| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
NMS-859 is a strong VCP inhibitor having IC50 values of 0.37 and 0.36 μM for wild-type VCP in the presence of 60 μM and 1 mM ATP in cells, respectively. NMS-859 has extremely little inhibitory action against VCPC522T. NMS-859 also reduces cell proliferation with IC50s of 3.5 μM and 3.0 μM in HCT116 and HeLa cell lines, respectively [1].
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| 体外研究 (In Vitro) |
NMS-859 是一种强效 VCP 抑制剂，在细胞中存在 60 μM 和 1 mM ATP 的情况下，对野生型 VCP 的 IC50 值分别为 0.37 和 0.36 μM。 NMS-859 对 VCPC522T 的抑制作用极小。 NMS-859 还可以降低 HCT116 和 HeLa 细胞系中的细胞增殖，IC50 分别为 3.5 μM 和 3.0 μM [1]。
NMS-859 抑制 HCT116 和 HeLa 癌细胞系的增殖，IC50 值分别为 3.5 µM 和 3.0 µM。 [1] 用 NMS-859 处理 HCT116 细胞可诱导剂量依赖性的多聚泛素化蛋白积累、稳定VCP底物蛋白细胞周期蛋白E和Mcl-1、并诱导内质网应激（UPR）标志物GRP78和CHOP。它还促进自噬标志物LC3B的脂化，并激活细胞凋亡，表现为caspase-3及其靶标PARP的切割。这种生物标志物调节模式重现了VCP siRNA敲低所观察到的表型，并且发生在与其抗增殖IC50一致的剂量下。 [1] 质谱分析证实 NMS-859 在 HCT116 细胞中共价修饰了内源性 VCP 的 Cys522 位点。 [1] 在 293 T-Rex 细胞中表达 VCPC522T 突变体可以挽救细胞对 NMS-859 的敏感性（将IC50从3.2 µM移至9.8 µM）并消除caspase的诱导，证实了其靶向作用机制。用V5标记的VCPC522T（而非野生型VCP或对照蛋白）瞬时转染HeLa细胞后，经 NMS-859 处理可富集转染细胞群，进一步验证了其特异性。 [1] NMS-859 (10 µM) 对 NSF 仅有轻微抑制，对一组其他 AAA ATP酶（VPS4B, RuvBL1, SPATAS）、HSP90 或 53 种激酶均无显著抑制，表明其对 VCP 具有高选择性。 [1] |
| 酶活实验 |
生化ATP酶活性测定： 使用改良的NADH偶联法测定重组六聚体VCP的ATP酶活性。第一步，VCP在ATP再生系统（丙酮酸激酶和磷酸烯醇式丙酮酸）存在下水解ATP，以化学计量方式积累丙酮酸。随后用EDTA淬灭反应。第二步，加入乳酸脱氢酶和NADH，将积累的丙酮酸转化为乳酸，同时将NADH氧化为NAD+。测量340 nm处NADH吸光度的下降，该值与VCP ATP酶活性相关。在此条件下测定抑制剂的效力（IC50）。 [1]
高通量筛选 (HTS) 实验： 使用 1,536 孔板格式的微型化实验进行初步筛选。将 VCP 与化合物预孵育，然后加入 ATP。90 分钟后，使用 Transcreener ADP 荧光偏振 (FP) 检测法检测 ADP 的产生。 [1] |
| 细胞实验 |
细胞增殖/活力实验： 将细胞（如 HCT116、HeLa）接种于 384 孔板中。24 小时后，用系列稀释的 NMS-859 处理细胞并孵育 72 小时。然后使用基于荧光素酶的检测方法（CellTiter-Glo）测量细胞内 ATP 水平以评估细胞活力。根据剂量反应曲线计算 IC50 值。 [1]
生物标志物调节的免疫印迹分析： 将指数生长期的细胞（如 HCT116）接种于培养板中，并用 NMS-859 处理指定时间（如 8 小时或 24 小时）。裂解细胞，蛋白质通过 SDS-PAGE 分离，转印至膜上，并用针对多聚泛素、细胞周期蛋白 E、Mcl-1、GRP78、CHOP、LC3B、切割的 caspase-3 和切割的 PARP 等靶标的特异性抗体进行检测。使用化学发光法显示免疫反应条带。 [1] 细胞VCP修饰的质谱分析： 处理过的 HCT116 细胞被裂解，蛋白质通过 SDS-PAGE 分离。切下对应于 VCP（约 90 kDa）的条带，进行胶内胰蛋白酶消化，所得肽段通过 MALDI-TOF/TOF 质谱进行分析。鉴定并测序含有 Cys522 的肽段，以确认 NMS-859 部分的加成（增加 313 Da）。 [1] VCPC522T 突变体拯救实验： 用表达 V5 标记的野生型 VCP、VCPC522T 或对照蛋白（survivin）的质粒转染 HeLa 细胞。48 小时后，用递增剂量的 NMS-859 处理细胞另外 48 小时。固定细胞，用抗 V5 抗体和荧光二抗进行免疫染色，并使用高内涵成像平台进行分析。量化处理后 V5 阳性细胞的富集情况以评估特异性拯救。 [1] 293 T-Rex 细胞中的诱导型拯救实验： 构建了稳定表达可多西环素诱导的 VCPC522T 的 293 T-Rex 细胞系。比较未诱导和诱导状态下细胞对 NMS-859 处理的存活率（使用活力测定法）。还通过免疫印迹评估了caspase的诱导。 [1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
NMS-859 是一种通过高通量筛选鉴定的 VCP/p97 共价抑制剂。[1]
它的作用机制是通过共价修饰 VCP D2 ATPase 结构域 Walker A 基序中的半胱氨酸 522 (Cys522)。这种修饰破坏了 ATP 结合口袋的局部结构，阻止了 ATP 的结合和水解，模拟了一种调控性的氧化机制。[1] 生化实验表明，该化合物的抑制作用具有时间依赖性，这与共价机制相符。它不影响 VCP 的六聚体寡聚状态或整体蛋白稳定性。[1] NMS-859 对癌细胞生物标志物（泛素化蛋白的积累、UPR 激活、细胞凋亡）的调控模式与 VCP 基因敲低的结果一致，这为 VCP 作为癌症药物靶点提供了重要的验证。[1] |
| 分子式 |
C15H12CLN3O3S
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|---|---|
| 分子量 |
349.7921
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| 精确质量 |
349.028
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| CAS号 |
1449236-96-7
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| PubChem CID |
71607189
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| 外观&性状 |
White to gray solid powder
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| 密度 |
1.5±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
540.7±56.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
280.8±31.8 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±1.4 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.673
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| LogP |
2.08
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| tPSA |
96
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
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| 重原子数目 |
23
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| 分子复杂度/Complexity |
587
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| InChi Key |
JWMFLBAPPIWNGG-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H12ClN3O3S/c16-9-14(20)17-10-4-3-5-11(8-10)18-15-12-6-1-2-7-13(12)23(21,22)19-15/h1-8H,9H2,(H,17,20)(H,18,19)
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| 化学名 |
2-chloro-N-[3-[(1,1-dioxo-1,2-benzothiazol-3-yl)amino]phenyl]acetamide
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~50 mg/mL (~142.94 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (7.15 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 +5% Tween-80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80+，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.8589 mL | 14.2943 mL | 28.5886 mL | |
| 5 mM | 0.5718 mL | 2.8589 mL | 5.7177 mL | |
| 10 mM | 0.2859 mL | 1.4294 mL | 2.8589 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
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