Meisoindigo   中文名称: 甲异靛

- NLRP3 inflammasome: Meisoindigo inhibits NLRP3 inflammasome activation. [2]
- TLR4/NF-κB signaling pathway: Meisoindigo suppresses the TLR4/NF-κB signaling pathway. [2]

- 细胞生长抑制（白血病）： Meisoindigo 以剂量和时间依赖的方式抑制 HL-60、NB4 和 U937 AML 细胞系的生长。这些细胞系 24 小时的 IC50 值大约在 5 至 10 μM 之间。[1]
- 凋亡诱导（白血病）： 使用 10 μM meisoindigo 处理 24 小时，Annexin V/PI 染色显示 HL-60、NB4 和 U937 细胞中凋亡细胞百分比显著增加。这种凋亡可被广谱 caspase 抑制剂 z-VAD-fmk (50 μM) 和 caspase-3 抑制剂 z-DEVD-fmk (20 μM) 部分阻断，表明存在 caspase 依赖性和非依赖性途径。在 HL-60 细胞中，Meisoindigo 增加了 cleaved caspase-3 和促凋亡蛋白 Bak，并降低了抗凋亡蛋白 Bcl-2 和 Bcl-xL 的水平。未观察到 CD95 (Fas) 表达的变化，表明凋亡可能主要通过内源性线粒体途径介导。[1]
- 细胞周期阻滞（白血病）： Meisoindigo 处理（5, 10 μM，24 小时）导致 HL-60、NB4 和 U937 细胞周期阻滞，sub-G1 和 G0/G1 期细胞增多，S 期细胞减少。这与 p21 和 p27 蛋白水平升高相关。未检测到 phospho-cdc2 (Tyr 15) 的显著变化。[1]
- 髓系分化（白血病）： Meisoindigo（5 μM，48 小时）可诱导 HL-60 和 NB4 细胞髓系分化，表现为形态学改变（胞质空泡化、核浓缩/凹陷）、CD11b+ 细胞百分比增加以及硝基蓝四唑还原活性增强。[1]
- hTERT 下调（白血病）： 使用 5 μM meisoindigo 处理 24 小时显著下调了 HL-60 和 NB4 细胞中 hTERT 启动子活性和 hTERT mRNA 水平。处理 3 天可显著降低 hTERT 蛋白水平。[1]
- 化疗药物协同作用（白血病）： Meisoindigo 对 HL-60 和 NB4 细胞具有叠加效应，增强了阿糖胞苷和伊达比星的细胞毒性，组合指数约为 1，表明具有相加效应。[1]
- 原代 AML 细胞活性： Meisoindigo（5, 10 μM，2 天）抑制了来自 8 名患者的原代 AML 细胞的生长。在来自两名患者的样本中，5 μM meisoindigo 处理 24 小时诱导了显著的凋亡，增加了 p21、p27 和 cleaved caspase-3 水平，并下调了 Bcl-2 表达。未观察到 CD95 表达的变化。[1]
- 神经保护（OGD/R）： 在 HT-22（海马神经元）和 BV2（小胶质细胞）细胞中，meisoindigo 处理（BV2 为 30 μM，HT-22 为 50 μM）显著提高了氧糖剥夺/复糖复氧后的细胞活力。Meisoindigo 显著降低了两种细胞系在 OGD/R 后 NLRP3、ASC、CL-caspase-1 和 IL-1β 的表达。它还下调了 M1 标志物 iNOS，并上调了 M2 标志物 Arg-1。Meisoindigo 阻断了由 OGD/R 和 LPS 刺激诱导的 TLR4/NF-κB 信号通路激活，抑制了 TLR4、p-NF-κB p65 和下游 NLRP3 炎症小体蛋白。这与 BV2 细胞中小胶质细胞从 M1 向 M2 表型的转变相关。[2]

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Meisoindigo（Dian III；5–20 M；持续 24 小时）可防止 AML 细胞系增殖[1]。 Meisoindigo（10 μM；持续 24 小时）诱导急性髓系白血病细胞凋亡[1]。甲异靛（5-10 μM；持续 24 小时）会导致细胞周期停滞[1]。 Meisoindigo（5-10 μM；持续 24 小时）可提高 HL-60 细胞中的促凋亡 Bak 和裂解 caspase-3，同时降低 Bcl-2 和 Bcl-xL 水平[1]。 Meisoindigo（10、30、50、100、150 μM；24 小时）通过 OGD 后下调 TLR4 通路，阻断 HT-22 和 BV2 细胞中由 LPS (1 μg/mL) 引起的 NLRP3 炎症小体激活和 M1/M2 极化/R[2]。

- 抗白血病活性（NOD/SCID 小鼠）： 在腹腔注射 HL-60 细胞的 NOD/SCID 小鼠中，每日腹腔注射 meisoindigo（50、100 或 150 mg/kg，细胞注射 7 天后开始，持续 14 天）以剂量依赖性方式减小了脾脏大小，表明具有中等的体内抗 AML 活性。[1]
- 神经保护（MCAO 小鼠）： 在经受大脑中动脉闭塞和再灌注的成年雄性 C57BL/6J 小鼠中，使用 meisoindigo（4, 8, 12 mg/kg 腹腔注射，于 MCAO 前和再灌注后 2 小时给药）进行后处理，显著减少了梗死体积，改善了神经功能缺损，并降低了脑水肿（脑含水量）和 AQP4 表达。8 mg/kg 剂量具有最大的保护效果。Meisoindigo 减少了缺血半暗带中 NLRP3+ 细胞、MPO+ 中性粒细胞和 iNOS+ M1 型小胶质细胞/巨噬细胞的数量，同时增加了 YM1/2+ M2 型小胶质细胞/巨噬细胞的数量。它抑制了 NLRP3、ASC、CL-caspase-1、IL-18、TLR4、p-NF-κB p65、HMGB1 和 IL-1β 的表达。其效果与特异性 NLRP3 抑制剂 MCC950 (50 mg/kg) 和 TLR4 抑制剂 TAK-242 (3 mg/kg) 相似。[2]

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Meisoindigo（Dian III；50–150 mg/kg；IP；每日；持续 14 天）具有体内抗白血病活性[1]。在野生型 C57BL/6J 小鼠（25-30 g）大脑中动脉闭塞（MCAO）后 3 天，在术前静脉注射（2、4、8、12 mg/kg）时，甲异靛显着减少梗塞体积并改善神经功能缺损。 MCAO 和再灌注后 2 小时。甲异靛可减轻脑水肿和 AQP4 表达[2]。

- 细胞活力测定（MTT）： AML 细胞系（HL-60, NB4, U937）接种于 96 孔板，用指定浓度的 meisoindigo 处理。在不同时间点加入 MTT，孵育 3 小时后，用 DMSO 溶解甲臜结晶，在 570 nm 处测量吸光度。对于原代 AML 细胞，培养基中加入 10% 的 5637 膀胱癌细胞条件培养基。[1]
- 细胞活力测定（CCK-8，用于 OGD/R）： HT-22 和 BV2 细胞接种于 96 孔板，在 OGD 期间用不同浓度的 meisoindigo 处理。OGD/R 后，加入 CCK-8 溶液，在 450 nm 处测量吸光度。[2]
- 凋亡测定（Annexin V/PI 流式细胞术）： 细胞经 meisoindigo 处理后，用 Annexin V-FITC 和碘化丙啶（5 μg/mL）在黑暗中标记 30 分钟，然后进行流式细胞术分析。部分组别加入 caspase 抑制剂（z-VAD-fmk 50 μM, z-DEVD-fmk 20 μM）。[1]
- 细胞周期分析： 细胞经 meisoindigo 处理后，使用低渗方法制备样品。通过流式细胞仪获取数据，并使用 ModFit LT 软件进行分析。[1]
- 髓系分化测定： 通过用 CD11b 抗体染色后进行流式细胞术、测量 NBT 还原活性（细胞经佛波酯和 NBT 处理后计数甲臜沉淀）以及检查 Giemsa-Wright 染色的细胞涂片形态变化来评估分化。[1]
- hTERT 启动子活性测定： HL-60 和 NB4 细胞用含有 hTERT 启动子的荧光素酶报告质粒和海肾荧光素酶对照质粒共转染。经 meisoindigo 处理后，测量荧光素酶活性。[1]
- 实时定量 RT-PCR： 提取总 RNA，反转录为 cDNA，使用 SYBR Green 进行定量 PCR，以测量 hTERT、M1 标志物（iNOS, CD32, CD16）、M2 标志物（CD206, YM1/2, Arg-1）和炎性细胞因子（TNF-α, IL-1β）的 mRNA 水平。[1][2]
- 蛋白质印迹分析： 裂解细胞，蛋白质样品经 SDS-PAGE 分离，转至 PVDF 膜，用特异性一抗（如 cleaved caspase-3, Bcl-2, Bak, p21, p27, NLRP3, ASC, CL-caspase-1, IL-1β, TLR4, p-NF-κB p65, iNOS, Arg-1）进行杂交，使用化学发光法检测蛋白条带。[1][2]
- 免疫荧光（体外）： 对于体外 OGD/R 实验，用特异性抗体对细胞进行染色以评估蛋白表达。[2]

- 抗白血病活性（NOD/SCID 小鼠）： 6-8 周龄 NOD/SCID 小鼠腹腔注射 1 × 10⁶ 个 HL-60 细胞。注射后七天，每日一次腹腔注射 meisoindigo（溶于 DMSO 后用无菌生理盐水稀释），剂量为 50、100 或 150 mg/kg 体重，持续 14 天。溶媒对照组仅给予溶剂。处死小鼠，取出脾脏并称重。[1]
- 神经保护（MCAO 小鼠）： 对成年雄性 C57BL/6J 小鼠（25-30 g）进行 1 小时的大脑中动脉闭塞，然后进行再灌注。Meisoindigo（溶于 DMSO 并用生理盐水稀释）在 MCAO 前和再灌注后 2 小时通过腹腔注射给药，剂量为 2、4、8 和 12 mg/kg。MCC950 (50 mg/kg，一种特异性 NLRP3 抑制剂) 在闭塞后 1 小时和 3 小时腹腔注射。TAK-242 (3 mg/kg，一种特异性 TLR4 抑制剂) 在闭塞后 1 小时腹腔注射。MCAO 后 3 天评估神经功能缺损评分。然后处死小鼠，取脑用于梗死体积测量（TTC 染色）、脑含水量（干湿重法）、免疫荧光和蛋白质印迹分析。[2]

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HL-60、NB4、U937白血病细胞系
5、10、15、20 μM
腹腔注射；每日一次；持续14天

- 概述： Meisoindigo 是靛玉红的第二代衍生物，具有普遍的水溶性且耐受性良好，没有靛玉红的毒性。[2]
- 临床应用： Meisoindigo 已在中国临床上用于治疗慢性髓系白血病。[1][2]

[1]. Meisoindigo is a promising agent with in vitro and in vivo activity against human acute myeloid leukemia. Leuk Lymphoma. 2010 May;51(5):897-905.

[2]. Meisoindigo Protects Against Focal Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury by Inhibiting NLRP3 Inflammasome Activation and Regulating Microglia/Macrophage Polarization via TLR4/NF-κB Signaling Pathway. Front Cell Neurosci. 2019 Dec 16;13:553.

- 背景： Meisoindigo 是一种 3,3'-连接的双吲哚，是靛玉红的第二代衍生物。靛玉红是中药当归芦荟丸（含青黛）的活性成分。它已在中国用于治疗慢性髓系白血病。其母体化合物靛玉红水溶性差且具有严重的胃肠道副作用，而 meisoindigo 克服了这些缺点。[1][2]
- 在 AML 中的作用机制： Meisoindigo 主要通过内源性线粒体途径（下调 Bcl-2/Bcl-xL，上调 Bak/Bax，激活 caspase-3）诱导 AML 细胞凋亡，并诱导髓系分化（上调 CD11b，增加 NBT 还原）。它还能下调 hTERT 表达。它叠加性地增强了阿糖胞苷和伊达比星的细胞毒性。[1]
- 在缺血性脑卒中的作用机制： Meisoindigo 通过抑制 TLR4/NF-κB 信号通路来保护脑缺血再灌注损伤，进而抑制 NLRP3 炎症小体活化。这导致小胶质细胞/巨噬细胞从促炎的 M1 表型向抗炎的 M2 表型转变，从而减轻神经炎症。该研究还发现，脑卒中后，NLRP3 在神经元中的表达高于在小胶质细胞/巨噬细胞中的表达。[2]

C18H14N2O2

290.31

276.089

C, 74.47; H, 4.86; N, 9.65; O, 11.02

97207-47-1

97207-47-1

126274

Red solid powder

1.4±0.1 g/cm3

482.0±45.0 °C at 760 mmHg

236-237ºC

245.3±28.7 °C

0.0±1.2 mmHg at 25°C

1.698

1.53

49.41

1

2

1

21

614

0

O=C1C(=C2C3C(=CC=CC=3)N(C)C2=O)C2C(=CC=CC=2)N1

XZYXCQXTKOYHGK-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H12N2O2/c1-19-13-9-5-3-7-11(13)15(17(19)21)14-10-6-2-4-8-12(10)18-16(14)20/h2-9,21H,1H3

3-(2-hydroxy-1-methylindol-3-yl)indol-2-one

Meisoindigo; N-Methylisoindigotin; Methyl isoindigotin

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~55 mg/mL (~199.1 mM)
Ethanol: ~1 mg/mL (~3.6 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (9.05 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。