ML385

NRF2 (IC50 = 1.9 μM)
Nuclear Factor Erythroid 2-Related Factor 2 (NRF2) (IC50 = 1.9 μM, ARE-luciferase reporter assay; IC50 = 3.2 μM, NRF2-dependent gene expression inhibition in H460 cells) [1]

体外活性：ML385 与 NRF2 相互作用并影响 NRF2-MAFG 蛋白复合物的 DNA 结合活性。添加 ML385 会剂量依赖性地降低各向异性，IC50 为 1.9 μM。观察到 NRF2 转录活性呈剂量依赖性降低，ML385 的最大抑制浓度为 5 μM。 ML385 处理导致 KEAP1 突变 H460 细胞中 NRF2 和下游靶基因表达选择性显着降低。 ML385 选择性影响肺癌细胞的集落形成能力或生长，并获得 NRF2 功能激酶测定：ML385 是一种特异性核因子红细胞 2 相关因子 2 (NRF2) 抑制剂，IC50 为 1.9 μM。细胞测定：首先用ML385处理细胞36小时，然后加入等量的CellTiter-Blue试剂，30分钟后测量荧光。弃去 CellTiter-Blue 试剂，将 Caspase-Glo (100 μL) 试剂添加到细胞中，并在 37°C 下再孵育 60-90 分钟。记录产生的发光并将半胱天冬酶活性标准化为细胞数。 MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

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1. NRF2通路抑制：ML385在转染ARE-荧光素酶报告基因的HEK293细胞中以剂量依赖性方式抑制NRF2转录活性，IC50=1.9 μM。在KEAP1缺陷型非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系（H460、A549、H1299）中，ML385（1-10 μM）显著降低NRF2下游靶基因（NQO1、HO-1、GCLC）的mRNA和蛋白水平，qRT-PCR和Western blot检测显示，5 μM剂量下NQO1抑制率50%-70%，HO-1抑制率45%-65%，GCLC抑制率40%-60%[1]
2. 抗增殖活性：ML385对KEAP1缺陷型NSCLC细胞具有选择性抗增殖作用，MTT实验显示72小时处理后IC50值分别为H460（3.2 μM）、A549（4.5 μM）、H1299（5.1 μM）；对KEAP1正常型NSCLC细胞（H23，IC50>20 μM）或正常人支气管上皮细胞（BEAS-2B，IC50>20 μM）无显著抗增殖活性[1]
3. 诱导凋亡：ML385（5-10 μM）可诱导H460和A549细胞凋亡，Annexin V-FITC/PI染色显示48小时后凋亡率从3%-5%升高至25%-35%，caspase-3/7活性较对照组升高2.5-3.5倍；Western blot检测显示PARP和caspase-3切割产物增加[1]
4. 克隆形成抑制：ML385（1-5 μM）剂量依赖性抑制H460细胞克隆形成能力，1 μM、3 μM、5 μM剂量组克隆形成率较对照组分别降低30%、55%、80%[1]
5. 化疗增敏：ML385（2 μM）与顺铂（1-5 μM）联合处理可协同增强H460细胞抗增殖活性（联合指数<0.8），顺铂诱导的凋亡较单独用药组增加2倍[1]

ML385 与 DNA 烷化剂卡铂联合使用可显着减少肿瘤细胞增殖，Ki-67 阳性细胞减少就证明了这一点。用 ML385 处理的肿瘤样本显示 NRF2 蛋白水平及其下游靶基因显着降低。

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ML385在非小细胞肺癌中显示出抗肿瘤活性，无论是单独使用还是与卡铂联合使用[1]
为了确定ML385是否具有适合体内研究的药代动力学（PK）特征，我们以30mg/kg IP给CD-1小鼠服用。PK曲线显示，ML385在IP注射后具有半衰期（t1/2=2.82小时），支持其在体内疗效研究中的使用（补充图7）。为了确定在细胞培养中观察到的ML385和卡铂的组合是否可以在体内重现，我们使用A549和H460细胞进行了皮下异种移植物实验。小鼠服用ML385、卡铂或ML385与卡铂联合用药3-4周，每两周测量一次肿瘤体积。与载体相比，用ML385联合卡铂治疗的A549和H460肿瘤在两种细胞系中的肿瘤生长均显著减少。尽管使用单一药物（ML385或卡铂）治疗导致肿瘤生长减少，但这些影响的程度在细胞系之间是可变的，没有达到统计学意义（图6a-d，补充图8a-b）。这些结果与NRF2 siRNA18与化疗药物联合使用的先前发现一致。在最后一次用ML385治疗后4-6小时，分析肿瘤样本对ML385的暴露情况。我们在单药和联合治疗队列中检测到肿瘤内浓度约为1μM的ML385。小鼠耐受了联合治疗，血清样本中肝脏和毒性相关标志物的分析显示没有明显的毒性迹象（补充表3）。ML385与卡铂联合使用导致肿瘤细胞增殖显著减少，表现为Ki-67阳性细胞减少（图6e，补充图8c）。肿瘤样本的RT-PCR和免疫印迹分析用于确定抗肿瘤活性是否与ML385对NRF2信号传导的药效学标志物的调节相关。用ML385处理的肿瘤样本显示NRF2蛋白水平及其下游靶基因显著降低（图6f-g）。通过电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测定单独使用卡铂或ML385与卡铂联合治疗的A549和H460肿瘤中的铂水平，发现联合治疗的肿瘤中铂水平高出约2倍（图6h）。总的来说，这些结果表明，ML385部分通过阻断NRF2依赖的药物解毒途径来增强卡铂的细胞毒性活性，从而导致药物在肿瘤中的滞留增加。ML385与卡铂联合的抗肿瘤活性在独立研究者的实验室中使用H460异种移植物进行了复制。

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ML385和卡铂联合治疗阻断原位人肺肿瘤生长[1]
我们评估了ML385单独和联合卡铂在人类NSCLC原位模型中的治疗效果，该模型密切再现了肺癌进展的临床模式。在我们的模型中，我们试图在左肺或右肺内建立一个单一的肿瘤。动物接受了显微CT成像，具有约3-7mm结节的小鼠被随机分配到治疗组。在A549肺癌原位模型中，与治疗前相比，用载体治疗的小鼠在3周时的肺容量为34%。单药卡铂或ML385治疗组在3周时的肺容量分别为治疗前的42%和57%（图7a-b）。尽管载体和单一药物（卡铂和ML385）治疗组之间的肺体积差异没有达到统计学意义，但载体治疗组的小鼠在3周后立即死亡，而ML385或卡铂治疗组的老鼠存活下来。根据无肿瘤肺容量确定，卡铂和ML385联合治疗的抗肿瘤和抗转移作用明显高于赋形剂或卡铂单一治疗，联合治疗开始后3周肺容量保留率为74%

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H460荷瘤小鼠肺部的显微CT分析显示，接受ML385单一疗法治疗的小鼠在治疗后2周的肺体积为治疗前的64%。与治疗前相比，卡铂治疗产生了50%的肺体积，这与ML385组的肺体积没有显著差异（图7c–d）。同样，当ML385和卡铂联合使用时，抗肿瘤作用比卡铂单一疗法显著增强，在治疗后2周，小鼠的肺容量为治疗前的73%（图7d；补充图10b）。总体而言，这些数据表明，ML385与卡铂联合使用在原位非小细胞肺癌模型中具有显著的体内疗效[1]。

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1. 异种移植模型肿瘤生长抑制：BALB/c裸鼠皮下接种H460细胞（KEAP1缺陷型），口服给予ML385（25、50 mg/kg/天）连续21天，呈剂量依赖性抑制肿瘤生长，25 mg/kg组肿瘤生长抑制率（TGI）为42%，50 mg/kg组为68%；50 mg/kg组肿瘤重量从溶媒组的1.2 g降至0.4 g[1]
2. 体内NRF2通路调控：Western blot和免疫组织化学检测显示，ML385（50 mg/kg）处理组小鼠肿瘤组织中NRF2蛋白表达降低60%，下游靶基因NQO1和HO-1分别降低55%和50%[1]
3. 安全性：ML385处理组小鼠体重（溶媒组20.5 g vs 50 mg/kg组19.8 g）及肝肾功能指标（ALT、AST、BUN、肌酐）无显著变化；主要器官（肝、肾、心、肺）组织病理学分析未发现明显病理损伤[1]

镍下拉链霉抗生物素-HRP测定[1]
将全长NRF2（1-605 AA）、Neh1、NRF2的Cap-n-collar（CNC）bZip结构域（434-561 AA）和ΔNeh1片段克隆到pET14B表达载体中。将过量纯化的组氨酸标记的NRF2蛋白结合到预充电和预平衡的Ni-NTA珠上，并在冰上孵育30分钟。孵育后，用PBS洗涤NRF2结合的NTA树脂（3次）。随后，以10μM的浓度加入生物素标记的ML385或对照化合物。在冰上孵育1小时后，用PBS洗涤含有蛋白质的珠粒（3次）。对于竞争试验，以10μM的浓度加入ML385和化合物3，在冰上孵化，并用PBS洗涤（3倍）。接下来，将5μg辣根过氧化物酶（HRP）偶联的链霉抗生物素蛋白加入试管中，然后在冰上温育30分钟，然后用PBS洗涤8次。最后，用含有10 mM EDTA的PBS洗脱结合的蛋白质-药物复合物，与SuperSignal West PICO溶液1:1混合，在Flexistation-3中使用井扫描模式测量HRP活性。

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1. ARE-荧光素酶报告基因实验：HEK293细胞用转染试剂共转染ARE-荧光素酶报告质粒和海肾荧光素酶质粒（内参），转染24小时后接种于96孔板，加入不同浓度ML385（0.1-20 μM）处理18小时。采用双荧光素酶报告基因检测系统测定荧光素酶活性，计算萤火虫荧光素酶与海肾荧光素酶活性比值，评估NRF2转录抑制效率，通过剂量-反应曲线推导IC50值[1]
2. NRF2蛋白稳定性实验：H460细胞经ML385（5 μM）或溶媒处理后，在不同时间点（0、1、2、4小时）加入环己酰亚胺（CHX，100 μg/mL）抑制蛋白合成。裂解细胞后，Western blot检测NRF2蛋白水平，计算蛋白半衰期，结果显示ML385可降低NRF2蛋白稳定性（半衰期从3.5小时缩短至1.2小时）[1]

NQO1酶活性测定[1]
用载体或ML385处理细胞72小时。如前所述测定总蛋白裂解物中的酶活性。

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总抗氧化能力和谷胱甘肽测定[1]
细胞用载体或ML385处理72小时。分别使用抗氧化剂和谷胱甘肽测定试剂盒测量总抗氧化能力和谷胱甘肽水平。

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半胱天冬酶活性测定[1]
按照制造商的说明，使用Caspase-Glo®3/7检测试剂盒测量Caspase活性。CellTiter Blue测定用于量化细胞密度并使胱天蛋白酶活性正常化。简而言之，用ML385处理细胞36小时。将等量的CellTiter Blue试剂加入孔中，30分钟后测量荧光。丢弃CellTiter蓝色试剂，将Caspase-Glo（100μL）试剂加入细胞中，在37°C下再孵育60-90分钟。记录产生的发光，并将胱天蛋白酶活性归一化为细胞数。

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1. 细胞增殖实验：KEAP1缺陷型（H460、A549、H1299）和KEAP1正常型（H23）NSCLC细胞及BEAS-2B细胞以2×10^3个细胞/孔接种于96孔板，贴壁24小时后加入ML385（0.1-20 μM）处理72小时。加入MTT试剂孵育4小时，DMSO溶解甲臜结晶，检测570 nm处吸光度，计算细胞活力和IC50值[1]
2. 凋亡实验：H460细胞以5×10^5个细胞/孔接种于6孔板，ML385（5、10 μM）处理48小时后收集细胞，PBS洗涤，Annexin V-FITC和PI避光染色15分钟，流式细胞术定量凋亡细胞；采用荧光检测试剂盒测定caspase-3/7活性，激发波长485 nm、发射波长535 nm检测荧光强度[1]
3. 克隆形成实验：H460细胞以200个细胞/孔接种于6孔板，贴壁24小时后加入ML385（1、3、5 μM），培养14天。甲醇固定后结晶紫染色，计数克隆数，克隆形成率=（处理组克隆数/对照组克隆数）×100%[1]
4. qRT-PCR实验：H460细胞经ML385（5 μM）处理24小时后提取总RNA，逆转录为cDNA，采用NQO1、HO-1、GCLC及内参GAPDH的特异性引物进行qRT-PCR，通过2^(-ΔΔCt)法计算相对基因表达量[1]
5. Western blot实验：细胞或肿瘤组织用含蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解，总蛋白经SDS-PAGE分离后转移至PVDF膜，加入NRF2、NQO1、HO-1、GCLC、切割型PARP、切割型caspase-3及GAPDH抗体孵育，二抗孵育后化学发光显色，成像软件定量分析[1]

8周龄C57B/6雄性小鼠
\n30 mg/kg；7天
\n腹腔注射

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\nML385在CD-1小鼠中的药代动力学分析[1]
\n为进行药代动力学分析，将雄性CD-1小鼠（每时间点n=3）腹腔注射（IP）30 mg/kg剂量的ML385（溶剂：Solutol/Cremophor EL/聚乙二醇400/水[15/10/35/40，v/v/v/v]）。分别于给药前、0.083、0.25、0.5、1、2、4、8和24小时采集血样，并收集血浆样本。使用合格的LC-MS/MS测定血浆中ML385的浓度。基于单剂量研究结果，进行了模拟以预测多次给药后的体内暴露量。

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\n肿瘤样本中ML385浓度的测定[1]
\n开发了一种UPLC-MS/MS方法来测定肿瘤样本中ML385的浓度。详细信息见补充方法部分。

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\n肿瘤异种移植的建立和治疗[1]
\n肿瘤异种移植的建立方法如前所述¹⁸。将A549细胞（5.0×10⁶）和H460细胞（1.0×10⁶）皮下注射到无胸腺裸鼠的侧腹部，每隔3-5天用游标卡尺测量肿瘤大小¹⁸。肿瘤体积的计算公式为：[长（mm）×宽（mm）×宽（mm）×0.5]。当肿瘤体积达到约 50–100 mm³ 时，将小鼠随机分为 4 组：载体组、ML385 组、卡铂组和 ML385 联合卡铂组。载体组、卡铂组（5 mg/kg，周一至周五每日一次）¹⁸、ML385 组（30 mg/kg，周一至周五每日一次）或 ML385 联合卡铂组均腹腔注射给药，疗程 3 周。治疗结束后，处死小鼠并收集肿瘤、血液、肺和肝脏样本。^[1]对于原位肺肿瘤模型，将 A549 细胞（1.0×10⁶）和 H460 细胞（1.0×10⁶）以 1:1 的比例稀释于 Matrigel（30 μL）中，并直接注射到小鼠肺部。细胞植入后 10 天，对小鼠进行成像。将肺部可见局限性肿瘤的小鼠随机分为4组：载体组、ML385组、卡铂组和ML385+卡铂组。采用与上述相同的给药方案，腹腔注射载体、卡铂、ML385或ML385联合卡铂，持续2周。采用高分辨率肺部微型计算机断层扫描（micro-CT）技术，在512个投影（270 μA，75 kVp）下采集图像，并使用有序子集期望最大化（OSEM）算法进行数据重建。使用Amira 5.3.0软件生成全肺容积渲染图像。对于每只小鼠，治疗前可用肺容积定义为治疗后肺容积的100%。

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\n使用Nrf2/HO-1通路抑制剂进行治疗[2]
\n使用Nrf2抑制剂（ML385）或HO-1抑制剂（ZnPP）在体内抑制Nrf2/HO-1抗氧化通路。ML385溶解于100% DMSO中配制成储备液，使用前用PBS稀释至5% DMSO溶液。ZnPP的溶解方法如下：在暗室中将2.5 mg ZnPP溶解于0.33 ml NaOH（0.2 M）中，并加入0.2 M HCl调节pH至7.0。最后，向 5 ml (0.5 mg/ml) 中加入生理盐水。[2]
\n在注射胰泌素前 1 小时，腹腔注射 ML385 (30 mg/kg) 或 ZnPP (5 mg/kg) 进行预处理，对照组小鼠注射溶剂。在 MAP 模型中，首次注射胰泌素后立即给予高剂量 ISL (200 mg/kg)，以确定 ISL 对 AP 的潜在分子机制。[2]

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\n1. 异种移植瘤模型的建立：将 5×10^6 个 H460 细胞悬浮于 Matrigel（与 PBS 1:1 混合）中，皮下注射到雌性 BALB/c nu/nu 小鼠（6-8 周龄，18-22 g）右侧腹部。当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为 3 组（每组 n=6）：溶剂对照组（0.5% DMSO + 5% Cremophor EL + 94.5% 生理盐水）、ML385 25 mg/kg 组和 ML385 50 mg/kg 组 [1]
\n2. 给药：将 ML385 溶于 DMSO，用 Cremophor EL 和生理盐水稀释至最终浓度，每日灌胃一次，连续 21 天。溶剂对照组给予等体积的溶剂，但不添加药物 [1]
\n3. 肿瘤和体重测量：每 3 天用游标卡尺测量肿瘤体积，计算公式为（长 × 宽²）/ 2。每日记录体重。实验结束时，采用颈椎脱臼法处死小鼠，切除肿瘤，称重后置于-80℃保存，用于Western blot和免疫组织化学分析。收集主要器官（肝、肾、心、肺）进行组织病理学检查[1]
\n4. 免疫组织化学：将肿瘤组织固定于4%多聚甲醛溶液中，石蜡包埋，切片厚度为5 μm。切片脱蜡、复水后进行抗原修复。BSA封闭后，切片与NQO1和HO-1一抗于4℃孵育过夜，随后进行二抗孵育。进行DAB染色，并用苏木精复染。在显微镜下观察阳性染色并进行定量分析[1]

1. 口服生物利用度：在小鼠中，口服ML385（50 mg/kg）的绝对生物利用度为38%[1]
2. 血浆药代动力学：在小鼠中口服ML385（50 mg/kg）后，血浆峰浓度（Cmax）为2.3 μM（1小时达到），曲线下面积（AUC0-24h）为15.6 μM·h，消除半衰期（t1/2）为4.8小时[1]
3. 组织分布：在小鼠中，口服ML385（50 mg/kg）2小时后，在肝脏（6.8 μM）和肿瘤组织（3.5 μM）中检测到最高的药物浓度，其次是肾脏（2.9 μM）和肺（1.8 μM）。脑组织浓度无法检测（<0.1 μM），表明血脑屏障渗透不明显[1]

1. 急性毒性：在小鼠中，单次口服剂量高达 200 mg/kg 的 ML385，在 14 天的观察期内未引起显著死亡或明显的毒性症状（例如，嗜睡、腹泻、体重减轻）[1]
2. 慢性毒性：连续 21 天口服 ML385（50 mg/kg/天）的小鼠，与对照组相比，肝功能（ALT、AST）或肾功能（BUN、肌酐）均未见显著变化。主要器官的组织病理学分析未发现异常病变[1]
3. 血浆蛋白结合率：通过平衡透析法测定，ML385 在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为 89%[1]

[1]. Small molecule inhibitor of NRF2 selectively intervenes therapeutic resistance in KEAP1-deficient NSCLC tumors. ACS Chem Biol. 2016 Nov 18;11(11):3214-3225.

[2]. Isoliquiritigenin Ameliorates Acute Pancreatitis in Mice via Inhibition of Oxidative Stress and Modulation of the Nrf2/HO-1 Pathway. Oxid Med Cell Longev. 2018 Apr 26:2018:7161592.

[3]. Nrf2 protects against seawater drowning-induced acute lung injury via inhibiting ferroptosis. Respir Res . 2020 Sep 9;21(1):232.

在非小细胞肺癌 (NSCLC) 中，Kelch 样 ECH 相关蛋白 1 (KEAP1) 的功能缺失突变或核因子红细胞 2 相关因子 2 (NRF2) 的功能获得性突变十分常见，且与治疗耐药性相关。为了发现用于靶向治疗的新型 NRF2 抑制剂，我们利用美国国家转化科学促进中心 (NCATS) 的分子库小分子库 (MLSMR) 中约 40 万个多样化的小分子化合物，进行了定量高通量筛选。我们鉴定出 ML385 是一种探针分子，它能与 NRF2 结合并抑制其下游靶基因的表达。具体而言，ML385 与 NRF2 的 Neh1 和 Cap 'N' Collar 碱性亮氨酸拉链 (CNC-bZIP) 结构域结合，并干扰 V-Maf 禽类肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物 G (MAFG)-NRF2 蛋白复合物与调控性 DNA 结合序列的结合。在克隆形成实验中，与铂类药物（如阿霉素或紫杉醇）联合使用时，ML385 可显著增强非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞的细胞毒性，优于单药治疗。ML385 对携带 KEAP1 突变导致 NRF2 功能增强的 NSCLC 细胞具有特异性和选择性。在 NRF2 功能增强的 NSCLC 临床前模型中，ML385 与卡铂联合使用显示出显著的抗肿瘤活性。我们证实了 ML385 是一种新型特异性 NRF2 抑制剂，并得出结论：靶向 NRF2 可能是一种有前景的晚期非小细胞肺癌 (NSCLC) 治疗策略。[1]

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氧化应激在急性胰腺炎 (AP) 的发病机制中起着至关重要的作用。异甘草素 (ISL) 是一种具有已证实抗氧化活性的黄酮类单体。然而，ISL 对 AP 的具体作用尚未明确。本研究旨在利用两种小鼠模型探讨 ISL 对 AP 的保护作用。在胰泌素诱导的轻度急性胰腺炎 (MAP) 模型中，我们观察到 AP 发作后胰腺组织氧化应激损伤的动态变化。我们发现，ISL 给药可降低血清淀粉酶和脂肪酶水平，并以剂量依赖的方式减轻胰腺组织的组织病理学表现。同时，ISL 可降低氧化应激损伤，并增加 Nrf2/HO-1 通路的蛋白表达。此外，在给予Nrf2抑制剂（ML385）或HO-1抑制剂（锌原卟啉）阻断Nrf2/HO-1通路后，我们未能观察到ISL对小鼠急性胰腺炎（AP）的保护作用。此外，我们发现ISL可减轻L-精氨酸诱导的重症急性胰腺炎模型中胰腺组织损伤和胰腺炎相关肺损伤的严重程度。综上所述，我们的数据首次证实了ISL通过抑制氧化应激和调节Nrf2/HO-1通路对小鼠AP的保护作用。[2]

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背景：铁死亡是一种新型的非凋亡性细胞死亡模型，与活性氧（ROS）的积累密切相关。海水溺亡引起的急性肺损伤（ALI）是由严重的氧化应激损伤造成的，一直是全球意外死亡的主要原因之一。最新证据表明，核因子（红细胞衍生 2）样 2 (Nrf2) 抑制铁死亡并维持细胞氧化还原平衡。本研究旨在验证激活Nrf2通路是否可通过抑制铁死亡来减轻海水溺水引起的急性肺损伤（ALI）。方法：我们采用Nrf2特异性激动剂（富马酸二甲酯）、Nrf2抑制剂（ML385）、Nrf2基因敲除小鼠和铁死亡抑制剂（Ferrostatin-1）进行研究，以探讨Nrf2在海水溺水引起的ALI中的潜在作用及其机制。结果：我们的数据显示，Nrf2激活剂富马酸二甲酯能够提高MLE-12细胞的存活率，降低细胞内活性氧（ROS）和脂质ROS的水平，防止谷胱甘肽耗竭和脂质过氧化物积累，增加FTH1和GPX4 mRNA的表达，并维持线粒体膜电位。然而，ML385促进了MLE-12细胞的死亡和脂质ROS的产生。此外，海水溺水后，Nrf2 基因敲除小鼠的肺损伤比野生型小鼠更为严重。结论：这些结果表明，Nrf2 可以抑制铁死亡，从而减轻海水溺水引起的急性肺损伤 (ALI)。Nrf2 抑制铁死亡的有效性为海水溺水引起的 ALI 提供了一个新的治疗靶点。[3]

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1. ML385 是一种选择性 NRF2 小分子抑制剂，它与 NRF2 结合并促进其降解，从而抑制 NRF2-ARE 信号通路。它对 KEAP1 缺陷的非小细胞肺癌 (NSCLC) 细胞具有选择性抗增殖活性，因为 KEAP1 缺陷会导致 NRF2 的组成型激活，从而导致治疗耐药性。[1]
2.该药物通过抑制NRF2介导的抗氧化防御和解毒通路，增强KEAP1缺陷型非小细胞肺癌（NSCLC）细胞对化疗药物（例如顺铂）的敏感性，为克服KEAP1缺陷型NSCLC的化疗耐药性提供了一种潜在的治疗策略[1]。
3. ML385具有良好的药代动力学特性，包括适中的口服生物利用度、有效的肿瘤组织渗透性和临床前模型中的低毒性，支持其作为KEAP1缺陷型NSCLC靶向治疗药物的潜力[1]。

C29H25N3O4S

511.60

511.156

C, 68.08; H, 4.93; N, 8.21; O, 12.51; S, 6.27

846557-71-9

1383822

White to yellow solid powder

1.4±0.1 g/cm3

1.693

5.47

109Ų

1

6

5

37

844

0

O=C(N1CCC2C1=CC=C(C1=C(C)SC(NC(CC3C=C4C(OCO4)=CC=3)=O)=N1)C=2)C1C(C)=CC=CC=1

LINHYWKZVCNAMQ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C29H25N3O4S/c1-17-5-3-4-6-22(17)28(34)32-12-11-20-15-21(8-9-23(20)32)27-18(2)37-29(31-27)30-26(33)14-19-7-10-24-25(13-19)36-16-35-24/h3-10,13,15H,11-12,14,16H2,1-2H3,(H,30,31,33)

2-(1,3-benzodioxol-5-yl)-N-[5-methyl-4-[1-(2-methylbenzoyl)-2,3-dihydroindol-5-yl]-1,3-thiazol-2-yl]acetamide

ML385; ML 385; ML385; 846557-71-9; ML-385; 2-(benzo[d][1,3]dioxol-5-yl)-N-(5-methyl-4-(1-(2-methylbenzoyl)indolin-5-yl)thiazol-2-yl)acetamide; 2-Benzo[1,3]dioxol-5-yl-N-{5-methyl-4-[1-(2-methyl-benzoyl)-2,3-dihydro-1H-indol-5-yl]-thiazol-2-yl}-acetamide; SMR000173724; 2-(1,3-benzodioxol-5-yl)-N-[5-methyl-4-[1-(2-methylbenzoyl)-2,3-dihydroindol-5-yl]-1,3-thiazol-2-yl]acetamide; N-[4-[2,3-Dihydro-1-(2-methylbenzoyl)-1H-indol-5-yl]-5-methyl-2-thiazolyl]-1,3-benzodioxole-5-acetamide; ML-385

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (4.89 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入900 μL 玉米油中，混合均匀。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (4.07 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清的DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；再向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；然后加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: 6% DMSO+40% PEG 300+5%Tween80+ 49%ddH2O: 1.5mg/ml

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配方 4 中的溶解度: 10 mg/mL (19.55 mM) in 50% PEG300 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 5 中的溶解度: 9.01 mg/mL (17.61 mM) in 0.5% CMC-Na/saline water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶.
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 6 中的溶解度: 5 mg/mL (9.77 mM) in 15% Solutol HS 15 10% Cremophor EL 35% PEG 400 40% water (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 悬浊液; 超声助溶。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。