PARP-2 ( IC50 = 2.1 nM ); PARP-1 ( IC50 = 3.8 nM ); V-PARP ( IC50 = 330 nM ); TANK-1 ( IC50 = 570 nM ); PARP-3 ( IC50 = 1300 nM )

体外活性：在全细胞测定中，MK-4827 抑制 PARP 活性，EC50 = 4 nM，并抑制突变 BRCA-1 和 BRCA-2 癌细胞的增殖，CC50 在 10-100 nM 范围内。它被证明是一种有效的选择性 PARP-1 和 PARP-2 抑制剂，IC50 分别为 3.8 和 2.1 nM。此外，它的选择性比 PARP-3、V-PARP 和 tankyrase-1 至少高 100 倍，IC50 分别为 1300、330 和 570 nM。 MK-4827 不仅能抑制因 RNA 干扰而沉默而缺乏 BRCA-1 的 HeLa 细胞的生长，还能抑制携带天然 BRCA-1 或 BRCA-2 突变的癌细胞系的增殖。在携带 BRCA-1 突变的 MDA-MB-436 人乳腺腺癌细胞中，MK-4827 显示 CC50 = 18 nM，而在 BRCA-2 突变的 CAPAN-1 人胰腺腺癌细胞中，MK-4827 显示 CC50 = 90纳米。相比之下，正常人前列腺和乳腺上皮细胞对 MK-4827 具有抗性，在微摩尔范围内表现出抗增殖作用，从而证明与周围组织相比，这些 PARP 抑制剂对 BRCA-1 和 -2 突变癌细胞具有非常高的选择性细胞毒性。激酶测定：MK-4827 表现出出色的 PARP 1 和 2 抑制作用，IC(50) = 3.8 和 2.1 nM，分别，在全细胞测定中，它抑制 PARP 活性，EC(50) = 4 nM，并抑制癌症增殖具有 CC(50) 在 10-100 nM 范围内的突变 BRCA-1 和 BRCA-2 的细胞。细胞测定：在 96 孔黑色观察板中进行增殖测定，培养基为 300 个细胞/孔（BRCA-1 wt 为 250 个细胞/孔），培养基为 190 μL/孔（含有 10% FCS、0.1 mg/mL 青霉素的 DMEM） -链霉素和2 mM L-谷氨酰胺)，在37℃、5% CO2气氛下接种并孵育4小时。然后以 10 μL/孔的浓度连续稀释添加抑制剂，以获得 0.5% DMSO 中所需的最终化合物浓度。然后将细胞在 37℃、5% CO2 中孵育 7 天，然后评估活力。简而言之，将 CellTiter-Blue 溶液在培养基中按 1:10 预稀释，加入 100 μL/孔，将细胞在 37℃、5% CO2 下放置 45 分钟，然后在室温下避光放置 15 分钟。通过在荧光计上读取平板、在 550 nm 处激发并在 590 nm 处发射来确定活细胞的数量。细胞生长表示为相对于媒介物处理的细胞的生长百分比。确定抑制细胞生长 50% (CC50) 所需的浓度。

MK-4827 是一种新型口服生物可利用的 PARP-1 和 PARP-2 抑制剂，可强烈增强辐射对多种人类肿瘤异种移植物（包括 p53 野生型和 p53 突变体）的作用。它在体内具有良好的耐受性，并且在 BRCA-1 缺陷癌症的异种移植模型中证明了作为单一药物的有效性。

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Niraparib（MK-4827）在缺乏BRCA-1的癌症异种移植物模型中作为单一药物使用时表现出良好的耐受性和疗效。在BRCA-1缺陷型癌症异种移植物模型中，niraparib（MK-4827）作为单一药物使用时显示出疗效，并且在体内耐受性良好。尼拉普（MK-4827）的血浆清除率为28（mL/min）/kg，分布体积非常大（Vd_ss=6.9 L/kg），终末半衰期长（t_1/2=3.4小时），生物利用度极高（F=65%），在大鼠体内表现出可接受的药代动力学[1]。在这两种情况下，niraparib（MK-4827）都能改善p53突变型Calu-6肿瘤的辐射反应；单次每日剂量50mg/kg比两次剂量25mg/kg更有益。

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niraparib（MK-4827）的体内疗效在BRCA-1突变MDA-MB-436异种移植物模型中得到了临床前证明（图4），并在6周龄裸CD1雌性小鼠的右侧皮下注射了2×106个细胞。当肿瘤达到150 mm3的平均体积时，将小鼠随机分成同质组，用尼拉普（MK-4827）治疗，口服剂量为100 mg/kg q.d或50 mg/kg b.i.d。两种给药方案均观察到肿瘤消退，且均耐受良好，无死亡。在实验过程中，体重减轻了不到10%。[3]

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聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）抑制剂MK-4827是一种新型口服有效的PARP-1和PARP-2抑制剂，目前正在癌症治疗的I期临床试验中。目前还没有关于MK-4827与放疗联合使用的临床前数据。目前的研究检查了MK-4827和分次放疗的联合治疗效果，使用了各种不同p53状态的人类肿瘤异种移植物：Calu-6（p53缺失）、A549（p53野生型[wt]）和H-460（p53 wt）肺癌以及三阴性MDA-MB-231人类乳腺癌。为了模拟放射治疗的临床应用，使用了分次放射治疗（每分次2 Gy）方案，每天一次或两次，持续1至2周，联合MK-4827，50 mg/kg每日一次或25 mg/kg每日两次。发现MK-4827在两种辐射方案中都具有高度相似的有效性，但当MK-4827以50mg/kg的剂量每天一次给药时，观察到最大的辐射增强（EF=2.2）。MK-4827对所有四种肿瘤进行了放射增敏研究，无论其p53状态如何。MK-4827在给药后1小时降低了肿瘤中的标准杆数水平，并持续了24小时。这种长时间的PARP抑制可能增加了未来临床试验设计的灵活性。因此，MK-4827显示出提高放射治疗疗效的巨大潜力[1]。

在全细胞测定中，MK-4827 抑制 PARP 活性，EC(50) = 4 nM，并阻止表达突变型 BRCA-1 和 BRCA-2 的癌细胞生长，CC(50) 范围在 10-100 nM。它还对 PARP 1 和 2 具有出色的抑制作用，IC(50) 分别为 3.8 和 2.1 nM。

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PARP-1 SPA检测[3]
酶测定在含有25 mM Tris、pH 8.0、1 mM DTT、1 mM精胺、50 mM KCl、0.01%Nonidet P-40和1 mM MgCl2的缓冲液中进行。PARP反应含有0.1μCi[3H]NAD+（200 000 DPM）、1.5μM NAD+、150 nM生物素化NAD+、1μg/mL活化的小牛胸腺和1−5 nM PARP-1。在白色96孔板中，在50μL体积内进行了基于SPA珠检测的自动反应。 化合物在96孔板中以5μL/孔在5%DMSO/H2O（10×浓缩）中以11点连续稀释制备。首先在缓冲液中加入35μL PARP-1酶，在室温下孵育5分钟，然后加入10μL NAD+和DNA底物混合物，引发反应。在室温下放置3小时后，通过加入50μL链霉抗生物素蛋白SPA珠（在200 mM EDTA中为2.5 mg/mL，pH 8）终止这些反应。5分钟后，使用TopCount微孔板闪烁计数器对其进行计数。IC50数据由不同底物浓度下的抑制曲线确定。

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PARP亚型TCA测定[3]
酶促反应在25 mM Tris-HCl pH 8.0、1 mM MgCl2、50 mM KCl、1 mM精胺、0.01%Nonidet P-40和1 mM DTT的存在下进行。PARP反应含有0.1μCi[3H]NAD（200000 DPM）、1.5μM NAD+、1μg/mL活化的小牛胸腺和0.2−1 nM人PARP-1酶。在白色96孔聚丙烯微孔板中以50μL的体积进行测定
制备96孔板，在0.1-50 nM浓度范围内连续稀释10个点，5%DMSO/H2O，5μL。首先在缓冲液中加入35μL PARP-1酶，在室温下孵育5分钟，然后加入10μL NAD+和DNA底物混合物，引发反应。在室温下孵育2小时后，通过加入TCA（50μL/孔，20%在20mM NaPPi溶液中）停止反应，并在冰上孵育10分钟。将所得沉淀物在Unifilter GF/B微孔板上过滤，并用2.5%TCA洗涤四次。添加50μL/孔闪烁液后，使用TopCount微板闪烁计数器测定标准杆数聚合物中的放射性含量。IC50数据由不同底物浓度下的抑制曲线确定。其他PARP家族成员的协议非常相似，但有细微的变化，如支持信息所述。

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PAR酰化分析[3]
将HeLa细胞以10000个细胞/孔的初始浓度接种到96孔Viewplate黑色微孔板中的培养基中（100μL含有10%FCS、0.1mg/mL青霉素-链霉素和2mM L-谷氨酰胺的DMEM）。将平板在37°C、5%CO2气氛下孵育4小时，然后在5%DMSO/H2O、10μL/孔中以0.3-100 nM的浓度范围在9个点上连续稀释化合物。然后将平板在37°C的5%CO2中孵育18小时，然后加入5μL的H2O2水溶液（终浓度200μM）引起DNA损伤。作为阴性对照，使用未经H2O2处理的细胞。将平板在37°C下保持5分钟。然后通过平板倒置轻轻取出培养基，通过加入冰冷的甲醇（100μL/孔）固定细胞，并在-20°C下维持20分钟。
通过平板倒置去除固定剂并用PBS（300μL）洗涤10次后，加入检测缓冲液（100μL/孔，含有PBS、Tween（0.05%）和BSA（1mg/mL））以及初级标准杆数mAb（1:2000）、次级抗小鼠Alexa Fluor 488抗体（1:3000）和核染料Draq5（5μM）。在室温下在黑暗中孵育3小时后，取出溶液，用PBS（300μL）洗涤10次，在InCell1000上读取平板读数。标准杆数聚合物的监测是通过在Ex.S475_20X，Em.HQ535_50检测Alexa488，暴露时间为600ms，细胞核的鉴定是通过用Ex.HQ620_60X，Em-HQ700_75M跟踪Draq5，暴露时间300ms。通过测量PAR-阳性细胞核数与Draq5-标记细胞核总数之比来计算%PAR-阳性细胞。IC50是根据PARPi浓度增加时的残留酶活性确定的。

A549 和 H1299 细胞用于使用 HT 通用化学发光 PARP 检测试剂盒检查 PARP 的抑制情况。总之，细胞经过胰蛋白酶消化，用 DMSO 或 1 μM Niraparib (MK-4827) 处理 15、30、60 或 120 分钟，然后转移到预先冷冻的试管中。用冰冷的 PBS 冲洗两次后，将细胞重悬于冷的 PARP 提取缓冲液中。为了分解细胞膜，定期涡旋细胞悬浮液，同时在冰上孵育 30 分钟。离心悬浮液后，将上清液转移至已冷却的冰填充管中。用 1X PARP 缓冲液复水后，96 孔板中组蛋白包被的孔在室温下孵育 30 分钟。除去 PARP 缓冲液，然后向每个孔中添加 1X PARP 缓冲液、稀释的 PARP-HSA 酶和 20 μg 通过 Bio-Rad 蛋白质测定法测量的蛋白质。室温孵育 60 分钟后，用含有 0.1% Triton X-100 的 PBS 清洗条带孔两次，然后再用 PBS 清洗一次。在条带孔中，添加稀释的 Strep-HRP，然后将其在室温下静置 60 分钟。和以前一样，井被清理干净。将等体积的 PeroxyGlow A 和 B 混合并添加到孔中后，使用读板器立即获得化学发光读数。

吸收、分布和排泄
单次服用300 mg尼拉帕尼后，平均（±SD）血浆峰浓度（Cmax）为804 (±403) ng/mL。尼拉帕尼的暴露量（Cmax和AUC）随每日剂量从30 mg（批准推荐剂量的0.1倍）到400 mg（批准推荐剂量的1.3倍）呈剂量比例增加。每日重复给药21天后，尼拉帕尼暴露量的累积比率在30至400 mg剂量范围内约为2倍。达峰时间（Tmax）约为3小时。尼拉帕尼的绝对生物利用度约为73%。食物似乎不影响药物暴露量。
尼拉帕尼通过多种途径消除，包括肝脏代谢、肝胆排泄和肾脏排泄。单次口服 300 毫克放射性标记的尼拉帕尼后，21 天内给药剂量的平均回收率为：尿液中 47.5%（范围：33.4% 至 60.2%），粪便中 38.8%（范围：28.3% 至 47.0%）。在6天内收集的混合样本中，尿液和粪便中回收的未代谢尼拉帕尼分别占给药剂量的11%和19%。
平均（±SD）表观分布容积（Vd/F）为1220（±1114）L。在群体药代动力学分析中，癌症患者的尼拉帕尼Vd/F为1074L。
在群体药代动力学分析中，癌症患者的尼拉帕尼表观总清除率（CL/F）为16.2 L/h。

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代谢/代谢物
尼拉帕尼主要通过羧酸酯酶（CEs）代谢生成M1，M1是一种主要的非活性代谢物。 M1代谢物随后可在UDP-葡萄糖醛酸转移酶（UGTs）介导下发生葡萄糖醛酸化，生成M10代谢物。在质量平衡研究中，M1和M10是主要的循环代谢物。M1代谢物还可发生甲基化、单加氧和氢化，生成其他次要代谢物。

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生物半衰期
每日多次服用300 mg尼拉帕尼后，平均半衰期（t_1/2）为36小时。

肝毒性
在尼拉帕尼的预注册随机对照临床试验中，常规肝功能检查异常较为常见，但大多为轻度且可自行消退。28%的患者出现血清ALT升高（对照组为15%），但仅有1%的患者ALT值超过正常值上限（ULN）的5倍（对照组为2%）。尽管临床试验中治疗期间血清酶升高较为常见，但未见出现伴有黄疸或肝功能衰竭的肝炎病例报告。尼拉帕尼获批并广泛应用后，尚未有已发表的临床上明显的肝损伤病例报告，但其使用范围和持续时间均受到限制。因此，尼拉帕尼是已知的轻度血清酶升高原因，但尚未发现与显著肝毒性相关。
可能性评分：E（未经证实但怀疑是临床上明显的肝损伤原因）。

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妊娠和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
目前尚无关于尼拉帕尼在哺乳期临床应用的信息。由于尼拉帕尼与血浆蛋白的结合率为83%，因此其在乳汁中的含量可能很低。制造商建议在尼拉帕尼治疗期间以及治疗结束后1个月内停止母乳喂养。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。
◉ 对泌乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白结合
尼拉帕尼与人血浆蛋白的结合率为83%。

[1]. Invest New Drugs . 2012 Dec;30(6):2113-20.

[2]. J Biol Chem . 2012 Feb 3;287(6):4198-210.

[3]. J Med Chem . 2009 Nov 26;52(22):7170-85.

[4]. Anticancer Res . 2013 Mar;33(3):755-62.

[5]. Oncotarget . 2014 Jul 15;5(13):5076-86.

药效学
尼拉帕尼对存在或不存在 _BRCA1/2_ 缺陷的肿瘤细胞系均具有细胞毒性作用。在 _BRCA1/2_ 缺陷的人类癌细胞系的小鼠异种移植模型以及具有同源重组缺陷 (HRD) 的人类患者来源的异种移植肿瘤模型（无论 _BRCA1/2_ 为突变型还是野生型）中均观察到肿瘤生长减缓。体外研究表明，尼拉帕尼抑制多巴胺、去甲肾上腺素和血清素转运蛋白，这可能解释了其脱靶心血管效应，例如心率和血压升高。

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我们公开了一系列新型 2-苯基-2H-吲唑-7-甲酰胺类化合物作为聚（ADP-核糖）聚合酶 (PARP) 1 和 2 抑制剂的开发。本系列化合物经过优化以提高酶活性和细胞活性，所得PARP抑制剂对BRCA-1和BRCA-2缺陷型癌细胞表现出抗增殖活性，且对BRCA功能正常的细胞具有高度选择性。研究发现，CYP450 1A1和1A2介导的肝外氧化是代谢方面的问题，并报道了改善药代动力学性质的策略。这些努力最终发现了2-{4-[(3S)-哌啶-3-基]苯基}-2H-吲唑-7-甲酰胺56 (MK-4827)，该化合物具有良好的药代动力学性质，目前正在进行I期临床试验。该化合物对PARP 1和2表现出优异的抑制活性，IC50值分别为3.8 nM和2.1 nM。在全细胞实验中，其对PARP活性的抑制EC50值为4 nM，对携带突变型BRCA-1和BRCA-2的癌细胞增殖的抑制CC50值在10-100 nM范围内。化合物56在体内耐受性良好，并在BRCA-1缺陷型癌症的异种移植模型中作为单药显示出疗效。[3]

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背景：尼拉帕尼是一种口服的聚（腺苷二磷酸[ADP]-核糖）聚合酶（PARP）1/2抑制剂，已在卵巢癌患者中显示出临床活性。我们旨在评估尼拉帕尼与安慰剂相比，作为铂敏感复发性卵巢癌患者维持治疗的疗效。方法：在这项随机、双盲、3期临床试验中，患者根据是否存在生殖系BRCA突变（gBRCA组和非gBRCA组）以及非gBRCA突变的类型进行分组，并以2:1的比例随机分配至尼拉帕尼组（300 mg）或安慰剂组，每日一次。主要终点为无进展生存期。结果：在553例入组患者中，203例为gBRCA组（其中138例分配至尼拉帕尼组，65例分配至安慰剂组），350例为非gBRCA组（其中234例分配至尼拉帕尼组，116例分配至安慰剂组）。与安慰剂组相比，尼拉帕尼组患者的中位无进展生存期显著延长，其中 gBRCA 队列为 21.0 个月 vs. 5.5 个月（风险比，0.27；95% 置信区间 [CI]，0.17 至 0.41），非 gBRCA 队列中同源重组缺陷 (HRD) 肿瘤患者的中位无进展生存期为 12.9 个月 vs. 3.8 个月（风险比，0.38；95% CI，0.24 至 0.59），非 gBRCA 队列患者的中位无进展生存期为 9.3 个月 vs. 3.9 个月（风险比，0.45；95% CI，0.34 至 0.61；所有三项比较的 P 值均 < 0.001）。尼拉帕尼组中最常见的3级或4级不良事件为血小板减少症（33.8%）、贫血（25.3%）和中性粒细胞减少症（19.6%），这些不良事件均通过调整剂量进行控制。
结论：在铂敏感复发性卵巢癌患者中，无论是否存在gBRCA突变或HRD状态，接受尼拉帕尼治疗的患者的中位无进展生存期均显著长于接受安慰剂治疗的患者，且骨髓毒性中等。（由Tesaro公司资助；ClinicalTrials.gov注册号：NCT01847274）。

C26H28N4O4S

492.59

492.183

C, 63.40; H, 5.73; N, 11.37; O, 12.99; S, 6.51

1038915-73-9

1038915-73-9;1613220-15-7 (tosylate hydrate); 1038915-60-4; 1038915-64-8 (HCl); 1476777-06-6 (Niraparib metabolite M1); 1038915-58-0 (Niraparib R-enantiomer)

78357761

Light yellow solid powder

5.943

135.69

3

6

4

35

655

1

S(C1C([H])=C([H])C(C([H])([H])[H])=C([H])C=1[H])(=O)(=O)O[H].O=C(C1=C([H])C([H])=C([H])C2C1=NN(C=2[H])C1C([H])=C([H])C(=C([H])C=1[H])[C@@]1([H])C([H])([H])N([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H])N([H])[H]

LCPFHXWLJMNKNC-PFEQFJNWSA-N

InChI=1S/C19H20N4O.C7H8O3S/c20-19(24)17-5-1-3-15-12-23(22-18(15)17)16-8-6-13(7-9-16)14-4-2-10-21-11-14;1-6-2-4-7(5-3-6)11(8,9)10/h1,3,5-9,12,14,21H,2,4,10-11H2,(H2,20,24);2-5H,1H3,(H,8,9,10)/t14-;/m1./s1

4-methylbenzenesulfonic acid;2-[4-[(3S)-piperidin-3-yl]phenyl]indazole-7-carboxamide;hydrate

MK-4827 tosylate; MK 4827; MK-4827 tosylate; Niraparib tosylate; MK-4827 (tosylate); MK-4827-tosylate; MK4827 tosylate; MK 4827 tosylate; MK-4827; MK4827; Niraparib; Niraparib HCl; Niraparib hydrochloride; Zejula

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.08 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 50% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.08 mM) (饱和度未知) in 5% DMSO + 95% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 0.5 mg/mL (1.02 mM) (饱和度未知) in 1% DMSO 99% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。