AEW-541 cis-isomer (NVP-AEW541)

IGF-IR (IC50 = 0.15 ±0.036 μM); InsR (IC50 = 0.14±0.039 μM); Flt-3 (IC50 = 0.42±0.11 μM); PDGFR (IC50 = 2±0.61 μM); c-Src (IC50 = 2.4±0.38 μM); c-Kit (IC50 = 3.3±1.4 μM)

体外活性：NVP-AEW541 还抑制 InsR、Tek、Flt1 和 Flt3，在纯化激酶/重组激酶结构域测定中，IC50 分别为 140 nM、530 nM、600 nM 和 420 nM。 NVP-AEW541 更具选择性，并且在细胞水平上比 InsR 更有效 27 倍。 NVP-AEW541 抑制 IGF-I 介导的 MCF-7 细胞存活、软琼脂和增殖，IC50 分别为 0.162 μM、0.105 μM 和 1.64 μM。 NVP-AEW541 还降低 NWT-21 细胞中磷酸-IGF-1R 和磷酸-PKB 的水平。 NVP-AEW541 在低血清培养基以及含 10% FBS 的培养基中显示出对 TC-71 肌肉骨骼肉瘤细胞的生长抑制作用。 NVP-AEW541 抑制细胞周期进程并诱导肉瘤细胞系（TC-71、SK-N-MC、SaoS-2、RD/18 和 RH4）中特异性 G1 期停滞。 NVP-AEW541可以抑制人神经母细胞瘤细胞的生长，IC50为0.4-6.8 μM。在这些细胞系中可以检测到亚二倍体部分的增加以及 S 和 G2-M 区室的消耗。 NVP-AEW541 驱动的 IGF-1R 抑制会导致神经母细胞瘤细胞中 Akt 磷酸化的减少，但不会减少 Erk1 和 Erk2 的磷酸化。 NVP-AEW541 抑制神经胶质瘤细胞生长并破坏 HIF1α 稳定启动的自分泌循环。最近的一项研究表明，NVP-AEW541 可抑制 PC3、DU145 和 22Rv1 前列腺癌细胞的增殖和活力，而无需相关的细胞死亡。 NVP-AEW541 降低 22Rv1 和 DU415 细胞中的磷酸 Akt 水平，但不降低 PC3 细胞中的磷酸 Akt 水平，而不影响总 Akt 水平，这表明 PTEN 状态可以决定 NVP-AEW541 与必需 Akt 的有效性。 NVP-AEW541 诱导的放射增敏取决于 Akt 激活状态。 NVP-AEW541 可以增加 PC3、DU145 和 22Rv1 细胞中的 H2AX 磷酸化（DSB 的测量）。激酶测定：NVP-AEW541 溶解在 DMSO (10 mM) 中并储存在 -20 °C。用 DMSO/水 1:1 新鲜配制稀释液。酶测定中 DMSO 的终浓度<0.5%。蛋白激酶测定在 96 孔板中于室温下进行，并通过添加 20 μL 125 mM EDTA 终止。随后，将 30 μL（c-Abl、c-Src、IGF-1R）反应混合物转移至用甲醇预浸泡 5 分钟的 Immobilon-PVDF 上，用水冲洗，然后用 0.5% H3PO4 浸泡 5 分钟，并安装在真空歧管。点样所有样品后，连接真空并用 200 μL 0.5 % H3PO4 冲洗每个孔。取出膜并在摇床上用 1.0% H3PO4 洗涤 4 次，用乙醇洗涤一次。干燥后，安装在 Packard TopCount 96 孔框架中，并添加 10 μL/孔的 Microscint，对膜进行计数。 IC50 值通过对四个浓度（通常为 0.01、0.1、1 和 10 μM）的 NVP-AEW541 的抑制百分比进行线性回归分析来计算，一式两份。 1 个蛋白激酶活性单位定义为 37 °C 下每毫克蛋白质每分钟从 [γ33P]ATP 转移至底物蛋白质的 1 nmol 33P。细胞测定：将 3 × 103 至 6 × 103 个细胞/孔接种到 96 孔板中，总培养基体积为 100 μL/孔。 24小时后添加浓度逐渐增加的NVP-AEW541，一式四份。 72 小时后，通过添加 25 μL/孔戊二醛 (20%) 固定细胞并在室温下孵育 10 分钟。然后用 200 μL/孔 H2O 洗涤细胞 2 次，并添加 100 μL 亚甲基蓝 (0.05%)。室温孵育 10 分钟后，用 200 μL/孔 H2O 洗涤细胞 3 次。添加 200 μL/孔 HCl (3%)，在板摇床上室温孵育 30 分钟后，在 650 nm 处测量吸光度。

NVP-AEW541（50 mg/kg，口服）导致基础和 IGF-I 诱导的受体以及 PKB 和 MAPK 磷酸化的消除，在 NWT-21 肿瘤异种移植物中 T/C 值为 14%。 NVP-AEW541 (50 mg/kg) 会导致 HTLA-230 和 SK-N-BE2c 异种移植物中的肿瘤缩小，且没有全身毒性迹象。 NVP-AEW541 可以抑制基质胶涂层室和 HTLA-230 异种移植物中的肿瘤侵袭。

将 [γ³³P]ATP (1000 Ci/mmol) 中的 ³³P 掺入合适的底物中，用于测量在存在或不存在以下条件下蛋白激酶的活性：抑制剂。蛋白激酶测定在室温 (RT) 下于 96 孔板中使用下述参数进行。添加 20 μL 125 mM EDTA 结束测定。然后将反应混合物转移到已用甲醇预浸泡五分钟的 Immobilon-PVDF 上，用水冲洗，并用 0.5% H₃PO_{4< 浸泡五分钟。 /sub>，然后以 30 μL（c-Abl、c-Src 和 IGF-1R）或 40 μL（所有其他激酶）安装在真空歧管上。一旦每个样品被点样，连接真空，并用 200 μL 0.5% H3PO4 冲洗每个孔。取出膜，再次用乙醇清洗后，在 1% H3PO4 中振荡 4 次。干燥后对膜进行计数，安装在 Packard TopCount 96 孔框架中，并每孔添加 10 μL Microscint。通过对四种不同浓度（通常为 0.01、0.1、1 和 10 μM）的每种化合物的抑制百分比进行线性回归分析，确定 IC50 值。单个蛋白激酶活性单位的测量为在 37C 下每分钟每毫克蛋白质从 [γ³³P]ATP 转移到底物蛋白的一纳摩尔 ³³P[ 1]。}

在 96 孔板中，每孔接种 3000-6000 个细胞，每孔总共有 100 μL 培养基体积。二十四小时后，以递增的浓度一式四份添加该化合物。 72小时后，通过每孔添加25μL 20%戊二醛来固定细胞，并让它们在室温下静置10分钟。用 200μL/孔 H2O 洗涤两轮后，向细胞中加入 100μL 亚甲基蓝 (0.05%)。 10 分钟 RT 孵育期后，使用 200 μL/孔 H₂O 洗涤细胞三次。每孔添加 200 μL HCl (3%)，并在平板摇床上室温孵育 30 分钟后，测量 650 nm 处的吸光度[1]。

Mice: The Harlan athymic female nude mice are utilized. DMEM (high glucose, 4.5 g/L), 10% FCS, 1% L-glutamine, and 1% Na-pyruvate are used to cultivate NWT-21 cells. Five mice are first given a subcutaneous injection of 5×10⁶ cells/animal into their right flank. Tumors ranging in size from 500 to 800 mm³ are removed, and non-crotic regions are divided into 3 x 3 x 3 mm pieces for the in vivo effectiveness trial. One tumor fragment per animal is transplanted s.c. into the right flank after being cleaned in sterile PBS. Body weights and tumor volumes (length × width × height ×π/6) are calculated three times a week. The therapy group (NVP-AEW541) and the control group (vehicle only) are chosen by stratification on the first day of treatment (day 0) (8 animals per group, average tumor volume of about 95 mm³ per group). The animals receive oral treatment twice a day, seven days a week, using either 25 mM L(+)-tartaric acid (control group) or NVP-AEW541 (20, 30, or 50 mg/kg; 10 mL/kg dissolved in 25 mM L(+)-tartaric acid, therapy group). T/C%, or the mean increase in tumor volumes of treated animals divided by the mean increase in tumor volumes of control animals multiplied by 100, is the expression used to express antitumor activity. When the mean tumor volume approaches 1500 mm3, the experiment comes to an end.

[1]. In vivo antitumor activity of NVP-AEW541-A novel, potent, and selective inhibitor of the IGF-IR kinase. Cancer Cell. 2004 Mar;5(3):231-9.

[2]. Down-regulation of IGF-1 receptor activity by NVP-AEW541 has an antitumor effect on neuroblastoma cells in vitro and in vivo. Clin Cancer Res. 2006, 12(22), 6772-6780.

C27H29N5O

439.55

439.24

C, 73.78; H, 6.65; N, 15.93; O, 3.64

475489-16-8

475488-34-7; 475489-16-8 (cis-isomer free base);1618643-96-1 (HCl); 2320261-63-8 (cis-isomer HCl)

white solid powder

C1CN(C1)CC2CC(C2)N3C=C(C4=C(N=CN=C43)N)C5=CC(=CC=C5)OCC6=CC=CC=C6

AECDBHGVIIRMOI-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C27H29N5O/c28-26-25-24(21-8-4-9-23(14-21)33-17-19-6-2-1-3-7-19)16-32(27(25)30-18-29-26)22-12-20(13-22)15-31-10-5-11-31/h1-4,6-9,14,16,18,20,22H,5,10-13,15,17H2,(H2,28,29,30)

7-[3-(azetidin-1-ylmethyl)cyclobutyl]-5-(3-phenylmethoxyphenyl)pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-amine

AEW541 cis-isomer; NVP-AEW541; NVP-AEW 541; NVP-AEW-541; AEW-541; AEW 541; AEW541

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: 50~88 mg/mL(113.8~200.2 mM)
Ethanol: ~24 mg/mL (~54.6 mM)

Solubility in Formulation 1: ≥ 2.5 mg/mL (5.69 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 400 μL PEG300 and mix evenly; then add 50 μL Tween-80 to the above solution and mix evenly; then add 450 μL normal saline to adjust the volume to 1 mL.
Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH₂ O to obtain a clear solution.

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Solubility in Formulation 2: 2.5 mg/mL (5.69 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), suspension solution; with ultrasonication.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of 20% SBE-β-CD physiological saline solution and mix evenly.
Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.

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Solubility in Formulation 3: ≥ 2.5 mg/mL (5.69 mM) (saturation unknown) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (add these co-solvents sequentially from left to right, and one by one), clear solution.
For example, if 1 mL of working solution is to be prepared, you can add 100 μL of 25.0 mg/mL clear DMSO stock solution to 900 μL of corn oil and mix evenly..

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Solubility in Formulation 4: 30% PEG400+0.5% Tween80+5% propylene glycol: 20 mg/mL

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。