| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
MKC9989 is a potent and selective inhibitor of the endoribonuclease (RNase) activity of IRE1α, an endoplasmic reticulum (ER) stress transducer.
Murine IRE1α RNase: IC₅₀ = 0.23 µM (range: 0.11 - 0.35 µM, n=6). Human IRE1α RNase: IC₅₀ = 0.52 µM (range: 0.26 - 0.78 µM, n=4). Yeast IRE1 RNase: IC₅₀ = 44 µM (n=6). [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
MKC9989 在 10 μM 剂量下完全停止基础和毒胡萝卜素诱导的 XBP1 mRNA 剪接。即使在接受毒胡萝卜素预处理的细胞中也能看到这些结果，表明 MKC9989 能够完全逆转 UPR 开始后 XPB1 剪接的发生率。当MKC9989和毒胡萝卜素在平行研究中一起施用时，RIDD靶标CD59 mRNA大大稳定，并且与单独使用毒胡萝卜素处理相比，非应激细胞中CD59 mRNA的水平有所升高。这一发现可能表明基线 RIDD 活性受到抑制。毒胡萝卜素处理两小时后，MKC9989 稍微稳定了 CD59 水平，与其对 XBP1 剪接的影响相反。最后，MKC9989 体外抗 RNA 裂解的功效与其抗 XBP1 mRNA 剪接的功效相似 (EC50=0.33 μM) [1]。
MKC9989 在体外强效抑制小鼠和人IRE1α的RNase活性，IC₅₀值在亚微摩尔水平，但对酵母IRE1的效力低得多。 相比之下，MKC9989 在浓度高达10 µM时对IRE1α的自激酶活性仅有微弱或可忽略的抑制作用，表明其对RNase结构域的高选择性。 使用微量热泳动（MST）进行的直接结合测量确定 MKC9989 与小鼠IRE1α的解离常数（K_d）为0.84 µM，证实了其高亲和力。 对IRE1α RNase活性位点残基（如Lys907Ala, Phe889Ala, Tyr892Ala, Asn906Leu, His910Ala）的突变分析显著削弱或消除了RNase活性和 MKC9989 的结合，验证了通过X射线晶体学确定的结合位点。 [1] |
| 酶活实验 |
IRE1α RNase活性实验（荧光法）： 该实验使用一个单发夹RNA底物（序列：5′-CAU GUC CGC AGC GCA UG-3′），其5′端标记有Alexa Fluor 647荧光基团，3′端标记有黑洞淬灭剂。反应体系包含10 nM IRE1α蛋白和100 nM RNA底物，缓冲液成分为50 mM Tris pH 7.0, 0.5 mM MgCl₂, 10 mM KCl, 0.025% Tween-20, 0.063 mg/ml tRNA, 和 2 mM DTT。化合物在添加底物前与IRE1α在室温预孵育1小时。RNA切割通过使用酶标仪每两分钟监测一次荧光强度（激发651 nm，发射672 nm）的增加来进行实时监测。
IRE1α RNase活性实验（凝胶法）： 该实验使用一个荧光素标记的单发夹RNA底物（相同序列），浓度为45 nM。反应在含有添加BSA（0.09 mg/ml）的类似缓冲液中进行。IRE1α与抑制剂在室温预孵育1小时后，加入RNA底物，反应在37°C下进行10-45分钟。反应用甲酰胺/EDTA上样缓冲液淬灭，切割产物使用20%尿素-TBE PAGE分离，并通过荧光成像仪显像和分析。 IRE1α激酶活性实验（自磷酸化）： 对于反式自磷酸化实验，将150 nM小鼠IRE1α与作为磷酸受体底物的15 µM激酶失活酵母IRE1在抑制剂存在下于室温孵育1小时。反应通过添加含有[γ-³²P]ATP的ATP混合物启动。反应用SDS-PAGE上样缓冲液终止，通过电泳分离，磷酸化信号通过磷屏成像检测和定量。 [1] |
| 细胞实验 |
人RPMI 8226浆细胞瘤细胞中XBP1剪接分析： 细胞按指定时间进程用1 µM毒胡萝卜素（Tg，一种内质网应激诱导剂）和/或10 µM MKC9989 处理。在某些实验中，MKC9989 在Tg处理后2小时加入。收集细胞并提取总RNA。通过RT-PCR结合PAGE分离和定量分析XBP1 mRNA的剪接状态（未剪接的XBP1u和剪接的XBP1s）。MKC9989（10 µM）完全抑制了基础和Tg诱导的XBP1剪接，即使在Tg处理后加入也有效。
CD59 mRNA稳定性分析： 使用来自XBP1剪接实验的相同RNA样本，测量了已知的IRE1依赖性降解（RIDD）靶标CD59的mRNA水平。与单独Tg处理相比，MKC9989 与Tg共同给药显著稳定了CD59 mRNA水平，并在非应激细胞中适度增加了CD59水平，表明其抑制了基础RIDD活性。当在Tg处理后2小时给药时，MKC9989 对CD59 mRNA显示出中等的稳定作用。 [1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
MKC9989 属于羟基芳基醛 (HAA) 类 IRE1 核糖核酸酶抑制剂。其化学结构为香豆素骨架，并具有特定的取代基：8 位为甲酰基（醛基），7 位为羟基，6 位为甲氧基，3 位为柔性聚醚链，4 位为甲基。
小鼠 IRE1α 与 MKC9989 的 X 射线共晶结构揭示了其在核糖核酸酶活性位点浅口袋内的结合模式。关键相互作用包括：1) 其醛基与 Lys907 侧链胺基之间形成的可逆席夫碱；2) 其羟基与 Tyr892 之间形成的氢键；3) 与 Phe889 和 His910 之间的 π-π 堆积相互作用。 4）其香豆素核心和聚醚侧链与 Glu913、Pro915 和 Leu914 等残基之间形成额外的氢键和范德华力。 MKC9989 作为一种非竞争性抑制剂，对 RNA 底物发挥作用，利用四个保守催化残基中的三个（Tyr892、Asn906 和 His910）进行结合。 它抑制 IRE1α 的两个主要下游通路：XBP1 mRNA 剪接和 RIDD（受调控的 IRE1 依赖性衰变）。 该研究表明，包括 MKC9989 在内的 HAA 类药物可能具有治疗潜力，因为它们具有选择性，并且靶点难以产生耐药突变而不损害其必需的催化活性。[1] |
| 分子式 |
C17H20O7
|
|---|---|
| 分子量 |
336.336505889893
|
| 精确质量 |
336.12
|
| CAS号 |
1338934-20-5
|
| PubChem CID |
89542001
|
| 外观&性状 |
Light yellow to yellow solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
512.2±50.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
184.5±23.6 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.4 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.561
|
| LogP |
2.18
|
| tPSA |
91.3
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
24
|
| 分子复杂度/Complexity |
487
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
QSVDQIXSUDHAOF-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C17H20O7/c1-10-11(4-5-23-7-6-21-2)17(20)24-16-12(10)8-14(22-3)15(19)13(16)9-18/h8-9,19H,4-7H2,1-3H3
|
| 化学名 |
7-hydroxy-6-methoxy-3-[2-(2-methoxyethoxy)ethyl]-4-methyl-2-oxochromene-8-carbaldehyde
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ≥ 50 mg/mL (~148.66 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.43 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.9732 mL | 14.8659 mL | 29.7318 mL | |
| 5 mM | 0.5946 mL | 2.9732 mL | 5.9464 mL | |
| 10 mM | 0.2973 mL | 1.4866 mL | 2.9732 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
