PARP-2 ( IC50 = 2.1 nM ); PARP-1 ( IC50 = 3.8 nM ); V-PARP ( IC50 = 330 nM ); TANK-1 ( IC50 = 570 nM ); PARP-3 ( IC50 = 1300 nM )

Niraparib (MK-4827) 甲苯磺酸盐水合物在全细胞测定中抑制 PARP 活性，EC50=4 nM 和 EC90=45 nM。在 10-100 nM 范围内，Niraparib 甲苯磺酸盐水合物以 CC50 抑制表达突变型 BRCA-1 和 BRCA-2 的癌细胞的生长。在全细胞测定中，尼拉帕尼甲苯磺酸盐水合物对 PARP 1 和 2 表现出良好的抑制作用（IC50 分别为 3.8 和 2.1 nM）[1]。
尼拉帕尼甲苯磺酸盐水合物在治疗 15 分钟内即可抑制 PARP，A549 细胞显示1 小时时抑制率为 85%，H1299 细胞在 1 小时时显示出约 55% 抑制[2]。

Niraparib (MK-4827) 甲苯磺酸盐水合物单独用于 BRCA-1 缺陷癌症的异种移植模型时具有良好的耐受性和有效性[1]。
Niraparib (MK-4827) 甲苯磺酸盐水合物在异种移植物中作为单一药物是有效的缺乏 BRCA-1 的癌症模型，并且体内耐受性良好[1]。
Niraparib (MK-4827) 甲苯磺酸盐水合物具有极高的分布容积 (Vd_ss=6.9 L/ kg）、终末半衰期长（t_1/2=3.4 h）、卓越的生物利用度（F=65%）以及大鼠体内可接受的药代动力学，血浆清除率为 28 (mL/min)/ kg[1].
Niraparib (MK-4827) 甲苯磺酸盐水合物在两种情况下均可增加 p53 突变体 Calu-6 肿瘤的放射反应，每日单次剂量 50 mg/kg 的效果优于两次剂量 25 mg/kg 的效果[3]。

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MK-4827 是一种新型口服生物可利用的 PARP-1 和 PARP-2 抑制剂，可强烈增强辐射对多种人类肿瘤异种移植物（包括 p53 野生型和 p53 突变体）的作用。它在体内具有良好的耐受性，并且在 BRCA-1 缺陷癌症的异种移植模型中证明了作为单一药物的有效性。

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niraparib（MK-4827）的体内疗效在BRCA-1突变MDA-MB-436异种移植物模型中得到了临床前证明（图4），并在6周龄裸CD1雌性小鼠的右侧皮下注射了2×106个细胞。当肿瘤达到150 mm3的平均体积时，将小鼠随机分成同质组，用尼拉普（MK-4827）治疗，口服剂量为100 mg/kg q.d或50 mg/kg b.i.d。两种给药方案均观察到肿瘤消退，且均耐受良好，无死亡。在实验过程中，体重减轻了不到10%。[1]

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聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）抑制剂MK-4827是一种新型口服有效的PARP-1和PARP-2抑制剂，目前正在癌症治疗的I期临床试验中。目前还没有关于MK-4827与放疗联合使用的临床前数据。目前的研究检查了MK-4827和分次放疗的联合治疗效果，使用了各种不同p53状态的人类肿瘤异种移植物：Calu-6（p53缺失）、A549（p53野生型[wt]）和H-460（p53 wt）肺癌以及三阴性MDA-MB-231人类乳腺癌。为了模拟放射治疗的临床应用，使用了分次放射治疗（每分次2 Gy）方案，每天一次或两次，持续1至2周，联合MK-4827，50 mg/kg每日一次或25 mg/kg每日两次。发现MK-4827在两种辐射方案中都具有高度相似的有效性，但当MK-4827以50mg/kg的剂量每天一次给药时，观察到最大的辐射增强（EF=2.2）。MK-4827对所有四种肿瘤进行了放射增敏研究，无论其p53状态如何。MK-4827在给药后1小时降低了肿瘤中的标准杆数水平，并持续了24小时。这种长时间的PARP抑制可能增加了未来临床试验设计的灵活性。因此，MK-4827显示出提高放射治疗疗效的巨大潜力[3]。

PARP-1 SPA检测[1]
酶测定在含有25 mM Tris、pH 8.0、1 mM DTT、1 mM精胺、50 mM KCl、0.01%Nonidet P-40和1 mM MgCl2的缓冲液中进行。PARP反应含有0.1μCi[3H]NAD+（200 000 DPM）、1.5μM NAD+、150 nM生物素化NAD+、1μg/mL活化的小牛胸腺和1−5 nM PARP-1。在白色96孔板中，在50μL体积内进行了基于SPA珠检测的自动反应。 化合物在96孔板中以5μL/孔在5%DMSO/H2O（10×浓缩）中以11点连续稀释制备。首先在缓冲液中加入35μL PARP-1酶，在室温下孵育5分钟，然后加入10μL NAD+和DNA底物混合物，引发反应。在室温下放置3小时后，通过加入50μL链霉抗生物素蛋白SPA珠（在200 mM EDTA中为2.5 mg/mL，pH 8）终止这些反应。5分钟后，使用TopCount微孔板闪烁计数器对其进行计数。IC50数据由不同底物浓度下的抑制曲线确定。

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PARP亚型TCA测定[1]
酶促反应在25 mM Tris-HCl pH 8.0、1 mM MgCl2、50 mM KCl、1 mM精胺、0.01%Nonidet P-40和1 mM DTT的存在下进行。PARP反应含有0.1μCi[3H]NAD（200000 DPM）、1.5μM NAD+、1μg/mL活化的小牛胸腺和0.2−1 nM人PARP-1酶。在白色96孔聚丙烯微孔板中以50μL的体积进行测定
制备96孔板，在0.1-50 nM浓度范围内连续稀释10个点，5%DMSO/H2O，5μL。首先在缓冲液中加入35μL PARP-1酶，在室温下孵育5分钟，然后加入10μL NAD+和DNA底物混合物，引发反应。在室温下孵育2小时后，通过加入TCA（50μL/孔，20%在20mM NaPPi溶液中）停止反应，并在冰上孵育10分钟。将所得沉淀物在Unifilter GF/B微孔板上过滤，并用2.5%TCA洗涤四次。添加50μL/孔闪烁液后，使用TopCount微板闪烁计数器测定标准杆数聚合物中的放射性含量。IC50数据由不同底物浓度下的抑制曲线确定。其他PARP家族成员的协议非常相似，但有细微的变化，如支持信息所述。

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PAR酰化分析[1]
将HeLa细胞以10000个细胞/孔的初始浓度接种到96孔Viewplate黑色微孔板中的培养基中（100μL含有10%FCS、0.1mg/mL青霉素-链霉素和2mM L-谷氨酰胺的DMEM）。将平板在37°C、5%CO2气氛下孵育4小时，然后在5%DMSO/H2O、10μL/孔中以0.3-100 nM的浓度范围在9个点上连续稀释化合物。然后将平板在37°C的5%CO2中孵育18小时，然后加入5μL的H2O2水溶液（终浓度200μM）引起DNA损伤。作为阴性对照，使用未经H2O2处理的细胞。将平板在37°C下保持5分钟。然后通过平板倒置轻轻取出培养基，通过加入冰冷的甲醇（100μL/孔）固定细胞，并在-20°C下维持20分钟。
通过平板倒置去除固定剂并用PBS（300μL）洗涤10次后，加入检测缓冲液（100μL/孔，含有PBS、Tween（0.05%）和BSA（1mg/mL））以及初级标准杆数mAb（1:2000）、次级抗小鼠Alexa Fluor 488抗体（1:3000）和核染料Draq5（5μM）。在室温下在黑暗中孵育3小时后，取出溶液，用PBS（300μL）洗涤10次，在InCell1000上读取平板读数。标准杆数聚合物的监测是通过在Ex.S475_20X，Em.HQ535_50检测Alexa488，暴露时间为600ms，细胞核的鉴定是通过用Ex.HQ620_60X，Em-HQ700_75M跟踪Draq5，暴露时间300ms。通过测量PAR-阳性细胞核数与Draq5-标记细胞核总数之比来计算%PAR-阳性细胞。IC50是根据PARPi浓度增加时的残留酶活性确定的。

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在全细胞测定中，MK-4827 抑制 PARP 活性，EC(50) = 4 nM，并阻止表达突变型 BRCA-1 和 BRCA-2 的癌细胞生长，CC(50) 范围在 10-100 nM。它还对 PARP 1 和 2 具有出色的抑制作用，IC(50) 分别为 3.8 和 2.1 nM。

BRCA-1沉默和野生型HeLa细胞的增殖试验[1]
HeLa BRCA1沉默细胞是通过以100的MOI用慢病毒转导HeLa细胞而产生的，慢病毒含有针对BRCA-1的shRNA的H1衍生表达盒和GFP的表达盒（GFP在EF1-a启动子的控制下）。Taqman分析评估，BRCA1的沉默率超过80%。对照BRCA野生型HeLa细胞是通过用仅表达GFP的慢病毒转导而产生的
在96孔黑色观察板中进行增殖试验，在190μL/孔的培养基（含10%FCS、0.1 mg/mL青霉素-链霉素和2 mM L-谷氨酰胺的DMEM）中培养300个细胞/孔（BRCA-1-wt为250个细胞/孔），在37°C和5%CO2气氛下培养4小时。然后以10μL/孔的连续稀释液加入抑制剂，以在0.5%DMSO中获得所需的最终化合物浓度。然后将细胞在37°C的5%CO2中孵育7天，然后评估存活时间。简而言之，在培养基中用1:10的CellTiter Blue 溶液预稀释，加入100μL/孔，将细胞在37°C、5%CO2下静置45分钟，然后在室温下在黑暗中静置15分钟。通过在荧光计上读取平板，在550 nm下激发，在590 nm下发射来确定活细胞的数量。细胞生长表示为相对于载体处理细胞的生长百分比。测定抑制细胞生长50%所需的浓度（CC50）。其他细胞系的方案非常相似，并在支持信息中进行了描述。

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增殖测定在 96 孔黑色观察板中进行。将 300 个细胞/孔（BRCA-1 wt 为 250 个细胞/孔）接种于 190 μL/孔的培养基（含有 10% FCS、0.1 mg/mL 青霉素-链霉素和 2 mM L-谷氨酰胺的 DMEM）中，然后在 37°C、5% CO2 气氛下孵育 4 小时。之后，以 10 μL/孔的连续稀释液添加抑制剂，以在 0.5% DMSO 中达到目标最终化合物浓度。在 37°C、5% CO2 下培养 7 天后，评估细胞的活力。总之，每孔加入 100 μL 预稀释的 1:10 CellTiter-Blue 溶液，将细胞在 37°C、5% CO2 下孵育 45 分钟，然后在室温、黑暗中再孵育 15 分钟。通过在荧光计上读取平板、550 nm 激发和 590 nm 发射，可以确定活细胞的数量。与媒介物处理的细胞相比，细胞的生长百分比用于表达细胞生长。确定了什么浓度 (CC50) 可以使细胞生长在 50% 的时间内停止。

雌性裸鼠
25 mg/kg 每日两次或 50 mg/kg 每日一次
口服给药

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MDA-MB-436 人乳腺癌细胞（ATCC）在添加了 10% 胎牛血清 (FCS)、青霉素 (100 U/mL) 和链霉素 (100 μg/mL) 的 RPMI 1640 培养基中，于 37 °C 和 5% CO2 的标准贴壁培养条件下培养。为了建立异种移植瘤，使用 EDTA/胰蛋白酶从亚融合培养物中收集细胞，用无血清培养基洗涤，并将 2 × 10⁶ 个细胞以 100 μL 的总体积皮下注射到 6 周龄 CD1 雌性裸鼠的右侧腹部。细胞悬液由无血清培养基和 RGF-Matrigel 以 1:1 的比例混合而成。当肿瘤平均体积达到 150 mm³ 时，将小鼠随机分组，形成同质组，并开始口服给药。小鼠每日一次口服 100 mg/kg 的药物（溶于 10 mL/kg 水中），或每日两次口服 50 mg/kg 的药物，持续 33 天，每周至少测量一次肿瘤生长情况和体重。[1]

吸收、分布和排泄
单次服用300 mg尼拉帕尼后，平均（±SD）血浆峰浓度（Cmax）为804 (±403) ng/mL。尼拉帕尼的暴露量（Cmax和AUC）随每日剂量从30 mg（批准推荐剂量的0.1倍）到400 mg（批准推荐剂量的1.3倍）呈剂量比例增加。每日重复给药21天后，尼拉帕尼暴露量的累积比率在30至400 mg剂量范围内约为2倍。达峰时间（Tmax）约为3小时。尼拉帕尼的绝对生物利用度约为73%。食物似乎不影响药物暴露量。
尼拉帕尼通过多种途径消除，包括肝脏代谢、肝胆排泄和肾脏排泄。单次口服 300 毫克放射性标记的尼拉帕尼后，21 天内给药剂量的平均回收率为：尿液中 47.5%（范围：33.4% 至 60.2%），粪便中 38.8%（范围：28.3% 至 47.0%）。在6天内收集的混合样本中，尿液和粪便中回收的未代谢尼拉帕尼分别占给药剂量的11%和19%。
平均（±SD）表观分布容积（Vd/F）为1220（±1114）L。在群体药代动力学分析中，癌症患者的尼拉帕尼Vd/F为1074L。
在群体药代动力学分析中，癌症患者的尼拉帕尼表观总清除率（CL/F）为16.2 L/h。

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代谢/代谢物
尼拉帕尼主要通过羧酸酯酶（CEs）代谢生成M1，M1是一种主要的非活性代谢物。 M1代谢物随后可在UDP-葡萄糖醛酸转移酶（UGTs）介导下发生葡萄糖醛酸化，生成M10代谢物。在质量平衡研究中，M1和M10是主要的循环代谢物。M1代谢物还可发生甲基化、单加氧和氢化，生成其他次要代谢物。

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生物半衰期
每日多次服用300 mg尼拉帕尼后，平均半衰期（t_1/2）为36小时。

肝毒性
在尼拉帕尼的预注册随机对照临床试验中，常规肝功能检查异常较为常见，但大多为轻度且可自行消退。28%的患者出现血清ALT升高（对照组为15%），但仅有1%的患者ALT值超过正常值上限（ULN）的5倍（对照组为2%）。尽管临床试验中治疗期间血清酶升高较为常见，但未见出现伴有黄疸或肝功能衰竭的肝炎病例报告。尼拉帕尼获批并广泛应用后，尚未有已发表的临床上明显的肝损伤病例报告，但其使用范围和持续时间均受到限制。因此，尼拉帕尼是已知的轻度血清酶升高原因，但尚未发现与显著肝毒性相关。
可能性评分：E（未经证实但怀疑是临床上明显的肝损伤原因）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于尼拉帕尼在哺乳期临床应用的信息。由于尼拉帕尼与血浆蛋白的结合率为83%，因此其在乳汁中的含量可能很低。制造商建议在尼拉帕尼治疗期间以及治疗结束后1个月内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
尼拉帕尼与人血浆蛋白的结合率为83%。

[1]. Discovery of 2-{4-[(3S)-piperidin-3-yl]phenyl}-2H-indazole-7-carboxamide (MK-4827): a novel oral poly(ADP-ribose)polymerase (PARP) inhibitor efficacious in BRCA-1 and -2 mutant tumors. J Med Chem. 2009 Nov 26;52(22):7170-85.

[2]. Niraparib (MK-4827), a novel poly(ADP-Ribose) polymerase inhibitor, radiosensitizes human lung and breast cancer cells. Oncotarget. 2014 Jul 15;5(13):5076-86.

[3]. MK-4827, a PARP-1/-2 inhibitor, strongly enhances response of human lung and breast cancer xenografts to radiation. Invest New Drugs. 2012 Dec;30(6):2113-20.

[4]. Niraparib Maintenance Therapy in Platinum-Sensitive, Recurrent Ovarian Cancer. N Engl J Med. 2016 Dec 1;375(22):2154-2164.

尼拉帕尼甲苯磺酸盐一水合物是尼拉帕尼的一种口服生物利用度高的水合甲苯磺酸盐形式，尼拉帕尼是一种聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）1型和2型（PARP-1和PARP-2）抑制剂，具有抗肿瘤活性。给药后，尼拉帕尼与PARP-1和PARP-2结合并抑制其活性，从而抑制PARP-1和PARP-2介导的DNA修复，增加DNA链断裂的积累，促进基因组不稳定，最终导致细胞凋亡。 PARP蛋白家族催化核蛋白的翻译后ADP核糖基化，并被单链DNA (ssDNA)断裂激活。
另见：尼拉帕尼（具有活性部分）……查看更多……

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药效学
尼拉帕尼对BRCA1/2缺陷或正常的肿瘤细胞系均具有细胞毒性作用。在BRCA1/2缺陷的人类癌细胞系的小鼠异种移植模型以及具有同源重组缺陷（HRD）且BRCA1/2突变或野生型的人类患者来源的异种移植肿瘤模型中，均观察到肿瘤生长减缓。体外研究表明，尼拉帕尼可抑制多巴胺、去甲肾上腺素和血清素转运蛋白，这可能解释了其非靶向心血管效应，例如心率和血压升高。我们公开了一系列新型2-苯基-2H-吲唑-7-甲酰胺类化合物的开发，这些化合物可作为聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）1和2的抑制剂。该系列化合物经过优化以提高酶活性和细胞活性，所得PARP抑制剂对BRCA-1和BRCA-2缺陷型癌细胞表现出抗增殖活性，且对BRCA功能正常的细胞具有高度选择性。我们发现CYP450 1A1和1A2的肝外氧化是一个代谢问题，并报道了改善药代动力学性质的策略。这些努力最终鉴定出了2-{4-[(3S)-哌啶-3-基]苯基}-2H-吲唑-7-甲酰胺56 (MK-4827)，该化合物具有良好的药代动力学性质，目前正在进行I期临床试验。该化合物对PARP 1和PARP 2表现出优异的抑制作用，IC50值分别为3.8 nM和2.1 nM。在全细胞实验中，该化合物对PARP活性的抑制EC50值为4 nM，并且对携带突变型BRCA-1和BRCA-2的癌细胞增殖的抑制作用CC50值在10-100 nM范围内。化合物 56 在体内耐受性良好，并在 BRCA-1 缺陷型癌症的异种移植模型中作为单药显示出疗效。[1]

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本研究旨在评估新型聚（ADP-核糖）聚合酶 (PARP) 抑制剂尼拉帕尼 (MK-4827) 增强人肿瘤细胞放射敏感性的能力。采用克隆形成存活实验检测尼拉帕尼对肺癌、乳腺癌和前列腺癌来源的人肿瘤细胞的放射敏感性。实验包括 p53 野生型和 p53 缺陷型细胞系。通过检测 γ-H2AX 和 RAD51 灶，确定尼拉帕尼改变辐射诱导的 DNA 双链断裂 (DSB) 修复的能力。克隆形成存活分析表明，微摩尔浓度的尼拉帕尼可增强肺癌、乳腺癌和前列腺癌来源的肿瘤细胞系的放射敏感性，且该作用与p53状态无关，但对正常组织来源的细胞系则无此作用。尼拉帕尼还能增强肿瘤细胞对H₂O₂的敏感性，并在DNA复制过程中将H₂O₂诱导的单链断裂（SSB）转化为双链断裂（DSB）。这些结果表明，在体外实验中，强效且选择性的PARP-1抑制剂尼拉帕尼可显著增强人肿瘤细胞的放射敏感性。这种作用机制似乎与药物抑制碱基切除修复有关，从而在DNA复制过程中将亚致死性SSB转化为致死性DSB。综上所述，我们的研究结果有力地支持对尼拉帕尼联合放射治疗进行临床评估。 [2]

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背景：尼拉帕尼是一种口服聚（腺苷二磷酸[ADP]-核糖）聚合酶（PARP）1/2抑制剂，已在卵巢癌患者中显示出临床活性。我们旨在评估尼拉帕尼与安慰剂相比，作为铂敏感复发性卵巢癌患者维持治疗的疗效。
方法：在这项随机、双盲、3期临床试验中，根据是否存在生殖系BRCA突变（gBRCA组和非gBRCA组）以及非gBRCA突变的类型，将患者分为两组，并以2:1的比例随机分配接受尼拉帕尼（300 mg）或安慰剂，每日一次。主要终点是无进展生存期。
结果：在 553 名入组患者中，203 名属于 gBRCA 队列（其中 138 名分配至尼拉帕尼组，65 名分配至安慰剂组），350 名患者属于非 gBRCA 队列（其中 234 名分配至尼拉帕尼组，116 名分配至安慰剂组）。与安慰剂组相比，尼拉帕尼组患者的中位无进展生存期显著延长，其中 gBRCA 队列为 21.0 个月 vs. 5.5 个月（风险比，0.27；95% 置信区间 [CI]，0.17 至 0.41），非 gBRCA 队列中同源重组缺陷 (HRD) 肿瘤患者的中位无进展生存期为 12.9 个月 vs. 3.8 个月（风险比，0.38；95% CI，0.24 至 0.59），非 gBRCA 队列患者的中位无进展生存期为 9.3 个月 vs. 3.9 个月（风险比，0.45；95% CI，0.34 至 0.61；所有三项比较的 P 值均 < 0.001）。尼拉帕尼组中最常见的3级或4级不良事件为血小板减少症（33.8%）、贫血（25.3%）和中性粒细胞减少症（19.6%），这些不良事件均通过调整剂量进行控制。
结论：在铂敏感复发性卵巢癌患者中，无论是否存在gBRCA突变或HRD状态，接受尼拉帕尼治疗的患者的中位无进展生存期均显著长于接受安慰剂治疗的患者，且骨髓毒性中等。（由Tesaro公司资助；ClinicalTrials.gov注册号：NCT01847274）。[4]

C26H30N4O5S

510.6052

510.193

C, 61.16; H, 5.92; N, 10.97; O, 15.67; S, 6.28

1613220-15-7

1038915-64-8 (HCl); 1038915-73-9; 613220-15-7 (tosylate hydrate); 1038915-60-4; 1038915-58-0

74763937

White to off-white solid powder

137

4

7

4

36

655

1

S(C1C=CC(C)=CC=1)(=O)(=O)O.O.C1(C(N)=O)=CC=CC2=CN(C3=CC=C([C@H]4CNCCC4)C=C3)N=C12

ACNPUCQQZDAPJH-FMOMHUKBSA-N

InChI=1S/C19H20N4O.C7H8O3S.H2O/c20-19(24)17-5-1-3-15-12-23(22-18(15)17)16-8-6-13(7-9-16)14-4-2-10-21-11-14;1-6-2-4-7(5-3-6)11(8,9)10;/h1,3,5-9,12,14,21H,2,4,10-11H2,(H2,20,24);2-5H,1H3,(H,8,9,10);1H2/t14-;;/m1../s1

4-methylbenzenesulfonic acid;2-[4-[(3S)-piperidin-3-yl]phenyl]indazole-7-carboxamide;hydrate

MK-4827; Niraparib tosylate monohydrate; 1613220-15-7; Niraparib tosylate hydrate; Niraparibtosylate; 195Q483UZD;MK-4827; MK4827; MK4827-tosylate; Niraparib tosylate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~64 mg/mL (~199.8 mM)
Ethanol: ~64 mg/mL