemoattractant protein-1 levels.BMC Musculoskelet Disord. 2017 Nov 16;18(1):462.

N-[2-[4-[[3-丁基-5-氧代-1-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-三唑-4-基]甲基]苯基]苯基]磺酰基-3-甲基-2-噻吩甲酰胺是联苯类化合物的一员。

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背景：近期研究表明，环氧合酶2 (COX-2) 抑制剂可能增强抗癌药物对肿瘤细胞（包括口腔鳞状细胞癌 (OSCC)）的毒性作用，但长期使用会导致胃溃疡和心肌梗死等副作用。本研究旨在探讨环氧合酶-2 (COX-2) 的下游产物前列腺素E2 (PGE2) 对人口腔鳞状细胞癌细胞系Tca8113增殖的影响，并探索PGE2受体，特别是EP4受体，对Tca8113细胞生长的影响。方法：为评估PGE2和EP受体对Tca8113细胞的影响，我们进行了CCK8实验、蛋白质印迹实验、细胞周期分析和细胞凋亡实验。结果：我们发现EP4受体激动剂PGE1-OH能够模拟PGE2，逆转塞来昔布的抑制作用，并通过ERK磷酸化诱导细胞增殖；而EP4受体拮抗剂L-161,982则完全阻断了PGE2刺激的ERK磷酸化和Tca8113细胞增殖。此外，L-161,982 可能通过上调 Bax 和 p21 蛋白水平以及下调 Bcl-2、CDK2 和细胞周期蛋白 A2 蛋白水平来诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期 S 期进程。结论：我们的结果表明，EP4 受体通过 ERK 信号通路介导 PGE2 诱导的细胞增殖，抑制 EP4 受体可能代表一种预防和治疗口腔鳞状细胞癌 (OSCC) 的替代治疗策略。[1]

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越来越多的证据表明，前列腺素 E2 (PGE2) 水平升高可增加肠上皮细胞增殖，从而在结直肠肿瘤发生中发挥作用。PGE2 通过四种 G 蛋白偶联 PGE 受体 (EP) 亚型发挥作用，这些亚型分别命名为 EP1、EP2、EP3 和 EP4。前列腺素E2 (PGE2) 刺激人结肠癌细胞增殖需要细胞外信号调节激酶 (ERK1/2) 的磷酸化水平升高。然而，参与此过程的EP受体尚不清楚。我们提供的证据表明，选择性EP4受体拮抗剂L-161,982可完全阻断PGE2诱导的HCA-7细胞ERK磷酸化和增殖。为了鉴定ERK1/2信号通路的下游靶基因，我们发现PGE2诱导ERK1/2下游早期生长反应基因1 (EGR-1) 的表达，并在转录水平上调控其表达。PGE2处理可诱导HCA-7细胞中环磷酸腺苷反应元件结合蛋白 (CREB) Ser133位点的磷酸化，并增强CRE介导的荧光素酶活性。利用显性负性CREB突变体（ACREB）的研究为CREB参与HCA-7细胞中PGE(2)驱动的egr-1转录提供了明确的证据。总之，本研究揭示了egr-1是HCA-7细胞中PGE(2)的靶基因，并通过新发现的EP4/ERK/CREB通路进行调控。最后，我们的结果支持拮抗EP4受体可能为结肠癌的治疗提供一种新的治疗方法。[2]

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背景：探讨L161982（一种EP4拮抗剂）对胶原诱导性关节炎（CIA）小鼠模型的影响及其潜在机制。方法：首先通过用鸡II型胶原蛋白免疫DBA/1小鼠建立CIA小鼠模型。 CIA组每天一次，持续2周，分别腹腔注射（IP）5 mg/kg L161982、胃内灌注200 U塞来昔布或腹腔注射100 μl PBS。研究结束时，评估总关节炎评分和组织病理学检查结果以确定CIA的严重程度。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫组织化学染色（IHC）分别检测血浆和组织中IL-17和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达；测定淋巴结和脾脏中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞（Treg）占总CD4+细胞的比例。我们还分别采用BrdU检测和流式细胞术检测了L161982处理后分离的Treg细胞增殖情况以及初始T细胞的Th17极化比例。结果：L161982治疗的CIA小鼠关节炎评分、关节肿胀、软骨表面裂纹均有所减轻，关节腔结缔组织增生也减少。CIA小鼠血浆和组织中的IL-17和MCP-1水平降低，脾脏和淋巴结中Treg细胞的比例均增加。此外，L161982对Treg细胞增殖没有直接影响；在体外，L161982处理的初始T细胞中观察到Th17极化的趋势降低。结论：尽管L161982的疗效不如塞来昔布，但它也能减轻CIA小鼠的踝关节炎症。 L161982 通过抑制 IL-17 和 MCP-1、增加 Treg 细胞以及减轻炎症，降低 CIA 小鼠的 RA 严重程度。L161982 给药后血浆或组织中 IL-17 水平降低的机制可能源于 CD4+ T 细胞向 Th-17 细胞分化的抑制。[3]

C32H29F3N4O4S2

654.722275495529

654.158

C, 58.70; H, 4.46; F, 8.71; N, 8.56; O, 9.77; S, 9.79

147776-06-5

9961192

White to off-white solid powder

1.37g/cm3

> 145 °C

1.633

8.071

139.68

1

9

10

45

1190

0

S(C1=CC=CC=C1C1C=CC(=CC=1)CN1C(N(C2C=CC=CC=2C(F)(F)F)N=C1CCCC)=O)(NC(C1=C(C)C=CS1)=O)(=O)=O

MMDNKTXNUZFVKD-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C32H29F3N4O4S2/c1-3-4-13-28-36-39(26-11-7-6-10-25(26)32(33,34)35)31(41)38(28)20-22-14-16-23(17-15-22)24-9-5-8-12-27(24)45(42,43)37-30(40)29-21(2)18-19-44-29/h5-12,14-19H,3-4,13,20H2,1-2H3,(H,37,40)

N-[2-[4-[[3-butyl-5-oxo-1-[2-(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-triazol-4-yl]methyl]phenyl]phenyl]sulfonyl-3-methylthiophene-2-carboxamide

L161982; 147776-06-5; L-161,982; L-161982; L 161,982; N-[2-[4-[[3-butyl-5-oxo-1-[2-(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-triazol-4-yl]methyl]phenyl]phenyl]sulfonyl-3-methylthiophene-2-carboxamide; L161982; N-[2-[4-[[3-butyl-5-oxo-1-[2-(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-triazol-4-yl]methyl]phenyl]phenyl]sulfonyl-3-methyl-2-thiophenecarboxamide; 2-Thiophenecarboxamide, N-[[4'-[[3-butyl-1,5-dihydro-5-oxo-1-[2-(trifluoromethyl)phenyl]-4H-1,2,4-triazol-4-yl]methyl][1,1'-biphenyl]-2-yl]sulfonyl]-3-methyl-; L 161982

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~152.74 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.82 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。