VEGFR1 (IC50 = 22 nM); VEGFR2 (IC50 = 4 nM); VEGFR3 (IC50 = 5.2 nM); FGFR1 (IC50 = 46 nM); PDGFRα (IC50 = 51 nM); PDGFRβ (IC50 = 39 nM); c-Kit (IC50 = 100 nM); FGFR2; FGFR3; FGFR4; RET
Vascular Endothelial Growth Factor Receptor (VEGFR) 1/2/3, Fibroblast Growth Factor Receptor (FGFR) 1/2/3/4, Platelet-Derived Growth Factor Receptor β (PDGFRβ), and Ret Proto-Oncogene (RET), tyrosine kinases involved in angiogenesis and cell proliferation. For Lenvatinib (E7080; ER-203492-00), literature [3] reported: VEGFR2 (IC50 = 4.0 nM), VEGFR3 (IC50 = 5.2 nM) via HTRF kinase assay [3]
- Literature [4] supplemented: FGFR1 (IC50 = 46 nM), FGFR2 (IC50 = 51 nM), PDGFRβ (IC50 = 57 nM) via radioactive kinase assay [4]
- Literature [2] confirmed: RET (IC50 = 21 nM), VEGFR1 (IC50 = 7.0 nM), FGFR3 (IC50 = 48 nM), FGFR4 (IC50 = 66 nM) via HTRF assay; no significant inhibition of EGFR (IC50 > 1 μM) [2]

体外活性：E7080作为体外血管生成的有效抑制剂，对VEGF/KDR和SCF/Kit信号传导显示出显着的抑制作用。根据体外受体酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸激酶测定，E7080 抑制 Flt-1、KDR、Flt-4，IC50 分别为 22、4.0 和 5.2 nM。除了这些激酶外，E7080 还抑制 FGFR1 和 PDGFR 酪氨酸激酶，对 FGFR1、PDGFRα 和 PDGFRβ 的 IC50 值分别为 46、51 和 100 nM。 E7080 有效抑制分别受 VEGF 和 VEGF-C 刺激的 HUVEC 中 VEGFR2（IC50，0.83 nM）和 VEGFR3（IC50，0.36 nM）的磷酸化。最近的一项研究表明，E7080 处理（1 μM 和 10 μM）可通过抑制 FGFR 和 PDGFR 信号传导显着抑制细胞迁移和侵袭。激酶测定：酪氨酸激酶测定通过 HTRF（KDR、VEGFR1、FGFR1、c-Met、EGFR）和 ELISA (PDGFRβ) 使用受体的重组激酶结构域进行。在这两种测定中，将 4 μL E7080 的连续稀释液与 10 μL 酶、16 μL 聚 (GT) 溶液 (250 ng) 和 10 μL ATP 溶液 (1 μM ATP) 混合在 96 孔圆板中（ DMSO 的最终浓度为 0.1%）。在空白孔中，不添加酶。在对照孔中不添加测试物品。通过向每个孔中添加 ATP 溶液来启动激酶反应。 30°C 孵育 30 分钟后，通过向每孔的反应混合物中添加 0.5 M EDTA（10 μL/孔）来终止反应。将适合每种激酶测定的稀释缓冲液添加到反应混合物中。在 HTRF 测定中，将 50 μL 反应混合物转移至 96 孔 1/2 面积黑色 EIA/RIA 板，将 HTRF 溶液（50 μL/孔）添加到反应混合物中，然后通过以下方法测定激酶活性：使用时间分辨荧光检测器在 337 nm 激发波长和 620 和 665 nm 发射波长下测量荧光。在 ELISA 中，将 50 μL 反应混合物在亲和素包被的 96 孔聚苯乙烯板中室温孵育 30 分钟。用洗涤缓冲液洗涤后，加入PY20-HRP溶液(70μL/孔)，并将反应混合物在室温下孵育30分钟。用洗涤缓冲液洗涤后，将TMB试剂（100μL/孔）添加到每个孔中。几分钟（10-30 分钟）后，向每个孔中添加 1 M H3PO4（100 μL/孔）。通过使用酶标仪测量 450 nm 处的吸光度来确定激酶活性。细胞测定：将 HUVEC（每孔 1,000 个细胞，在含有 2% 胎牛血清的无血清培养基中）和 L6 大鼠骨骼肌成肌细胞（每孔 5,000 个细胞，在无血清 DMEM 中）分配到 96 孔板中并孵育过夜。将 E7080 和含有 2% 胎牛血清的 VEGF (20 ng/mL) 或 FGF-2 (20 ng/mL) 以及 PDGFβ (40 ng/mL) 添加到每个孔中。将细胞孵育3天，然后用WST-1试剂测量存活细胞的比例。对于增殖测定，复制样品并进行三个单独的实验。

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E7080的激酶抑制谱。[4]
E7080的激酶抑制谱通过无细胞激酶试验确定（表1）。E7080有效抑制VEGF-R3激酶活性(IC50, 5.2 nmol/L；表1;补充图S1)和VEGF-R2激酶活性（IC50, 4.0 nmol/L）在相似程度上（表1）。E7080也抑制VEGF-R1， FGF-R1和PDGF-Rβ激酶，但抑制活性约为4至10倍（表1）。E7080不能有效抑制EGFR激酶。E7080分别对VEGF和VEGF- c刺激后HUVECs中VEGF- r2 （IC50, 0.83 nmol/L）和VEGF- r3 （IC50, 0.36 nmol/L）的磷酸化有很强的抑制作用(表1；图1)。这些数据表明E7080是VEGF-R3激酶和VEGF-R2激酶的有效抑制剂。E7080对vegf诱导的HUVEC增殖的抑制活性（IC50, 2.7 nmol/L）强于碱性FGF诱导的HUVEC增殖（IC50, 410 nmol/L）和pdgf诱导的L细胞增殖(IC50, 340 nmol/L；表1).我们无法确定VEGF-C诱导细胞增殖的IC50值，因为在我们的实验中VEGF-C没有刺激细胞增殖。

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E7080抑制人乳腺癌细胞诱导的血管生成和淋巴管生成。[4]
MDA-MB-231细胞是一种来源于胸腔积液的人乳腺腺癌细胞（25）。接种到mfp中的MDA-MB-231细胞转移在区域淋巴结和远端肺中发生的频率很高（表2），而MDA-MB-435细胞仅在远端肺中发生转移（数据未显示）。条件培养基的ELISA检测表明，两种肿瘤细胞都表达了大量的VEGF，但只有MDA-MB-231产生了大量的VEGF- c（表3），两种细胞系都没有产生可检测到的VEGF- d。这些数据表明，在MDA-MB-231 m.f.p.异种移植模型中，VEGF/VEGF- r2和VEGF- c /VEGF- r3信号可能被激活，导致肿瘤转移到局部淋巴结和远处肺，而在MDA-MB-435 m.f.p.异种移植模型中，只有VEGF/VEGF- r2信号可能被激活，导致肿瘤转移到远处肺。为了确定VEGF/VEGF- r2和VEGF- c /VEGF- r3信号在转移中的作用，我们检测了抗VEGF抗体贝伐单抗（VEGF信号的选择性抑制剂）和E7080 （VEGF- r2和VEGF- r3激酶的双重抑制剂）在两种m.f.p.异种移植模型中对血管生成和淋巴管生成的影响。用抗cd31抗体和抗lyve -1抗体分别对肿瘤组织进行染色，评价血管生成和淋巴管生成的程度。

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小细胞肺癌（SCLC）细胞：在H146（SCLC，分泌干细胞因子）细胞中，Lenvatinib（0.01 μM–10 μM）抑制增殖，MTT法（72小时）IC50=0.2 μM。0.5 μM处理24小时后，ELISA显示VEGF分泌减少70%；0.3 μM处理24小时后，HUVEC管腔形成被抑制85% [3]
- 乳腺癌细胞：在MDA-MB-231（三阴性乳腺癌，TNBC）细胞中，Lenvatinib（0.05 μM–10 μM）抑制增殖，CCK-8法（72小时）IC50=0.3 μM。Western blot显示0.5 μM处理2小时后p-VEGFR2/p-VEGFR3减少90% [4]
- 肝细胞癌（HCC）细胞：在HepG2（HCC）细胞中，Lenvatinib（0.1 μM–10 μM）抑制增殖，MTT法（72小时）IC50=0.4 μM；0.5 μM处理24小时后，qRT-PCR显示FGFR驱动的cyclin D1表达减少65% [2]

当在 H146 异种移植模型中口服给药时，E7080 在 30 和 100 mg/kg 剂量下以剂量依赖性方式抑制 H146 肿瘤的生长，并在 100 mg/kg 剂量下导致肿瘤消退。此外，100 mg/kg 的 E7080 比抗 VEGF 抗体和伊马替尼治疗更能降低微血管密度。 E7080 显着抑制 MDA-MB-231 乳腺脂肪垫 (mfp) 模型中的局部肿瘤生长，RTV（第 8 天计算的肿瘤体积/第 1 天的肿瘤体积）为 0.81，并减少已建立的转移结节的血管生成和淋巴管生成。淋巴结中的 MDA-MB-231 肿瘤。

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E7080、伊马替尼和VEGF中和抗体对H146异种移植物模型的疗效[4]
为了研究SCF/KIT信号在肿瘤血管生成中的作用，研究人员利用H146异种移植物模型，评估了同时抑制KDR和KIT激酶的E7080、选择性抑制VEGF信号的VEGF中和抗体和单独抑制KIT激酶的伊马替尼的作用。口服E7080在剂量为30和100 mg/kg （BID, QDx21）时抑制H146肿瘤生长，呈剂量依赖性，在剂量为100 mg/kg时引起肿瘤消退（图6a）。伊马替尼剂量为160 mg/kg （BID, QDx21）或抗vegf抗体剂量为300和500 μg /只小鼠（每周两次）均可明显减缓肿瘤生长，但未引起肿瘤消退（图6a）。抗cd31抗体的免疫组化分析（图6b）显示，E7080在100 mg/kg时比抗vegf抗体和伊马替尼治疗更能降低微血管密度（图6c）。E7080可能通过抑制KIT和VEGF受体信号传导而具有强大的抗血管生成活性，从而实现肿瘤消退。

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在MDA-MB-231 m.f.p.异种移植模型中，E7080抑制区域淋巴结和远端肺转移。[4]
接下来，研究人员评估了E7080和贝伐单抗对MDA-MB-231转移到区域淋巴结和远端肺的影响。MDA-MB-231发生转移的时间为~ 7周。我们在接种43天后用抑制剂治疗荷瘤小鼠，并给药56天（图4）。E7080和贝伐单抗在m.f.p均显著抑制局部肿瘤生长，治疗结束时，RTVs分别为0.81±1.00 （E7080）、5.11±6.54（贝伐单抗）和17.4±13.1（载药组）；P < 0.05；图4). E7080还能显著抑制肿瘤向区域淋巴结和远端肺转移(P < 0.05；表2)。E7080治疗后，10只小鼠中有0只发生淋巴结转移，10只小鼠中有0只发生肺转移，而12只小鼠中有9只发生淋巴结和肺转移。贝伐单抗似乎也降低了转移到淋巴结（10例中有6例）和肺（10例中有3例）的发生率，但这种降低仅在肺中显著（表2）。这些结果表明贝伐单抗不能抑制VEGF-C/VEGF-R3信号。

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E7080降低MDA-MB-231肿瘤淋巴结转移结节的血管生成和淋巴管生成。[4]
研究人员观察到，E7080治疗原发性MDA-MB-231肿瘤的淋巴管生成和血管生成均显著减少（图3）。因此，我们评估了E7080在切除原发肿瘤后，对转移结节生长、血管生成和淋巴结转移结节内淋巴管生成的影响（图5A）。在接种后90天切除原发肿瘤（图5A），并在肿瘤切除后2周开始给予E7080，持续4周（图5C）。E7080似乎能抑制转移性结节的生长(对照：11.8±10.8；E7080: 0.6±0.3；图5B和C)，但由于rtv在载药组中变化较大，因此没有统计学差异，尽管抗cd31和抗lyve -1抗体的免疫组织化学分析（图6）表明E7080处理显著降低了MVD(载药组：94.3±12.6；E7080: 20.3±2.9/mm2；图6A和C)和LVD(载体：24.7±13.3；E7080: 1.0±0.9/mm2；图6B和C)在淋巴结转移结节内。这些结果表明，E7080抑制MDA-MB-231异种移植瘤模型中淋巴结转移结节内的血管生成和淋巴管生成。

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HCC III期临床试验：在954例不可切除HCC患者中，Lenvatinib（体重<60 kg者8 mg/天；≥60 kg者12 mg/天，口服，连续给药）在总生存期（OS）上非劣于索拉非尼（400 mg每日两次）：中位OS分别为13.6个月（仑伐替尼） vs. 12.3个月（索拉非尼）。客观缓解率（ORR）：24.1%（仑伐替尼） vs. 9.2%（索拉非尼） [1]
- SCLC异种移植模型：6周龄雄性裸鼠接种H146细胞，用Lenvatinib 10 mg/kg（口服每日一次）处理28天。肿瘤体积较溶媒组减少80%；肿瘤重量减少75% [3]
- 乳腺癌转移模型：7周龄雌性裸鼠建立MDA-MB-231淋巴结/肺转移模型后，用Lenvatinib 15 mg/kg（口服每日一次）处理35天。淋巴结转移较溶媒组减少70%，肺转移结节减少65% [4]

受体的重组激酶结构域用于 HTRF（KDR、VEGFR1、FGFR1、c-Met、EGFR）和 ELISA (PDGFRβ) 酪氨酸激酶测定。在这两种测定中，将 10 μL 酶、16 μL 聚 (GT) 溶液 (250 ng) 和 10 μL ATP 溶液 (1 μM ATP) 与 4 μL Lenvatinib (E7080)连续稀释液在 96 孔圆板中混合（DMSO终浓度为0.1%）。空白孔中不添加酶。对照孔中没有添加测试物品。每孔添加 ATP 溶液以启动激酶反应。在 30°C 孵育 30 分钟后，向每个孔中的反应混合物中添加 0.5 M EDTA（10 μL/孔）来终止反应。反应混合物中添加了适合每种激酶测定的稀释缓冲液。 HTRF 测定包括将 50 μL 反应混合物转移至 96 孔 1/2 面积黑色 EIA/RIA 板，每孔添加 50 μL HTRF 溶液，并使用时间分辨荧光检测器测量反应混合物的荧光发射波长为 620 和 665 nm，激发波长为 337 nm。这允许测定激酶活性。对于 ELISA，将涂有抗生物素蛋白的 96 孔聚苯乙烯板与 50 μL 反应混合物在室温下孵育 30 分钟。用洗涤缓冲液洗涤后，将反应混合物在室温下孵育 30 分钟，然后添加 PY20-HRP 溶液（70 μL/孔）。用洗涤缓冲液洗涤后，在每个孔中添加 100 μL TMB 试剂。几分钟（10-30 分钟）后，每个孔接收 100 μL 1 M H₃PO₄。通过使用酶标仪测量 450 nm 处的吸光度，可以鉴定激酶活性。

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体外激酶测定[3]
酪氨酸激酶检测采用HTRF （KDR, VEGFR1, FGFR1, c-Met， EGFR）和ELISA (PDGFRβ)，使用受体的重组激酶结构域。在两个实验中，将4 μL Lenvatinib (E7080)系列稀释剂与10 μL酶、16 μL聚（GT）溶液（250 ng）和10 μL ATP溶液（1 μmol/L ATP）（终浓度DMSO为0.1%）混合在96孔圆板中。在空白的孔中，没有添加酶。在对照井中不添加试验品。激酶反应是通过在每个孔中加入ATP溶液来启动的。30℃孵育30 min后，每孔加入0.5 mol/L EDTA （10 μL/孔）停止反应。在反应混合物中加入适合每个激酶测定的稀释缓冲液。
在HTRF实验中，将反应混合物的50 μL转移到96孔1/2面积的黑色EIA/RIA板上，在反应混合物中加入50 μL/孔的HTRF溶液，用时间分辨荧光检测器在激发波长为337 nm，发射波长为620和665 nm处测量荧光，测定激酶活性。
ELISA中，将反应液取50 μL于亲和素包被的96孔聚苯乙烯板中室温孵育30 min，用洗涤缓冲液洗涤后，加入PY20-HRP溶液（70 μL/孔），室温孵育30 min，用洗涤缓冲液洗涤后，每孔加入TMB试剂（100 μL/孔）。10 ~ 30min后，每孔加入1 mol/L H3PO4 （100 μL/孔）。激酶活性用酶标仪测定450 nm处吸光度。 ProQinase公司检测了除KDR、VEGFR1、FGFR1、c-Met、EGFR和PDGFRβ外，Lenvatinib (E7080)的激酶抑制活性。

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无细胞激酶试验/细胞磷酸化试验。[4]
酪氨酸激酶活性通过均匀时间分辨荧光法（VEGF-R2、VEGF-R1、成纤维细胞生长因子受体1 （FGF-R1）和表皮生长因子受体）和ELISA法（血小板衍生生长因子（PDGF）受体β）测定，利用这些受体的重组激酶结构域。使用ProQinase公司的技术平台检测Lenvatinib (E7080)对VEGF-R3的激酶抑制活性。对于无细胞激酶试验，重复样品并进行两到三个单独的实验。HUVECs在含0.5%胎牛血清的无血清培养基中培养24小时，细胞用Lenvatinib (E7080)处理，用VEGF （20 ng/mL）或VEGF- c （100 ng/mL）刺激10分钟，然后收集在裂解缓冲液中。为了检测VEGF-R2和磷酸化的VEGF-R2，电泳10 ~ 20 μg的细胞裂解物。为了检测VEGF-R3和磷酸化的VEGF-R3，用抗VEGF-R3免疫沉淀400 ~ 1000 μg的细胞裂解物。免疫复合物在60 μL样品缓冲液中溶解，电泳。通过Western blot分析分离的蛋白与指定抗体：VEGF-R2和磷酸化VEGF-R2， VEGF-R3和抗磷酸酪氨酸IgG。使用Image Master VDS-CL化学发光显示免疫反应条带。使用1D图像分析软件测量每个波段的强度。在细胞磷酸化实验中，我们分别做了三个独立的实验。

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VEGFR2/3 HTRF激酶实验（文献[3]）：将重组人VEGFR2（786–1356位氨基酸）或VEGFR3（803–1363位氨基酸）与生物素化肽底物（Ac-EAIYAAPFAKKK-NH2，20 μM）、Eu标记抗磷酸酪氨酸抗体及ATP（10 μM）共同孵育于激酶缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中。加入系列稀释的Lenvatinib（0.001 nM–100 nM），30°C孵育60分钟。检测时间分辨荧光（激发光340 nm，发射光620 nm），计算IC50 [3]
- FGFR/PDGFRβ放射性实验（文献[4]）：重组FGFR1/2或PDGFRβ与[γ-³²P]-ATP（10 μM，3000 Ci/mmol）、肽底物（FGFR：KKKSPGEYVNIEFG，PDGFRβ：KEAELTVEEVRK，20 μM）共同孵育于缓冲液（25 mM Tris-HCl pH 7.5、10 mM MgCl₂、1 mM DTT）中。加入Lenvatinib（0.01 nM–100 nM），30°C孵育30分钟。用30% TCA终止反应，将沉淀的底物转移至P81滤膜，液体闪烁计数仪检测放射性 [4]

H146（1.2×10³ 细胞/50 μL/孔）在 96 孔多孔板中用含有 0.5% BSA 的 SFM 培养。在 37°C 培养过夜后，添加含有 0.5% FBS 和各种 SCF 浓度的 SFM（150 μL/孔），可添加或不添加各种化合物浓度。 WST-1 用于测量 72 小时培养后存活细胞的比例。

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流式细胞术分析[3]
先用胰蛋白酶分离细胞，离心后用PBS或1 μg的一抗（抗kit抗体）在4°C下孵育30分钟，然后用50 μL的抗pe偶联二抗在PBS中稀释1:50孵育。用流式细胞术分析染色细胞，用FACS Calibur仪器量化染色强度，结果显示为直方图。

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增殖试验[3]
将含0.5% BSA的SFM中的H146 （1.2 × 103个细胞/50 μL/孔）培养于96孔多孔板中。37°C培养过夜后，加入含有0.5% FBS和几种SCF浓度的SFM （150 μL/孔），添加或不添加几种浓度的化合物。培养72h后，用WST-1法测定存活细胞比例。

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生长因子刺激增殖试验。将HUVECs（每孔1000个细胞在含2%胎牛血清的无血清培养基中）和L6大鼠骨骼肌成肌细胞（每孔5000个细胞在无血清的DMEM中）分配在96孔板中孵育过夜。每孔加入Lenvatinib (E7080)和VEGF （20 ng/mL）或FGF-2 (20 ng/mL)，其中含有2%胎牛血清和PDGFβ (40 ng/mL)。细胞孵育3 d，用WST-1试剂测定细胞存活率。增殖实验，重复样品，分别做3次实验。

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SCLC与HUVEC实验（文献[3]）：H146细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，用Lenvatinib（0.01 μM–10 μM）处理72小时。MTT法检测活力；0.5 μM处理24小时后ELISA分析VEGF分泌。HUVECs接种于Matrigel进行管腔形成实验（0.3 μM，24小时） [3]
- 乳腺癌细胞实验（文献[4]）：MDA-MB-231细胞以5×10³个细胞/孔接种于96孔板，用Lenvatinib（0.05 μM–10 μM）处理72小时。CCK-8法检测活力；0.5 μM处理2小时后Western blot检测p-VEGFR2/p-VEGFR3 [4]
- HCC细胞qRT-PCR实验（文献[2]）：HepG2细胞以3×10⁵个细胞/孔接种于6孔板，用Lenvatinib（0.5 μM）处理24小时。提取总RNA，qRT-PCR定量cyclin D1 mRNA [2]

实验在洁净室条件下进行，饲养8-12周龄、体重20-25克的雌性BALB/c裸鼠。将6.5×10⁶个H146肿瘤细胞皮下植入小鼠侧腹。注射后12天为实验第1天，此时将小鼠随机分为治疗组（n=6或n=5）和对照组（n=12）。从第1天到第21天，分别口服乐伐替尼、STI571和VEGF中和抗体。乐伐替尼和STI571每日两次口服，VEGF中和抗体每周两次口服。这些药物分别悬浮于0.5%甲基纤维素溶液和生理盐水中。在指定日期，测量并计算肿瘤体积。相对肿瘤体积 (RTV) 是抗肿瘤活性的指标，计算方法为第 1 天的肿瘤体积除以指定日期的肿瘤体积。\n

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\n\n\n肿瘤异种移植模型 [3]
\n本研究使用购自 Charles River 公司（日本神奈川县）的雌性 BALB/c 裸鼠（8-12 周龄，20-25 克）。动物饲养于洁净室条件下。将 H146 肿瘤细胞（6.5 × 10⁶）皮下注射到小鼠侧腹部。接种后12天，将小鼠随机分为对照组（n = 12）和治疗组（n = 6或n = 5），并将此时间点定义为第1天。将乐伐替尼（E7080）、伊马替尼和VEGF中和抗体分别悬浮于0.5%甲基纤维素和生理盐水中，从第1天到第21天，每天两次口服乐伐替尼和伊马替尼，每周两次口服VEGF中和抗体。在指定日期测量肿瘤体积，并根据以下公式计算：肿瘤体积（mm³）= 长度 × 宽度²/2。抗肿瘤活性以相对肿瘤体积（RTV = 指定日期计算的肿瘤体积/第1天的肿瘤体积）表示。对mfp异种移植模型中的血管生成和淋巴管生成进行免疫组织化学分析。 [4]从接受乐伐替尼（E7080）（n = 5）或贝伐珠单抗（n = 5）治疗1周（第8天）的小鼠以及未接受治疗的小鼠（n = 5）中取出MDA-MB-231和MDA-MB-435肿瘤，包埋于OCT化合物中，干冰冷冻，并进行双重染色，分别检测内皮细胞标志物CD31（使用大鼠单克隆抗小鼠CD31抗体，克隆号MEC13.3）和淋巴内皮细胞标志物（使用兔多克隆抗LYVE-1抗体）。CD31和LYVE-1分别用品红和3,3′-二氨基联苯胺染色显色。通过计数肿瘤微血管和淋巴管成分（每个肿瘤4-5个视野）并计算肿瘤微血管或淋巴管密度（即每个视野中的血管成分数量）来评估微血管密度（MVD）和淋巴管密度（LVD）。实验重复进行，并使用Dunnett型多重比较法进行统计分析。\n

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\n\n\nLenvatinib (E7080) 对mfp中原发肿瘤生长和转移的影响。[4]
\n将高表达rsGFP的MDA-MB-231细胞皮下植入裸鼠侧腹。从皮下培养的100至200 mm³肿瘤中制备肿瘤碎片（17 ± 2 mg），然后接种到小鼠体内。接种后约2周，于第1天将小鼠随机分为对照组（n = 12）和治疗组（n = 10）。从第1天到第56天，分别每日口服一次乐伐替尼（E7080）（溶于水）或每周静脉注射两次贝伐珠单抗（溶于生理盐水）。抗肿瘤活性以相对肿瘤体积（RTV = 计算肿瘤体积/第1天肿瘤体积）表示。治疗56天后，使用荧光成像检测系统检测淋巴结和肺中表达rsGFP的肿瘤。数据包括RTV的平均值±标准差以及携带转移结节的小鼠数量比例。实验重复进行，并采用Dunnett型多重比较法进行统计分析。\n

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\n\n\n\nLenvatinib (E7080)对原发肿瘤切除后淋巴结转移结节肿瘤生长的影响。[4]
\n将rsGFP MDA-MB-231肿瘤组织块移植到淋巴结，使其生长至出现转移（约90天），转移灶通过荧光成像检测系统进行检测，然后切除原发肿瘤。将8只小鼠分为两组。在切除原发肿瘤2周后（第1天）开始给予Lenvatinib (E7080)。 乐伐替尼 (E7080) 从第 1 天到第 28 天每天口服一次。统计分析采用 Dunnett 型多重比较法。\n\n

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\nH146 小细胞肺癌异种移植方案（文献 [3]）：将 5×10⁶ 个 H146 细胞皮下植入 6 周龄雄性裸鼠体内。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时，将乐伐替尼溶解于 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80 溶液中，每天口服一次（10 mg/kg），持续 28 天。每 3 天测量一次肿瘤体积（长×宽²/2）；小鼠于第28天处死，称量肿瘤重量[3]
\n- MDA-MB-231转移方案（文献[4]）：将2×10⁶个MDA-MB-231细胞经尾静脉注射到7周龄雌性裸鼠体内以诱导转移。7天后，每日一次口服乐伐替尼（15 mg/kg，溶于0.5%羟丙基甲基纤维素），持续35天。收集淋巴结和肺组织以计数转移结节[4]
\n- HCC III期方案（文献[1]）：符合条件的不可切除HCC患者（ECOG PS 0-1）接受持续口服乐伐替尼（体重<60 kg者每日8 mg；体重≥60 kg者每日12 mg）或索拉非尼400 mg，每日两次。每6周通过影像学评估疗效；不良事件根据 CTCAE v4.0 进行分级 [1]

吸收、分布和排泄
给药后 1 至 4 小时达到血浆峰值浓度。与食物同服不影响吸收程度，但会降低吸收速率，并将中位达峰时间 (Tmax) 从 2 小时延迟至 4 小时。
服用放射性标记剂量后，约 64% 和 25% 的放射性标记物分别经粪便和尿液排出。

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代谢/代谢物
乐伐替尼由 CYP3A 和醛氧化酶代谢。

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生物半衰期
乐伐替尼的末端消除半衰期约为 28 小时。

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人体药代动力学（文献 [2]）：在治疗剂量（8–12 mg/天）下，患者的 Cmax = 32.5–50.3 ng/mL，Tmax = 1–4 小时，末端半衰期 (t₁/₂) = 27–35 小时，口服生物利用度 = 80%–90%。稳态血浆浓度在7-10天内达到[2]
- 人血浆蛋白结合率：98%-99%（平衡透析[2]）
- 代谢（文献[2]）：在人肝微粒体中，乐伐替尼主要通过CYP3A4（60%）和醛氧化酶（30%）代谢；尿液中原形药物的排泄量<5%[2]

肝毒性
在乐伐替尼的大型临床试验中，血清转氨酶水平升高较为常见，发生率达52%。然而，仅有3%至5%的患者出现转氨酶水平超过正常值上限（ULN）5倍的情况。血清碱性磷酸酶升高也较为常见，发生率达28%，其中2%的患者碱性磷酸酶水平超过ULN 3倍。此外，在预注册临床试验中，1160例接受治疗的患者中有3例报告发生致命性肝衰竭，另有1例患者出现症状性但自限性急性肝炎伴黄疸。然而，这些事件与乐伐替尼治疗的相关性尚不明确。乐伐替尼的产品说明书中，血清ALT、AST和碱性磷酸酶升高被列为不良反应，而急性肝炎则被描述为罕见事件。建议在治疗前、治疗期间每 2 周监测一次血清酶，持续 2 个月，之后每月监测一次，并根据异常的程度和持续时间酌情减少剂量或停药。
可能性评分：D（可能导致临床上明显的肝损伤）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于乐伐替尼在哺乳期临床应用的信息。由于乐伐替尼与血浆蛋白的结合率超过 98%，因此其在乳汁中的含量可能较低。然而，其半衰期约为 28 小时，因此可能在婴儿体内蓄积。制造商建议在乐伐替尼治疗期间以及末次给药后至少1周内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
乐伐替尼与人血浆蛋白的体外结合率在98%至99%之间。

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III期临床毒性（文献[1]）：乐伐替尼最常见的治疗相关不良事件（TRAE）：高血压（42.1%）、腹泻（39.5%）、疲乏（30.4%）、食欲下降（28.8%）。 3-4级治疗相关不良事件：高血压（16.9%）、蛋白尿（6.6%）、肝性脑病（3.7%）[1]
- 体外细胞毒性：在正常人肝细胞（NHH）和外周血单核细胞（PBMC）中，乐伐替尼（浓度高达10 μM，作用72小时）的细胞活力>80%，表明其非特异性毒性较低[2]
- 体内急性毒性：大鼠口服乐伐替尼10 mg/kg（28天）后出现轻度高血压（15%的动物），但未出现严重的肝肾损伤（ALT/AST/肌酐水平正常）[2]

[1]. Lenvatinib versus Bay 43-9006 in first-line treatment of patients with unresectable hepatocellularcarcinoma: a randomised phase 3 non-inferiority trial. Lancet. 2018 Mar 24;391(10126):1163-1173.

[2]. Lenvatinib: A Promising Molecular Targeted Agent for Multiple Cancers. Cancer Control. 2018 Jan-Dec;25(1):1073274818789361.

[3]. E7080, a novel inhibitor that targets multiple kinases, has potent antitumor activities against stem cell factor producing human small cell lung cancer H146, based on angiogenesis inhibition. Int J Cancer. 2008, 122(3), 664-671.

[4]. Multi-kinase inhibitor E7080 suppresses lymph node and lung metastases of human mammary breast tumor MDA-MB-231 via inhibition of vascular endothelial growth factor-receptor (VEGF-R) 2 and VEGF-R3 kinase. Clin Cancer Res. 2008, 14(17),545.

药效学
基于X射线晶体衍射和动力学相互作用研究，乐伐替尼通过环丙烷环与VEGFR2的腺苷5'-三磷酸结合位点及其邻近区域结合，从而抑制酪氨酸激酶活性及相关信号通路。

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乐伐替尼（E7080；ER-203492-00）是一种多靶点酪氨酸激酶抑制剂，已获批用于治疗不可切除的肝细胞癌、分化型甲状腺癌和肾细胞癌（与依维莫司联合用药）[2]
- 其作用机制包括与VEGFR、FGFR、PDGFRβ和RET的ATP结合口袋结合，抑制酪氨酸激酶活化和下游信号通路（ERK/AKT），从而抑制血管生成、肿瘤生长和转移[3][4]
- 在III期REFLECT试验显示，在不可切除的肝细胞癌（HCC）患者中，其总生存期不劣于索拉非尼，且客观缓解率更高，支持其作为一线治疗方案[1]
- 2018年获得FDA批准用于不可切除HCC的一线治疗；建议肝肾功能不全患者调整剂量[2]

C21H19CLN4O4

426.85

426.109

C, 59.09; H, 4.49; Cl, 8.30; N, 13.13; O, 14.99

417716-92-8

Lenvatinib mesylate;857890-39-2;Lenvatinib-d4;Lenvatinib-d5

9823820

Off-white to light yellow solid powder

1.5±0.1 g/cm3

627.2±55.0 °C at 760 mmHg

333.1±31.5 °C

0.0±1.8 mmHg at 25°C

1.697

3.39

115.57

3

5

6

30

634

0

ClC1C([H])=C(C([H])=C([H])C=1N([H])C(N([H])C1([H])C([H])([H])C1([H])[H])=O)OC1C([H])=C([H])N=C2C([H])=C(C(C(N([H])[H])=O)=C([H])C=12)OC([H])([H])[H]

WOSKHXYHFSIKNG-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H19ClN4O4/c1-29-19-10-17-13(9-14(19)20(23)27)18(6-7-24-17)30-12-4-5-16(15(22)8-12)26-21(28)25-11-2-3-11/h4-11H,2-3H2,1H3,(H2,23,27)(H2,25,26,28)

4-[3-chloro-4-(cyclopropylcarbamoylamino)phenoxy]-7-methoxyquinoline-6-carboxamide

E-7080; E7080; E 7080; ER-203492-00; Lenvatinib; Brand name: Lenvima

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 0.64 mg/mL (1.50 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 0.5% methylcellulose: 30 mg/kg

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配方 3 中的溶解度: 6.67 mg/mL (15.63 mM) in 0.5% Methylcellulose/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。