体外活性：NVP-AEW541 还抑制 InsR、Tek、Flt1 和 Flt3，在纯化激酶/重组激酶结构域测定中，IC50 分别为 140 nM、530 nM、600 nM 和 420 nM。 NVP-AEW541 更具选择性，并且在细胞水平上比 InsR 更有效 27 倍。 NVP-AEW541 抑制 IGF-I 介导的 MCF-7 细胞存活、软琼脂和增殖，IC50 分别为 0.162 μM、0.105 μM 和 1.64 μM。 NVP-AEW541 还降低 NWT-21 细胞中磷酸-IGF-1R 和磷酸-PKB 的水平。 NVP-AEW541 在低血清培养基以及含 10% FBS 的培养基中显示出对 TC-71 肌肉骨骼肉瘤细胞的生长抑制作用。 NVP-AEW541 抑制细胞周期进程并诱导肉瘤细胞系（TC-71、SK-N-MC、SaoS-2、RD/18 和 RH4）中特异性 G1 期停滞。 NVP-AEW541可以抑制人神经母细胞瘤细胞的生长，IC50为0.4-6.8 μM。在这些细胞系中可以检测到亚二倍体部分的增加以及 S 和 G2-M 区室的消耗。 NVP-AEW541 驱动的 IGF-1R 抑制会导致神经母细胞瘤细胞中 Akt 磷酸化的减少，但不会减少 Erk1 和 Erk2 的磷酸化。 NVP-AEW541 抑制神经胶质瘤细胞生长并破坏 HIF1α 稳定启动的自分泌循环。最近的一项研究表明，NVP-AEW541 可抑制 PC3、DU145 和 22Rv1 前列腺癌细胞的增殖和活力，而无需相关的细胞死亡。 NVP-AEW541 降低 22Rv1 和 DU415 细胞中的磷酸 Akt 水平，但不降低 PC3 细胞中的磷酸 Akt 水平，而不影响总 Akt 水平，这表明 PTEN 状态可以决定 NVP-AEW541 与必需 Akt 的有效性。 NVP-AEW541 诱导的放射增敏取决于 Akt 激活状态。 NVP-AEW541 可以增加 PC3、DU145 和 22Rv1 细胞中的 H2AX 磷酸化（DSB 的测量）。激酶测定：NVP-AEW541 溶解在 DMSO (10 mM) 中并储存在 -20 °C。用 DMSO/水 1:1 新鲜配制稀释液。酶测定中 DMSO 的终浓度<0.5%。蛋白激酶测定在 96 孔板中于室温下进行，并通过添加 20 μL 125 mM EDTA 终止。随后，将 30 μL（c-Abl、c-Src、IGF-1R）反应混合物转移至用甲醇预浸泡 5 分钟的 Immobilon-PVDF 上，用水冲洗，然后用 0.5% H3PO4 浸泡 5 分钟，并安装在真空歧管。点样所有样品后，连接真空并用 200 μL 0.5 % H3PO4 冲洗每个孔。取出膜并在摇床上用 1.0% H3PO4 洗涤 4 次，用乙醇洗涤一次。干燥后，安装在 Packard TopCount 96 孔框架中，并添加 10 μL/孔的 Microscint，对膜进行计数。 IC50 值通过对四个浓度（通常为 0.01、0.1、1 和 10 μM）的 NVP-AEW541 的抑制百分比进行线性回归分析来计算，一式两份。 1 个蛋白激酶活性单位定义为 37 °C 下每毫克蛋白质每分钟从 [γ33P]ATP 转移至底物蛋白质的 1 nmol 33P。细胞测定：将 3 × 103 至 6 × 103 个细胞/孔接种到 96 孔板中，总培养基体积为 100 μL/孔。 24小时后添加浓度逐渐增加的NVP-AEW541，一式四份。 72 小时后，通过添加 25 μL/孔戊二醛 (20%) 固定细胞并在室温下孵育 10 分钟。然后用 200 μL/孔 H2O 洗涤细胞 2 次，并添加 100 μL 亚甲基蓝 (0.05%)。室温孵育 10 分钟后，用 200 μL/孔 H2O 洗涤细胞 3 次。添加 200 μL/孔 HCl (3%)，在板摇床上室温孵育 30 分钟后，在 650 nm 处测量吸光度。

NVP-AEW541（50 mg/kg，口服）导致基础和 IGF-I 诱导的受体以及 PKB 和 MAPK 磷酸化的消除，在 NWT-21 肿瘤异种移植物中 T/C 值为 14%。 NVP-AEW541 (50 mg/kg) 会导致 HTLA-230 和 SK-N-BE2c 异种移植物中的肿瘤缩小，且没有全身毒性迹象。 NVP-AEW541 可以抑制基质胶涂层室和 HTLA-230 异种移植物中的肿瘤侵袭。

Cancer Cell.2004;5(3):231-9;Cancer Res.2005;65(9):3868-76;Clin Cancer Res.2006;12(22):6772-80.

1618643-96-1

475488-34-7; 475489-16-8 (cis-isomer free base);1618643-96-1 (HCl); 2320261-63-8 (cis-isomer HCl);

Typically exists as solid at room temperature

XBUCKSAZHWFXGF-NINBLYJGSA-N

InChI=1S/C27H29N5O.2ClH/c28-26-25-24(21-8-4-9-23(14-21)33-17-19-6-2-1-3-7-19)16-32(27(25)30-18-29-26)22-12-20(13-22)15-31-10-5-11-31/h1-4,6-9,14,16,18,20,22H,5,10-13,15,17H2,(H2,28,29,30)2*1H/t20-,22-

7-((1r,3r)-3-(azetidin-1-ylmethyl)cyclobutyl)-5-(3-(benzyloxy)phenyl)-7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-amine dihydrochloride

AEW-541 HCl AEW-541 dihydrochloride NVP-AEW541 NVP-AEW 541 NVP-AEW-541 AEW-541 AEW 541 AEW541

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。