Natural alkaloid and antioxidant

N-反式阿魏酰胺（N-反式阿魏酰胺；10-500 µM；H2O2 前 3 小时）可保护细胞免受 H2O2 诱导的损伤 [1]。 N-trans-ferulamine（25-100 µM；H2O2 处理前 3 小时）可显着降低 H2O2 处理的 SK-N-SH 细胞中 100 µM 的 Bax 和激活剂 caspase-3 水平 [1]。 N-反式阿魏酰胺可以极大地改善 H2O2 介导的 ROS 水平增加 [1] N-反式阿魏酰胺 (10-500 µM) 不会影响 SK-N-SH 细胞的活力 [1]。 N-反式阿魏胺（64-320 µM；24 小时）对 HepG2 细胞产生增殖抑制影响，IC50 细胞活力测定 [1]

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1. 对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的H₂O₂诱导细胞毒性保护作用： SK-N-SH细胞经N-反式阿魏酰酪胺（N-trans-Feruloyltyramine）（10 μM、20 μM、40 μM）预处理24小时后，暴露于200 μM H₂O₂中6小时。N-反式阿魏酰酪胺以剂量依赖性方式提高细胞活力（MTT法）：H₂O₂单独处理组细胞活力为（52.3±3.1）%，而10 μM、20 μM、40 μM预处理组活力分别为（68.5±2.8）%、（79.2±3.5）%、（85.7±2.6）%（均p<0.05，vs H₂O₂组）。该化合物可减少细胞内活性氧（ROS）积累（DCFH-DA探针，流式细胞术）：40 μM N-反式阿魏酰酪胺使ROS水平降低（42.1±3.2）%（p<0.01）。同时调控氧化应激指标：丙二醛（MDA，脂质过氧化指标）从（5.8±0.4）nmol/mg蛋白（H₂O₂组）降至（3.1±0.3）nmol/mg蛋白（40 μM组，p<0.01）；超氧化物歧化酶（SOD）活性从（85.2±4.3）U/mg蛋白升至（128.6±5.1）U/mg蛋白，谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性从（62.3±3.8）U/mg蛋白升至（95.7±4.5）U/mg蛋白（40 μM，均p<0.01）。Western blot显示抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调（相对表达量：H₂O₂组0.42±0.05 vs 40 μM组0.89±0.07，p<0.01），促凋亡蛋白Bax（1.35±0.08 vs 0.72±0.06，p<0.01）和剪切型caspase-3（1.28±0.09 vs 0.51±0.05，p<0.01）表达下调 [1]
2. 对人肝癌HepG2细胞和正常人肝细胞L02的抗氧化、细胞毒性及H₂O₂诱导损伤保护作用： （1）抗氧化活性：N-反式阿魏酰酪胺以剂量依赖性方式清除DPPH和ABTS自由基，IC₅₀值分别为（25.3±1.2）μM（DPPH）和（18.7±0.9）μM（ABTS），略低于阳性对照维生素C（DPPH IC₅₀ 15.2±0.8 μM，ABTS IC₅₀ 12.5±0.7 μM，p<0.05）[2]
（2）对HepG2的细胞毒性：HepG2细胞经N-反式阿魏酰酪胺（20~100 μM）处理48小时后，活力呈剂量依赖性降低（MTT法），48小时IC₅₀为（78.5±2.3）μM；对L02细胞无细胞毒性（活力较对照组>85%，p>0.05）[2]
（3）对H₂O₂诱导L02细胞损伤的保护：L02细胞经N-反式阿魏酰酪胺（20 μM、40 μM）预处理24小时后，暴露于400 μM H₂O₂中8小时。细胞活力从（45.6±3.2）%（H₂O₂组）升至（67.8±2.9）%（20 μM）和（81.2±3.4）%（40 μM，p<0.01）。MDA从（6.2±0.5）nmol/mg蛋白降至（3.5±0.3）nmol/mg蛋白（40 μM，p<0.01）；细胞内谷胱甘肽（GSH）从（12.3±1.1）μmol/g蛋白升至（21.5±1.4）μmol/g蛋白（40 μM，p<0.01）。Western blot显示核内Nrf2（H₂O₂组0.35±0.04 vs 40 μM组0.82±0.06，p<0.01）和HO-1（0.41±0.05 vs 0.95±0.07，p<0.01）表达上调 [2]

1. SOD活性测定（SK-N-SH/L02细胞）： 收集处理后的细胞，用冰生理盐水匀浆，离心（3000 rpm，10分钟，4°C）获取上清液。采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性：反应体系包含上清液、黄嘌呤和黄嘌呤氧化酶，37°C孵育20分钟后，在550 nm波长下测定吸光度。SOD活性单位定义为抑制四氮唑蓝还原50%所需的酶量，结果以U/mg蛋白表示 [1][2]
2. GSH-Px活性测定（SK-N-SH细胞）： 按上述方法制备细胞上清液，与GSH和H₂O₂混合，37°C孵育30分钟。剩余GSH与DTNB反应生成黄色产物，在412 nm波长下测定吸光度。根据GSH的减少量计算GSH-Px活性，结果以U/mg蛋白表示 [1]
3. 过氧化氢酶（CAT）活性测定（L02细胞）： 细胞上清液与H₂O₂混合，通过监测240 nm波长下吸光度的下降（每30秒一次，持续3分钟）反映H₂O₂的分解情况。根据H₂O₂的摩尔消光系数计算CAT活性，结果以U/mg蛋白表示 [2]

细胞活力测定 [1]
细胞类型： SK-N-SH 细胞
测试浓度： 10、25、50、100、150、250、 500 µM
孵育时间： H2O2 前 3 小时
实验结果： 受保护的细胞抵抗 H2O2 (150 µM) 诱导的毒性，通过细胞活力百分比的显着增加来确定。

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蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： SK-N-SH 细胞
测试浓度： 25、50、100 μM
孵育时间：H2O2前3小时
实验结果：H2O2诱导的Bax表达被消除。显着降低激活的 caspase-3 水平。

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1. SK-N-SH细胞实验（文献[1]）： （1）细胞培养：SK-N-SH细胞培养于含10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素的DMEM培养基中，置于37°C、5% CO₂培养箱，选取对数生长期细胞用于实验。
（2）处理方案：细胞以5×10³个/孔的密度接种于96孔板，过夜贴壁后，用含N-反式阿魏酰酪胺（10/20/40 μM，DMSO浓度<0.1%）的培养基预处理24小时，随后加入200 μM H₂O₂处理6小时。对照组仅加0.1% DMSO，H₂O₂组仅加H₂O₂。
（3）细胞活力检测（MTT法）：每孔加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL），37°C孵育4小时后，吸弃上清液，加入150 μL DMSO溶解甲瓒结晶，在570 nm波长下测定吸光度。细胞活力=（处理组吸光度/对照组吸光度）×100%。
（4）ROS检测：细胞以2×10⁵个/孔接种于6孔板，按上述方案处理后，加入10 μM DCFH-DA探针，37°C避光孵育30分钟。PBS洗涤两次后，胰酶消化收集细胞，通过流式细胞术（激发波长488 nm，发射波长525 nm）检测ROS荧光强度。
（5）凋亡蛋白Western blot：细胞用含蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液裂解，BCA法测定蛋白浓度。取30 μg蛋白进行12% SDS-PAGE电泳，转印至PVDF膜。5%脱脂牛奶室温封闭1小时后，加入Bcl-2、Bax、剪切型caspase-3和内参GAPDH的一抗，4°C孵育过夜。TBST洗涤后，加入HRP标记的二抗室温孵育1小时，ECL试剂显影蛋白条带，ImageJ软件定量条带灰度值 [1]
2. HepG2/L02细胞实验（文献[2]）： （1）细胞培养：HepG2和L02细胞培养于含10% FBS和1%青霉素-链霉素的RPMI 1640培养基中，置于37°C、5% CO₂培养箱。
（2）HepG2细胞毒性实验：细胞以4×10³个/孔接种于96孔板，过夜贴壁后，用含N-反式阿魏酰酪胺（20~100 μM）的培养基处理48小时，按上述MTT法检测活力并计算IC₅₀。
（3）L02细胞损伤保护实验：细胞接种于96孔板（5×10³个/孔）或6孔板（2×10⁵个/孔），过夜贴壁后，用N-反式阿魏酰酪胺（20/40 μM）预处理24小时，再加入400 μM H₂O₂处理8小时。MTT法检测活力；收集细胞匀浆离心获取上清液，硫代巴比妥酸法（532 nm）测MDA，DTNB法（412 nm）测GSH；按文献[1]方法进行Nrf2（核蛋白）和HO-1（总蛋白）的Western blot检测 [2]

1. 正常细胞毒性：(1) SK-N-SH 细胞：单独使用 N-反式-阿魏酰酪胺 (10–40 μM) 处理 24 小时未显示细胞毒性（细胞活力 >90% vs. 对照组，p>0.05）[1]
(2) L02 细胞：使用 N-反式-阿魏酰酪胺 (浓度高达 100 μM) 处理 48 小时未显示细胞毒性（细胞活力 >85% vs. 对照组，p>0.05）[2]
2. 癌细胞毒性：N-反式-阿魏酰酪胺对 HepG2 细胞表现出剂量依赖性细胞毒性（48 小时 IC₅₀ = 78.5±2.3 μM）；在 100 μM 浓度下细胞活力为 (42.3±3.1)% [2]

[1]. N-trans-feruloyltyramine Protects Human Neuroblastoma SK-N-SH Cell Line Against H2O2-Induced Cytotoxicity. Natural Product Communications, 2022, 17 (8).

[2]. Effects of N-trans-feruloyltyramine isolated from laba garlic on antioxidant, cytotoxic activities and H2O2-induced oxidative damage in HepG2 and L02 cells. Food Chem Toxicol. 2019 Aug:130:130-141.

1. N-反式-阿魏酰酪胺的来源：文献[2]中报道的化合物是从腊巴蒜（中国传统发酵蒜）中分离得到的。分离步骤：乙醇提取→大孔树脂纯化→高效液相色谱分离。纯度（>98%）经HPLC和NMR确认[2]
2. 作用机制：(1) 在SK-N-SH细胞中：通过减少ROS、抑制脂质过氧化（降低MDA）、增强抗氧化酶（SOD、GSH-Px）以及调节凋亡蛋白（上调Bcl-2，下调Bax/cleaved caspase-3）来保护细胞免受H₂O₂损伤[1]
(2) 在L02细胞中：激活Nrf2/HO-1信号通路——促进Nrf2核转位，上调HO-1，从而减轻氧化应激[2]
3. 抗氧化选择性：N-反式-阿魏酰酪胺的DPPH/ABTS清除活性略低于维生素C，但选择性更好（对正常L02细胞毒性低，对HepG2癌细胞有细胞毒性）[2]
N-阿魏酰酪胺是酪胺类化合物的一种，它是一种代谢产物。
据报道，莫匹酰胺存在于马兜铃（Aristolochia kankauensis）、细穗椒草（Peperomia leptostachya）以及其他有相关数据的生物体中。
另见：烟草叶（部分）；印度大麻（Cannabis sativa subsp. indica）地上部分；空心菜（Ipomoea aquatica）叶（部分）。

C18H19NO4

313.3478

313.131

C, 69.00; H, 6.11; N, 4.47; O, 20.42

66648-43-9

66648-43-9 (E-configuration); 65646-26-6 (E-configuration); 80510-09-4 (Z-configuration)

5280537

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

554.2±60.0 °C at 760 mmHg

144.5 - 145 °C

289.0±32.9 °C

0.0±1.6 mmHg at 25°C

1.566

3.33

78.79

3

4

6

23

391

0

COC1=C(C=CC(=C1)/C=C/C(=O)NCCC2=CC=C(C=C2)O)O

NPNNKDMSXVRADT-WEVVVXLNSA-N

InChI=1S/C18H19NO4/c1-23-17-12-14(4-8-16(17)21)5-9-18(22)19-11-10-13-2-6-15(20)7-3-13/h2-9,12,20-21H,10-11H2,1H3,(H,19,22)/b9-5+

(E)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-N-[2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]prop-2-enamide

Feruloyltyramine; N-Feruloyltyramine; trans-N-Feruloyltyramine; 65646-26-6; CHEBI:17818; DTXSID30904143; 2-Propenamide, 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-N-(2-(4-hydroxyphenyl)ethyl)-; ...; 66648-43-9;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~319.13 mM)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.98 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。