Akt1 (IC50 = 8 nM); Akt2 (IC50 = 12 nM); Akt3 (IC50 = 65 nM) Akt1 (IC50 = 8 nM); Akt2 (IC50 = 12 nM); Akt3 (IC50 = 65 nM)
Akt1, Akt2, and Akt3 (also known as protein kinase B alpha, beta, and gamma). MK-2206 is a highly selective allosteric inhibitor of the Akt kinases. It binds to the pleckstrin homology (PH) domain of Akt, preventing its membrane translocation and subsequent phosphorylation by PDK1 at Thr308 and by mTORC2 at Ser473. The compound inhibits Akt1 with an IC50 of 8 nM, Akt2 with an IC50 of 12 nM, and Akt3 with an IC50 of 65 nM. This allosteric mechanism of action is distinct from ATP-competitive kinase inhibitors and provides high selectivity for Akt over other kinases. The Akt pathway is a central regulator of cell survival, proliferation, and metabolism, and is frequently hyperactivated in cancer through mutations in PIK3CA, loss of PTEN, or amplification of Akt itself.

MK-2206（0-10 μM；72 和 96 小时）以剂量和时间依赖的方式抑制鼻咽癌 (NPC) 细胞系 CNE-1、CNE-2、HONE-1 和 SUNE-1 的生长[3]。对于 CNE-2 和 HONE-1 细胞，MK-2206（0-10 μM；24 和 48 小时）导致 G0/G1 期细胞比例呈剂量依赖性升高，S 期细胞数量相应减少[3]。MK-2206（0-10 μM；24 小时）以剂量依赖的方式降低 S6 和 PRAS40 的磷酸化水平。GSKα/β 和 AKT 的磷酸化不受 MK-2206 的影响。[3]在 CNE-2 细胞中，MK-2206（0-10 μM；24 小时）呈剂量依赖性地促进 LC3-II 的出现。自噬需要关键蛋白微管相关蛋白 1 (LC3)[3]。
MK-2206 对 Akt 激酶具有强效的体外活性，IC50 值分别为 8 nM (Akt1)、12 nM (Akt2) 和 65 nM (Akt3)。在基于细胞的实验中，该化合物抑制 Akt 磷酸化及其下游信号传导，导致细胞增殖减少和细胞凋亡增加。许多乳腺癌细胞系以及具有 PIK3CA 突变或 PTEN 缺失的细胞对 MK-2206 敏感。该化合物表现出 Akt 抑制剂的预期细胞功能，包括抑制细胞生长、诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞。该化合物的变构机制使其具有高选择性，并能降低脱靶效应，优于ATP竞争性抑制剂。更多详细的体外数据，包括针对多种癌细胞系的GI50值，可在原始文献中找到。

在裸鼠体内，MK-2206 可通过两种灌胃剂量（480 mg/kg，每周一次；以及 240 mg/kg，每周三次，持续两周）抑制人 CNE-2 异种移植瘤的生长。在小鼠体内，未观察到其他明显的损害[3]。口服 MK-2206（120 mg/kg，隔日一次）可显著减少携带 GEO 结肠癌细胞的 3-5 周龄无胸腺裸鼠体内肿瘤的形成[4]。MK-2206 已在多种临床前癌症模型中显示出体内疗效。在鼻咽癌动物模型中，该化合物可抑制肿瘤生长。该化合物具有良好的口服生物利用度，支持其用于口服给药方案。在异种移植瘤模型中，MK-2206 给药可剂量依赖性地抑制肿瘤生长，并伴有肿瘤组织中 Akt 磷酸化及其下游信号传导的降低。该化合物已与其他靶向疗法和化疗药物联合使用进行评估，并在某些模型中显示出协同效应。详细的体内数据，包括对各种肿瘤类型的疗效、药代动力学-药效学关系以及联合用药研究，均可在原始文献中找到。

Akt激酶的检测采用GSK衍生的生物素化肽底物。将特异性识别磷酸化肽的镧系螯合物（Lance）偶联单克隆抗体与能结合肽生物素部分的链霉亲和素连接的别藻蓝蛋白（SA-APC）荧光团结合，即可利用均相时间分辨荧光（HTRF）测定磷酸化程度。当Lance和APC靠近时，Lance将非辐射能量传递给APC，APC随后发射波长为655 nm的光。蛋白酶抑制剂混合物（PIC）100X：苯甲脒1 mg/mL，胃蛋白酶抑制剂0.5 mg/mL，亮抑蛋白酶肽0.5 mg/mL，抑肽酶0.5 mg/mL； 10倍浓度检测试剂：20 mM 9-甘油磷酸钠、50 mM HEPES（pH 7.3）、16.6 mM EDTA、0.1% BSA、0.1% Triton X-100、0.17 nM 标记单克隆抗体和 0.0067 mg/mL SA-APC 组成淬灭缓冲液。ATP/MgCl₂ 检测工作液：1倍浓度检测缓冲液、1 mM DTT、1倍浓度 PIC、5% 甘油和活性 Akt；肽工作液：2TM GSK 生物素化肽、1倍浓度检测缓冲液、1 mM DTT、1倍浓度 PIC 和 5% 甘油。反应体系的配制方法为：向相应的孔中加入 16 µL ATP/MgCl₂ 工作液。加入 MK-2206 或溶剂（1.0 µL），随后加入 10 µL 肽工作液。加入 13 μL 酶工作液并混匀以启动反应。反应进行 50 分钟后，加入 60 µL HTRF 淬灭缓冲液终止反应。终止反应后，在室温下孵育至少 30 分钟，然后用仪器读取结果。
使用重组 Akt1、Akt2 和 Akt3 酶进行 MK-2206 的激酶抑制活性测定。将该化合物与酶和底物（通常为含有 Akt 共识磷酸化序列的肽）孵育，并测定激酶活性的抑制情况。根据剂量反应曲线确定 IC50 值分别为 8 nM (Akt1)、12 nM (Akt2) 和 65 nM (Akt3)。通过广泛的激酶筛选评估了该化合物对其他激酶的选择性，证实了其对Akt的高选择性。通过与Akt的PH结构域结合实验，可以证实该化合物的变构机制。

细胞增殖实验[3]
细胞类型： 鼻咽癌细胞系 CNE-1、CNE-2、HONE-1 和 SUNE-1
测试浓度： 0.08、0.16、0.31、0.63、1.25、2.5、5、10 μM
孵育时间： 72 和 96 小时
实验结果： 在 72 和 96 小时，CNE-1、CNE-2 和 HONE-1 细胞系的 IC50 值为 3-5 μM，而 SUNE-1 细胞系的 IC50 值小于 1 μM。

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细胞周期分析[3]
细胞类型： CNE-2 和 HONE-1 细胞
测试浓度： 0.625、1.25、2.5、5、10 μM
孵育时间： 24 或 48 小时
实验结果： 以剂量依赖的方式诱导细胞周期停滞于 G1 期。

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蛋白质印迹分析[3]
细胞类型： SUNE-1 和 CNE-2 细胞
测试浓度： 0.625、1.25、2.5、5、10 μM
孵育时间： 24 小时
实验结果： 抑制 AKT 下游靶点的磷酸化。细胞自噬检测[3]
细胞类型： CNE-2 细胞
测试浓度： 0.625、1.25、2.5、5、10 μM
孵育时间： 24 小时
实验结果： 诱导自噬。
MK-2206 的细胞检测采用多种癌细胞系进行，包括乳腺癌、前列腺癌和白血病细胞系。将细胞用不同浓度（通常为纳摩尔至微摩尔级）的 MK-2206 处理特定时间，并评估以下终点：Akt 在 Ser473 和 Thr308 位点的磷酸化（通过蛋白质印迹法检测）、下游信号通路（例如 GSK3β、FOXO、mTOR）、细胞活力（通过 MTT 或 CellTiter-Glo 检测）、细胞凋亡（通过膜联蛋白 V 染色或 caspase 激活检测）以及细胞周期分布（通过流式细胞术检测）。通过测量细胞生长抑制的 IC50 值来评估该化合物的抗增殖作用。使用 Akt 敲低或过表达的细胞可以验证所观察到的作用的特异性。

动物/疾病模型： 4～6周龄雄性BALB/c裸鼠，携带CNE-2异种移植瘤[3]
剂量： 240 mg/kg 和 480 mg/kg
给药途径： 灌胃（po）；240 mg/kg，每周三次；480 mg/kg，每周一次；持续两周
实验结果： 两种剂量均能抑制裸鼠体内人源CNE-2异种移植瘤的生长。
MK-2206的体内研究是在多种癌症的小鼠异种移植瘤模型中进行的，包括鼻咽癌、乳腺癌和其他类型的肿瘤。该化合物通常以10～200 mg/kg的剂量口服给药，每日一次或按其他方案给药。药效学终点包括肿瘤组织中Akt磷酸化水平的测定（通过Western blot或免疫组化法）、下游信号通路评估以及肿瘤生长抑制评价。药代动力学参数，例如血浆浓度-时间曲线、半衰期、清除率和生物利用度，均通过连续血样采集测定。该化合物的口服生物利用度支持其用于口服给药方案。

MK-2206 具有良好的口服生物利用度，其药代动力学特性支持其在临床前和临床研究中的应用。该化合物通常在临床前和临床研究中均采用口服给药。详细的药代动力学参数，包括半衰期、Cmax、AUC 和生物利用度，可从已发表的研究中获取。该化合物的分子量为 443.94，处于口服小分子药物的典型分子量范围内。储存建议包括适当的温度控制以维持其稳定性。该化合物可溶于 DMSO 和其他有机溶剂，适用于体外和体内制剂。

在临床前毒理学研究中，MK-2206 在治疗剂量下表现出可接受的安全性。临床前研究中观察到的常见副作用包括与 Akt 抑制相关的副作用，例如对葡萄糖代谢的影响。在临床试验中，MK-2206 已在多种癌症患者中进行评估，该化合物显示出可控的毒性。然而，现有摘要中并未详细列出具体的毒性数据。该化合物拟用于研究用途，并已在临床试验中进行评估。

[1]. Abstract #DDT01-1: MK-2206: A potent oral allosteric AKT inhibitor. 2009.

[2]. Phase II trial of AKT inhibitor MK-2206 in patients with advanced breast cancer who have tumors with PIK3CA or AKT mutations, and/or PTEN loss/PTEN mutation. Breast Cancer Res. 2019 Jul 5;21(1):78.

[3]. Effects of an oral allosteric AKT inhibitor (MK-2206) on human nasopharyngeal cancer in vitro and in vivo. Drug Des Devel Ther. 2014 Oct 10;8:1827-37.

[4]. Akt inhibitor MK-2206 promotes anti-tumor activity and cell death by modulation of AIF and Ezrin in colorectal cancer. BMC Cancer. 2014 Mar 1;14:145.

PI3K通路在调控癌细胞增殖、生长、存活和代谢中发挥着至关重要的作用。丝氨酸/苏氨酸激酶Akt是PI3K通路的核心节点，在多种人类实体瘤中频繁激活，使其成为极具吸引力的治疗靶点。Akt抑制剂靶向多种重要生长因子及其酪氨酸激酶受体（如HER2、IGF1R、EGFR和c-MET）下游的信号通路，因此有望用于多种人类肿瘤的治疗。我们利用常规化合物筛选方法，鉴定出能够同时阻断Akt酶激活和激酶活性的抑制剂。对这些先导化合物进行构效关系（SAR）药物化学研究，获得了高效且选择性强的Akt化合物，其中包括MK-2206。MK-2206可抑制Akt同工酶1、2和3，其体外IC50值分别为8、12和65 nM。 MK-2206 是一种变构抑制剂，其活性依赖于 Pleckstrin 同源结构域的存在，因此对 Akt 具有高度选择性。在 1956 μM 的浓度下，它对超过 250 种蛋白激酶均无抑制活性。在多种癌细胞系中，MK-2206 可抑制 Akt1 激酶活性（IC50 为 20 nM），但其对 Akt2 和 Akt3 活性的抑制效力低 2 至 6 倍。MK-2206 可抑制 Akt T308 和 S473 的自身磷酸化，并阻止 Akt 介导的下游信号分子（包括 TSC2、PRAS40 和核糖体 S6 蛋白）的磷酸化。 MK-2206 对多种携带以下一种或多种基因缺陷的癌细胞系表现出强效的抗增殖活性：1) 基因扩增导致上游受体酪氨酸激酶（例如 HER2）的组成型激活；2) PI3KCA 激活突变；3) 肿瘤抑制因子 PTEN 失活；以及 4) Akt 基因自身的扩增和突变。此外，Ras 通路的激活通常预示着对 MK-2206 无反应。[1] MK-2206 目前正在进行两项 I 期临床试验，一项针对健康志愿者 (HV)，另一项针对癌症患者。在第一项人体健康志愿者试验中，24 名健康男性受试者参与了这项 I 期随机、双盲、安慰剂对照、序贯、多周期、递增单次口服剂量研究。八名受试者被随机分为三组（A组、B组和C组）。在每个治疗周期中，每组的六名受试者在隔夜空腹后接受MK-2206治疗，另两名受试者接受安慰剂治疗。志愿者接受单次0.25至100 mg的剂量，并在给药前和预设的给药后时间点采集血样，用于药代动力学和药效学（全血磷酸化Akt抑制）分析。结果显示，单次剂量高达100 mg的MK-2206总体耐受性良好。未报告严重临床或实验室不良事件。最常见的不良事件为头痛、普通感冒和腹泻。一名受试者因视力模糊的临床不良事件而退出研究，但该症状已缓解。实验室安全性检查和心电图评估均未发现具有临床意义的改变。所有受试者均未出现具有临床意义的高血糖或高胰岛素血症。初步药代动力学结果显示，口服MK-2206吸收迅速，达峰时间（Tmax）中位数为6至8小时，半衰期中位数为55至78小时。在2 mg至100 mg的剂量范围内，AUC_0-t和C_max与剂量呈正比。初步药效学结果显示，单次服用40 mg、80 mg和100 mg MK-2206后，全血中Akt抑制作用强于安慰剂。80 mg和100 mg剂量组在给药后6小时达到Akt抑制峰值，平均血浆浓度>65 nM。Akt抑制作用在2至24小时内即可观察到。总之，健康受试者单次服用MK-2206后耐受性良好。 MK-2206 的药代动力学特征呈剂量比例关系，且有明确的证据表明其可抑制 Akt。MK-2206 的临床开发正在进行中，主要针对存在 PI3K 通路激活的肿瘤。[1] 丝氨酸/苏氨酸激酶 Akt 是磷脂酰肌醇-3-激酶下游的关键信号节点，在促进细胞存活和抑制细胞凋亡方面发挥重要作用。Akt 抑制剂可能对 Akt 信号增强且对细胞毒性药物或受体酪氨酸激酶抑制剂敏感性降低的癌症特别有效。我们评估了一种新型变构 Akt 抑制剂 MK-2206 与几种抗癌药物联合使用的疗效。体外实验表明，MK-2206 与分子靶向药物（如厄洛替尼（一种表皮生长因子受体抑制剂）或拉帕替尼（一种双重表皮生长因子受体/人表皮生长因子受体2抑制剂））联合使用时，可协同抑制人癌细胞系的增殖。MK-2206 对厄洛替尼不敏感细胞中 Akt 磷酸化的互补抑制是其协同机制之一，即使在厄洛替尼不敏感的细胞系中也观察到了这种协同效应。在肺癌NCI-H460或卵巢癌A2780细胞中，MK-2206与拓扑异构酶抑制剂（阿霉素、喜树碱）、抗代谢药物（吉西他滨、5-氟尿嘧啶）、抗微管药物（多西他赛）和DNA交联剂（卡铂）等细胞毒性药物联合使用时，也显示出协同作用。与多西他赛的协同作用取决于给药顺序；在多西他赛给药前给予MK-2206无效。MK-2206抑制卡铂和吉西他滨诱导的Akt磷酸化。体内实验表明，MK-2206与这些药物联合使用时，其抑癌活性显著强于单独使用。这些发现提示，Akt抑制可能增强现有抗癌疗法的疗效。因此，MK-2206有望成为接受细胞毒性药物和/或分子靶向治疗的癌症患者的有效治疗药物。[2]

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抑制生存激酶Akt可诱导细胞凋亡，并已被发现能激活自噬，这可能会干扰肿瘤攻击。在本研究中，我们探讨了MK-2206（首个进入临床开发的小分子Akt变构抑制剂）通过调节Akt来调控肿瘤细胞凋亡和自噬的机制。在人胶质瘤细胞中，MK-2206或siRNA介导的Akt抑制显著激活了自噬，而沉默真核延伸因子-2 (eEF-2)激酶（一种蛋白质合成调节因子）则减弱了这种自噬反应。eEF-2沉默抑制了MK-2206诱导的自噬，同时促进了细胞凋亡。同样，siRNA介导的eEF-2激酶抑制增强了MK-2206对胶质瘤细胞的疗效。总之，这些结果表明，通过抑制eEF-2激酶来减弱自噬并增强细胞凋亡可以调节胶质瘤细胞对Akt抑制剂的敏感性。我们的研究结果提示，靶向eEF-2激酶可能增强MK-2206等Akt抑制剂的抗肿瘤疗效。[3] MK-2206 HCl是一种强效、选择性高且口服生物利用度高的Akt（Akt1、Akt2、Akt3）变构抑制剂，具有潜在的抗癌活性。它已在临床前和临床研究中用于治疗多种癌症，包括乳腺癌、鼻咽癌和其他肿瘤类型。该化合物的变构机制使其具有高选择性，并且其作用方式与ATP竞争性激酶抑制剂截然不同。 MK-2206 已在临床试验中进行过评估，但目前尚未获得 FDA 批准用于任何适应症。该化合物可从多家化学品供应商处获得，用于研究用途。

C₂₅H₂₂CLN₅O

443.93

443.151

C, 67.64; H, 5.00; Cl, 7.99; N, 15.78; O, 3.60

1032349-77-1

MK-2206 dihydrochloride;1032350-13-2;MK-2206 free base;1032349-93-1

67254077

Solid powder

6.157

89.33

3

4

3

32

760

0

O=C1NN=C2C3C=C(C4C=CC=CC=4)C(C4C=CC(=CC=4)C4(CCC4)N)=NC=3C=CN21

LFYOZCBFOSSLNJ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H21N5O.ClH/c26-25(12-4-13-25)18-9-7-17(8-10-18)22-19(16-5-2-1-3-6-16)15-20-21(27-22)11-14-30-23(20)28-29-24(30)31;/h1-3,5-11,14-15H,4,12-13,26H2,(H,29,31);1H

8-(4-(1-aminocyclobutyl)phenyl)-9-phenyl-[1,2,4]triazolo[3,4-f][1,6]naphthyridin-3(2H)-one hydrochloride

MK2206; MK-2206 hydrochloride; 1032349-77-1; MK-2206 Monohydrochloride; UNII-4HA45S22ZZ; 4HA45S22ZZ; 1,2,4-Triazolo(3,4-f)(1,6)naphthyridin-3(2H)-one, 8-(4-(1-aminocyclobutyl)phenyl)-9-phenyl-, hydrochloride (1:1); 8-[4-(1-aminocyclobutyl)phenyl]-9-phenyl-2H-[1,2,4]triazolo[3,4-f][1,6]naphthyridin-3-one;hydrochloride; MK2206; MK 2206

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Typically soluble in DMSO (e.g. > 10 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。