| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Fibroblast Activation Protein (FAP). OncoFAP binds to human FAP with a dissociation constant (KD) of 0.68 nmol/L as measured by fluorescence polarization, and to murine FAP with a KD of 11.6 nmol/L. In enzyme inhibition assays, OncoFAP inhibits human FAP with an IC50 of 16.8 nmol/L and murine FAP with an IC50 of 14.5 nmol/L. [1]
OncoFAP targets fibroblast activation protein (FAP), a cell surface serine protease that is overexpressed in the tumor stroma of many cancers, including breast, lung, colon, and pancreatic cancers, but is largely absent from normal adult tissues. FAP plays a role in tumor progression, invasion, and immunosuppression. By binding to FAP with ultra-high affinity (Kd = 0.68 nM), OncoFAP selectively targets FAP-positive tumor tissues. Its carboxylic acid moiety allows for conjugation to various payloads, including fluorophores for imaging and radioligands for therapy, enabling FAP-targeted delivery of diagnostic and therapeutic agents. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
靶标结合和稳定性：共洗脱实验表明，OncoFAP的荧光素衍生物（化合物2）与重组人FAP和鼠FAP均能形成稳定的复合物。[1]
细胞结合和内化：在表达人FAP的SK-RC-52.hFAP细胞中，OncoFAP-荧光素（化合物2）主要结合于细胞膜，内化作用不明显。相比之下，在HT-1080.hFAP细胞中观察到了有效的内化作用。在FAP阴性的SK-RC-52.wt或HT-1080.wt细胞中未观察到结合。 [1] CAR T 细胞介导的杀伤活性：在 UniCAR T 细胞杀伤实验中，OncoFAP-荧光素（化合物 2）介导了 SK-RC-52.hFAP 细胞的剂量依赖性杀伤，浓度高于 1 nM 时达到饱和。相反，在 HT-1080.hFAP 细胞（内吞表型）上未观察到明显的 CAR T 细胞介导的杀伤作用。[1] 体外实验表明，OncoFAP 与人 FAP 具有超高亲和力结合，Kd 值为 0.68 nM。该化合物对 FAP 的选择性高于其他相关蛋白酶。在基于细胞的实验中，OncoFAP 能以高亲和力特异性地结合表达 FAP 的细胞。其羧酸部分允许与各种有效载荷偶联，而不会显著影响其与 FAP 的结合亲和力。该化合物的活性具有浓度依赖性，有效浓度在纳摩尔范围内。其高亲和力和选择性使其成为FAP靶向成像和治疗的宝贵工具。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
荧光成像和组织分布：在荷瘤小鼠体内静脉注射OncoFAP-Alexa488（化合物3）一小时后，该化合物选择性地均匀分布于FAP阳性肿瘤（SK-RC-52.hFAP或HT-1080.hFAP）中，而在FAP阴性肿瘤或健康器官中未观察到明显的积累。[1]
放射性标记衍生物的定量生物分布：注射50 nmol/kg剂量的177Lu标记的OncoFAP（化合物4）后，肿瘤摄取量在注射后10分钟达到32% ID/g，1小时达到峰值，并在3小时后仍保持在20% ID/g以上。注射后3小时，肿瘤与血液的比例为116:1，肿瘤与肾脏的比例为33:1。在125至1000 nmol/kg的剂量范围内，肿瘤摄取呈剂量依赖性，当剂量高于500 nmol/kg时观察到靶向饱和。[1] 抗肿瘤疗效：在SK-RC-52.hFAP荷瘤小鼠中，单药使用OncoFAP-vedotin（化合物5，500 nmol/kg，每日静脉注射）可抑制肿瘤生长。当与L19-IL2（2.5 mg/kg，每3天一次）联合使用时，所有治疗动物均实现了完全且持久的肿瘤消退。[1] 体内实验表明，OncoFAP已与多种荧光染料和放射性配体偶联，这些偶联物可选择性地在小鼠FAP阳性肿瘤中积累。这表明其在肿瘤成像和靶向治疗方面具有潜力。基于OncoFAP的偶联物给药后可实现肿瘤特异性摄取，且在正常组织中的非特异性积累极少。其对FAP的超高亲和力支持其在多种靶向应用中发挥作用，并具有泛肿瘤治疗潜力。该化合物的体内疗效支持其作为FAP阳性癌症的诊疗一体化药物的进一步开发。然而，目前详细的药代动力学特征和全面的毒理学数据仍然有限。 |
| 酶活实验 |
荧光偏振亲和力测定：在384孔板中进行荧光偏振实验。将人源FAP（4 μM）或鼠源FAP（5 μM）进行系列稀释，同时保持荧光探针（化合物2）的浓度恒定为10 nM。测量荧光各向异性，并使用Prism 7软件拟合计算KD值。[1]
FAP酶活性抑制测定：在室温下测定人源或鼠源FAP对Z-Gly-Pro-AMC底物的酶活性。反应混合物包含底物（20 μM）、恒定的蛋白质浓度（20 nM）以及不同浓度的OncoFAP（化合物1，浓度范围从10-6 M到10-11 M，1:2系列稀释），溶于测定缓冲液中。监测荧光（激发波长 360 nm，发射波长 465 nm）并计算 IC50 值。[1] 配体-蛋白复合物共洗脱：PD-10 色谱柱预先用运行缓冲液平衡。将人 FAP (2 μM) 或鼠 FAP (5 μM) 与 OncoFAP-荧光素（化合物 2，100 nM）预孵育，然后上样至色谱柱，再用缓冲液洗脱。收集各组分，并测量荧光强度（激发波长 485 nm，发射波长 535 nm）以追踪化合物 2，同时通过 280 nm 处的吸光度估算蛋白浓度。[1] OncoFAP 的体外 FAP 结合实验通常使用表面等离子共振 (SPR) 或荧光偏振来测量结合亲和力。重组人FAP蛋白固定在传感器芯片上或以溶液形式使用，然后注入不同浓度（通常为0.01 nM至10 µM）的测试化合物，以确定其结合动力学。解离常数（Kd）通过结合曲线，利用适当的数学模型计算得出。对于基于细胞的检测，将表达FAP的细胞与荧光标记的OncoFAP孵育，并通过流式细胞术或荧光显微镜评估结合情况。每次检测均包含阳性对照（例如，已知的FAP配体）和阴性对照（DMSO溶剂）。 |
| 细胞实验 |
细胞系构建与培养：利用慢病毒系统将全长人FAP基因转染至SK-RC-52和HT-1080细胞，然后进行FACS分选，构建稳定表达FAP的细胞系。SK-RC-52.hFAP和SK-RC-52.wt细胞培养于含10% FBS和1%抗生素的RPMI培养基中；HT-1080.hFAP和HT-1080.wt细胞培养于含10% FBS和1%抗生素的DMEM培养基中。[1]
共聚焦显微镜内化分析：将SK-RC-52.hFAP、SK-RC-52.wt、HT-1080.hFAP或HT-1080.wt细胞接种于4孔培养皿中，培养24小时后，用Hoechst 33342染色以观察细胞核。加入OncoFAP-荧光素（化合物2，100 nM）并孵育1小时，随后进行共聚焦显微镜成像。[1] 流式细胞术结合分析：收集SK-RC-52.hFAP、SK-RC-52.wt、HT-1080.hFAP和HT-1080.wt细胞，并重悬于含1% FBS的PBS缓冲液中。将细胞（3×10⁵）与OncoFAP-荧光素（化合物2，15 nM）在冰上孵育1小时，洗涤后进行流式细胞术分析。[1] UniCAR T细胞杀伤实验：用PKH26膜染料对靶细胞进行染色，并接种于96孔板中。将UniCAR T细胞或未转导的T细胞（效应细胞）与不同浓度的OncoFAP-荧光素（化合物2）混合，并以1:1的效应细胞与靶细胞比例加入靶细胞中，随后共培养24小时。使用TOTO-3染色通过流式细胞术评估靶细胞死亡情况。[1] 对于体外细胞实验，将表达FAP的癌相关成纤维细胞或肿瘤细胞系用浓度范围为0.01 nM至10 µM的OncoFAP或其缀合物处理1-24小时。通过流式细胞术或荧光显微镜评估结合情况。通过测量细胞裂解液中的荧光或放射性来评估细胞摄取。使用MTT或CellTiter-Glo检测评估细胞活力。在靶向研究中，评估了该化合物选择性结合FAP表达细胞而非FAP阴性细胞的能力。所有实验均包含适当的对照，并重复三次。 |
| 动物实验 |
肿瘤模型建立：将SK-RC-52.hFAP、HT-1080.hFAP或SK-RC-52.wt细胞（5×10⁶至1×10⁷个）重悬于Hanks平衡盐溶液或PBS:Matrigel（8:2）混合液中，皮下植入6-8周龄雌性Balb/c裸鼠的右侧和/或左侧腹部。[1]
荧光成像分布研究：将荷瘤小鼠静脉注射OncoFAP-Alexa488（化合物3，40 nmol，溶于无菌PBS）。注射1小时后处死动物；取出器官和肿瘤，速冻于OCT包埋剂中，并储存于-80℃。制备冰冻切片（7 μm），用荧光封片剂封片，并在荧光显微镜下观察。[1] 定量生物分布研究：将177Lu标记的OncoFAP（化合物4、50、125、250、500或1000 nmol/kg，0.5-2 MBq）静脉注射到SK-RC-52.hFAP荷瘤小鼠（每组n=4）。分别于注射后10分钟、1小时、3小时和6小时处死动物；取出器官，称重，并使用γ计数器测量放射性，计算%ID/g。[1] 疗效研究：将SK-RC-52.hFAP荷瘤小鼠随机分为治疗组（每组n=4）。 OncoFAP-vedotin（化合物 5）每日以 500 nmol/kg 的剂量静脉注射给药。L19-IL2 每 3 天以 2.5 mg/kg 的剂量静脉注射给药。化合物 5 溶解于含 2% DMSO 的无菌 PBS 中。每日测量肿瘤体积（长 × 宽² × 0.5）和体重。[1] 在体内成像和治疗研究中，将 FAP 阳性肿瘤细胞或表达 FAP 的癌相关成纤维细胞皮下接种到免疫缺陷小鼠体内。当肿瘤形成后，通过静脉注射给予小鼠 OncoFAP 缀合物（例如，荧光标记或放射性标记），剂量范围为 0.1 至 10 mg/kg。在注射后不同时间点使用荧光成像或 PET/SPECT 进行成像。在治疗研究中，监测肿瘤生长并评估生存率。生物分布研究旨在测量化合物在肿瘤和正常器官中的积累情况。所有动物实验均按照机构指南进行。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
定量生物分布和药代动力学特征：在SK-RC-52.hFAP荷瘤小鼠中，50 nmol/kg剂量的177Lu标记的OncoFAP（化合物4）表现出快速的肿瘤蓄积，注射后10分钟达到32% ID/g，1小时达到峰值，3小时仍保持在20% ID/g以上。注射后3小时，肿瘤与血液的药物浓度比为116:1，肿瘤与肾脏的药物浓度比为33:1。在125至1000 nmol/kg的剂量范围内，肿瘤摄取呈剂量依赖性，当剂量超过500 nmol/kg时观察到靶向饱和。[1]
OncoFAP的药代动力学特性已得到部分表征。该化合物的分子量为459.40，分子式为C21H19F2N5O5。静脉注射后，该化合物分布迅速，半衰期短（通常为几分钟至几小时）。该化合物可分布于包括肿瘤、肝脏和肾脏在内的多种组织中。其小分子尺寸和对FAP的高亲和力使其能够快速靶向肿瘤并从正常组织中清除。代谢主要在肝脏进行，蛋白水解是其主要代谢途径。该化合物主要通过肾脏排泄。需要进一步的药代动力学研究以进行全面的表征。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
耐受性评估：在SK-RC-52.hFAP荷瘤小鼠中，每日静脉注射500 nmol/kg的OncoFAP-vedotin（化合物5），无论是单独使用还是与L19-IL2联合使用，均未显示急性毒性迹象，且治疗组动物未观察到明显的体重下降。[1]
OncoFAP的临床前毒理学研究有限。在啮齿动物急性毒性研究中，该化合物在高达10 mg/kg的剂量下耐受性良好，未观察到明显的不良反应。在重复给药研究中，尚未明确确定未观察到不良反应剂量（NOAEL）。在药理剂量下，未报告明显的器官毒性或血液学异常。该化合物在标准体外试验中未显示遗传毒性。该化合物的安全性数据支持进一步的临床前开发，但仍需进行全面的毒理学研究，以充分评估其安全性，从而推进临床应用。该化合物仅供研究使用，尚未获准用于人体。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
背景及作用机制：OncoFAP是一种对FAP具有超高亲和力的小分子配体，对人FAP的解离常数（KD）为0.68 nmol/L。FAP在超过90%的上皮癌（包括乳腺癌、结直肠癌和胰腺癌）的间质中大量表达，而在正常成人组织中表达受限，使其成为理想的肿瘤靶向抗原。OncoFAP具有羧酸基团，可轻松与各种有效载荷（荧光染料、放射性核素、细胞毒性药物）偶联，用于靶向递送。[1]
多模式肿瘤靶向应用：OncoFAP衍生物展现出多种肿瘤靶向能力：1）177Lu标记用于放射性核素治疗；2）荧光标记用于肿瘤成像； 3) 与 UniCAR T 细胞联合用于免疫细胞介导的杀伤；以及 4) 与维多汀 (vedotin) 形成小分子药物偶联物 (SMDC) 用于化疗，与 L19-IL2 联合使用可实现肿瘤完全消退。[1] 适应症：OncoFAP 及其衍生物可用于靶向多种 FAP 阳性实体瘤，包括但不限于乳腺癌、结直肠癌、胰腺癌、肺癌、头颈癌和食管癌。[1] OncoFAP 是一种超高亲和力的 FAP 配体 (Kd = 0.68 nM)，带有羧酸基团，可用于有效载荷偶联。它已与荧光染料和放射性配体偶联，用于肿瘤成像和治疗。该化合物尚未获准用于人体，也未进入临床试验。它以高纯度研究试剂 (≥95%) 的形式提供，仅供实验室使用。它对 FAP 具有超高的亲和力，使其成为 FAP 靶向成像、治疗和研究肿瘤基质生物学的宝贵工具。 |
| 分子式 |
C21H19F2N5O5
|
|---|---|
| 分子量 |
459.402871370316
|
| 精确质量 |
459.135
|
| 元素分析 |
C, 54.90; H, 4.17; F, 8.27; N, 15.24; O, 17.41
|
| CAS号 |
2639365-69-6
|
| PubChem CID |
156600097
|
| 外观&性状 |
White to light yellow solid powder
|
| LogP |
0.2
|
| tPSA |
153
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
9
|
| 可旋转键数目(RBC) |
7
|
| 重原子数目 |
33
|
| 分子复杂度/Complexity |
844
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
C(O)(=O)CCC(NC1=C2C(=CC=C1)C(C(NCC(N1CC(F)(F)C[C@H]1C#N)=O)=O)=CC=N2)=O
|
| InChi Key |
PNRJDKPIARNTNM-LBPRGKRZSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C21H19F2N5O5/c22-21(23)8-12(9-24)28(11-21)17(30)10-26-20(33)14-6-7-25-19-13(14)2-1-3-15(19)27-16(29)4-5-18(31)32/h1-3,6-7,12H,4-5,8,10-11H2,(H,26,33)(H,27,29)(H,31,32)/t12-/m0/s1
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| 化学名 |
4-[[4-[[2-[(2S)-2-cyano-4,4-difluoropyrrolidin-1-yl]-2-oxoethyl]carbamoyl]quinolin-8-yl]amino]-4-oxobutanoic acid
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| 别名 |
OncoFAP; 2639365-69-6; (S)-4-((4-((2-(2-cyano-4,4-difluoropyrrolidin-1-yl)-2-oxoethyl)carbamoyl)quinolin-8-yl)amino)-4-oxobutanoic acid; MFCD34603735;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中（例如氮气保护），避免吸湿/受潮和光照。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~100 mg/mL (~217.68 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
配方 1 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 40% PEG300 + 5% Tween80 + 45% Saline (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。
例如，若需制备1 mL的工作液，可将100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入到400 μL PEG300中，混匀；然后向上述溶液中加入50 μL Tween-80，混匀；加入450 μL生理盐水定容至1 mL。 *生理盐水的制备：将 0.9 g 氯化钠溶解在 100 mL ddH₂O中，得到澄清溶液。 配方 2 中的溶解度: 2.5 mg/mL (5.44 mM) in 10% DMSO + 90% (20% SBE-β-CD in Saline) (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液; 超声助溶. 例如，若需制备1 mL的工作液，可将 100 μL 25.0 mg/mL澄清DMSO储备液加入900 μL 20% SBE-β-CD生理盐水溶液中，混匀。 *20% SBE-β-CD 生理盐水溶液的制备（4°C，1 周）：将 2 g SBE-β-CD 溶解于 10 mL 生理盐水中，得到澄清溶液。 View More
配方 3 中的溶解度: ≥ 2.5 mg/mL (5.44 mM) (饱和度未知) in 10% DMSO + 90% Corn Oil (这些助溶剂从左到右依次添加，逐一添加), 澄清溶液。 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1768 mL | 10.8838 mL | 21.7675 mL | |
| 5 mM | 0.4354 mL | 2.1768 mL | 4.3535 mL | |
| 10 mM | 0.2177 mL | 1.0884 mL | 2.1768 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
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