Methyllycaconitine citrate

别名: Methyllycaconitine (citrate); 351344-10-0; 20-ethyl-1alpha,6beta,14alpha,16beta-tetramethoxy-4-[[[2-[(3S)-3-methyl-2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl]benzoyl]oxy]methyl]-aconitane-7,8-diol,2-hydroxy-1,2,3-propanetricarboxylate; [(1S,2R,3R,4S,5R,6S,8R,9S,10S,13S,16S,17R,18S)-11-ethyl-8,9-dihydroxy-4,6,16,18-tetramethoxy-11-azahexacyclo[7.7.2.12,5.01,10.03,8.013,17]nonadecan-13-yl]methyl 2-[(3S)-3-methyl-2,5-dioxopyrrolidin-1-yl]benzoate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid; MLA; G12422
目录号: V41916 纯度: ≥98%
Mmethyllycaconitine citrate 是 α7 神经元烟碱乙酰胆碱受体 (α7nAChR) 的特异性拮抗剂。
Methyllycaconitine citrate CAS号: 351344-10-0
产品类别: New2
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
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产品描述
Mmethyllycaconitine citrate 是 α7 神经元烟碱乙酰胆碱受体 (α7nAChR) 的特异性拮抗剂。
生物活性&实验参考方法
靶点
α7 neuronal nicotinic acetylcholine receptor/α7nAChR
体外研究 (In Vitro)
和 10 μM 柠檬酸甲基乌头碱 (MLA) 的抑制可防止 Aβ25-35 引起的细胞活力降低。暴露于甲基乌头碱柠檬酸盐(2.5、5、10、20 μM)后,细胞活力没有变化。 Mmethylaconitine citrate 可抑制 aβ25-35 治疗引起的 LC3-II 水平升高。在 SH-SY5Y 细胞中,柠檬酸甲基乌头碱还可防止 Aβ 诱导的自噬体积累。流式细胞术证明,甲基乌头碱柠檬酸盐治疗导致 MDC 标记的空泡减少 [1]。
体内研究 (In Vivo)
单独腹腔注射甲基乌头碱柠檬酸盐(MLA)(6 mg/kg)并不能刺激攀爬行为。使用柠檬酸甲基乌头碱可以大大减少甲基苯丙胺 (METH) 诱导的攀爬行为,大约可减少 50% 的转录位点。甲基乌头碱柠檬酸盐不会改变基础运动活性或冰毒引起的过度运动。在用甲基乌头碱柠檬酸盐(250±43 fmol/mg,n=7)复制的模型中,METH诱导的多巴胺神经元完全耗尽被完全阻止。由于柠檬酸甲基乌头碱对体温有直接影响,因此被省略。甲基乌头碱柠檬酸盐不会改变基础体温(37.0±0.5°C,n=5)或减轻 METH 引起的高热(38.2±0.4 °C,n=6,MLA+METH 组,ns 与 METH 组)[1] 。
细胞实验
细胞培养和药物治疗[1]
人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y在37°C下在添加了10%FBS的RPMI-1640中培养。将60-70%融合的细胞用浓度为Aβ25-35、methyllycaconitine/甲基牛扁亭(MLA)、雷帕霉素或有或没有MLA的Aβ25-35处理。对照细胞在正常条件下培养。
细胞活力测定[1]
将细胞铺在含有完整培养基的96孔板上并培养24小时。然后用指定浓度的化合物处理细胞指定时间。药物处理后,通过MTT法测定细胞存活率。简而言之,向每个孔中加入10µl MTT溶液(5mg/mL),并在37°C下孵育4小时。去除上清液后,向每个孔中加入100µL DMSO。用酶标仪在570nm处测量吸光度。所有实验重复3次。
单丹磺酰尸胺染色(MDC)[1]
为了检测SH-SY5Y细胞中的自噬,将细胞铺在6孔板的盖玻片上。24小时后,用指定浓度的化合物处理细胞,在室温下用4%多聚甲醛固定15分钟,然后在37°C的黑暗中用MDC(1µg/mL的磷酸盐缓冲盐水[PBS])染色,并立即用荧光显微镜观察。为了量化带有酸性囊泡的细胞数量,将细胞接种到6孔板中并培养过夜,然后在37°C下用1µg/mL MDC染色15分钟。孵育后,用PBS洗涤细胞,用胰蛋白酶-EDTA去除,重新悬浮,并通过流式细胞仪分析。
Hoechst 33258染色检测细胞凋亡[1]
Hoechst 33258染色用于检测凋亡细胞核。将细胞镀在24孔板上。药物处理后,用10µg/mL Hoechst 33258对细胞染色15分钟。用PBS轻轻洗涤一次后,在荧光显微镜下观察细胞并拍照。
流式细胞术检测细胞凋亡[1]
将细胞铺在六孔板中并孵育24小时,暴露于所需浓度的Aβ25-35中24小时,然后通过胰蛋白酶消化收获,并在PBS中洗涤两次。用AnnexinV/异硫氰酸荧光素(FITC)和碘化丙啶(PI)的组合染色后,立即通过流式细胞术分析细胞。
免疫细胞化学[1]
如所述进行免疫细胞化学染色。简而言之,细胞在一夜之间被接种在盖玻片上。药物处理后,将细胞在4%多聚甲醛中固定30分钟。阻断后,将细胞与第一抗体(抗LC3)在4°C下孵育过夜。用PBS洗涤后,将细胞与PE标记的二抗(1∶500;Invitrogen)在室温下孵育1小时,然后用4-6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)复染10分钟。通过激光扫描显微镜获得图像。
蛋白质印迹分析[1]
处理后,收集细胞并用PBS轻轻洗涤两次,然后用蛋白质裂解缓冲液(25 mM Tris-HCl中的1%SDS,pH 7.5,4 mM EDTA,100 mM NaCl,1 mM PMSF,1%鸡尾酒蛋白酶抑制剂)裂解。样品在4°C下以12000 g离心15分钟,收集上清液。通过考马斯亮蓝蛋白测定法测定蛋白质的浓度。通过SDS-PAGE分离等量的蛋白质(50µg),并将其转移到硝化纤维膜上,在室温下用TBS中的5%脱脂奶粉封闭1小时,然后在4°C下与一抗(1∶1000)一起孵育过夜。洗涤膜,并在室温下用适当的二抗处理1小时。免疫复合物用增强化学发光试剂盒检测。
电子显微镜(EM)[1]
用2%四氧化锇对细胞进行后固定,然后用乙醇和环氧丙烷进行递增梯度脱水步骤。然后将细胞包埋在LX-112培养基(Ladd)中,将切片切成超薄(90 nm),放置在未涂覆的铜网格上,用0.2%柠檬酸铅和1%醋酸铀酰染色。在80 kV的JEOL-1010电子显微镜(JEOL)下检查图像。
动物实验
在之前的研究中,我们证实甲基乌头碱(MLA)——一种α7神经元尼古丁乙酰胆碱受体(α7 nAChR)的特异性拮抗剂——能够抑制大鼠纹状体突触体中甲基苯丙胺(METH)诱导的活性氧(ROS)生成。本研究旨在利用体内和体外模型,探讨MLA对小鼠急性METH效应和神经毒性的影响。结果显示,MLA可抑制METH诱导的小鼠攀爬行为达50%。此外,小鼠预先用1 μM METH孵育30分钟后,纹状体突触体多巴胺(DA)摄取减少,而MLA能够抑制这种减少。在体内评估甲基苯丙胺(METH)诱导的神经毒性时,发现治疗后72小时纹状体多巴胺能神经末梢丢失73%,酪氨酸羟化酶水平降低90%,而MLA可显著减轻这些损伤。治疗后24小时也观察到小胶质细胞活化(以1-(2-氯苯基)-N-甲基-N-(1-甲基丙基)-3-异喹啉甲酰胺结合量衡量),MLA可完全抑制小胶质细胞活化,这进一步证实了MLA的神经保护作用。MLA对METH诱导的高热无影响。此外,流式细胞术分析显示,METH诱导的活性氧(ROS)生成发生在小鼠纹状体突触体内。该效应提示囊泡多巴胺(DA)的释放,且依赖于钙离子、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)和蛋白激酶C(PKC)。 MLA 和 α-银环蛇毒素(而非二氢-β-红霉素,一种阻断含 nAChR β2 亚基的拮抗剂)能够完全抑制甲基苯丙胺 (METH) 诱导的活性氧 (ROS) 生成,且不影响囊泡多巴胺 (DA) 的摄取。这项研究的意义不仅在于 MLA 阻断 α7 尼古丁受体所产生的神经保护作用,还在于它提出了一种研究 METH 诱导的急性和长期效应的新机制。[2] 据报道,甲基乌头碱 (MLA) 是尼古丁乙酰胆碱受体 α7 亚型的选择性拮抗剂,动物行为学研究发现,MLA 可以减少尼古丁的自我给药并减轻尼古丁戒断症状。虽然 MLA 可以穿过血脑屏障 (BBB),但目前尚无研究评估长期暴露于尼古丁的动物的脑摄取情况。鉴于已有报道称长期尼古丁给药会改变血脑屏障(BBB)参数,进而影响MLA的BBB转运动力学,我们采用原位大鼠脑灌注技术,评估了未接触尼古丁和暴露于S-(-)尼古丁(4.5 mg/kg/天,持续28天;渗透泵)的大鼠脑内MLA摄取情况。结果表明,未接触尼古丁的大鼠脑内(3)H-MLA摄取率与静脉注射动力学数据(K(in),3.24 ± 0.71 × 10⁻⁴ mL/s/g)相近。然而,28天的尼古丁暴露使脑内(3)H-MLA摄取量降低了约60%(K(in),1.29 ± 0.4 × 10⁻⁴ mL/s/g)。这种降低与尼古丁诱导的脑内(3)H-MLA外排或BBB转运改变无关。类似的实验也表明,长期接触尼古丁后,(14)C-硫脲的被动渗透性降低了约24%。因此,长期接触尼古丁似乎会降低提取率极低的化合物(即渗透性受限化合物)的血脑被动扩散。这些发现提示,对于接触尼古丁的个体,可能需要重新评估渗透性受限的神经药物的药代动力学。[3]
参考文献

[1]. Methyllycaconitine alleviates amyloid-β peptides-induced cytotoxicity in SH-SY5Y cells. PLoS One. 2014 Oct 31;9(10):e111536.

[2]. Methyllycaconitine prevents methamphetamine-induced effects in mouse striatum: involvement of alpha7 nicotinic receptors. J Pharmacol Exp Ther. 2005 Nov;315(2):658-67.

[3]. Chronic nicotine exposure alters blood-brain barrier permeability and diminishes brain uptake of methyllycaconitine. J Neurochem. 2005 Jul;94(1):37-44.

其他信息
阿尔茨海默病(AD)是一种慢性进行性神经退行性疾病。作为最常见的痴呆症类型,它影响着全球超过3500万人,且发病率仍在不断上升。细胞外淀粉样β肽(Aβ)的过度沉积是AD的病理特征之一。越来越多的证据表明,巨自噬参与了AD的发病机制,但其确切作用机制尚不明确。尽管已有大量关于分子机制的研究报道,但目前仍缺乏有效预防、阻止或逆转阿尔茨海默病的方法。本研究探讨了Aβ25-35是否能够诱导自噬并抑制SH-SY5Y细胞的生长。此外,我们还研究了甲基乌头碱(MLA)对Aβ25-35细胞毒性的影响。结果表明,MLA对Aβ的细胞毒性具有保护作用,这可能与其抑制Aβ诱导的自噬以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路参与其中有关。此外,MLA具有良好的安全性。MLA治疗可能是一种有前景的AD治疗手段。[1]
多种信号通路调控自噬过程,其中mTOR通路发挥关键作用。我们关注了其下游靶点。活化的mTORC1可直接磷酸化4E结合蛋白1和p70S6K,从而负调控自噬。我们之前的研究表明,Aβ可通过mTOR依赖性通路诱导PC12细胞自噬。本研究也发现,Aβ可通过mTOR信号通路诱导SH-SY5Y细胞自噬,表现为磷酸化p70S6K水平的下调。此外,MLA可减弱Aβ引起的p70S6K磷酸化水平降低。MLA对mTOR信号通路的激活可能抑制Aβ诱导的自噬,并有助于其发挥对抗Aβ相关细胞毒性的保护作用。总之,我们发现Aβ25-35抑制SH-SY5Y细胞生长并诱导自噬。此外,MLA能够抵抗Aβ的细胞毒性,发挥神经保护作用,这可能与其通过mTOR通路抑制Aβ诱导的自噬有关。MLA可能是一种安全且有前景的AD治疗候选药物。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C43H58N2O17
分子量
874.923834323883
精确质量
874.373
CAS号
351344-10-0
PubChem CID
45073440
外观&性状
White to yellow solid powder
tPSA
276
氢键供体(HBD)数目
6
氢键受体(HBA)数目
18
可旋转键数目(RBC)
15
重原子数目
62
分子复杂度/Complexity
1610
定义原子立体中心数目
14
SMILES
CCN1C[C@@]2(CC[C@@H]([C@@]34[C@@H]2[C@@H]([C@@]([C@H]31)([C@]5(C[C@@H]([C@H]6C[C@@H]4[C@@H]5[C@H]6OC)OC)O)O)OC)OC)COC(=O)C7=CC=CC=C7N8C(=O)C[C@@H](C8=O)C.C(C(=O)O)C(CC(=O)O)(C(=O)O)O
InChi Key
INBLZNJHDLEWPS-OULUNZSJSA-N
InChi Code
InChI=1S/C37H50N2O10.C6H8O7/c1-7-38-17-34(18-49-32(42)20-10-8-9-11-23(20)39-26(40)14-19(2)31(39)41)13-12-25(46-4)36-22-15-21-24(45-3)16-35(43,27(22)28(21)47-5)37(44,33(36)38)30(48-6)29(34)36;7-3(8)1-6(13,5(11)12)2-4(9)10/h8-11,19,21-22,24-25,27-30,33,43-44H,7,12-18H2,1-6H3;13H,1-2H2,(H,7,8)(H,9,10)(H,11,12)/t19-,21+,22+,24-,25-,27+,28-,29+,30-,33-,34-,35+,36-,37+;/m0./s1
化学名
[(1S,2R,3R,4S,5R,6S,8R,9S,10S,13S,16S,17R,18S)-11-ethyl-8,9-dihydroxy-4,6,16,18-tetramethoxy-11-azahexacyclo[7.7.2.12,5.01,10.03,8.013,17]nonadecan-13-yl]methyl 2-[(3S)-3-methyl-2,5-dioxopyrrolidin-1-yl]benzoate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid
别名
Methyllycaconitine (citrate); 351344-10-0; 20-ethyl-1alpha,6beta,14alpha,16beta-tetramethoxy-4-[[[2-[(3S)-3-methyl-2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl]benzoyl]oxy]methyl]-aconitane-7,8-diol,2-hydroxy-1,2,3-propanetricarboxylate; [(1S,2R,3R,4S,5R,6S,8R,9S,10S,13S,16S,17R,18S)-11-ethyl-8,9-dihydroxy-4,6,16,18-tetramethoxy-11-azahexacyclo[7.7.2.12,5.01,10.03,8.013,17]nonadecan-13-yl]methyl 2-[(3S)-3-methyl-2,5-dioxopyrrolidin-1-yl]benzoate;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid; MLA; G12422
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~125 mg/mL (~142.87 mM)
H2O : ~2.18 mg/mL (~2.49 mM)
溶解度 (体内实验)
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中,混匀;然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80,混匀;加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备:将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中,得到澄清溶液。

配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中,混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备(4°C,1 周):将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中,得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (2.38 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加,逐一添加), 澄清溶液。
例如,若需制备1 mL的工作液,可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。


请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.1430 mL 5.7148 mL 11.4296 mL
5 mM 0.2286 mL 1.1430 mL 2.2859 mL
10 mM 0.1143 mL 0.5715 mL 1.1430 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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