激酶测定：Akt 激酶通过 GSK 衍生的生物素化肽底物进行测定。肽磷酸化的程度通过均相时间分辨荧光 (HTRF) 测定，使用对磷酸肽具有特异性的镧系元素螯合物 (Lance) 偶联单克隆抗体，并结合链霉亲和素连接的别藻蓝蛋白 (SA-APC) 荧光团，该荧光团将与生物素结合肽上的部分。当喷枪和 APC 靠近时，会发生从喷枪到 APC 的非辐射能量转移，然后从 APC 发出 655 nm 的光。工作溶液：100X 蛋白酶抑制剂混合物 (PIC)：1mg/mL 苯甲脒、0.5 mg/mL 胃酶抑素、0.5 mg/mL 亮肽素、0.5 mg/mL 抑肽酶； 10X 检测缓冲液：500 mM HEPES，pH7.5，1% PEG，16.6 mM EDTA，1 mM EGTA，1% BSA，20 mM 9-甘油磷酸盐；淬灭缓冲液 50 mM HEPES pH 7.3、16.6 mM EDTA、0.1% BSA、0.1% Triton X-100、0.17 nM 标记单克隆抗体、0.0067 mg/mL SA-APC； ATP/MgCl2 工作溶液：1X 检测缓冲液、1 mM DTT、1X PIC、5% 甘油、活性 Akt；肽工作溶液：1X 检测缓冲液、1 mM DTT、1X PIC、5% 甘油、2 TM GSK 生物素化肽。通过向适当的孔中添加 16 µL ATP/MgCl2 工作溶液来组装反应。添加 MK-2206 或载体 (1.0 µL)，然后添加 10 µL 肽工作溶液。加入 13 μL 酶工作液并混合开始反应。允许反应进行 50 分钟，然后通过添加 60 µL HTRF 淬灭缓冲液来停止。终止的反应在室温下孵育至少30分钟，然后在仪器中读数。 细胞测定：MK-2206溶解在DMSO中作为储备溶液，并在使用前用培养基稀释。将细胞（A431、HCC827、NCI-H292、NCI-H358、NCI-H23、NCI-H1299、Calu-6 和 NCI-H460 细胞）以 2-3 × 103 的密度接种在 96 孔板中，并孵育 24小时。然后将 MK-2206（0、0.3、1 和 3 μM）添加到细胞中。 72 或 96 小时后测定细胞增殖。MK-2206 是一种变构抑制剂，由 pleckstrin 同源结构域激活。 MK-2206 抑制 Akt T308 和 S473 的自身磷酸化。 MK-2206 还可以防止 Akt 介导的下游信号分子磷酸化，包括 TSC2、PRAS40 和核糖体 S6 蛋白。与 Ras 突变细胞系（NCI-H358、NCI-H23、NCI-H1299 和 Calu-6）相比，MK-2206 更有效地抑制 Ras 野生型 (WT) 细胞系（A431、HCC827 和 NCI-H292） ）。 MK-2206 还在肺 NCI-H460 或卵巢 A2780 肿瘤细胞中与细胞毒性药物（例如厄洛替尼或拉帕替尼）联合显示出协同反应。MK-2206 或 siRNA 介导的 Akt 抑制可强烈激活人神经胶质瘤细胞中的自噬。然而，真核延伸因子 2 (eEF-2) 沉默会抑制 MK-2206 诱导的自噬，从而促进细胞凋亡。

MK-2206 在 240 mg/kg 剂量下显示 60% TGI，并抑制 A2780 卵巢癌异种移植物中超过 70% 的磷酸-Akt1/2（T308 和 S473）。 MK-2206 与厄洛替尼或拉帕替尼联合使用，在 NCI-H292 异种移植物中表现出显着的抗肿瘤活性。

SK-OV-3, NCI-H292, HCC70, PC-3, and NCI-H460 models in male CD1-nude mice;

:Mol Cancer Ther.2010 Jul;9(7):1956-67;Cancer Res.2011 Apr 1;71(7):2654-63.

C25H21N5O

407.46714

1032349-93-1

MK-2206 dihydrochloride;1032350-13-2;MK-2206;1032349-77-1

C1=CC=C(C=C1)C2=C(C3=CC=C(C=C3)C4(CCC4)N)N=C5C=CN6C(=NN=C6O)C5=C2

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Note: Listed below are some common formulations that may be used to formulate products with low water solubility (e.g. < 1 mg/mL), you may test these formulations using a minute amount of products to avoid loss of samples.

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Injection Formulation 1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (i.e. 100 μL DMSO stock solution → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH ₂ O to obtain a clear solution.
Injection Formulation 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (i.e. 100 μL DMSO → 400 μLPEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
Injection Formulation 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (i.e. 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
Example: Take the Injection Formulation 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) as an example, if 1 mL of 2.5 mg/mL working solution is to be prepared, you can take 100 μL 25 mg/mL DMSO stock solution and add to 900 μL corn oil, mix well to obtain a clear or suspension solution (2.5 mg/mL, ready for use in animals).

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Injection Formulation 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in saline = 10 : 90 [i.e. 100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in saline)]
*Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.
Injection Formulation 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (i.e. 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin → 500 μL Saline)
Injection Formulation 6: DMSO : PEG300 : castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (i.e. 50 μL DMSO → 100 μLPEG300 → 200 μL castor oil → 650 μL Saline)
Injection Formulation 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (i.e. 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
Injection Formulation 8: Dissolve in Cremophor/Ethanol (50 : 50), then diluted by Saline
Injection Formulation 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (i.e. 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
Injection Formulation 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (i.e. 100 μL EtOH → 400 μLPEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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Oral Formulation 1: Suspend in 0.5% CMC Na (carboxymethylcellulose sodium)
Oral Formulation 2: Suspend in 0.5% Carboxymethyl cellulose
Example: Take the Oral Formulation 1 (Suspend in 0.5% CMC Na) as an example, if 100 mL of 2.5 mg/mL working solution is to be prepared, you can first prepare 0.5% CMC Na solution by measuring 0.5 g CMC Na and dissolve it in 100 mL ddH2O to obtain a clear solution; then add 250 mg of the product to 100 mL 0.5% CMC Na solution, to make the suspension solution (2.5 mg/mL, ready for use in animals).

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Oral Formulation 3: Dissolved in PEG400
Oral Formulation 4: Suspend in 0.2% Carboxymethyl cellulose
Oral Formulation 5: Dissolve in 0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose
Oral Formulation 6: Mixing with food powders

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Note: Please be aware that the above formulations are for reference only. InvivoChem strongly recommends customers to read literature methods/protocols carefully before determining which formulation you should use for in vivo studies, as different compounds have different solubility properties and have to be formulated differently.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。