L-161982

EP4; The target of L-161982 is the EP4 receptor (Prostaglandin E2 receptor subtype 4, PTGER4), a G protein-coupled receptor. This compound exhibits high selectivity for the EP4 receptor: it binds to human EP4 receptors with a Ki value of 0.024 μM, while showing significantly lower affinity for other prostanoid receptor family members (EP1 Ki=17 μM, EP2 Ki=23 μM, EP3 Ki=1.90 μM, DP Ki=5.10 μM, FP Ki=5.63 μM, TP Ki=0.71 μM, IP Ki=6.74 μM). This selectivity enables effective blockade of PGE2-mediated biological effects via the EP4 receptor.
L-161982 targets the EP4 receptor, a subtype of the prostaglandin E2 receptor. It acts as a selective antagonist, blocking the binding of PGE2 to the EP4 receptor. By inhibiting EP4, it blocks PGE2-induced signal transduction and cell proliferation.

PGE2 增强的 HCA-7 细胞增殖可被 L-161982 (10 μM; 2 小时) 抑制 [1]。在 HCA-7 细胞中，PGE2 刺激的 ERK 磷酸化可被 L-161982 (10 μM; 1 小时) 阻断 [1]。在口腔鳞状细胞癌 Tca8113 细胞中，L-161982 可诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞，并抑制前列腺素 E2 诱导的增殖 [3]。研究发现，EP4 受体激动剂 PGE1-OH 可模拟 PGE2 的作用，逆转塞来昔布的抑制作用，并通过 ERK 磷酸化促进细胞生长；而 EP4 受体拮抗剂 L-161982 则完全阻断 PGE2 刺激的 ERK 磷酸化和 Tca8113 细胞的增殖。此外，L-161,982 可通过上调 Bax 和 p21 蛋白水平以及下调 Bcl-2、CDK2 和细胞周期蛋白 A2 蛋白水平，诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期 S 期进程。[1]
L-161,982 可抑制 PGE2 刺激的 HCA-7 细胞增殖。[2]
L-161,982 可抑制 PGE2 刺激的 ERK 磷酸化。[2]
L-161,982 可减弱 ERK 对 CREB 的磷酸化。[2]
L-161,982 可在体外抑制幼稚 T 细胞向 Th17 分化。[3]

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体外研究表明，L-161,982 可有效阻断 PGE2 诱导的细胞增殖和信号转导。在HCA-7结肠癌细胞中，用10 μM L-161982预处理1小时可完全阻断PGE2刺激的ERK磷酸化，预处理2小时可阻断PGE2诱导的细胞增殖。在口腔鳞状细胞癌Tca8113细胞中，L-161982（5-20 μM，处理48-72小时）以剂量和时间依赖的方式抑制细胞增殖，48小时的IC₅₀约为15 μM，并诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。此外，L-161982可抑制人脑微血管内皮细胞中寨卡病毒的复制，且不引起细胞毒性。
体外实验表明，L-161982可完全阻断PGE2诱导的HCA-7结肠癌细胞的ERK磷酸化和细胞增殖。它是一种选择性EP4受体拮抗剂。它的活性使其成为研究 EP4 在癌症和炎症中的作用的宝贵工具。

在胶原诱导性关节炎 (CIA) 小鼠模型中，L-161982（5 mg/kg；腹腔注射；每日一次，持续 2 周）可减轻关节炎病变的发生和进展 [2]。L161982 治疗可减少 CIA 小鼠的关节炎病变及其进展。L161982 可降低 CIA 小鼠血浆和组织中 IL-17 和 MCP-1 的表达。L161982 可增加 CIA 小鼠中 Treg 细胞的比例，但不能直接促进 Treg 细胞的增殖 [3]。L161982 治疗的 CIA 小鼠表现出关节炎评分降低、关节肿胀减轻、软骨表面裂纹减少以及关节腔结缔组织增生减少。CIA 小鼠血浆和组织中 IL-17 和 MCP-1 水平降低，而脾脏和淋巴结中 Treg 细胞的比例均增加。否则，L161982 对 Treg 细胞增殖没有直接影响。结论：尽管 L161982 的疗效不如塞来昔布，但它也能减轻 CIA 小鼠的踝关节炎症。L161982 通过抑制 IL-17 和 MCP-1、增加 Treg 细胞数量以及减轻炎症来降低 CIA 小鼠的类风湿关节炎 (RA) 严重程度[3]。L-161982 在多种动物模型中均表现出体内活性。在胶原诱导性关节炎 (CIA) 小鼠模型中，L-161982（5 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续 2 周）可显著降低关节炎评分，减轻关节肿胀和软骨表面裂纹，减少关节腔结缔组织的增生，降低血浆和组织中 IL-17 和 MCP-1 的水平，并增加脾脏和淋巴结中 Treg 细胞的比例。在幼鼠中，L-161982（10 mg/kg/天）可抑制 PGE2 刺激的骨形成。在 LPS 激活的人类巨噬细胞中，100 nM L-161982 可逆转 PGE2 的抗炎作用。
在体内，L-161982 可缓解小鼠胶原诱导性关节炎。作为一种选择性 EP4 受体拮抗剂，它可用于炎症性疾病的动物模型。其阻断 PGE2 信号传导的能力转化为体内抗炎功效。

L-161982 的受体结合亲和力可通过放射性配体结合试验测定。标准实验方案包括：1）制备表达人 EP4 受体或其他前列腺素受体亚型的膜悬液；2）将 L-161982 溶解于 DMSO 中，并用结合缓冲液稀释至不同浓度（0.1 nM - 100 μM）；3）加入放射性标记示踪剂（例如 [³H]-PGE2），并在室温下孵育 60-120 分钟以达到结合平衡；4）通过快速真空过滤或离心终止反应，并用冰冷的缓冲液洗涤以去除未结合的配体；5）使用液体闪烁计数器或 γ 计数器测量膜结合的放射性；6）根据竞争性结合曲线计算 Ki 值。利用此方法，测得L-161982对人EP4受体的Ki值为0.024 μM。
L-161982的体外受体结合实验包括测定其对EP4和其他前列腺素受体的亲和力。放射性配体结合实验采用³H-PGE2，在表达这些受体的细胞膜上进行。将化合物与递增浓度的配体孵育，并计算IC50值。功能性实验测定其拮抗PGE2诱导的cAMP积累或ERK磷酸化的能力。

细胞增殖实验[1]
细胞类型：HCA-7细胞
测试浓度：10 μM
孵育时间：2小时
实验结果：抑制PGE2诱导的细胞增殖。

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细胞增殖实验[2]
采用磺基罗丹明B (SRB) 法测定不同处理后细胞的增殖情况，具体方法如前所述。简而言之，将约8×10⁴个HCA-7细胞接种于6孔板的每个孔中，培养24小时。之后，细胞在无血清培养基中饥饿24小时，并用L-161,982 (10 μM)预孵育2小时，然后用PGE2刺激细胞72小时。随后，将活细胞用预冷的50%三氯乙酸（终浓度10%）在4℃下固定1小时。用去离子水洗涤细胞，并在室温下用0.4% SRB染料孵育10分钟进行染色。然后用1%乙酸洗涤细胞，并用1M无缓冲Tris溶解结合的SRB染料，充分混匀，使用酶标仪（Biomek，540 nm）测量光密度（OD）。

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体外增殖实验[3]
使用CD4+CD25+调节性T细胞分离试剂盒，通过阴性选择法从小鼠脾细胞中纯化CD4+CD25+细胞。将细胞以每孔 2 x 10³ 个细胞的密度培养，并用 0.5 μg/ml 可溶性小鼠抗 CD3 抗体、1 μg/ml 抗 CD28 抗体和 700 pg/ml PEG2 刺激，同时加入或不加入 150 pg/ml L161982。在 37°C 和 5% CO₂ 条件下孵育 5 天后，用 BrdU (100 μM) 脉冲标记细胞，并在 4 小时后检测 BrdU 的掺入情况。结果以 405 nm 波长下的光密度 (OD) 值表示。

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L-161982 的体外细胞检测方案如下：1) 将靶细胞（例如 HCA-7 结肠癌细胞、Tca8113 口腔鳞状细胞癌细胞或原代巨噬细胞）接种于培养板中，并在 37°C、5% CO₂ 条件下培养至对数生长期； 2) 用不同浓度的 L-161982（通常为 1-20 μM）预处理细胞 1-2 小时；3) 加入激动剂 PGE2（通常为 1-10 μM）刺激细胞，并继续孵育特定时间（ERK 磷酸化检测 15-30 分钟，细胞增殖检测 48-72 小时）；4) 对于 ERK 磷酸化检测，收集细胞裂解液，并通过 Western blot 检测 p-ERK 和总 ERK 水平；5) 对于细胞增殖检测，通过 MTT 或 CCK-8 法评估细胞活力；6) 对于细胞凋亡检测，通过流式细胞术（Annexin V/PI 双染）或 caspase 活性检测进行评估。
对于体外细胞实验，培养表达 EP4 受体的细胞，并用不同浓度的 L-161982 处理。通过阻断 PGE2 诱导的 ERK 磷酸化和细胞增殖来证实其受体拮抗作用。细胞活力采用标准方法进行评估。化合物对下游信号通路的影响通过蛋白质印迹法进行分析。

动物/疾病模型： 6～8周龄雌性DBA/1小鼠（胶原诱导性关节炎（CIA）小鼠模型）[1]
剂量： 5 mg/kg
给药途径： 腹腔注射（ip）；每日一次，持续2周
实验结果： 免疫后35天，关节肿胀减轻，关节炎评分降低。

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CIA小鼠模型的建立及给药方案[3]
将40只小鼠随机分为5组，每组8只：对照组和4个CIA组。对于CIA组，将200 μg溶于DMSO的鸡II型胶原蛋白与等体积的弗氏完全佐剂混合，并在冰浴中乳化。取100 μl该乳剂，经尾根部皮内注射，3周后进行加强免疫。模型对照组注射的乳剂添加了弗氏完全佐剂，但未添加鸡II型胶原蛋白，注射方法与实验组相同。其余CIA治疗组小鼠首先按CIA组处理，然后分别腹腔注射5 mg/kg L161982、灌胃200 U塞来昔布或腹腔注射100 μl PBS，方法与既往研究相同。所有注射均每日一次，持续 2 周。

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使用胶原诱导性关节炎 (CIA) 小鼠模型进行 L-161982 体内动物试验方案如下：1) 使用 6-8 周龄雄性 DBA/1 小鼠，于第 0 天和第 21 天用牛 II 型胶原蛋白完全弗氏佐剂乳剂进行免疫，以诱导关节炎；2) 关节炎症状出现后（通常在第 21-28 天），将动物随机分为载体对照组和 L-161982 治疗组（每组 8-10 只小鼠）；3) L-161982 制剂：通常使用 10% DMSO + 90% 玉米油作为载体，配制浓度为 0.5 mg/mL 的工作液；4) 给药方案：每日一次腹腔注射 L-161982，剂量为 5 mg/kg，持续 2 周。 5) 评估终点：每周评估关节炎评分（0-4 分制）2-3 次，测量后爪厚度；治疗后处死动物并收集关节组织进行组织病理学检查（苏木精-伊红染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色）；检测血浆中炎症细胞因子（IL-17、MCP-1）的水平。
在关节炎和炎症模型中进行了 L-161982 的体内动物研究。该化合物通过口服或腹腔注射给药。通过测量爪肿胀、关节损伤和炎症标志物来评估疾病严重程度。该化合物的抗炎作用已在胶原诱导的关节炎模型中得到证实。

现有文献中关于L-161982的系统药代动力学参数有限。该化合物在DMSO中的溶解度约为150 mg/mL (229.11 mM)，在10% DMSO + 90%玉米油混合溶液中的溶解度约为0.5 mg/mL (0.76 mM)，因此适用于腹腔注射。体内研究采用腹腔注射（5 mg/kg），每日一次，持续2周，结果显示其具有良好的体内活性和耐受性。体外实验的浓度范围为1-20 μM。诸如半衰期、生物利用度和分布容积等详细的药代动力学参数仍需进一步研究。粉末形式在-20°C下可稳定保存3年，溶液形式在-80°C下可稳定保存1年。
L-161982（CAS：147776-06-5）的分子式为C32H29F3N4O4S2。外观：固体粉末。纯度：≥95%。溶解度：DMF：20 mg/mL；DMSO：10 mg/mL。储存条件：-20°C。该化合物是一种选择性EP4受体拮抗剂。

根据材料安全数据表 (MSDS)，L-161982 被归类为非危险物质或混合物，未确定其 GHS 危险分类。该化合物未被 NTP、IARC、OSHA 或 ACGIH 列为致癌物。体外细胞毒性评估显示，L-161982 在有效浓度（例如 10 μM）下对 HCA-7 细胞和 Tca8113 细胞均无明显细胞毒性。动物研究表明，L-161982（5 mg/kg，腹腔注射，持续 2 周）未引起显著的全身毒性。本产品仅供研究使用，不得用于人类或兽医用途。操作和储存过程中应使用适当的个人防护装备，并在通风良好的区域进行。L-161982 是一种研究用化合物，尚未获准用于人类治疗。临床前研究表明，其安全性良好。作为一种EP4拮抗剂，它可能对炎症和免疫功能产生影响。处理该化合物时应遵循标准的实验室安全预防措施。

[1]. The EP4 antagonist, L-161,982, induces apoptosis, cell cycle arrest, and inhibits prostaglandin E2-induced proliferation in oral squamous carcinoma Tca8113 cells.J Oral Pathol Med. 2017 Nov;46(10):991-997.

[2]. The EP4 receptor antagonist, L-161,982, blocks prostaglandin E2-induced signal transduction and cell proliferation in HCA-7 colon cancer cells.Exp Cell Res. 2007 Aug 15;313(14):2969-79.

[3]. L161982 alleviates collagen-induced arthritis in mice by increasing Treg cells and down-regulating Interleukin-17 and monocyte-chemoattractant protein-1 levels.BMC Musculoskelet Disord. 2017 Nov 16;18(1):462.

N-[2-[4-[[3-丁基-5-氧代-1-[2-(三氟甲基)苯基]-1,2,4-三唑-4-基]甲基]苯基]苯基]磺酰基-3-甲基-2-噻吩甲酰胺属于联苯类化合物。

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背景：近期研究表明，环氧合酶2 (COX-2) 抑制剂可增强抗癌药物对肿瘤细胞（包括口腔鳞状细胞癌 (OSCC)）的毒性，但长期使用可能导致胃溃疡和心肌梗死等副作用。本研究旨在探讨COX-2下游产物前列腺素E2 (PGE2) 对人口腔鳞状细胞癌细胞系Tca8113增殖的影响，并探索PGE2受体，特别是EP4受体，对Tca8113细胞生长的影响。方法：为了评估PGE2和EP受体对Tca8113细胞的影响，我们进行了CCK8实验、Western blotting、细胞周期分析和细胞凋亡实验。结果：我们发现EP4受体激动剂PGE1-OH模拟PGE2的作用，逆转塞来昔布的抑制作用，并通过ERK磷酸化诱导细胞增殖；而EP4受体拮抗剂L-161,982则完全阻断PGE2刺激的ERK磷酸化和Tca8113细胞增殖。此外，L-161,982可能通过上调Bax和p21蛋白的表达水平，下调Bcl-2、CDK2和cyclin A2蛋白的表达水平，诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期S期。结论：我们的研究结果表明，EP4受体通过ERK信号通路介导PGE2诱导的细胞增殖，抑制EP4受体可能代表预防和治疗口腔鳞状细胞癌（OSCC）的一种替代治疗策略。[1]越来越多的证据表明，前列腺素E2（PGE2）水平升高可促进肠上皮细胞增殖，从而在结直肠肿瘤发生中发挥作用。PGE2通过四种G蛋白偶联PGE受体（EP）亚型发挥作用，这四种亚型分别命名为EP1、EP2、EP3和EP4。前列腺素E2（PGE2）刺激人结肠癌细胞增殖需要细胞外信号调节激酶（ERK1/2）磷酸化水平升高。然而，参与此过程的具体EP受体尚不清楚。我们的证据表明，选择性EP4受体拮抗剂L-161,982能够完全阻断PGE2诱导的HCA-7细胞中ERK磷酸化和增殖。为了鉴定ERK1/2信号通路中的下游靶基因，我们发现PGE2能够诱导ERK1/2下游早期生长反应基因1 (EGR-1)的表达，并在转录水平上调控其表达。PGE2处理能够诱导HCA-7细胞中环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB) Ser133位点的磷酸化，并增强CRE介导的荧光素酶活性。利用显性负性CREB突变体(ACREB)的研究提供了明确的证据，表明CREB参与了PGE2驱动的HCA-7细胞中egr-1的转录。总之，本研究揭示了egr-1是HCA-7细胞中PGE(2)的靶基因，并通过新发现的EP4/ERK/CREB通路进行调控。最后，我们的结果支持拮抗EP4受体可能为结直肠癌提供一种新的治疗方法。[2]

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背景：探讨EP4拮抗剂L161982对胶原诱导性关节炎（CIA）小鼠模型的影响及其潜在机制。方法：首先通过用鸡II型胶原免疫DBA/1小鼠建立CIA小鼠模型。CIA组小鼠分别接受以下三种给药方案：腹腔注射（IP）5 mg/kg L161982，每日一次，持续2周；灌胃给予200 U塞来昔布；或腹腔注射100 μl PBS。研究结束时，评估了总关节炎评分和组织病理学检查结果，以确定胶原诱导性关节炎（CIA）的严重程度。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫组织化学染色（IHC）分别检测血浆和组织中白细胞介素-17（IL-17）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达。测定了淋巴结和脾脏中CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞（Tregs）的比例。我们还使用BrdU检测和流式细胞术检测了L161982治疗后分离的Treg细胞的增殖情况以及初始T细胞的Th17极化率。结果：L161982治疗降低了CIA小鼠的关节炎评分、关节肿胀和软骨表面裂纹，并减少了关节腔内结缔组织的增生。 CIA小鼠血浆和组织中IL-17和MCP-1水平降低，而脾脏和淋巴结中Treg细胞的比例增加。此外，L161982对Treg细胞增殖无直接影响；体外实验表明，L161982处理的初始T细胞中Th17极化趋势减弱。结论：尽管L161982的疗效不如塞来昔布，但它也能减轻CIA小鼠的踝关节炎症。L161982通过抑制IL-17和MCP-1、增加Treg细胞数量以及减轻炎症，降低了CIA小鼠类风湿关节炎的严重程度。L161982给药后血浆或组织中IL-17水平降低的机制可能是由于CD4+ T细胞向Th-17细胞分化受到抑制。 [3]L-161982 是一种选择性 EP4 受体拮抗剂，可阻断 PGE2 诱导的 ERK 磷酸化和细胞增殖。它能缓解小鼠胶原诱导性关节炎。其 CAS 编号为 147776-06-5。该药物尚未获得 FDA 批准，仅供研究使用。

C32H29F3N4O4S2

654.722275495529

654.158

C, 58.70; H, 4.46; F, 8.71; N, 8.56; O, 9.77; S, 9.79

147776-06-5

9961192

White to off-white solid powder

1.37g/cm3

> 145 °C

1.633

8.071

139.68

1

9

10

45

1190

0

S(C1=CC=CC=C1C1C=CC(=CC=1)CN1C(N(C2C=CC=CC=2C(F)(F)F)N=C1CCCC)=O)(NC(C1=C(C)C=CS1)=O)(=O)=O

MMDNKTXNUZFVKD-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C32H29F3N4O4S2/c1-3-4-13-28-36-39(26-11-7-6-10-25(26)32(33,34)35)31(41)38(28)20-22-14-16-23(17-15-22)24-9-5-8-12-27(24)45(42,43)37-30(40)29-21(2)18-19-44-29/h5-12,14-19H,3-4,13,20H2,1-2H3,(H,37,40)

N-[2-[4-[[3-butyl-5-oxo-1-[2-(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-triazol-4-yl]methyl]phenyl]phenyl]sulfonyl-3-methylthiophene-2-carboxamide

L161982; 147776-06-5; L-161,982; L-161982; L 161,982; N-[2-[4-[[3-butyl-5-oxo-1-[2-(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-triazol-4-yl]methyl]phenyl]phenyl]sulfonyl-3-methylthiophene-2-carboxamide; L161982; N-[2-[4-[[3-butyl-5-oxo-1-[2-(trifluoromethyl)phenyl]-1,2,4-triazol-4-yl]methyl]phenyl]phenyl]sulfonyl-3-methyl-2-thiophenecarboxamide; 2-Thiophenecarboxamide, N-[[4'-[[3-butyl-1,5-dihydro-5-oxo-1-[2-(trifluoromethyl)phenyl]-4H-1,2,4-triazol-4-yl]methyl][1,1'-biphenyl]-2-yl]sulfonyl]-3-methyl-; L 161982

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~152.74 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (3.82 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。