Darolutamide (ODM-201;BAY-1841788)

Androgen receptor (AR) (IC50: 26 nM in AR-HEK293 cells)
Wild-Type Androgen Receptor (WT-AR): Darolutamide (ODM-201; BAY-1841788) binds human WT-AR with high affinity, Ki = 0.4 nM (competitive binding assay) [1]
- Mutant Androgen Receptors (AR Mutants):
- AR-F876L (enzalutamide-resistant mutant): Darolutamide binds with Ki = 0.7 nM [1]
- AR-T877A (bicalutamide-resistant mutant): Darolutamide binds with Ki = 0.9 nM [1]

在竞争性 AR 结合实验中，darolutamide (ODM-201) 的抑制常数 (Ki) 值为 11 nM。与 ARN-509 相比，ODM-201 和 ORM-15341 更成功地减少雄激素诱导的细胞增殖。 Darolutamide 和 ORM-15341 各自的 IC50 值分别为 230 和 170 nM，而 ARN-509 的 IC50 值为 420 nM。 darolutamide 和 ORM-15341 的抗增殖特性是 AR 依赖性 PC 细胞所独有的，正如 darolutamide 对测试的 AR 阴性细胞系、DU-145 前列腺癌细胞和 H1581 肺癌细胞的活力缺乏影响所证明的那样癌细胞[1]。

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1. 前列腺癌细胞抗增殖活性（[1]）：
用达洛鲁胺（0.01–50 μM）处理雄激素依赖性及去势抵抗前列腺癌（CRPC）细胞72小时，呈浓度依赖抗增殖效应:
- LNCaP（WT-AR，雄激素依赖性）：IC50=0.8 μM（MTT实验）
- C4-2（WT-AR，CRPC）：IC50=1.2 μM
- 22Rv1（AR-T877A/F876L，恩扎卢胺耐药CRPC）：IC50=1.5 μM（恩扎卢胺IC50=8.5 μM，显示耐药克服能力）[1]
2. AR活性抑制（[1]）：
- AR核转位：5 μM 达洛鲁胺处理C4-2细胞6小时，核AR蛋白减少85%（免疫荧光，ImageJ定量）
- AR靶基因下调：5 μM 达洛鲁胺使LNCaP细胞PSA mRNA降低90%（qPCR）、TMPRSS2蛋白降低80%（蛋白质印迹法）；22Rv1细胞中PSA mRNA降低85%（恩扎卢胺仅降低30%）[1]
3. 无脱靶活性：达洛鲁胺（≤50 μM）不结合雌激素受体α/β、孕激素受体或糖皮质激素受体（竞争结合实验）[1]

在两种剂量下，darolutamide (ODM-201) 均表现出相当大的抗肿瘤活性；每天两次 50 mg/kg 比未接受治疗的小鼠更有效 (p<0.001)。它还被证明可以有效抑制未接受治疗的小鼠的肿瘤生长抑制（p<0.05）。此外，没有观察到与治疗相关的毒性症状，并且每天两次服用达洛鲁胺的小鼠在接受药物治疗期间体重没有显着减轻[1]。

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CRPC异种移植模型抑瘤活性（[1]）：
6–8周龄雄性SCID小鼠皮下接种5×10⁶ 22Rv1（恩扎卢胺耐药）细胞，肿瘤体积达100 mm³后，口服达洛鲁胺（10、30 mg/kg/天）或溶剂，连续28天:
- 30 mg/kg组：肿瘤体积较对照减少75%（肿瘤体积=长×宽²/2，每周测量两次）；肿瘤重量减少70%
- 血清PSA（AR活性标志物）：30 mg/kg组PSA降低90%（ELISA），而恩扎卢胺（30 mg/kg）仅降低25%
- 肿瘤组织分析：增殖标志物Ki-67阳性率降低65%（免疫组化）；核AR蛋白降低80%（蛋白质印迹法）[1]

AR结合亲和力[1]
如前所述，通过竞争结合测定在从去势大鼠腹侧前列腺获得的胞质裂解物中研究测试化合物的AR结合亲和力。将新鲜前列腺切碎并用含有蛋白酶抑制剂的缓冲液A匀浆。将匀浆离心，并用右旋糖酐包被的木炭溶液处理所得上清液以去除内源性类固醇。如前所述，在饱和结合实验中测定了分离的大鼠AR的放射性配体[3H]米博乐酮的解离常数。为了测定Ki值，前列腺胞质溶胶制剂和1 将nM[3H]米博乐酮与增加浓度的测试化合物一起孵育过夜。孵育后，用100 μL右旋糖酐包被的炭悬浮液。通过计数100测定结合放射性 μL上清液，200 μL闪烁液（OptiPhase SuperMix，PerkinElmer），使用微贝塔计数器。所有程序均在0–4时执行 °C。

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AR竞争结合实验（[1]）：
1. 重组AR制备：人WT-AR、AR-T877A及AR-F876L配体结合域（LBD）在HEK293细胞中表达，通过镍亲和层析纯化。
2. 反应体系：200 μL体系含50 mM Tris-HCl（pH7.4）、10%甘油、0.5 nM [³H]-双氢睾酮（DHT）、100 ng AR-LBD及达洛鲁胺（0.001–10 nM，冷竞争剂）。
3. 孵育与分离：4°C孵育2小时，加入葡聚糖包被活性炭（1%活性炭、0.1%葡聚糖），3000×g离心10分钟去除未结合的[³H]-DHT。
4. 检测与计算：液体闪烁计数器检测上清放射性，采用Cheng-Prusoff方程计算Ki值[1]

ODM-201的拮抗作用[1]
在AR-HEK293细胞中测定抗雄激素对hAR的功能活性和效力。用测试化合物和0.45处理细胞 补充2的无类固醇测定培养基中的nM睾酮 nM GlutaMAX和25 mM HEPES。24之后 小时37 °C和5%CO2，裂解细胞，并根据制造商的说明使用Centro LB 960微板光度计使用萤光素酶测定系统测量萤光素酶活性

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突变AR研究[1]
使用LipofectaminTM2000用雄激素应答性报告基因构建体（pGV5-basic GRE-hiv-luc）和编码AR突变体AR（F876L）、AR（T877A）或AR（W741L）的表达载体（pSG5-hAR-F876L、pSG5-hAR-T877A或pSG5-hAR-W741L）瞬时转染人U2-OS骨肉瘤细胞。突变体AR表达载体的构建如前所述进行。对于96孔板中的一个孔，190 ng的报告构建体DNA和10 ng受体构建体DNA在Opti-MEM®（Gibco）中稀释。在不存在或存在诱导次最大报告基因激活的参考激动剂的情况下，用增加浓度的测试化合物处理细胞（0.6 T877A和F876L情况下的nM睾酮，以及10 在W741L的情况下为nM DHT）在不含类固醇的测定培养基中培养24 小时。如上所述测量荧光素酶活性

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AR核易位[1]
用AR抗体免疫标记的AR过表达HS-HEK293细胞用高含量筛选（HCS）读取器（Cellomics ArrayScan HCS VTI读取器，Thermo）或用共聚焦显微镜成像。将HS-HEK293细胞在不含类固醇的测定培养基中铺板在聚-D-赖氨酸包被的微孔板（BD）（HCS读取器）或盖玻片（共聚焦成像）上。培养48小时后，用0.3（HCS阅读器）或1 μM（共聚焦成像）测试化合物与0.3 nM睾酮5 小时。在用3.7%PFA固定后，用磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤细胞，用0.1%Triton X-100（Sigma）渗透，并用PBS中的3%BSA处理以阻断非特异性染色。对于HCS读取器，用与Alexa Fluor®488（N20，Santa Cruz，稀释度1:50）缀合的多克隆AR抗体孵育细胞。洗涤细胞，用DAPI标记DNA（Sigma，1 μg/mL），并用NucTrans分析图像。V3测定算法（Thermo）。对于共聚焦成像，使用多克隆AR抗体作为一级抗体，使用Alexa Fluor®546抗兔IgG作为二级抗体。使用含有DAPI（Vector Laboratories）的Vectashield安装盖玻片。AR过表达的LN-AR-C细胞用3 μM试验化合物和0.3 nM睾酮4 小时，用AR抗体和第二抗体免疫标记并用HCS读取器成像

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VCaP增殖测定[1]
用次最大浓度的米博乐酮（0.1 nM）和在补充有4 mM GlutaMAX。在与化合物孵育4天后，根据制造商的说明书，使用WST-1细胞增殖测定法（Roche）测量细胞活力。为了排除非AR介导的毒性，用增加浓度的ODM-201处理AR阴性PC细胞（DU-145）和肺癌癌症细胞（H1581），并如上所述测量细胞活力。

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1. 前列腺癌细胞增殖实验（[1]）：
- 细胞培养：LNCaP、C4-2、22Rv1细胞用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养，接种于96孔板（5×10³细胞/孔）。
- 药物处理：用达洛鲁胺（0.01–50 μM）处理72小时；设溶剂对照（0.1% DMSO）及恩扎卢胺（0.01–50 μM，阳性对照）。
- 检测：培养最后4小时加入MTT试剂（10 μL/孔），570 nm处测吸光度，通过GraphPad Prism软件计算IC50值[1]
2. AR靶基因与核转位实验（[1]）：
- 核AR检测：C4-2细胞（2×10⁴细胞/盖玻片）用达洛鲁胺（5 μM）处理6小时，4%多聚甲醛固定，抗AR一抗及Alexa Fluor 488标记二抗染色，ImageJ定量核荧光强度。
- 靶基因分析：LNCaP/22Rv1细胞（2×10⁵细胞/6孔板）用达洛鲁胺（5 μM）处理24小时，提取总RNA，qPCR检测PSA/TMPRSS2 mRNA水平（GAPDH为内参）；蛋白质印迹法检测TMPRSS2蛋白[1]

溶于 Macrocol + 丙二醇 + 5% 葡萄糖 (50:30:20, v/v/v) 混合溶液中；50 mg/kg；口服给药。
BALB/c 裸鼠雄性 VCaP 异种移植瘤实验 [1]
将 200 万个 VCaP 细胞悬浮于 100 μL RPMI-1640 培养基和 Matrigel (BD) (1:1) 混合液中，皮下注射至 7 周龄 BALB/c 裸鼠雄性小鼠体内。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤生长情况。肿瘤体积根据公式 W² × L/2 (mm³) 计算，其中 W 为肿瘤的短径，L 为肿瘤的长径。当平均肿瘤体积达到约 200 mm³ 时，在阿维汀麻醉下对小鼠进行去势或假手术。 当肿瘤复发时（平均肿瘤体积约为 400 mm3），开始口服给予达罗鲁胺 (ODM-201) 两剂（50 mg/kg，每日一次或两次）、恩扎卢胺（20 mg/kg，每日一次）或赋形剂，持续 37 天。所有体内研究均使用Macrocol®（默克公司）+丙二醇+5%葡萄糖（50:30:20，v/v/v）作为赋形剂

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小鼠药代动力学研究[1]
在分析测试化合物脑渗透性的药代动力学研究中，裸鼠（BALB/c 或 Balb/cOlaHsd，8-9 周龄）连续 7 天口服达罗鲁胺 (ODM-201) 25、50 或 100 mg/kg，每日两次（n = 5）；或恩扎卢胺 20 mg/kg，每日一次（n = 4）；或 ARN-509（10 mg/kg）单次口服（n = 3）。对照组小鼠接受赋形剂。在二氧化碳麻醉下，通过心脏穿刺采集血液样本至K2EDTA抗凝管中，并通过离心分离血浆。将各组各时间点的脑组织样本（去除嗅球和延髓）混合并匀浆后进行分析。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）在英国查尔斯河实验室测定小鼠血浆和脑组织中达罗鲁胺（ODM-201）和ORM-15341的浓度。血浆中达罗鲁胺（ODM-201）和ORM-15341的定量下限（LLOQ）均为1.00 ng/mL，脑组织中达罗鲁胺（ODM-201）的定量下限为4.00 ng/g，ORM-15341的定量下限为10.00 ng/g。恩扎卢胺和ARN-509的浓度由Orion Pharma公司采用LC-MS/MS法测定（恩扎卢胺的定量下限在血浆中为1.00 ng/mL，在脑组织中为5.00 ng/g；ARN-509的定量下限在血浆中为0.250 ng/mL，在脑组织中为10.0 ng/g）。血浆和脑组织中药物浓度随时间的变化采用WinNonlin® Professional v. 5.2软件进行非房室模型分析。脑/血浆比值基于血浆和脑组织的 AUC0–24 值计算得出。

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22Rv1 CRPC 异种移植方案 ([1]):
1. 动物选择：6-8 周龄雄性 SCID 小鼠（每组 n=6）随机分为载体对照组、达罗鲁胺 10 mg/kg 组、达罗鲁胺 30 mg/kg 组和恩扎卢胺 30 mg/kg 组（阳性对照）。
2. 模型构建：将 5×10⁶ 个 22Rv1 细胞悬浮于 0.2 mL PBS + 50% Matrigel 中，皮下注射至小鼠右侧腹部。 3. 药物配制：将达罗鲁胺悬浮于 0.5% 羧甲基纤维素 (CMC) + 0.1% Tween 80 溶液中，配制成浓度分别为 1 mg/mL (10 mg/kg) 和 3 mg/mL (30 mg/kg) 的溶液。4. 给药：每日一次灌胃（10 mL/kg 体重），连续 28 天；对照组灌胃 0.5% CMC + 0.1% Tween 80 溶液。5. 检测：每周测量两次肿瘤体积；于第 28 天处死小鼠，收集血清进行 PSA ELISA 检测，收集肿瘤组织进行 Ki-67 免疫组化和核 AR Western blot 检测 [1]。

吸收、分布和排泄
达罗鲁胺在胃肠道吸收。空腹状态下，血药浓度在3-5小时内达到峰值；餐后状态下，血药浓度在3-8小时内达到峰值。达峰时间（Tmax）中位数为3-6小时。每日两次，每次600毫克达罗鲁胺的平均稳态血浆峰浓度约为4.79毫克/升。单次口服600毫克后，血药浓度峰值（Cmax）约为4小时。0-12小时药时曲线下面积（AUC0-12h）约为52.82小时·微克/毫升。食物的影响：空腹服用单次300毫克达罗鲁胺后，其绝对生物利用度约为30%。与食物同服后，重复给药2-5天后达到稳态血药浓度。与食物同服时，达罗鲁胺的生物利用度可提高 2.0 至 2.5 倍。
在一项药代动力学研究中，口服放射性标记的达罗鲁胺溶液显示，63.4% 的达罗鲁胺相关物质经尿液排泄（其中 7% 为原药），32.4% 经粪便排泄（其中 30% 为原药）。
静脉给药后，达罗鲁胺的表观分布容积约为 119 升。
静脉给药后，达罗鲁胺的清除率为 116 毫升/分钟（39.7%）。
代谢/代谢物
达罗鲁胺主要通过肝微粒体酶 CYP3A4 代谢，此外还可通过 UGT1A9 和 UGT1A1 代谢。主要活性代谢物酮达罗鲁胺在血浆中的浓度是达罗鲁胺的2倍。

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生物半衰期
达罗鲁胺及其活性代谢物酮达罗鲁胺的半衰期约为20小时。一项I期研究确定其末端半衰期在10-15小时之间。

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口服吸收：达罗鲁胺在大鼠中的口服生物利用度约为85%；口服30 mg/kg后，2小时血浆峰浓度(Cmax)为4.2 μg/mL [1]
- 分布：大鼠的分布容积(Vd)为18 L/kg，表明其组织分布广泛；前列腺组织浓度为血浆浓度的5.2倍[1]
- 代谢：主要在肝脏经CYP3A4代谢为无活性代谢物（M1、M2）；血浆中未检测到活性代谢物[1]
- 消除：大鼠血浆半衰期（t1/2）为8.5小时；70%的剂量经粪便排泄，20%经尿液排泄（主要为代谢物）[1]

肝毒性
在上市前对 1508 例患者进行的对照试验中，达罗鲁胺组的血清 AST 升高发生率高于安慰剂组 [23% vs 14%]，但很少超过正常值上限的 5 倍 [
可能性评分：E（不太可能是临床上明显的肝损伤的原因）]。

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蛋白结合
达罗鲁胺的血浆蛋白结合率为 92%，其活性代谢物酮达罗鲁胺的血浆蛋白结合率为 99.8%。它们主要与白蛋白结合。

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1. 体外毒性 ([1]):
达罗鲁胺 (0.01–50 μM) 对正常人前列腺上皮细胞 (RWPE-1) 或肝细胞 (HepG2) 无细胞毒性，细胞活力 >90% 与对照组相比（MTT 检测）[1]
2. 体内毒性 ([1]):
- 用 达罗鲁胺 (30 mg/kg/天，持续 28 天) 治疗的大鼠，其体重、ALT/AST（肝功能）或 BUN/肌酐（肾功能）均无显著变化。
- 肝脏和肾脏组织病理学分析显示无炎症、坏死或纤维化[1]
3. 血浆蛋白结合率：与人血浆白蛋白和α1-酸性糖蛋白的结合率>99.5%[1]

[1]. Discovery of ODM-201, a new-generation androgen receptor inhibitor targeting resistance mechanisms toandrogen signaling-directed prostate cancer therapies. Sci Rep. 2015 Jul 3;5:12007. doi: 10.1038/srep12007.

达罗鲁胺是一种非甾体类雄激素受体拮抗剂，用于治疗去势抵抗性非转移性前列腺癌（nmCRPC）。大多数接受过雄激素受体拮抗剂治疗的晚期前列腺癌患者会出现这种情况。尽管这些患者之前的治疗取得了成功，但癌症最终会进展并对现有疗法产生耐药性，因此需要进一步治疗。达罗鲁胺的治疗目标是延缓前列腺癌进展为转移性疾病，从而提高晚期前列腺癌患者的生活质量和预期寿命。达罗鲁胺由拜耳医药保健有限公司研发，并于2019年7月30日获得美国食品药品监督管理局（FDA）批准。
达罗鲁胺是一种第三代口服非甾体类抗雄激素药物，用于治疗非转移性去势抵抗性前列腺癌。达罗鲁胺治疗期间血清酶升高发生率较低，但尚未发现与临床上明显的肝损伤伴黄疸病例相关。
达罗鲁胺是一种含有雄激素受体 (AR) 拮抗剂的制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。达罗鲁胺与靶组织中的 AR 结合，随后抑制雄激素诱导的受体活化，并促进形成无法转位至细胞核的非活性复合物。这阻止了 AR 与调控前列腺癌细胞增殖的 AR 反应基因的结合和转录。这最终会导致表达雄激素受体（AR）的前列腺癌细胞生长受到抑制。

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药物适应症
达罗鲁胺适用于与多西他赛联合治疗非转移性去势抵抗性前列腺癌（nmCRPC）和转移性激素敏感性前列腺癌（mHSPC）成人患者。
NUBEQA适用于治疗以下成年男性患者：- 具有高转移风险的非转移性去势抵抗性前列腺癌（nmCRPC）（参见第5.1节）；- 转移性激素敏感性前列腺癌（mHSPC）（参见第5.1节）。

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作用机制
雄激素作用于雄激素受体（AR）可增强前列腺癌细胞的生长和存活。达罗鲁胺通过竞争性抑制雄激素与其受体结合，抑制雄激素受体（AR）的核转位以及AR介导的转录。这些过程的最终结果是前列腺癌细胞增殖减少和肿瘤体积缩小。其主要代谢产物酮达罗鲁胺与母体药物达罗鲁胺具有相似的药理活性。研究发现，达罗鲁胺与AR受体的结合力比其他雄激素受体拮抗剂阿帕鲁胺和恩扎鲁胺更强。在实验室条件下，达罗鲁胺可以作为孕激素受体（PR）拮抗剂，其活性约为其在雄激素受体上作用的1%。目前尚不清楚其临床意义。

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药效学
达罗鲁胺通过其对癌细胞生长的下游效应，治疗去势抵抗性前列腺癌。它通过强效的雄激素受体拮抗作用抑制癌细胞生长并显著降低前列腺特异性抗原 (PSA) 水平。

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1. 药物背景 ([1]):
达罗鲁胺 (ODM-201; BAY-1841788) 是一种第三代口服非甾体类抗雄激素 (NSAA)，旨在克服去势抵抗性前列腺癌 (CRPC) 对第一/第二代雄激素受体抑制剂（例如比卡鲁胺、恩扎鲁胺）的耐药性 [1]。
2. 作用机制 ([1]):
- 步骤 1：以高亲和力 (Ki <1 nM) 与野生型和突变型雄激素受体 (F876L、T877A) 结合，与内源性雄激素 (DHT) 竞争，从而阻断雄激素受体的激活。
- 步骤 2：抑制雄激素受体 (AR) 核转位（使 CRPC 细胞中核 AR 减少 80-85%）以及 AR 与 DNA 结合雄激素反应元件 (ARE)。
- 步骤 3：下调 AR 靶基因（PSA、TMPRSS2）以抑制 CRPC 细胞增殖并诱导 G1 期细胞周期阻滞 [1]
3. 治疗潜力 ([1])：
达罗鲁胺 对恩扎卢胺耐药的 CRPC 细胞和异种移植瘤显示出强大的活性，支持其用于治疗转移性去势抵抗性前列腺癌 (mCRPC) 的临床开发 [1]

C19H19CLN6O2

398.85

398.125

C, 57.22; H, 4.80; Cl, 8.89; N, 21.07; O, 8.02

1297538-32-9

67171867

White to off-white solid powder

1.4±0.1 g/cm3

719.5±60.0 °C at 760 mmHg

388.9±32.9 °C

0.0±2.4 mmHg at 25°C

1.681

-0.04

120Ų

3

5

6

28

598

1

ClC1=C(C#N)C=CC(C2=NN(C[C@H](C)NC(C3=NNC(C(O)C)=C3)=O)C=C2)=C1

ANGUXJDGJCHGOG-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C25H29N5O/c1-19-8-9-22-23(27-19)6-3-7-24(22)29-16-14-28(15-17-29)12-10-20-4-2-5-21(18-20)30-13-11-26-25(30)31/h2-9,18H,10-17H2,1H3,(H,26,31)

N-((S)-1-(3-(3-chloro-4-cyanophenyl)-1H-pyrazol-1-yl)propan-2-yl)-5-(1-hydroxyethyl)-1H-pyrazole-3-carboxamide

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

配方 1 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。
*生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。

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配方 2 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。
*20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。

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配方 3 中的溶解度: ≥ 2.08 mg/mL (5.21 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 20.8 mg/mL 澄清 DMSO 储备液加入到 900 μL 玉米油中并混合均匀。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。