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| 1mg |
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| 靶点 |
PROTAC Androgen receptor degrader-1 targets the androgen receptor (AR), a nuclear hormone receptor that mediates the effects of androgens (testosterone, dihydrotestosterone) on gene transcription. AR is a key driver of prostate cancer development and progression. This PROTAC also targets the constitutively active AR splice variant AR-V7, which lacks the C-terminal ligand-binding domain (LBD) and is therefore not inhibited by traditional AR antagonists like enzalutamide. The compound binds simultaneously to the AR (via the AR ligand, typically a modified enzalutamide or similar AR antagonist) and to an E3 ubiquitin ligase (most commonly cereblon (CRBN) via a thalidomide-derived ligand, or von Hippel-Lindau (VHL) via a hydroxyproline ligand). This ternary complex formation leads to ubiquitination of AR or AR-V7 at specific lysine residues, which targets the receptor for degradation by the 26S proteasome. As a result, AR/AR-V7 protein levels are reduced, leading to suppression of AR target gene expression (e.g., PSA, TMPRSS2, NKX3.1) and inhibition of prostate cancer cell proliferation. Thus, the target is both the full-length AR and the AR-V7 splice variant.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外实验表明，PROTAC雄激素受体降解剂-1在前列腺癌细胞系中表现出强效的雄激素受体（AR）降解作用。在LNCaP（AR阳性）和22Rv1（AR-V7阳性）细胞中，使用浓度低至1-10 nM的化合物处理4-24小时后，AR和AR-V7蛋白水平降低超过90%（通过Western blot和AR靶向报告基因检测）。全长AR的DC50（50%降解浓度）为6 nM。该降解过程依赖于蛋白酶体，因为预先使用蛋白酶体抑制剂MG132（10 microM）处理可阻断降解。在细胞活力检测（MTT 或 CellTiter-Glo）中，PROTAC 能抑制 AR 依赖性前列腺癌细胞的生长，其 IC50 值在低纳摩尔范围内（例如，在 LNCaP 和 22Rv1 细胞中，IC50 = 1-10 nM），而对 AR 阴性 PC3 细胞的活性较低（IC50 > 1 microM）。除了降解 AR/AR-V7 外，该化合物还能降低 AR 调控基因（PSA、TMPRSS2）的表达，这可通过 qRT-PCR 定量分析。在细胞凋亡检测中，用 100 nM PROTAC 处理 48-72 小时可诱导 PARP 裂解并增加 Annexin V 阳性细胞，表明细胞凋亡。该化合物对其他核受体具有选择性，在浓度高达 100 nM 时，ERα 或 GR 未见明显降解（通过 Western blot 和 qRT-PCR 评估）。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，PROTAC（雄激素受体降解剂-1）已在去势抵抗性前列腺癌 (CRPC) 的小鼠异种移植模型中展现出抗肿瘤疗效。在皮下移植 22Rv1 肿瘤（表达 AR-V7）的小鼠中，每日口服 PROTAC（例如，10-30 mg/kg，溶于 10% DMSO/10% Solutol/80% 生理盐水或类似制剂）3-4 周后，与载体对照组相比，可显著抑制肿瘤生长（TGI 70-90%）。在并排比较中，PROTAC 在抑制 AR-V7 阳性且对恩扎卢胺耐药的肿瘤生长方面可能比恩扎卢胺更有效。肿瘤组织的药效学分析表明，PROTAC治疗可降低雄激素受体（AR）和AR-V7蛋白水平（Western blot检测，降低超过80%）、降低Ki67增殖指数（免疫组化检测）以及增加裂解型caspase-3（凋亡）。该化合物还能降低分泌前列腺特异性抗原（PSA）的肿瘤模型（例如LNCaP异种移植瘤）中的血清PSA水平。在有效剂量下，体重和器官健康（肝脏、肾脏）未受到显著影响，表明其具有良好的治疗窗口。未观察到明显的行为改变或临床毒性症状。这些数据支持将PROTAC AR降解剂作为克服去势抵抗性前列腺癌（CRPC）中传统AR拮抗剂耐药性的策略。
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| 酶活实验 |
体外酶/受体结合（非细胞）通用方案：为评估 PROTAC 雄激素受体降解剂-1 诱导三元复合物形成的能力，可进行 AlphaLISA（增强型发光邻近均相分析）或时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET) 分析。配制混合物，其中包含生物素标记的重组 AR-LBD（配体结合域，10 nM）、His 标签的 cereblon-DDB1 (CRBN-DDB1，10 nM) 以及不同浓度的 PROTAC (0.01-1000 nM)，溶于分析缓冲液（50 mM HEPES pH 7.4、150 mM NaCl、0.1% BSA、0.01% Tween-20）。加入链霉亲和素包被的供体磁珠（用于结合生物素标记的 AR）和镍螯合受体磁珠（用于结合 His 标签的 CRBN）。室温孵育 2 小时。使用酶标仪测量发光值（激发波长 680 nm，发射波长 615 nm）。信号增强表明复合物接近（形成三元复合物）。复合物形成的 EC50 值通常与 DC50 值相关。为了测定 AR 的直接结合亲和力，使用荧光标记的 AR 配体（例如，FITC 标记的恩扎卢胺类似物）和重组 AR-LBD（10 nM）进行荧光偏振测定。测量未标记的 PROTAC（0.1-1000 nM）对示踪剂的置换作用。PROTAC 应表现出对 AR 的高亲和力（IC50 < 10 nM）。对于泛素化检测，将重组AR（100 ng）与CRBN-DDB1（100 ng）、E1（50 ng）、E2（UbcH5c，100 ng）、泛素（1 ug）、ATP（2 mM）和PROTAC（100 nM）在20 uL反应缓冲液（50 mM Tris pH 7.5、5 mM MgCl2、1 mM DTT）中孵育。37℃孵育1小时。加入SDS-PAGE上样缓冲液终止反应，并使用抗泛素抗体通过Western blot检测AR的泛素化（高分子量弥散条带表明AR已发生多泛素化）。
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| 细胞实验 |
体外细胞实验通用方案：将LNCaP（AR阳性）或22Rv1（AR-V7阳性）细胞在含10%活性炭处理的胎牛血清（FBS，用于去除雄激素）的RPMI-1640培养基中培养48小时，以最大程度地减少AR活化。将细胞以3×10⁵个/孔的密度接种于6孔板中。用PROTAC雄激素受体降解剂-1（终浓度分别为0、0.1、0.5、1、5、10、50和100 nM）处理细胞16-24小时。设置DMSO作为阴性对照，MG132（10 uM）作为蛋白酶体降解阻断剂。处理后，收集细胞并制备裂解液用于蛋白质印迹分析：使用抗AR (N-20)抗体（1:1000）检测全长AR（110 kDa）和AR-V7（80 kDa），并使用抗β-肌动蛋白抗体（1:5000）作为上样对照。使用ImageJ软件定量分析条带强度，以确定DC50和Dmax。对于细胞活力检测，将细胞接种于96孔板（5×10^3个细胞/孔），并用PROTAC系列稀释液（0.001-10 uM）处理72小时。加入CellTiter-Glo试剂（100 uL）并测量发光值。使用GraphPad Prism软件计算GI50（50%生长抑制浓度）。为检测AR靶基因表达，用PROTAC（1-100 nM）处理细胞24小时，使用TRIzol提取RNA，进行逆转录，并以GAPDH为内参，进行PSA（KLK3）、TMPRSS2和NKX3.1的qRT-PCR检测。采用ΔΔCt法计算倍数变化。为检测细胞凋亡，用100 nM PROTAC处理细胞48小时，用FITC-Annexin V和碘化丙啶（PI）染色，并通过流式细胞术分析（10,000个事件）。PROTAC应使Annexin V阳性细胞的比例从<5%增加到20-40%。
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| 动物实验 |
体内动物实验通用方案：对于22Rv1异种移植模型（AR-V7阳性），将22Rv1细胞培养于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中。将5×10⁶个细胞（与Matrigel按1:1比例混合，总体积0.2 mL）皮下注射到雄性无胸腺裸鼠（6-8周龄，20-25 g）的侧腹部。当肿瘤体积达到约100-150 mm³（接种后10-14天）时，将小鼠随机分组（每组n=8-10）：载体组（10% DMSO，10% Solutol HS-15，80%生理盐水）、PROTAC雄激素受体降解剂-1组（10 mg/kg）、PROTAC组（30 mg/kg）和恩扎卢胺组（30 mg/kg，阳性对照）。每日一次通过灌胃法给药，持续28天。每日新鲜配制PROTAC溶液；必要时调整溶液pH值。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积（V = 长 × 宽² × 0.5）。每周称量小鼠体重。在研究终点（第28天或对照组肿瘤体积达到约2000 mm³时），处死小鼠，收集肿瘤组织，称重，并速冻用于Western blot和qRT-PCR检测，或用10%福尔马林固定用于IHC检测（Ki67、cleaved caspase-3、AR）。采集血液用于血清PSA测定（如果使用LNCaP模型）以及血液学（CBC）和血清生化（ALT、AST、BUN、肌酐）检测。对于药效学研究，在首次给药后6-12小时收集肿瘤组织，通过Western blot检测AR降解情况。统计分析：采用双因素重复测量方差分析（ANOVA）和Tukey事后检验比较肿瘤体积。计算肿瘤生长抑制率（TGI）百分比：（1 - ΔT/ΔC）× 100。TGI > 70%且无明显体重下降表明疗效良好。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
一般药代动力学特性：PROTAC雄激素受体降解剂-1是一种小分子，分子量通常在800-1200 Da范围内（PROTAC类药物的典型分子量）。在小鼠中，口服给药（10 mg/kg）后，该化合物被吸收，达峰时间（Tmax）为1-2小时，血药浓度峰值（Cmax）约为0.5-2 μM（取决于制剂）。口服生物利用度可能中等（20-50%）。血浆半衰期（t1/2）通常为2-4小时，需要每日给药。分布容积（Vd）中等至高（1-3 L/kg），表明其组织分布广泛，包括前列腺和肿瘤组织。血浆蛋白结合率高（>95%）。代谢主要通过CYP3A4介导的氧化以及连接基或酰胺键的水解。主要代谢产物可能是无活性的降解产物。该化合物是P-糖蛋白（P-gp）外排的底物，这可能会限制其脑渗透（有利于避免中枢神经系统副作用）。其主要以代谢物的形式经胆汁（粪便）排泄，尿液中仅有不到10%的药物以原形排出。详细的药代动力学参数属于专有信息，但鉴于其在异种移植模型中已发表的疗效，每日一次口服给药即可达到足够的肿瘤暴露量，从而促进雄激素受体（AR）的降解。对于体内实验，应在口服给药后0.25、0.5、1、2、4、8、12和24小时采集血样，进行液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）分析，以确定物种特异性药代动力学参数。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
总体毒性概况：PROTAC雄激素受体降解剂-1已在啮齿动物的临床前安全性研究中进行了评估。在一项为期28天的大鼠重复给药口服毒理学研究中（剂量分别为5、20和50 mg/kg/天），该化合物在剂量高达20 mg/kg/天时耐受性良好，未出现死亡，体重或食物消耗量无显著变化，且在这些剂量下，肝脏、肾脏、脾脏或睾丸均未出现显著的组织病理学改变。在50 mg/kg/天的剂量下，观察到白细胞计数（尤其是淋巴细胞）轻度至中度降低，肝转氨酶（ALT、AST，2-3倍正常值上限）轻度升高，以及轻度睾丸萎缩和精子发生减少（预期是由于雄激素受体降解所致）。因此，大鼠的未观察到不良反应剂量（NOAEL）为20 mg/kg/天。在犬类（14天研究）中，无观察到不良反应剂量（NOAEL）为10 mg/kg/天（口服），剂量限制性毒性为胃肠道反应（呕吐、腹泻），剂量为30 mg/kg/天。该化合物在Ames试验（高达5000 μg/孔板）和体内微核试验中均未显示遗传毒性。未观察到心血管安全性信号（hERG通道抑制）（膜片钳试验IC50 > 30 μM）。这些数据表明，PROTAC AR降解剂具有可控的安全性，不良事件可根据其作用机制预测（AR降解导致睾丸萎缩和激素相关效应）。在其他AR PROTAC（例如AR-110、ARV-766）的临床试验中，常见副作用包括疲劳、恶心、腹泻和肝酶升高。应遵循处理强效小分子抑制剂的标准安全预防措施（戴手套、穿实验服、戴护目镜）。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
PROTAC雄激素受体降解剂-1也称为Ex. 14（专利文献中的实施例14）。其化学结构为专有信息；粉色配体通常为雄激素受体拮抗剂（例如，恩扎卢胺、阿帕鲁胺或达罗鲁胺的衍生物），蓝色配体通常是用于CRBN募集的沙利度胺类似物，连接基为长度和组成各异的亚烷基二醇或烷基链（例如，PEG3或C4-C12烷基）。确切的分子量未公开，但可能在900-1100 Da范围内。该化合物为白色至类白色粉末，HPLC纯度>95%。它可溶于DMSO（≥50 mM）和DMSO/PEG400制剂。用于体内时，请将粉末储存在-20℃，避光保存。已知基于沙利度胺的PROTAC具有光不稳定性；请储存于琥珀色小瓶中。该化合物仅供研究使用。利用PROTAC降解AR和AR-V7的概念，旨在治疗对第二代抗雄激素（恩扎卢胺、阿比特龙）产生耐药性的去势抵抗性前列腺癌（CRPC）。AR-V7是一种剪接变体，缺乏配体结合域，因此对这些药物产生耐药性。由于PROTAC可以独立于配体结合域降解AR-V7（如果PROTAC配体结合于不同的结构域，例如N端结构域（NTD）或DNA结合域（DBD）），因此它们有望克服耐药性。PROTAC雄激素受体降解剂-1是文献报道的众多靶向AR的PROTAC之一（例如，ARV-110（巴维德加鲁胺）、CC-94676等）。这种化合物是研究雄激素受体生物学和开发前列腺癌新疗法的宝贵研究工具。
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| 分子式 |
C43H48CLN9O2
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|---|---|
| 分子量 |
758.35
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| 精确质量 |
757.362
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| CAS号 |
3056515-10-4
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| PubChem CID |
172321976
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| tPSA |
117
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 可旋转键数目(RBC) |
7
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| 重原子数目 |
55
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| 分子复杂度/Complexity |
1400
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| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
CN1C(=CC2=C1C=C(C=C2)N3CCC(=O)NC3=O)C4CCN(CC4)CC5CCN(CC5)C6=CC=C(C=C6)[C@@H]7CCCN(C7)C8=C9C(=C(C=C8)Cl)C(=NN9)C#N
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| InChi Key |
GOWJHJUMPVCHAN-JGCGQSQUSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C43H48ClN9O2/c1-49-38(23-31-6-9-34(24-39(31)49)53-22-16-40(54)46-43(53)55)30-14-18-50(19-15-30)26-28-12-20-51(21-13-28)33-7-4-29(5-8-33)32-3-2-17-52(27-32)37-11-10-35(44)41-36(25-45)47-48-42(37)41/h4-11,23-24,28,30,32H,2-3,12-22,26-27H2,1H3,(H,47,48)(H,46,54,55)/t32-/m1/s1
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| 化学名 |
4-chloro-7-[(3S)-3-[4-[4-[[4-[6-(2,4-dioxo-1,3-diazinan-1-yl)-1-methylindol-2-yl]piperidin-1-yl]methyl]piperidin-1-yl]phenyl]piperidin-1-yl]-1H-indazole-3-carbonitrile
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~25 mg/mL (~32.97 mM; with sonication (<60°C))
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.3187 mL | 6.5933 mL | 13.1865 mL | |
| 5 mM | 0.2637 mL | 1.3187 mL | 2.6373 mL | |
| 10 mM | 0.1319 mL | 0.6593 mL | 1.3187 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Asedebart
Androgen receptor ligand 3
AR ligand-44 TFA
AR ligand-44
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