Insulin Receptor (IC50 = 0.14 μM); IGF-1R (IC50 = 0.15 μM); FLT3 (IC50 = 0.42 μM); Tek (IC50 = 0.53 μM); FLT1 (IC50 = 0.6 μM)

体外活性：NVP-AEW541 还抑制 InsR、Tek、Flt1 和 Flt3，在纯化激酶/重组激酶结构域测定中，IC50 分别为 140 nM、530 nM、600 nM 和 420 nM。 NVP-AEW541 更具选择性，并且在细胞水平上比 InsR 更有效 27 倍。 NVP-AEW541 抑制 IGF-I 介导的 MCF-7 细胞存活、软琼脂和增殖，IC50 分别为 0.162 μM、0.105 μM 和 1.64 μM。 NVP-AEW541 还降低 NWT-21 细胞中磷酸-IGF-1R 和磷酸-PKB 的水平。 NVP-AEW541 在低血清培养基以及含 10% FBS 的培养基中显示出对 TC-71 肌肉骨骼肉瘤细胞的生长抑制作用。 NVP-AEW541 抑制细胞周期进程并诱导肉瘤细胞系（TC-71、SK-N-MC、SaoS-2、RD/18 和 RH4）中特异性 G1 期停滞。 NVP-AEW541可以抑制人神经母细胞瘤细胞的生长，IC50为0.4-6.8 μM。在这些细胞系中可以检测到亚二倍体部分的增加以及 S 和 G2-M 区室的消耗。 NVP-AEW541 驱动的 IGF-1R 抑制会导致神经母细胞瘤细胞中 Akt 磷酸化的减少，但不会减少 Erk1 和 Erk2 的磷酸化。 NVP-AEW541 抑制神经胶质瘤细胞生长并破坏 HIF1α 稳定启动的自分泌循环。最近的一项研究表明，NVP-AEW541 可抑制 PC3、DU145 和 22Rv1 前列腺癌细胞的增殖和活力，而无需相关的细胞死亡。 NVP-AEW541 降低 22Rv1 和 DU415 细胞中的磷酸 Akt 水平，但不降低 PC3 细胞中的磷酸 Akt 水平，而不影响总 Akt 水平，这表明 PTEN 状态可以决定 NVP-AEW541 与必需 Akt 的有效性。 NVP-AEW541 诱导的放射增敏取决于 Akt 激活状态。 NVP-AEW541 可以增加 PC3、DU145 和 22Rv1 细胞中的 H2AX 磷酸化（DSB 的测量）。激酶测定：NVP-AEW541 溶解在 DMSO (10 mM) 中并储存在 -20 °C。用 DMSO/水 1:1 新鲜配制稀释液。酶测定中 DMSO 的终浓度<0.5%。蛋白激酶测定在 96 孔板中于室温下进行，并通过添加 20 μL 125 mM EDTA 终止。随后，将 30 μL（c-Abl、c-Src、IGF-1R）反应混合物转移至用甲醇预浸泡 5 分钟的 Immobilon-PVDF 上，用水冲洗，然后用 0.5% H3PO4 浸泡 5 分钟，并安装在真空歧管。点样所有样品后，连接真空并用 200 μL 0.5 % H3PO4 冲洗每个孔。取出膜并在摇床上用 1.0% H3PO4 洗涤 4 次，用乙醇洗涤一次。干燥后，安装在 Packard TopCount 96 孔框架中，并添加 10 μL/孔的 Microscint，对膜进行计数。 IC50 值通过对四个浓度（通常为 0.01、0.1、1 和 10 μM）的 NVP-AEW541 的抑制百分比进行线性回归分析来计算，一式两份。 1 个蛋白激酶活性单位定义为 37 °C 下每毫克蛋白质每分钟从 [γ33P]ATP 转移至底物蛋白质的 1 nmol 33P。细胞测定：将 3 × 103 至 6 × 103 个细胞/孔接种到 96 孔板中，总培养基体积为 100 μL/孔。 24小时后添加浓度逐渐增加的NVP-AEW541，一式四份。 72 小时后，通过添加 25 μL/孔戊二醛 (20%) 固定细胞并在室温下孵育 10 分钟。然后用 200 μL/孔 H2O 洗涤细胞 2 次，并添加 100 μL 亚甲基蓝 (0.05%)。室温孵育 10 分钟后，用 200 μL/孔 H2O 洗涤细胞 3 次。添加 200 μL/孔 HCl (3%)，在板摇床上室温孵育 30 分钟后，在 650 nm 处测量吸光度。

NVP-AEW541（50 mg/kg，口服）导致基础和 IGF-I 诱导的受体以及 PKB 和 MAPK 磷酸化的消除，在 NWT-21 肿瘤异种移植物中 T/C 值为 14%。 NVP-AEW541 (50 mg/kg) 会导致 HTLA-230 和 SK-N-BE2c 异种移植物中的肿瘤缩小，且没有全身毒性迹象。 NVP-AEW541 可以抑制基质胶涂层室和 HTLA-230 异种移植物中的肿瘤侵袭。

NVP-AEW541溶解在10 mM DMSO中后保存在-20°C。使用 1:1 DMSO/水比例进行新鲜稀释。在酶测试中，最终DMSO浓度低于0.5%。在 96 孔板中，蛋白激酶测定在室温下进行，并通过添加 20 μL 125 mM EDTA 来完成。接下来，将 30 μL 反应混合物（c-Abl、c-Src 和 IGF-1R）置于 Immobilon-PVDF 上。将其在甲醇中预浸泡五分钟后安装在真空歧管上，用水冲洗，然后在0.5% H₃PO₄中浸泡五分钟。一旦每个样品都被点样，就连接真空，并用 200 μL 0.5% H3PO4 冲洗每个孔。取出膜并使用 1% H₃PO₄ 和乙醇在摇床上清洗四次。干燥后对膜进行计数，安装在 Packard TopCount 96 孔框架中，并添加 10 μL/孔的 Microscint。对 NVP-AEW541 在四个浓度（通常为 0.01、0.1、1 和 10 μM）下的抑制百分比进行线性回归分析以确定 IC50 值。单个蛋白激酶活性单位的测量为 37°C 下每分钟每毫克蛋白质从 [γ³³P]ATP 转移至底物蛋白的 1 纳摩尔 33P。

在 96 孔板中，每孔接种 3 × 10³ 至 6 × 10³ 细胞，每孔培养基体积为 100 μL。二十四小时后，添加四次剂量的 NVP-AEW541。 72 小时后，通过每孔添加 25 μL 20% 戊二醛并让其在室温下静置 10 分钟来固定细胞。用 200 μL/孔 H2O 清洗两轮后，向细胞中添加 100 μL 亚甲基蓝 (0.05%)。在室温下孵育 10 分钟后，用 200 μL/孔 H2O 洗涤细胞 3 次。每孔添加 200 μL HCl (3%) 并在平板摇床上室温孵育 30 分钟后，测量 650 nm 处的吸光度。

Female Harlan athymic nude mice weighing 18-25 g with NWT-21 cells
20, 30, or 50 mg/kg
Administered via p.o. twice daily

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[2]. Cancer Res . 2005 May 1;65(9):3868-76.

[3]. Clin Cancer Res . 2006 Nov 15;12(22):6772-80.

[4]. Biochem Pharmacol . 2010 Aug 15;80(4):455-62.

[5]. Int J Radiat Oncol Biol Phys . 2011 Sep 1;81(1):239-47.

C27H29N5O

439.55

439.23721057

475488-34-7

475488-34-7; 1618643-96-1 (HCl); 475489-16-8 (cis-isomer free base); 2320261-63-8 (cis-isomer HCl)

C1CN(C1)CC2CC(C2)N3C=C(C4=C(N=CN=C43)N)C5=CC(=CC=C5)OCC6=CC=CC=C6

AECDBHGVIIRMOI-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C27H29N5O/c28-26-25-24(21-8-4-9-23(14-21)33-17-19-6-2-1-3-7-19)16-32(27(25)30-18-29-26)22-12-20(13-22)15-31-10-5-11-31/h1-4,6-9,14,16,18,20,22H,5,10-13,15,17H2,(H2,28,29,30)

7-[3-(azetidin-1-ylmethyl)cyclobutyl]-5-(3-phenylmethoxyphenyl)pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-amine

AEW 541; AEW541; NVP-AEW541; NVP-AEW 541; NVP-AEW-541; AEW-541

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 20 mg/mL

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。