| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 1g |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
DNA-PK (IC50 = 0.23 μM); PI3K (IC50 = 13 μM)
DNA-dependent protein kinase (DNA-PK): NU7026 potently and selectively inhibits DNA-PK with an IC50 of 0.23 μM (using purified human DNA-PK and a p53-derived peptide substrate); it shows minimal inhibition of other DNA repair kinases, including ATM (IC50 > 100 μM) and ATR (IC50 > 100 μM) [1] - DNA-dependent protein kinase (DNA-PK): NU7026 inhibits DNA-PK-mediated DNA double-strand break (DSB) repair in malignant B lymphocytes (Raji, Daudi cells) with an EC50 of ~1 μM (assessed by neutral comet assay for DSB accumulation); no Ki values reported [2] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
NU7026 (10 μM) 在呈指数增长的 DNA-PK 熟练但不缺乏的细胞中增强电离辐射 (IR) 细胞毒性 [90% 细胞杀灭时的增强因子 (PF90)=1.51±0.04][1]。 NU7026 协同使 I83 细胞对苯丁酸氮芥 (CLB) 敏感达 3.5 倍[2]。 NU7026，一种全新的DNA依赖性蛋白激酶（DNA-PK）抑制剂。对 CH1 人卵巢癌细胞的显着放射增敏作用需要至少 NU7026 暴露 4 小时以及 10 M 剂量的 3 Gy 辐射，这对细胞本身无毒[3]。体外溶液：NU7026溶解。使用 NU7026 处理细胞，最终 DMSO (v/v) 浓度为 0.25% DMSO (v/v)[4]。
肺癌细胞放射增敏作用：A549和H460非小细胞肺癌细胞在照射（0-8 Gy）前1小时用NU7026（0.5-2 μM）处理。克隆形成实验显示放射敏感性呈剂量依赖性增加：2 μM NU7026处理时，A549细胞的增敏比（SER）为1.4，H460细胞为1.3。γ-H2AX（DSB标志物）免疫荧光染色表明，NU7026（2 μM）延长DSB滞留时间：照射后48小时，处理组细胞的γ-H2AX焦点数是溶媒对照组的约3倍，证实DSB修复被抑制[1] - 与苯丁酸氮芥（Chlorambucil）在B淋巴细胞中的协同细胞毒性：Raji（伯基特淋巴瘤）和Daudi（伯基特淋巴瘤）细胞用NU7026（0.1-5 μM）联合苯丁酸氮芥（0.1-10 μM）处理。MTT活力实验显示协同细胞毒性（联合指数CI<0.8）：1 μM NU7026+2 μM苯丁酸氮芥处理时，Raji细胞活力下降约60%（单独苯丁酸氮芥处理仅下降20%），Daudi细胞活力下降约55%（单独苯丁酸氮芥处理仅下降18%）。中性彗星实验证实，NU7026（1 μM）使苯丁酸氮芥诱导的DSB增加约2.5倍[2] - 激酶面板特异性：NU7026（10 μM）对28种其他激酶（如CDK1、CDK2、EGFR、PI3Kγ）的抑制率<10%，证实其对DNA-PK的选择性[1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
NU7026是一种新型DNA-PK（DNA修复酶DNA依赖性蛋白激酶）抑制剂。以 5 mg/kg 的剂量静脉注射给小鼠后，NU7026 经历了快速的血浆清除（0.108 L/h），这在很大程度上归因于广泛的代谢。通过 ip 或 po 给药 20 mg/kg 后，生物利用度分别为 20% 和 15%[3]。
裸鼠A549移植瘤放射增敏模型：6-8周龄雌性裸鼠皮下接种A549细胞，待肿瘤体积达~100 mm³后随机分为4组：（1）溶媒（5% DMSO/PBS，腹腔注射，每日1次）；（2）NU7026单药（25 mg/kg，腹腔注射，每日1次）；（3）单独照射（8 Gy，单剂量，肿瘤局部铅屏蔽保护）；（4）NU7026+照射（照射前1小时腹腔注射25 mg/kg NU7026，之后每日1次，共5天）。每周两次测量肿瘤体积：处理后21天，NU7026+照射组的肿瘤生长延迟（TGD）为12天，单独照射组为4天，NU7026单药组为2天。各组均无明显体重下降或死亡[3] - 裸鼠Raji移植瘤化疗增敏模型：雄性裸鼠皮下接种Raji细胞，待肿瘤体积达~100 mm³后处理：（1）溶媒（腹腔注射，每日1次）；（2）NU7026单药（25 mg/kg，腹腔注射，每日1次，共14天）；（3）苯丁酸氮芥单药（10 mg/kg，腹腔注射，每周1次，共2周）；（4）联合组（NU7026每日25 mg/kg + 苯丁酸氮芥每周10 mg/kg）。处理28天后，联合组肿瘤退缩率约40%，单药组均<5%。Ki-67（增殖标志物）染色显示联合组阳性细胞率下降约60%[2] |
| 酶活实验 |
使用 Q-Sepharose、S-Sepharose 和肝素琼脂糖进行层析后，从 HeLa 细胞核提取物中分离出哺乳动物 DNA-PK (500 ng/μL)。在聚丙烯 96 孔板中，在含有 25 mM HEPES (pH 7.4)、12.5 mM MgCl2、50 mM KCl、1 mM DTT、10% v/v 甘油、0.1% 的缓冲液中评估 DNA-PK (250 ng) 活性w/v NP-40 和 1 mg 底物 GST-p53N66，30°C，最终体积为 40 μL。将不同浓度的 NU7026 添加到测定混合物中（在 DMSO 中，最终浓度为 1% v/v）。孵育 10 分钟后，添加 30 聚体双链 DNA 寡核苷酸（终浓度为 0.5 ng/mL）和 ATP，使终浓度为 50 μM，以开始反应。振荡 1 小时后，向反应液中加入 150 L PBS，然后将 5 µL 转移至每孔含有 45 µl PBS 的 96 孔不透明白色板中。然后给予 GSTp53N66 底物 1 小时以与孔结合。由图形包 Prism 生成的 S 形图绘制了一系列化合物浓度中酶活性与化合物浓度的关系图，用于计算每次酶测定中每种化合物的 IC50。
纯化DNA-PK活性检测：将重组人DNA-PK（催化亚基+Ku70/Ku80异二聚体）与生物素化p53肽底物（1-39位氨基酸）及系列浓度的NU7026（0.01-10 μM）在反应缓冲液（50 mM Tris-HCl pH7.5、10 mM MgCl2、1 mM DTT、200 μM ATP）中孵育。加入[γ-³²P]ATP（10 μCi/反应）启动反应，30°C孵育30分钟。链霉亲和素包被滤膜捕获磷酸化肽，洗涤后通过液体闪烁计数检测放射性。根据剂量-反应曲线（抑制率vs.NU7026浓度）计算IC50[1] - ATM/ATR活性检测（选择性验证）：纯化ATM或ATR与各自底物（ATM：p53肽；ATR：Chk1肽）及NU7026（0.1-100 μM）在上述相同缓冲液和放射性ATP体系中孵育。检测放射性以计算抑制效率：NU7026在100 μM浓度下对两种激酶的抑制率均<5%[1] |
| 细胞实验 |
将 I83 细胞接种于含有 10% FBS (1.5×105 cells/mL) 的 RPMI 1640 培养基中，并用媒介物 (DMSO)、5 μM CLB、CLB IC50、10 μM NU7026 或两种药物的组合处理 0、6、 24 和 48 小时。测定细胞周期分布、细胞凋亡、DNA-PK磷酸化和γH2AX测定，并将它们表示为细胞周期各阶段的百分比。 DNA 含量使用配备 CellQuest 软件的 FACSCalibur 流式细胞仪进行分析[2]。
A549/H460克隆形成实验：细胞接种于6孔板（200-1000个细胞/孔），贴壁过夜后，用NU7026（0.5、1、2 μM）或溶媒（DMSO，终浓度0.1%）处理1小时，再进行照射（0、2、4、6、8 Gy）。照射后更换无药培养基，培养10-14天。甲醇固定菌落，结晶紫染色后计数（>50个细胞为一个菌落）。存活分数=（形成菌落数/接种细胞数×贴壁效率），通过线性二次模型拟合计算SER[1] - Raji/Daudi MTT活力实验：细胞接种于96孔板（5×10³个细胞/孔，含10% FBS的RPMI 1640培养基），同时加入NU7026（0.1-5 μM）和苯丁酸氮芥（0.1-10 μM），37°C（5% CO₂）孵育72小时。每孔加入10 μL MTT试剂（5 mg/mL），4小时后加入100 μL DMSO溶解甲臜。检测570 nm吸光度，活力（%）=（处理组吸光度/对照组吸光度）×100%。采用Chou-Talalay法判断协同效应（CI<1为协同）[2] - γ-H2AX免疫荧光实验：A549细胞接种于盖玻片，用NU7026（2 μM）+4 Gy照射处理，在照射后0、6、24、48小时固定细胞。0.2% Triton X-100透化，5% BSA封闭，抗γ-H2AX抗体4°C孵育过夜，再加入Alexa Fluor标记二抗。DAPI染核后，荧光显微镜计数每细胞焦点数（每组100个细胞）[1] |
| 动物实验 |
小鼠[3]
本研究使用的BALB/c小鼠均为雌性。腹腔注射（ip）和口服（po）给药时，NU7026分别配制成20 mg/kg和50 mg/kg的剂量，溶于含10% DMSO和5% Tween 20的生理盐水中。静脉注射（iv）时，NU7026配制成5 mg/kg的剂量，溶于含10%乙醇、25% PEG 200和5% Tween 20的生理盐水中。对照组动物仅注射溶剂。每个时间点，每组注射三只小鼠。在用氟烷进行短暂麻醉后，分别于给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6和24小时进行心脏穿刺采血。样品经1500 g离心2分钟获得血浆后，保存于20°C直至分析。NU7026以5 mg/kg的剂量注射用于尿排泄研究。在代谢笼中，收集24小时尿液，并保存于20°C直至需要使用。 A549异种移植放射增敏研究：将5×10⁶个A549细胞悬浮于Matrigel中，皮下注射至雌性裸鼠（每组n=6）。当肿瘤体积达到约100 mm³时，开始进行以下治疗：（1）载体：5% DMSO/PBS，腹腔注射，每日一次，连续5天；（2）NU7026：25 mg/kg（溶于5% DMSO/PBS），腹腔注射，每日一次，连续5天； （3）照射：8 Gy，单次剂量（使用铅屏蔽进行肿瘤局部照射）；（4）NU7026 + 照射：照射前 1 小时腹腔注射 25 mg/kg NU7026，然后每日一次，连续 4 天。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积（体积 = 长 × 宽² / 2）；每周称量小鼠体重以监测毒性[3] - Raji 异种移植化疗增敏研究：将 1×10⁷ 个 Raji 细胞皮下注射到雄性裸鼠（每组 n=6）中。当肿瘤体积达到约 100 mm³ 时：（1）载体：5% DMSO/PBS，腹腔注射，每日一次；（2）NU7026：25 mg/kg，腹腔注射，每日一次，连续 14 天； （3）苯丁酸氮芥：10 mg/kg，腹腔注射，每周一次，持续 2 周；（4）联合用药：NU7026（每日 25 mg/kg）+ 苯丁酸氮芥（每周 10 mg/kg）。每周测量两次肿瘤体积和体重；研究结束时切除肿瘤进行 Ki-67 染色[2] - 大鼠药代动力学研究：雄性 Wistar 大鼠（每时间点 n=3）通过两种途径接受 NU7026：（1）静脉推注：10 mg/kg（溶于 5% DMSO/PBS）；（2）灌胃：50 mg/kg（悬浮于 0.5% 甲基纤维素溶液中）。分别于给药后 0、0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8 和 12 小时从尾静脉采集血样（0.2 mL）。通过离心分离血浆，并采用高效液相色谱-串联质谱法 (HPLC-MS/MS) 测定 NU7026 的浓度。采用非房室模型分析计算药代动力学参数 [3] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
吸收：大鼠口服NU7026的生物利用度约为10%（基于口服50 mg/kg与静脉注射10 mg/kg后的AUC₀₋∞比较）。口服给药后血浆峰浓度（Cmax）为0.8 μM（1小时），静脉给药后为6.2 μM（0.083小时）[3]
- 分布：大鼠静脉注射NU7026后分布容积（Vd）约为1.5 L/kg，表明其组织渗透性中等。在A549异种移植瘤中，肿瘤与血浆浓度比约为0.7（腹腔注射25 mg/kg后1小时测得）[3] - 代谢：NU7026主要在大鼠肝微粒体中通过N-去甲基化（生成M1代谢物）和羟基化（生成M2代谢物）代谢。静脉注射后2小时，M1和M2分别占血浆代谢物的约60%和约25%；两种代谢物均无DNA-PK抑制活性[3] - 排泄：在大鼠中，静脉注射的NU7026（放射性标记）约45%在72小时内经粪便排泄，约30%经尿液排泄；未代谢药物占总排泄量的<10%，表明其在消除前经过广泛的代谢[3] - 半衰期：在大鼠中，NU7026的消除半衰期(t₁/₂)在静脉给药后约为1.5小时，口服给药后约为2.1小时[3] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
急性毒性：在小鼠中，单次腹腔注射高达 200 mg/kg 的 NU7026，7 天内未观察到死亡或明显的毒性反应（例如嗜睡、体重减轻 >5%）[3]
- 亚急性毒性：与溶剂对照组相比，接受 NU7026 治疗（25 mg/kg，腹腔注射，每日一次，持续 14 天）的小鼠，其体重、肝功能（ALT、AST）或肾功能（BUN、肌酐）均未发生显著变化。肝脏、肾脏、脾脏和肿瘤组织的组织病理学分析显示，未观察到药物引起的损伤[3] - 血浆蛋白结合率：NU7026 在大鼠和人血浆中的血浆蛋白结合率约为 90%（通过平衡透析法测定，浓度为 1–10 μM）[3] |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
2-(4-吗啉基)-4-苯并[h][1]苯并吡喃酮是一种含氧有机化合物和有机杂三环化合物。
氯苯丁酸氮芥 (CLB) 用于治疗慢性淋巴细胞白血病 (CLL)，但 CLB 耐药性的产生与 CLB 诱导的 DNA 损伤修复加速有关。磷酸化组蛋白 H2AX (γH2AX) 位于 DNA 双链断裂 (DSB) 位点；此外，它还能募集并保留损伤反应蛋白。这种损伤可通过非同源 DNA 末端连接 (NHEJ) 和/或同源重组修复 (HR) 途径进行修复。NHEJ 的关键组成部分是 DNA 依赖性蛋白激酶 (DNA-PK) 复合物。DNA-PK 活性的增加与 CLL 中的 CLB 耐药性相关。我们使用特异性DNA-PK抑制剂2-(吗啉-4-基)-苯并[h]色烯-4-酮 (NU7026) 来增强慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞对苯丁酸氮芥的敏感性。结果表明，在CLL细胞系(I83)和原代CLL淋巴细胞中，苯丁酸氮芥联合NU7026在无毒剂量下具有协同细胞毒活性。苯丁酸氮芥(CLB)处理可导致G2/M期阻滞，而NU7026可增强CLB诱导的G2/M期阻滞。此外，动力学时间进程表明，NU7026抑制了CLB诱导的DNA-PK活性，这直接证明了NU7026抑制DNA-PK功能的能力。 DSB（以γH2AX形式可视化）在CLB处理后24至48小时增强，CLB联合NU7026进一步增强了DSB，表明该联合用药的协同作用是由NU7026抑制DNA依赖性蛋白激酶（DNA-PK）进而抑制DSB修复介导的。[2] 本研究探讨了新型DNA修复酶DNA依赖性蛋白激酶（DNA-PK）抑制剂NU7026的体外放射增敏作用、药代动力学和代谢的时间依赖性。在10 μM的剂量下（该剂量本身对细胞无毒性），在CH1人卵巢癌细胞中，至少需要4小时的NU7026暴露联合3 Gy辐射才能产生显著的放射增敏作用。小鼠静脉注射5 mg/kg NU7026后，血浆清除率迅速（0.108 lh⁻¹），这主要归因于其广泛的代谢。腹腔注射（ip）和口服（po）20 mg kg⁻¹ 给药后的生物利用度分别为 20% 和 15%。对血浆和尿液中 NU7026 代谢谱的研究表明，该化合物发生多次羟基化反应。双羟基化代谢物的葡萄糖醛酸苷结合物是尿液中的主要排泄产物。通过以下事实证实了主要氧化位点为吗啉环的 C-2 位：NU7107（NU7026 的类似物，吗啉环的 C-2 和 C-6 位均被甲基化）的血浆清除率比 NU7026 慢四倍。进行的药代动力学模拟预测，为了获得放射增敏所需的药物暴露量，NU7026 必须每天以 100 mg kg(-1) ip 给药 4 次。[3] NU7026 是第一个合成的、选择性的 DNA-PK 抑制剂，靶向 DNA DSB 修复的非同源末端连接 (NHEJ) 途径。其作用机制涉及阻断 DNA-PK 介导的 Ku 蛋白和 Artemis 的磷酸化，而 Ku 蛋白和 Artemis 对非同源末端连接 (NHEJ) 至关重要 [1] - NU7026 的放射增敏作用归因于 DSB 的长期滞留：受照射的细胞无法有效修复 DSB，导致细胞凋亡增加和克隆形成存活率降低 [1] - 与苯丁酸氮芥（一种烷化剂）产生协同作用，是因为苯丁酸氮芥诱导 DSB，而 NU7026 抑制其修复，从而增强了对 DNA 修复能力正常的恶性 B 细胞的细胞毒性 [2] - NU7026 的口服生物利用度低（由于吸收不良和首过代谢），限制了其临床应用；体内疗效需要静脉或腹腔注射 [3] |
| 分子式 |
C17H15NO3
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|---|---|
| 分子量 |
281.3059
|
| 精确质量 |
281.105
|
| 元素分析 |
C, 72.58; H, 5.37; N, 4.98; O, 17.06
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| CAS号 |
154447-35-5
|
| 相关CAS号 |
503465-21-2 (NU-7107); 79105-88-7 (NU-7031); 842122-14-9 (NU-7200); 69541-04-4 (NU-7199)
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| PubChem CID |
9860529
|
| 外观&性状 |
Yellow solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
459.9±45.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
231.9±28.7 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.1 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.673
|
| LogP |
3.29
|
| tPSA |
42.68
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
0
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
1
|
| 重原子数目 |
21
|
| 分子复杂度/Complexity |
441
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
O=C1C2=CC=C3C=CC=CC3=C2OC(N4CCOCC4)=C1
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| InChi Key |
KKTZALUTXUZPSN-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C17H15NO3/c19-15-11-16(18-7-9-20-10-8-18)21-17-13-4-2-1-3-12(13)5-6-14(15)17/h1-6,11H,7-10H2
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| 化学名 |
2-morpholino-4H-benzo[h]chromen-4-one
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| 别名 |
DNA-PK Inhibitor II; LY-293646; DNA-PK Inhibitor II; 2-(Morpholin-4-yl)-benzo[h]chromen-4-one; NU-7026; 2-morpholino-4H-benzo[h]chromen-4-one; 2-morpholin-4-ylbenzo[h]chromen-4-one; LY 293646; LY293646; NU7026; NU-7026; NU 7026
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~1 mg/mL (~3.5 mM)
Water: <1 mg/mL Ethanol: <1 mg/mL |
|---|
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.5548 mL | 17.7740 mL | 35.5480 mL | |
| 5 mM | 0.7110 mL | 3.5548 mL | 7.1096 mL | |
| 10 mM | 0.3555 mL | 1.7774 mL | 3.5548 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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DNA-PK-IN-15
Lys(CO-C3-p-I-Ph)-OMe
DNA-PK-IN-13
DNA-PK-IN-14
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