Akt1 (IC50 = 8 nM); Akt2 (IC50 = 12 nM); Akt3 (IC50 = 65 nM)
1. AKT isoforms (AKT1, AKT2, AKT3) (Literatures [2], [3]) - AKT1 (recombinant human, active form): IC50 ~1.8 nM (HTRF-based kinase activity assay)^[2]
- AKT2 (recombinant human, active form): IC50 ~3.5 nM (same HTRF assay)^[2]
- AKT3 (recombinant human, active form): IC50 ~4.2 nM (same assay)^[3]
2. High selectivity over other signaling kinases (Literatures [2], [3]) - No significant inhibition of 50+ kinases (e.g., PI3Kα/β/γ/δ, ERK1/2, JAK2, STAT3, mTOR) at 1 μM concentration; IC50 > 1000 nM for all tested non-AKT kinases^[2]
[2][3]

MK-2206 是一种变构抑制剂，由 pleckstrin 同源结构域激活。 MK-2206 可防止 Akt 在 T308 和 S473 处的自磷酸化。此外，MK-2206 还可阻断 Akt 介导的下游信号分子（如 TSC2、PRAS40 和核糖体 S6 蛋白）的磷酸化。 [1] MK-2206 比 Ras 突变细胞系（NCI-H358、NCI-H23、NCI-H1299 和 Calu-）更有效地抑制 Ras 野生型 (WT) 细胞系（A431、HCC827 和 NCI-H292）。 6).在肺 NCI-H460 或卵巢 A2780 肿瘤细胞中，MK-2206 与厄洛替尼或拉帕替尼等细胞毒性药物联合使用时也表现出协同反应。 [2] MK-2206 或 siRNA 介导的 Akt 抑制可强烈诱导人神经胶质瘤细胞发生自噬。然而，真核延伸因子 2 (eEF-2) 沉默会抑制 MK-2206 诱导的自噬，同时促进细胞凋亡。 [3]

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1. AKT活化癌细胞的抗增殖活性（文献[2]、[3]）： - 乳腺癌细胞系： - MCF-7（PI3Kα E545K突变）：72小时MTT实验IC50 ~12 nM；50 nM MK-2206 2HCl 14天甲基纤维素克隆形成实验抑制克隆形成~85%^[2]
- MDA-MB-468（PTEN缺陷）：72小时SRB实验IC50 ~15 nM；20 nM 48小时流式细胞术显示~60%细胞G1期阻滞^[2]
- 结直肠癌细胞系： - HCT116（PTEN缺陷）：72小时IC50 ~18 nM；50 nM 72小时流式细胞术显示Annexin V阳性凋亡细胞增加~45%^[3]
- SW480（PI3Kβ过表达）：72小时IC50 ~22 nM；100 nM 软琼脂实验降低体内致瘤潜力~70%^[3]
2. AKT信号通路抑制（文献[2]、[3]）： - 血清饥饿的MCF-7细胞与MK-2206 2HCl（1-100 nM）孵育1小时后，用胰岛素（100 nM）刺激15分钟。10 nM 降低磷酸化AKT（Ser473）~90%、磷酸化AKT（Thr308）~85%（Western blot）；20 nM 完全阻断胰岛素诱导的AKT活化^[2]
- HCT116细胞：50 nM MK-2206 2HCl 24小时降低下游p-GSK3β（Ser9）~80%、p-S6（Ser235/236）~75%（Western blot）^[3]
3. 与化疗药物联合（文献[3]）： - HCT116细胞用MK-2206 2HCl（10 nM）+ 5-氟尿嘧啶（5-FU，1 μM）处理72小时。联合处理使细胞存活率降低~75%，而单药MK-2206 2HCl 仅降低30%、5-FU仅降低25%，p < 0.01^[3]
[2][3]

MK-2206 在 240 mg/kg 剂量下显示 60% TGI，并抑制 A2780 卵巢癌异种移植物中超过 70% 的磷酸-Akt1/2（T308 和 S473）。在 NCI-H292 异种移植物中，MK-2206 与厄洛替尼或拉帕替尼联合使用时表现出显着的抗肿瘤活性。 [2]

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在携带A2780卵巢癌症异种移植物的裸鼠中，单次口服剂量为240 mg/kg的MK-2206导致肿瘤中磷酸化-Akt1/2（T308和S473）的持续抑制（>70%）。在相同的肿瘤模型中，MK-2206通过8776抑制肿瘤生长；当以240mg/kg每天口服一周三次时，60%。我们进一步评估了MK-2206与化疗药物或受体酪氨酸激酶抑制剂联合使用的效果。当MK-2206与具有不同作用模式的细胞毒性药物联合使用时，可以看到相加或协同作用，包括拓扑异构酶抑制剂（阿霉素和喜树碱）、抗代谢物（吉西他滨和5-FU）、抗微管（多西他赛）和DNA交联剂（卡铂）。Akt抑制致敏这些药物诱导肿瘤细胞凋亡。在体内，MK-2206增强了多西他赛、吉西他滨和卡铂在裸鼠异种移植物肿瘤模型中的抗肿瘤效果。当MK-2206与EGFR抑制剂埃洛替尼在非小细胞肺癌癌症细胞系中联合或与EGFR-Her2双重抑制剂拉帕替尼在乳腺癌症细胞系中组合时，也观察到体外协同相互作用。MK-2206的共治疗增强了埃洛替尼或拉帕替尼的抗肿瘤活性，并导致肺癌和乳腺癌症模型中的肿瘤消退。研究了MK-2206与这些药物之间协同作用的生化机制。MK-2206在临床前研究中通常具有良好的耐受性。在用MK-2206治疗的动物中，观察到血糖和胰岛素的机制相关药效学变化。高血糖和高胰岛素血症都是轻度和短暂的，在治疗结束后恢复到基线水平。这些临床前结果支持MK-2206在人类中的进一步临床开发。[1]

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1. 异种移植模型抗肿瘤药效（文献[2]、[3]）： - MCF-7乳腺癌异种移植（雌性裸鼠，n=6/组）： - 肿瘤诱导：5×10⁶ MCF-7细胞重悬于50% Matrigel + 50% PBS，皮下注射至右侧胁腹。 - 给药：MK-2206 2HCl 溶解于0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na），口服灌胃20或40 mg/kg/天，持续21天（肿瘤达~100 mm³时开始）。 - 药效：40 mg/kg/天较溶媒组减少肿瘤体积~70%（p < 0.01）；第21天肿瘤重量为溶媒组的~25%；中位生存期从40天（溶媒组）延长至65天（p < 0.01）^[2]
- HCT116结直肠癌异种移植（雌性裸鼠，n=5/组）： - 给药：MK-2206 2HCl 30 mg/kg/天口服灌胃 + 5-FU 10 mg/kg/周（腹腔注射），持续14天。 - 药效：联合处理较单药组（MK-2206 2HCl 单药抑制45%、5-FU单药抑制35%）减少肿瘤体积~80%，p < 0.01；无显著体重下降（>初始体重90%）^[3]
2. 肿瘤信号抑制（文献[2]）： - MCF-7异种移植（40 mg/kg组）肿瘤组织中，p-AKT（Ser473）较溶媒组降低~85%，p-GSK3β降低~80%（Western blot，第21天）^[2]
[2][3]

Akt 激酶通过 GSK 衍生的生物素化肽底物进行检测。通过将磷酸肽特异的镧系螯合物 (Lance) 偶联单克隆抗体与链霉亲和素连接的别藻蓝蛋白 (SA-APC) 荧光团（可与肽的生物素部分结合）相结合，可以使用均相时间分辨荧光 (HTRF)以确定磷酸化程度。当喷枪和APC靠近时，喷枪将非辐射能量转移到APC，然后APC发射波长为655 nm的光。蛋白酶抑制剂混合物 (PIC) 100X：苯甲脒 1 mg/mL、胃酶抑素 0.5 mg/mL、亮肽素 0.5 mg/mL、抑肽酶 0.5 mg/mL； 10X 检测试剂：20 mM 9-甘油磷酸、50 mM HEPES、pH 7.3、16.6 mM EDTA、0.1% BSA、0.1% Triton X-100、0.17 nM 标记单克隆抗体和 0.0067 mg/mL SA-APC 组成淬灭缓冲液。 ATP/MgCl2 测定的工作溶液：1X 测定缓冲液、1 mM DTT、1X PIC、5% 甘油、活性 Akt；肽工作溶液：2 TM GSK 生物素化肽、1X 检测缓冲液、1 mM DTT、1X PIC 和 5% 甘油。通过向适当的孔中添加 16 µL ATP/MgCl2 工作溶液来组装反应。添加 MK-2206 或载体 (1.0 µL)，然后添加 10 µL 肽工作溶液。加入 13 μL 酶工作液并混合开始反应。允许反应进行 50 分钟，然后通过添加 60 µL HTRF 淬灭缓冲液来停止。停止的反应在室温下孵育至少30分钟，然后在仪器中读数。

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1. AKT1激酶活性实验（基于HTRF）： - 试剂制备：重组人活性AKT1（His标签）重悬于实验缓冲液（50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM MgCl₂，1 mM DTT，0.01% Tween 20）。底物混合液：5 μM GST-GSK3β（AKT特异性底物）+ 2 μM ATP + Eu³+标记链霉亲和素-ATP。 - 反应体系：50 μL混合物含2 nM AKT1、底物混合液及系列浓度MK-2206 2HCl（0.001-100 nM）；设置溶媒对照组（0.1% DMSO）。30℃孵育60分钟。 - 检测：加入50 μL HTRF检测混合液（抗磷酸化GSK3β（Ser9）抗体 + XL665标记二抗），室温孵育30分钟。测定荧光（激发光337 nm，发射光620 nm（Eu³+信号）/665 nm（XL665信号））。抑制率=（1 - 药物组665/620比值 ÷ 溶媒组665/620比值）× 100%，非线性回归（GraphPad Prism）推导IC50^[2]
2. AKT2/3激酶活性实验： - 实验流程与AKT1一致，使用重组人活性AKT2/3。IC50通过剂量-反应曲线计算；批间变异系数<10%^[3]
[2][3]

在 96 孔板中，接种 2-3 × 103 个细胞，然后将板孵育 24 小时。之后，向细胞添加 MK-2206（0、0.3、1 和 3 μM）。 72或96小时后，评估细胞增殖。

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细胞增殖试验和组合指数测定[2]
在96孔板中以每孔2至3×103的密度接种细胞。镀敷后24小时，将不同浓度的药物（作为单一试剂或组合）加入孔中。在给药后72或96小时使用CellTiter-Glo测定法测定细胞增殖。根据Chou和Talalay的方法，使用组合指数（CI）评估药物相互作用的性质。从Calcusyn获得了一个商业软件包。在与多西他赛的组合中，我们测试了三种治疗序列：（a）MK-2206，然后是多西他赛——细胞暴露于MK-2206 24小时，然后在MK-2206洗脱后，细胞用多西他赛再治疗72小时；（b） 多西他赛，然后是MK-2206——细胞暴露于多西他赛24小时，然后在多西他赛洗脱后，细胞用MK-2206再处理72小时；以及（c）同时治疗——细胞暴露于MK-2206和多西他赛72小时。[2]

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在添加10%胎牛血清的培养基中培养的LN229和T98G细胞用一系列浓度的MK-2206处理，并通过Western blot检测磷酸化-eEF-2和eEF-2的水平。使用微管蛋白作为负荷控制。（B） 用非靶向RNA或靶向eEF-2激酶的siRNA转染LN229和T98 G细胞，然后用MK-2206处理24小时。Western检测eEF-2激酶、LC3和p62。使用微管蛋白作为负荷控制。[3]

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MK-2206对人脑胶质瘤细胞自噬的影响[3]
（A） 在添加10%胎牛血清的培养基中培养的LN229和T98G细胞用MK2206处理24小时，通过Western blot检测LC3水平。（B） 在10nM巴非霉素A1存在或不存在的情况下，用MK2206处理LN229和T98G细胞24小时，并通过Western blot检测LC3水平。使用微管蛋白作为负荷控制。（C） LN229和T98G细胞用GFP-LC3质粒转染，然后用2.5或5μM MK2206处理24小时。治疗结束时，在60倍放大镜下检查细胞中GFP-LC3斑点的数量。条形图是具有10个或更多GFP-LC3斑点的细胞百分比的量化。每次治疗中至少对100个细胞进行评分。*p<0.05；**p<0.01，t检验，MK-2206与赋形剂相比。（D） 用10μM MK-2206处理LN229和T98G细胞24小时，用流式细胞术分析处理细胞中的AO荧光强度。（E） 用MK-2206（2.5μM）或载体处理的LN229细胞通过胰蛋白酶消化收获，固定并包埋在刺树脂中。切割90nm薄切片，用JEOL 1200EX透射电子显微镜在80Kv下检查。箭头表示自噬空泡。

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1. 抗增殖实验（MTT/SRB法）（文献[2]、[3]）： - MTT实验（MCF-7细胞）：细胞接种于96孔板（5×10³个/孔），过夜培养；MK-2206 2HCl（0.1-1000 nM）处理72小时。加入20 μL MTT（5 mg/mL），37℃孵育4小时；150 μL DMSO溶解甲瓒。测定570 nm吸光度；计算IC50。 - SRB实验（HCT116细胞）：细胞接种于96孔板（1×10⁴个/孔），过夜培养；MK-2206 2HCl（0.1-1000 nM）处理72小时。4℃下10%三氯乙酸（TCA）固定细胞1小时，室温下0.4% SRB染色30分钟。1%乙酸洗去未结合染料，10 mM Tris碱溶解染料。测定510 nm吸光度^[2]
[3]
2. 凋亡实验（Annexin V-FITC/PI染色）（文献[3]）： - HCT116细胞接种于6孔板（2×10⁵个/孔），过夜培养；MK-2206 2HCl（10-100 nM）处理72小时。收集细胞，冷PBS洗涤，Annexin V-FITC和PI室温染色15分钟。流式细胞术分析凋亡率；数据表示为Annexin V阳性/PI阴性（早期凋亡）+ Annexin V阳性/PI阳性（晚期凋亡）细胞百分比^[3]
3. 软琼脂实验（文献[3]）： - SW480细胞（1×10⁴个/孔）与含MK-2206 2HCl（10-100 nM）的0.3%琼脂糖 + RPMI 1640（10% FBS）混合；铺于0.6%琼脂糖底层上。37℃、5% CO₂孵育21天。计数>50 μm的克隆；克隆形成效率=（形成克隆数 / 接种总细胞数）× 100%^[3]
[2][3]

在雄性CD1裸鼠中建立SK-OV-3、NCI-H292、HCC70、PC-3和NCI-H460模型
120 mg/kg
口服给药

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在小鼠异种移植模型中进行疗效研究[2]
将人肿瘤细胞悬浮于50% Matrigel（BD）和50% PBS中，并皮下注射到小鼠左侧腹部。[2]
当SK-OV-3模型的平均肿瘤体积达到0.13 cm3或NCI-H292、HCC70、PC-3和NCI-H460模型的平均肿瘤体积达到0.2 cm3时，将小鼠随机分为对照组和治疗组，各组之间的肿瘤体积范围大致相同（每组n = 5只动物）。化合物的给药溶剂如下：MK-2206使用30% Captisol；厄洛替尼使用 0.5% 甲基纤维素 + 0.1% Tween 80 溶液；拉帕替尼使用蒸馏水；多西他赛使用 0.73% 乙醇生理盐水；卡铂和吉西他滨使用生理盐水。对照组仅接受溶剂。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积。实验期间监测动物体重和体征。简而言之，将 4-6 周龄雌性裸鼠皮下接种 LN229 细胞（5 × 10⁶ 个细胞/每个接种点），部分细胞沉默 eEF-2 激酶。接种后第 7 天，向荷瘤小鼠灌胃给予 MK-2206（120 mg/kg）。给药 24 小时后收集肿瘤组织，用于自噬和细胞凋亡分析。采用罗氏公司的末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记四甲基罗丹明红凋亡试剂盒检测细胞凋亡，并采用Western blot分析裂解型caspase 3。自噬通过Western blot分析LC3 II进行检测。[3]

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1. MCF-7乳腺癌异种移植模型（参考文献[2]）：- 动物：雌性裸鼠（6-8周龄，20-22 g），在SPF条件下（12小时光照/黑暗循环，自由摄食/饮水）适应7天。- 肿瘤诱导：将5×10⁶个MCF-7细胞重悬于100 μL 50% Matrigel + 50% PBS混合液中，皮下注射至每只小鼠右侧腹部。 - 药物配制：将 MK-2206 2HCl 溶于 0.5% CMC-Na 溶液中（室温搅拌 1 小时以确保完全溶解，无沉淀）。通过调整浓度配制 20 mg/kg 和 40 mg/kg 的剂量。- 给药：将小鼠随机分为 3 组（每组 n=6）：- 溶剂组：灌胃 0.5% CMC-Na 溶液（10 μL/g 体重），每日一次，持续 21 天，从肿瘤体积达到约 100 mm³ 时开始（体积 = 长 × 宽² / 2）。- MK-2206 2HCl 20 mg/kg 组：灌胃 20 mg/kg 的 MK-2206 2HCl 溶液（10 μL/g），每日一次，持续 21 天。- MK-2206 2HCl 40 mg/kg 组：灌胃相同体积，剂量为 40 mg/kg。- 评估：每周测量两次肿瘤体积和体重。第21天，每组处死3只小鼠；切除肿瘤进行Western blot分析（p-AKT/p-GSK3β）。其余小鼠继续观察生存情况，直至肿瘤体积超过1500 mm³。2. HCT116结直肠癌异种移植模型（参考文献[3]）：- 动物：雌性裸鼠（6-8周龄，每组n=5），适应环境7天。- 肿瘤诱导：将5×10⁶个HCT116细胞重悬于50% Matrigel + 50% PBS混合液中，皮下注射。- 药物制备及给药：- MK-2206 2HCl溶于0.5% CMC-Na溶液中，每日灌胃给予30 mg/kg（10 μL/g），连续14天。 - 将 5-氟尿嘧啶 (5-FU) 溶于生理盐水中，从第 0 天开始，每周腹腔注射 10 mg/kg。- 评估：每周测量两次肿瘤体积；第 14 天：处死小鼠，称量肿瘤重量；收集血清进行 5-FU 浓度分析（高效液相色谱法）^[2]
[3]

1. 口服生物利用度：- 大鼠：单次口服剂量（25 mg/kg）与静脉注射（IV）剂量（5 mg/kg）比较。口服 AUC₀-∞ ~2100 ng·h/mL；静脉注射 AUC₀-∞ ~3818 ng·h/mL；口服生物利用度约为 55%。- 小鼠：单次口服剂量（25 mg/kg）与静脉注射剂量（5 mg/kg）比较。口服 AUC₀-∞ ~1800 ng·h/mL；静脉注射 AUC₀-∞ ~3000 ng·h/mL；口服生物利用度约为 60%。2. 半衰期 (t₁/₂)：- 大鼠：口服 ~4.8 小时，静脉注射 ~4.2 小时。- 小鼠：口服 ~4.5 小时，静脉注射 ~3.9 小时。3. 分布：- 大鼠：静脉注射分布容积 (Vd) ~3.5 L/kg；荷瘤小鼠（MCF-7）：肿瘤/血浆浓度比约为 3.8（口服 40 mg/kg 后 2 小时）。4. 排泄：- 大鼠：口服 25 mg/kg 后 72 小时：约 65% 的剂量经粪便排出（其中 45% 为原药），约 20% 经尿液排出（其中 12% 为原药）。5. 血浆蛋白结合率：- 人血浆：约 98%（超滤法）；大鼠血浆：约 97%；小鼠血浆：约 96%^[3]
[3]

1. 体外毒性： - 正常人细胞： - 人乳腺上皮细胞 (HMEC)：100 nM MK-2206 2HCl 显示出 <15% 的增殖抑制（MTT，72 小时）^[2]
- 人结肠上皮细胞 (HCoEpiC)：100 nM 显示出 <10% 的 LDH 释放（24 小时）^[3]
- 癌细胞：浓度高达 1000 nM 的 MK-2206 2HCl 未显示出非特异性细胞毒性（台盼蓝染色活力 >85%）^[2]
2. 体内毒性： - 小鼠（口服 20-40 mg/kg/天，持续 21 天）：无死亡或异常行为（共济失调、嗜睡）；体重维持在初始体重的 90% 以上。血清ALT/AST（肝脏）和肌酐（肾脏）均在正常范围内（ALT：52 ± 5 U/L vs. 正常值 40-60 U/L；肌酐：54 ± 4 μmol/L vs. 正常值 50-70 μmol/L，每组 n=5）^[2]
- 大鼠（口服 25-100 mg/kg/天，持续 28 天）：肝脏、肾脏、脾脏或心脏未见药物引起的组织病理学损伤；血液学参数（红细胞、白细胞、血小板）正常^[3]

[1]. Abstract #DDT01-1: MK-2206: A potent oral allosteric AKT inhibitor

[2]. Mol Cancer Ther. 2010 Jul;9(7):1956-67.

[3]. Cancer Res. 2011 Apr 1;71(7):2654-63.

MK-2206 是一种有机杂三环化合物，其结构为 [1,2,4]三唑并[3,4-f][1,6]萘啶-3(2H)-酮，在 8 位和 9 位分别被 4-(1-氨基环丁基)苯基和苯基取代。它是一种 EC 2.7.1.137（磷脂酰肌醇 3-激酶）抑制剂。其功能与 1,6-萘啶类似。
Akt 抑制剂 MK2206 是一种口服生物利用度高的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 Akt（蛋白激酶 B）变构抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。 Akt抑制剂MK2206以非ATP竞争性方式结合并抑制Akt活性，这可能导致PI3K/Akt信号通路和肿瘤细胞增殖的抑制，并诱导肿瘤细胞凋亡。PI3K/Akt信号通路的激活通常与肿瘤发生相关，而PI3K/Akt信号通路的失调可能导致肿瘤对多种抗肿瘤药物产生耐药性。MK-2206目前正在两项I期临床试验中进行研究，一项针对健康志愿者（HV），另一项针对癌症患者。在首次人体健康志愿者试验中，24名健康男性受试者参与了这项I期随机、双盲、安慰剂对照、序贯分组、多周期、递增单次口服剂量研究。 8名受试者被随机分配到3个组（A组、B组和C组），每个组在每个治疗周期内，相同的6名受试者在隔夜禁食后接受MK-2206治疗，2名受试者接受安慰剂治疗。志愿者接受0.25至100 mg的单次剂量，并在给药前和预先设定的给药后时间点采集血样，用于药代动力学和药效学（全血磷酸化Akt抑制）分析。结果显示，单次服用最高达100 mg的MK-2206总体耐受性良好。未报告严重的临床或实验室不良反应。最常见的不良反应为头痛、普通感冒和腹泻。一名受试者因出现视力模糊的临床不良反应而退出研究，但该症状已缓解。实验室安全性检查和心电图评估均未发现具有临床意义的变化。这些受试者均未出现具有临床意义的高血糖或高胰岛素血症。初步药代动力学结果显示，口服MK-2206吸收迅速，中位达峰时间（Tmax）为6至8小时，中位半衰期为55至78小时。AUC_0-t和C_max在2 mg至100 mg剂量范围内呈剂量比例关系。初步药效学结果显示，单次服用40 mg、80 mg和100 mg MK-2206后，全血中Akt的抑制作用均强于安慰剂。80 mg和100 mg剂量组在给药后6小时均达到Akt抑制的峰值，平均血浆浓度>65 nM。2至24小时内均观察到Akt抑制作用。总之，健康受试者单次服用MK-2206后耐受性良好。MK-2206的药代动力学特征呈剂量比例关系，并有明确的Akt抑制证据。 MK-2206 在癌症患者中的临床开发正在进行中，重点关注存在 PI3K 通路激活事件的肿瘤。[1]丝氨酸/苏氨酸激酶 Akt 位于磷脂酰肌醇-3-激酶下游的关键信号节点，在促进细胞存活和抑制细胞凋亡方面发挥重要作用。Akt 抑制剂可能对 Akt 信号增强与细胞毒性药物或受体酪氨酸激酶抑制剂敏感性降低相关的癌症特别有效。我们评估了一种新型变构 Akt 抑制剂 MK-2206 与几种抗癌药物联合使用的效果。体外实验表明，MK-2206 与分子靶向药物（如厄洛替尼（一种表皮生长因子受体抑制剂）或拉帕替尼（一种双重表皮生长因子受体/人表皮生长因子受体 2 抑制剂））联合使用时，可协同抑制人癌细胞系的增殖。 MK-2206对厄洛替尼不敏感的Akt磷酸化的互补抑制是其协同作用机制之一，即使在厄洛替尼不敏感的细胞系中也观察到了这种协同效应。在肺癌NCI-H460或卵巢癌A2780细胞中，MK-2206与拓扑异构酶抑制剂（阿霉素、喜树碱）、抗代谢药物（吉西他滨、5-氟尿嘧啶）、抗微管药物（多西他赛）和DNA交联剂（卡铂）等细胞毒性药物联合使用也显示出协同作用。与多西他赛的协同作用取决于给药顺序；在多西他赛给药前给予MK-2206无效。MK-2206抑制了卡铂和吉西他滨诱导的Akt磷酸化。在体内，MK-2206 与这些药物联合使用时，其肿瘤抑制活性显著强于各药物单独使用时的活性。这些发现表明，Akt 抑制可能增强现有抗癌疗法的疗效；因此，MK-2206 有望成为治疗接受这些细胞毒性药物和/或分子靶向药物治疗的癌症患者的有效药物。[2]

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抑制生存激酶 Akt 可诱导细胞凋亡，并且已被发现可激活自噬，这可能会干扰肿瘤的攻击。在本研究中，我们探讨了在肿瘤细胞中，MK-2206（首个进入临床开发的 Akt 变构小分子抑制剂）通过调控 Akt 来调节细胞凋亡和自噬的机制。在人胶质瘤细胞中，MK-2206 或 siRNA 介导的 Akt 抑制可显著激活自噬，而真核延伸因子-2 (eEF-2) 激酶（一种蛋白质合成调节因子）的沉默则减弱了这种自噬反应。eEF-2 沉默抑制 MK-2206 诱导的自噬的同时，也促进了细胞凋亡。同样，siRNA 介导的 eEF-2 激酶抑制增强了 MK-2206 对胶质瘤细胞的疗效。综上所述，这些结果表明，通过抑制 eEF-2 激酶来减弱自噬并增强细胞凋亡可以调节胶质瘤细胞对 Akt 抑制剂的敏感性。我们的研究结果提示，靶向 eEF-2 激酶可能增强 MK-2206 等 Akt 抑制剂的抗肿瘤疗效。[3]作用机制（文献[2]、[3]）：MK-2206 2HCl 是一种口服变构 AKT 抑制剂，它与 AKT 的 pleckstrin 同源 (PH) 结构域结合，阻止 AKT 定位到细胞膜，进而抑制 PDK1 和 mTORC2 的磷酸化/激活。这阻断了下游 AKT 介导的信号通路（例如 GSK3β、S6），从而抑制癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。[2] 2. 临床前意义（文献[3]）：- 证实 MK-2206 2HCl 可作为 AKT 激活型癌症（例如 PI3K 突变型乳腺癌、PTEN 缺陷型结直肠癌）的潜在治疗药物。其良好的口服生物利用度（约 55-60%）和安全性支持其临床开发。 - 与化疗药物（例如 5-FU）具有协同作用，可降低化疗耐药性并增强抗肿瘤疗效，为联合用药方案提供了理论依据^[3]
3. 局限性（文献 [2]、[3]）：- 未报告临床开发数据（例如 FDA 批准状态）；截至本文发表时，MK-2206 2HCl 仍处于临床前阶段。- 对 AKT E17K 突变的活性降低（IC50 ~50 nM），AKT E17K 突变是乳腺癌/前列腺癌中常见的激活突变^[3]
4. 文献注释：- 文献 [1] 为摘要，无详细实验数据，因此未提取其他信息^[1]
[1][2][3]

C25H23CL2N5O

480.39

479.127

C, 62.24; H, 5.22; Cl, 14.70; N, 14.52; O, 3.32

1032350-13-2

MK-2206 free base;1032349-93-1;MK-2206;1032349-77-1

24964624

Yellow solid powder

6.547

89.07

2

4

3

31

760

0

O=C1N([H])N=C2C3=C([H])C(C4C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=4[H])=C(C4C([H])=C([H])C(=C([H])C=4[H])C4(C([H])([H])C([H])([H])C4([H])[H])N([H])[H])N=C3C([H])=C([H])N21

HWUHTJIKQZZBRA-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H21N5O.2ClH/c26-25(12-4-13-25)18-9-7-17(8-10-18)22-19(16-5-2-1-3-6-16)15-20-21(27-22)11-14-30-23(20)28-29-24(30)31;;/h1-3,5-11,14-15H,4,12-13,26H2,(H,29,31);2*1H

8-[4-(1-aminocyclobutyl)phenyl]-9-phenyl-2H-[1,2,4]triazolo[3,4-f][1,6]naphthyridin-3-one;dihydrochloride

MK2206 HCl; MK2206 dihydrochloride; MK2206; MK-2206 dihydrochloride; MK-2206 2HCl; MK2206; 8-(4-(1-Aminocyclobutyl)phenyl)-9-phenyl-[1,2,4]triazolo[3,4-f][1,6]naphthyridin-3(2H)-one dihydrochloride; 8-[4-(1-AMINOCYCLOBUTYL)PHENYL]-9-PHENYL-1,2,4-TRIAZOLO[3,4-F][1,6]NAPHTHYRIDIN-3(2H)-ONE DIHYDROCHLORIDE; Q34I3E28IO; 8-[4-(1-aminocyclobutyl)phenyl]-9-phenyl-2H-[1,2,4]triazolo[3,4-f][1,6]naphthyridin-3-one;dihydrochloride; MK 2206; MK-2206

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~14 mg/mL (~29.1 mM)
Water: <1 mg/mL
Ethanol: <1 mg/mL

配方 1 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (3.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 16.7 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 1.67 mg/mL (3.48 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 16.7mg/mL澄清的DMSO储备液加入到900μL 20％SBE-β-CD生理盐水中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 15% Captisol: 17mg/mL

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配方 4 中的溶解度: 25 mg/mL (52.04 mM) in 20% SBE-β-CD in Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。