VEGFR1 (IC50 = 22 nM); VEGFR2 (IC50 = 4 nM); VEGFR3 (IC50 = 5.2 nM); FGFR1 (IC50 = 46 nM); PDGFRα (IC50 = 51 nM); PDGFRβ (IC50 = 39 nM); c-Kit (IC50 = 100 nM); FGFR2; FGFR3; FGFR4; RET

体外活性：E7080作为体外血管生成的有效抑制剂，对VEGF/KDR和SCF/Kit信号传导显示出显着的抑制作用。根据体外受体酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸激酶测定，E7080 抑制 Flt-1、KDR、Flt-4，IC50 分别为 22、4.0 和 5.2 nM。除了这些激酶外，E7080 还抑制 FGFR1 和 PDGFR 酪氨酸激酶，对 FGFR1、PDGFRα 和 PDGFRβ 的 IC50 值分别为 46、51 和 100 nM。 E7080 有效抑制分别受 VEGF 和 VEGF-C 刺激的 HUVEC 中 VEGFR2（IC50，0.83 nM）和 VEGFR3（IC50，0.36 nM）的磷酸化。最近的一项研究表明，E7080 处理（1 μM 和 10 μM）可通过抑制 FGFR 和 PDGFR 信号传导显着抑制细胞迁移和侵袭。激酶测定：酪氨酸激酶测定通过 HTRF（KDR、VEGFR1、FGFR1、c-Met、EGFR）和 ELISA (PDGFRβ) 使用受体的重组激酶结构域进行。在这两种测定中，将 4 μL E7080 的连续稀释液与 10 μL 酶、16 μL 聚 (GT) 溶液 (250 ng) 和 10 μL ATP 溶液 (1 μM ATP) 混合在 96 孔圆板中（ DMSO 的最终浓度为 0.1%）。在空白孔中，不添加酶。在对照孔中不添加测试物品。通过向每个孔中添加 ATP 溶液来启动激酶反应。 30°C 孵育 30 分钟后，通过向每孔的反应混合物中添加 0.5 M EDTA（10 μL/孔）来终止反应。将适合每种激酶测定的稀释缓冲液添加到反应混合物中。在 HTRF 测定中，将 50 μL 反应混合物转移至 96 孔 1/2 面积黑色 EIA/RIA 板，将 HTRF 溶液（50 μL/孔）添加到反应混合物中，然后通过以下方法测定激酶活性：使用时间分辨荧光检测器在 337 nm 激发波长和 620 和 665 nm 发射波长下测量荧光。在 ELISA 中，将 50 μL 反应混合物在亲和素包被的 96 孔聚苯乙烯板中室温孵育 30 分钟。用洗涤缓冲液洗涤后，加入PY20-HRP溶液(70μL/孔)，并将反应混合物在室温下孵育30分钟。用洗涤缓冲液洗涤后，将TMB试剂（100μL/孔）添加到每个孔中。几分钟（10-30 分钟）后，向每个孔中添加 1 M H3PO4（100 μL/孔）。通过使用酶标仪测量 450 nm 处的吸光度来确定激酶活性。细胞测定：将 HUVEC（每孔 1,000 个细胞，在含有 2% 胎牛血清的无血清培养基中）和 L6 大鼠骨骼肌成肌细胞（每孔 5,000 个细胞，在无血清 DMEM 中）分配到 96 孔板中并孵育过夜。将 E7080 和含有 2% 胎牛血清的 VEGF (20 ng/mL) 或 FGF-2 (20 ng/mL) 以及 PDGFβ (40 ng/mL) 添加到每个孔中。将细胞孵育3天，然后用WST-1试剂测量存活细胞的比例。对于增殖测定，复制样品并进行三个单独的实验。

当在 H146 异种移植模型中口服给药时，E7080 在 30 和 100 mg/kg 剂量下以剂量依赖性方式抑制 H146 肿瘤的生长，并在 100 mg/kg 剂量下导致肿瘤消退。此外，100 mg/kg 的 E7080 比抗 VEGF 抗体和伊马替尼治疗更能降低微血管密度。 E7080 显着抑制 MDA-MB-231 乳腺脂肪垫 (mfp) 模型中的局部肿瘤生长，RTV（第 8 天计算的肿瘤体积/第 1 天的肿瘤体积）为 0.81，并减少已建立的转移结节的血管生成和淋巴管生成。淋巴结中的 MDA-MB-231 肿瘤。

受体的重组激酶结构域用于 HTRF（KDR、VEGFR1、FGFR1、c-Met、EGFR）和 ELISA (PDGFRβ) 酪氨酸激酶测定。在这两种测定中，将 10 μL 酶、16 μL 聚 (GT) 溶液 (250 ng) 和 10 μL ATP 溶液 (1 μM ATP) 与 4 μL E7080 连续稀释液在 96 孔圆板中混合（DMSO终浓度为0.1%）。空白孔中不添加酶。对照孔中没有添加测试物品。每孔添加 ATP 溶液以启动激酶反应。在 30°C 孵育 30 分钟后，向每个孔中的反应混合物中添加 0.5 M EDTA（10 μL/孔）来终止反应。反应混合物中添加了适合每种激酶测定的稀释缓冲液。 HTRF 测定包括将 50 μL 反应混合物转移至 96 孔 1/2 面积黑色 EIA/RIA 板，每孔添加 50 μL HTRF 溶液，并使用时间分辨荧光检测器测量反应混合物的荧光发射波长为 620 和 665 nm，激发波长为 337 nm。这允许测定激酶活性。对于 ELISA，将涂有抗生物素蛋白的 96 孔聚苯乙烯板与 50 μL 反应混合物在室温下孵育 30 分钟。用洗涤缓冲液洗涤后，将反应混合物在室温下孵育 30 分钟，然后添加 PY20-HRP 溶液（70 μL/孔）。用洗涤缓冲液洗涤后，在每个孔中添加 100 μL TMB 试剂。几分钟（10-30 分钟）后，每个孔接收 100 μL 1 M H₃PO₄。通过使用酶标仪测量 450 nm 处的吸光度，可以鉴定激酶活性。

H146（1.2×10³ 细胞/50 μL/孔）在 96 孔多孔板中用含有 0.5% BSA 的 SFM 培养。在 37°C 培养过夜后，添加含有 0.5% FBS 和各种 SCF 浓度的 SFM（150 μL/孔），可添加或不添加各种化合物浓度。 WST-1 用于测量 72 小时培养后存活细胞的比例。

Clean-room conditions are used to maintain 8–12 week old, 20–25 g female BALB/c nude mice. Mice's flanks are subcutaneously (s.c.) implanted with 6.5×10⁶ H146 tumor cells. Day 1 of the experiment occurs twelve days after the injection when mice are randomized into treatment (n = 6 or n = 5) and control (n = 12) groups. From day one to day twenty-one, lenvatinib, STI571, and VEGF neutralization antibody are given orally twice daily for lenvatinib and STI571 and twice weekly for the antibody. These substances are suspended in 0.5% methylcellulose and saline, respectively. On the designated days, tumor volume is measured and computed. Relative tumor volume (RTV) is a measure of antitumor activity that is calculated as the volume of the tumor on day 1 divided by the tumor volume at indicated days.

[1]. Lenvatinib versus Bay 43-9006 in first-line treatment of patients with unresectable hepatocellularcarcinoma: a randomised phase 3 non-inferiority trial. Lancet. 2018 Mar 24;391(10126):1163-1173.

[2]. Lenvatinib: A Promising Molecular Targeted Agent for Multiple Cancers. Cancer Control. 2018 Jan-Dec;25(1):1073274818789361.

[3]. E7080, a novel inhibitor that targets multiple kinases, has potent antitumor activities against stem cell factor producing human small cell lung cancer H146, based on angiogenesis inhibition. Int J Cancer. 2008, 122(3), 664-671.

[4]. Multi-kinase inhibitor E7080 suppresses lymph node and lung metastases of human mammary breast tumor MDA-MB-231 via inhibition of vascular endothelial growth factor-receptor (VEGF-R) 2 and VEGF-R3 kinase. Clin Cancer Res. 2008, 14(17),545.

C21H19CLN4O4

426.85

426.11

C, 59.09; H, 4.49; Cl, 8.30; N, 13.13; O, 14.99

417716-92-8

Lenvatinib mesylate;857890-39-2;Lenvatinib-d4;Lenvatinib-d5

Solid powder

COC1=CC2=NC=CC(=C2C=C1C(=O)N)OC3=CC(=C(C=C3)NC(=O)NC4CC4)Cl

WOSKHXYHFSIKNG-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C21H19ClN4O4/c1-29-19-10-17-13(9-14(19)20(23)27)18(6-7-24-17)30-12-4-5-16(15(22)8-12)26-21(28)25-11-2-3-11/h4-11H,2-3H2,1H3,(H2,23,27)(H2,25,26,28)

4-[3-chloro-4-(cyclopropylcarbamoylamino)phenoxy]-7-methoxyquinoline-6-carboxamide

E-7080; E7080; E 7080; ER-203492-00; Lenvatinib; Brand name: Lenvima

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 0.64 mg/mL (1.50 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: 0.5% methylcellulose: 30 mg/kg

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配方 3 中的溶解度: 6.67 mg/mL (15.63 mM) in 0.5% Methylcellulose/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。